包括硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸衍生物的藥物制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及包含特定高分子量透明質(zhì)酸衍生物和硫酸軟骨素的組合的藥物制劑，作為關(guān)節(jié)內(nèi)洗液以及作為骨軟骨手術(shù)后的滑液的粘性替代物用在骨關(guān)節(jié)炎、軟骨下?lián)p傷、骨質(zhì)疏松癥、滑膜炎、腱鞘炎、腱炎、肌腱變性的治療中。這些劑型還適于間質(zhì)性膀胱炎的治療。
【專利說明】包括硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸衍生物的藥物制劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于治療骨關(guān)節(jié)炎、軟骨下?lián)p傷、骨質(zhì)疏松癥、滑膜炎、腱鞘炎、腱炎、 肌腱變性、間質(zhì)性膀胱炎并且最終也作為關(guān)節(jié)內(nèi)洗液和/或作為骨軟骨手術(shù)后的滑液的粘 性替代物的藥物制劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 軟骨基質(zhì)由三維結(jié)構(gòu)組成，該三維結(jié)構(gòu)由骨膠原分子和復(fù)合蛋白多糖的聚集體制 成，所述復(fù)合蛋白多糖的聚集體則由與非共價地結(jié)合到多肽序列的葡糖氨基葡聚糖（GAG) 的分子相互作用的透明質(zhì)酸衍生物（HA)類支撐結(jié)構(gòu)組成，因此給予軟骨生物力學(xué)和粘彈 性性能。
[0003] 實際上，HA為呈現(xiàn)特定粘彈性性能的分子，主要在關(guān)節(jié)腔中由滑膜細(xì)胞合成并分 泌（Asari A.等，Arch Histol Cytol，1995, 58(1) :65-76)，并且由于上述原因，其是滑液的 主要組分之一，根據(jù)其中包含的HA分子的數(shù)目和分子量（MW)而同時顯示粘件和彈件件能。
[0004] 因此，滑液的粘彈性性質(zhì)與隨年齡而變化的關(guān)節(jié)腔中存在的HA的含量及其濃度 有關(guān)：事實上，在人類中，從25歲之后其已經(jīng)開始減少?？赏ㄟ^測量其模量而量化滑液的粘 彈性特征：第一個模量稱為G'或彈性模暈，因為它表示當(dāng)多糖經(jīng)歷應(yīng)變/變形時儲存的能 量，第二個模量定義為G"或粘性模暈，因為它表示當(dāng)分子經(jīng)歷應(yīng)變時散逸的能量：簡言之， G'賦予滑液彈件，而G"為抵抗兩關(guān)節(jié)表面之間的摩擦的指示，因此從對應(yīng)變的抵抗其可確 定關(guān)節(jié)軟骨的變形。
[0005] 在緩慢移動過程中，HA用作粘件潤滑劑(其G"模量賦予其的性能），同時在快速 移動過稈中，它用彈件件能吸收可影響關(guān)節(jié)的仟何創(chuàng)傷或微創(chuàng)傷。
[0006] 骨關(guān)節(jié)病/骨關(guān)節(jié)炎（0A)是高致殘性疾病，特征為由于關(guān)節(jié)基質(zhì)的退化和細(xì)胞組 分的減少而造成的關(guān)節(jié)軟骨的漸進(jìn)性磨蝕。
[0007] 眾所周知可涉及關(guān)節(jié)整體的機(jī)械失衡如何可以是上述疾病發(fā)作的原始起因。
[0008] 該關(guān)節(jié)不穩(wěn)定性實質(zhì)上可由不同的因素引起（例如創(chuàng)傷、關(guān)節(jié)系統(tǒng)的炎癥、軟骨 磨蝕、不正確的輕運動或姿勢），并可決定主要由軟骨細(xì)胞和滑膜細(xì)胞合成的細(xì)胞外基質(zhì)的 合成和退化之間存在的微妙平衡的改變。
[0009] 當(dāng)該完美但微妙的動態(tài)平衡的情形被損害時，基質(zhì)的退化超過它的合成，結(jié)果它 開始緩慢的但是漸進(jìn)的退化過程，在軟骨細(xì)胞減少后其由相應(yīng)的合成過程很少地補(bǔ)償。
[0010] 實際上，關(guān)節(jié)上過大的和/或不正確的負(fù)荷可引起軟骨細(xì)胞響應(yīng)，表現(xiàn)為尤其是 當(dāng)例如0A的炎癥疾病發(fā)作時在關(guān)節(jié)腔中產(chǎn)生和釋放的炎癥性細(xì)胞因子例如IL-1和TNF-a 刺激時，負(fù)責(zé)由軟骨細(xì)胞合成的軟骨自身的退化的這些酶（稱為金屬蛋白酶（MMP))的合 成。實際上，IL-1刺激高水平的氧化氮的合成，并通過軟骨細(xì)胞自身抑制蛋白多糖的合 成（Dozin B.等，Matrix Biology, 2002, 21 :449-459)。發(fā)炎的軟骨進(jìn)一步產(chǎn)生高數(shù)量的 C0X-2,其又決定過量產(chǎn)生，并在關(guān)節(jié)腔中釋放PGE2，這促進(jìn)炎癥程度的惡化，因而軟骨損傷 (Amin A.等，J Clin Invest，1997, 99:1231)。
[0011] 在急性和慢性炎癥以及關(guān)節(jié)（〇A)的主要退化過程中，關(guān)節(jié)滑液中存在的HA的濃 度和分子量（MW)顯著地減小，所以損害了它的潤滑性能。眾所周知滑液的功能特征同時依 賴于HA的濃度和聚合度，并且它們的改變可決定0A類型關(guān)節(jié)組織損傷。
[0012] 實際上，0A關(guān)節(jié)的滑液不能有效地保護(hù)滑膜組織和關(guān)節(jié)軟骨免受每天施加在關(guān)節(jié) 上的機(jī)械壓力的"負(fù)面"的影響：在非病理性滑液中，當(dāng)提高應(yīng)變的頻率時，兩個模量通常增 力口：粘性組分在低的頻率占優(yōu)勢，而彈性模量值在高頻率大于粘性模量；另一方面，在0A關(guān) 節(jié)的滑液中，發(fā)現(xiàn)G'和G〃的值顯著地小于正常值。
[0013] 非病理性滑液中的HA交換通常特別快，而在0A中已發(fā)現(xiàn)兩者的濃度下降（與 GAG的減少相關(guān)），同時其麗減小以及其交換流量顯著減少（Balazs EA.等，J Rheumatol Suppl,1993, 12:75-82 ;Belcher C.等，Annals of the Rheumathic Disease,1997, 56:299-307)〇
[0014] 由于這些原因，Balazs首先提出了通過在關(guān)節(jié)腔內(nèi)直接攝入外源HA而改變骨關(guān) 節(jié)病的過程的發(fā)展的可能性。
[0015] 目前可商購各種藥物用于在0A中HA的關(guān)節(jié)內(nèi)給藥，其中有：Hval四η'從雞冠 花純化的 ΗΑ，具有 MW :5 ?7· 3Χ 105Da(US5, 925, 626)，SvnviscK，(Hylan G_F 20)與甲 醛和二乙烯砜交聯(lián)的HA，具有MW :6?7X106Da(US 4,713,448)，Arte?,具有MW :6. 2? 1. 2X105Da 的 HA。
[0016] 綜合的臨床數(shù)據(jù)已經(jīng)顯示關(guān)節(jié)內(nèi)注射的HA進(jìn)行顯著的粘性補(bǔ)償行為，改善了被 0A疾病影響的肢的功能能力，結(jié)果具有關(guān)節(jié)疼痛的減小。
[0017] HA是由D-葡萄糖醛酸與N-乙酰基-D-葡糖胺交替的殘基組成的雜多糖。它是直 鏈聚合物，根據(jù)獲得它的來源和使用的制備方法可具有范圍可在50, OOODa與13 X 106Da之 間的MW。在自然中，在細(xì)胞周圍的凝膠中，在脊椎動物生物體的結(jié)締組織的基本物質(zhì)（它是 其的主要組分之一）中，在關(guān)節(jié)的滑液中，在玻璃體液和臍帶中發(fā)現(xiàn)了它。眾所周知HA如 何通過它的膜受體⑶44調(diào)節(jié)與細(xì)胞生理和生物體相關(guān)的許多和各種過程，例如，如細(xì)胞增 殖、遷移、分化以及血管發(fā)生，以及它如何也進(jìn)行其它功能，例如組織水化和關(guān)節(jié)潤滑。
[0018] 近來，已經(jīng)成功地實驗了作為0A關(guān)節(jié)的抗炎劑的硫酸軟骨素（CS)的關(guān)節(jié)內(nèi)使用： 基質(zhì)蛋白多糖的組分，在非病理性條件下，促進(jìn)軟骨吸水，并賦予抗機(jī)械壓縮的性能；還已 經(jīng)顯示其減小MMP在0A關(guān)節(jié)的軟骨細(xì)胞中的表達(dá)的能力、以及其誘導(dǎo)0A滑液成纖維細(xì)胞 中高 MW HA 合成的能力（David-Raoudi Μ 等，Glycobiology，2〇〇9，l9:8l 3_8l5)。
[0019] 它是由N-乙?；?半乳糖胺與D-葡萄糖醛酸構(gòu)成的二糖單元組成的硫酸化的葡 糖氨基葡聚糖，其中，多數(shù)半乳糖胺殘基通過使多糖高度陰離子化而在位點4或6被硫酸 化。
[0020] CS還已經(jīng)證明能夠減小破骨細(xì)胞的活性，從而通常減小骨再吸收,并且以獨特的 方式減小軟骨下再吸收，該過程同時涉及0A的最初和最終階段；破骨細(xì)胞活性在"短暫性 局部骨質(zhì)疏松癥"中也是關(guān)鍵的，該疾病為決定病灶的骨質(zhì)減少和炎癥的潛在致殘的疾病 (1^8&四4.等，1^111]^1:丨81]1〇,2005,57:5-15)。此外，已經(jīng)檢測到03也在例如滑膜炎和腱 炎的炎癥疾病中具有良好的結(jié)果（Wildi LM.等，Ann Rheum Dis，2011，70:982-989)。
[0021] 對于上述抗炎性能，在眼外科手術(shù)中已經(jīng)初步研究了 CS與特定MW的HA的組合， 以特定的重量比在水性緩沖液中組合（US6, 051，560)。
[0022] 已經(jīng)研究了與具有500?750KD范圍內(nèi)的MW的HA組合的CS也作為0A的關(guān)節(jié)內(nèi) 階段I和II的治療具有顯著的成功，CS與HA的重量比為4:3,在磷酸鹽和氯化鈉緩沖液 中，在25°C在lsecl測量具有包括在68和115cps之間的總的最終粘度，2?6次注射的總 的治療的1?3個月的治療效能的時間段（EP 1443945)。
[0023] 最終，本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，CS與HA的組合組成的粘彈性流體的粘度改變：實驗 結(jié)果顯示CS如何提高低麗的HA溶液的粘度（與相同濃度的僅包含HA的劑型相比），雖然 與HA相比CS的粘度非常低，并且不相關(guān)；然而，在添加 CS后HA溶液的兩個模量G'和G" 未改變（Nishimura M.等，Biochimica et Biophysica Acta，1998,1380:1-9)。
[0024] 間質(zhì)性膀胱炎為膀胱疾病，其顯示具有疼痛或痛苦、尿頻、恥骨上疼痛和慢性骨盆 疼痛。
[0025] 不管它的名字，間質(zhì)性膀胱炎與普通的膀胱炎（由特定的細(xì)菌引起）非常不同，雖 然癥狀相似，然而，沒有出現(xiàn)細(xì)菌感染，并且實際上，證明抗生素治療是無效的。
[0026] 間質(zhì)性膀胱炎的病因未知，認(rèn)為由覆蓋膀胱的粘膜層中葡糖氨基葡聚糖的缺乏所 引起。因此，發(fā)現(xiàn)膀胱壁的細(xì)胞改變具有內(nèi)上皮的損傷，其與尿中存在的酸接觸，引起調(diào)節(jié) 疼痛的局部神經(jīng)敏感性的提高，并對排尿刺激的接受提高。
[0027] 基于作為臨床治療的該假設(shè)，已經(jīng)引入在膀胱中灌注戊聚糖多硫酸酯、肝素和透 明質(zhì)酸（Cystistat),以重建和保護(hù)內(nèi)上皮。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0028] 申請人:現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由于包含高分子量透明質(zhì)酸衍生物和硫酸軟骨素的組合的 劑型，可能克服根據(jù)本發(fā)明的領(lǐng)域中已知的劑型的上述缺點，如在本發(fā)明所附的權(quán)利要求 書中最好地描述以及同樣在下面本發(fā)明【具體實施方式】中更詳細(xì)描述的。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0029] 圖1顯示了如在實施例1中報告的物質(zhì)上檢測的以單位為Rad/sec的ω為函數(shù) 的單位為Pa的G"值。
[0030] 圖2顯示了如在實施例2中報告的物質(zhì)上檢測的以單位為Rad/sec的ω為函數(shù) 的單位為Pa的G'和G〃值。
[0031] 圖3顯示了如在實施例3中報告的物質(zhì)上檢測的以單位為Rad/sec的ω為函數(shù) 的單位為Pa的G'和G〃值。
[0032] 圖4顯示了如在實施例4中報告的物質(zhì)上檢測的以單位為Rad/sec的ω為函數(shù) 的單位為Pa的G'和G〃值。

【具體實施方式】
[0033] 本發(fā)明的目的為包括與HA衍生物組合的CS的藥物制劑，所述HA衍生物選自：
[0034] ?包括1500?3000KD之間，優(yōu)詵2500?3000KD之間的重抱MW的與堿金屬或堿 土金屬成鹽的HA(HA-HMW ;在可根據(jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)進(jìn)行的滅菌過程前測量）；
[0035] · HYADD":具有〇· 1?10%范圍內(nèi)的酰胺化程度（摩爾）（HPLC)的具有脂族、 芳基脂族、脂環(huán)族、芳族、環(huán)狀或雜環(huán)系列的胺的HA酰胺，優(yōu)選包括1 %和8 %之間的酰胺化 百分比的十六胺的HA酰胺（EP1095064);
[0036] ?第一級硫酸化的HA 0-硫酸化的衍生物：HAS1 (W095/25751A1)，其中第一級硫酸 化意思是每個透明質(zhì)酸聚合單元即二糖重復(fù)單元（D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖） 的硫酸化羥基的平均數(shù)；
[0037] ·Α〔:ΡΚ: HA內(nèi)酉旨（定義為自交聯(lián)HA)，具有不超過10%、優(yōu)選1%與5%之間酯化 的酯化百分比（ΕΡ341745);
[0038] ?由⑴ACPlP (ii)HBC的混合物組成的ΗΑ衍生物，其中，（ii)是與1，4- 丁二 醇二縮水甘油醚（BDDE)交聯(lián)的HA，其中，包括的（iV(ii)的重量比在10:90和90:10之 間，優(yōu)選 25:75 的重量比的（i) :(ii)(W02011/023355)。
[0039] 這些新的藥物組合物呈現(xiàn)與先前描述并且因而在本領(lǐng)域中已知的起始HA衍生物 以及由HA和CS組成的組合物完全不同的流變特性。實際上，在相同的濃度和分析條件下， 與起始衍生物相比，這些新的組合物顯示G'和G"模數(shù)方面重要的流變改變。
[0040] 該結(jié)果完全出乎意料，由于另一方面，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的數(shù)據(jù)（上面引用） 以清楚和明確的方式顯示通過添加 CS根本不改變HA彈性和粘性模量（Nishimura M.等， Biochimica et Biophysica Acta,1998,1380:1-9)。
[0041] 申請人:獲得的結(jié)果反而已經(jīng)顯示：
[0042] *CS與一級硫酸化的HAS的組合如何決定新的藥物組合物HAS1/CS的粘性模量G" 的非常顯著地提高，賦予它粘性補(bǔ)充劑特有的流變特性（大于Hyalgan K，下面顯示），同時 CS已知的抗炎性能與HAS 1的抗炎能力相互協(xié)同地聯(lián)合。
[0043] 對于上面要求保護(hù)的全部其它HA衍生物，它們與CS的組合物（HYADD& CS，ACP+HBC/CS，ACP/CS以及HA-HMW/CS組合物）已經(jīng)確定了彈性模量G'的值的顯著減小， 粘性模量G"未變化：結(jié)果，新的藥物組合物將顯示粘性補(bǔ)充劑特有的流變特性，其中，粘性 組分相對于起始衍生物成比例地遭血，因此，這樣的新的纟目合物將具有審大靡擦陽.力，并且 將顯示更大的潤滑能力,同時結(jié)合CS的已知的抗炎性能和HA衍生物對它們特有的抗炎能 力。由于這些原因，HA衍生物/CS的新的組合可通過關(guān)節(jié)內(nèi)給藥而用作疾病的處理和/或 治療的粘性的或局部的潤滑劑，例如：
[0044] ?最初階段和慢性階段的0A，因此同時在活動性炎癥階段和慢性炎癥階段，決定：
[0045] 〇由于HA衍生物和CS的抗炎性能之間的協(xié)同作用，關(guān)節(jié)炎癥程度以及因此軟骨 損傷減小，
[0046] 〇由于新的藥物組合物的吸收機(jī)械應(yīng)力的能力的改善，滑液的ιΗ確功能恢復(fù)，在 這個情況下，其用作粘性補(bǔ)充劑，
[0047] 〇關(guān)節(jié)表面更大的粘性潤滑，但最尤其是，關(guān)節(jié)自身耐關(guān)節(jié)表面之間的摩擦的更 大的能力；因此，新組合物能夠減慢/治愈骨關(guān)節(jié)病的過程；
[0048] ?軟骨下?lián)p傷，即破骨細(xì)胞活性決定的骨的再吸收；
[0049] ?骨質(zhì)疏松癥，尤其是"短暫性局部骨質(zhì)疏松癥"；
[0050] ?由于創(chuàng)傷/微創(chuàng)傷造成的骨軟骨損傷；
[0051] ?滑膜炎和腱鞘炎，腱炎和/或肌腱變性；
[0052] ?間質(zhì)性膀胱炎：在該情況下，治療包括選擇的組合物的膀胱內(nèi)灌注，因為對于上 述新的粘性特征，新的劑型顯示對膀胱壁的粘附能力，大于對照產(chǎn)品，因此確保了保護(hù)上皮 長的時間段，因此可能有更好的臨床結(jié)果。
[0053] 申請人:描述和要求這樣的潤滑劑作為特別粘的關(guān)節(jié)內(nèi)洗液以及作為骨軟骨手術(shù) (例如，如關(guān)節(jié)鏡檢查或韌帶重構(gòu)）后的滑液的粘件替代物的用涂。
[0054] 因此， 申請人:描述和要求了新的粘性潤滑劑，包括與上述HA衍生物組合的CS，用 于0A、軟骨下?lián)p傷、短暫性局部骨質(zhì)疏松癥、骨軟骨損傷的關(guān)節(jié)內(nèi)或局部治療，滑膜炎和腱 鞘炎、腱炎和/或肌腱變性的治療。
[0055] 申請人:進(jìn)一步要求新的粘性關(guān)節(jié)內(nèi)洗液和新的滑液的粘性替代物，包括與上述HA 衍生物組合的CS，用于骨軟骨手術(shù)的手術(shù)后治療中。
[0056] 治療性處理不再包括一種如本領(lǐng)域中已知的1?3個月時間段的2?6次注射的 的總體治療，但為了獲得協(xié)同的流變/抗炎效果，可能減小包括在3至6個月之間的治療有 效性時間段的1?2次注射的劑量。 申請人:最后描述和要求新的粘性藥物組合物，包括與 上述HA衍生物組合的CS (優(yōu)選HA-HMW/CS和ΗYADDu /CS的組合物），用于間質(zhì)性膀胱 炎的膀胱內(nèi)治療。
[0057] 用于要求的衍生物的制備的HA可源于任何來源，例如，通過從雞冠花中提取 (EP138572)，通過發(fā)酵（例如來源于鏈球菌屬，EP0716688)，或通過生物合成（來自桿菌）， 如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，并對于與堿金屬或堿土金屬成鹽的HA(HA-HMW)，具有包括400KDa 與3000KDa之間的，特別是1500KDa與3000KD之間，并且優(yōu)選2500KDa-3000KD的重均MW ; 對于制備HYADDK衍生物，甚至更具體地對于具有包括1%與8%之間的平均酰胺化程度 的HA十六酰胺，尤其地在500KDa與750KDa之間；對于制備HBC衍生物，在200KDa與750KDa 之間；對于ACP?和HAS1衍生物，在150KD與300KD之間。
[0058] 用于本發(fā)明的硫酸軟骨素具有包括10?80KD之間的重均MW，目前通過提取動物 和魚（鯊魚和鯨魚）軟骨而生產(chǎn)（例如，東京Seikagaku Kogyo生產(chǎn)的用于下述實驗的CS)， 并包含4-硫酸軟骨素和6-硫酸軟骨素，其比例可根據(jù)起始的提取軟骨而變化。
[0059] 根據(jù)用于制備新的藥物組合物而選擇的衍生物，加入CS并與HA衍生物以如下重 量比混合：包括的HA衍生物與CS重量比為1:0. 1與1:6之間，特別優(yōu)選下面的比：
[0060] · HAS1衍生物：CS :優(yōu)選1:2-1:6,甚至更優(yōu)選1:4 ;
[0061] · HYADDκ 衍生物：CS :優(yōu)選 1:0,2-1:1 ;
[0062] · ACP* +HBC 衍生物：CS :優(yōu)選 1:0, 2-1: L 5 ;
[0063] · AGP*衍生物：CS :優(yōu)選 1:0, 2-1:2 ;
[0064] · HA-HMW 衍生物：CS :優(yōu)選 1: 0· 5-1:2,甚至更優(yōu)選 1:1。
[0065] 通過組合粉末形式或事先制備為溶液的CS與選擇的HA衍生物而獲得新的藥物組 合物，后者也為粉末形式或事先溶解，因此為凝膠和/或溶液形式。通常，最終劑型中所述 活性組分或HA衍生物和CS的濃度為，例如，對于HA衍生物，通常包括在10mg/ml與30mg/ ml之間，優(yōu)選在15mg/ml和20mg/ml之間，而對于CS，它包括在10mg/ml與40mg/ml之間， 優(yōu)選20mg/ml和30mg/ml之間，對于HA衍生物以ml計的總含量，包括lml和3ml之間，與 CS組合還具有包括lml和3ml之間的總含量。
[0066] 兩種組分必須混合完成它們的組合并成為均勻的所需要的時間，所以它們必須在 包括25°C和80°C之間的溫度下經(jīng)機(jī)械攪拌，根據(jù)選擇的比例和制備的衍生物，攪拌1至24 個小時的時間；通常最大8?10個小時的攪拌時間是充足的。
[0067] 可選地， 申請人:描述和要求在使用時，即就在關(guān)節(jié)內(nèi)或局部或膀胱內(nèi)治療之前，兩 種組分（HA衍生物和CS)可能的組合，或作為進(jìn)一步的選項，在治療位點內(nèi)直接組合的兩種 組分的單獨給藥。這種類型的給藥可由于特定醫(yī)療/外科設(shè)備的幫助而發(fā)生，使得兩種組 分可能在同一設(shè)備內(nèi)同時但是單獨分隔。對于這些情況，分別制備HA衍生物和CS，因為這 兩種組分在治療位點內(nèi)直接組合。
[0068] 優(yōu)選地，用于上述全部制備的緩沖液選自：
[0069] ?磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉，兩者優(yōu)選以生理濃度溶解于具有氯化鈉的水或普通 氯化鈉中，在包括在6. 5與7. 4之間的藥物組合物的pH和必須包括在100m0s/l與350m0s/ 1之間的滲透濃度（osmolarity)。
[0070] 然后，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)滅菌HA衍生物/CS的新的制劑。
[0071] 通過僅描述并且非限制的方式，報告了本發(fā)明的新的藥物組合物的制備的一些實 施例：
[0072] 實施例 1 :鉬合物 HAS1/CS :1:4
[0073] 對于該實驗，通過使用具有包括在150KD與300KD之間的重均MW的起始HA (尤其 是它的四丁胺鹽）使用了根據(jù)由EP 702699制備的HAS1。
[0074] 20g的HAS1溶解于1L的水性緩沖液中，所述水緩沖液通過向其加入磷酸二氫鈉 (0· 05g)、磷酸氫二鈉（0· 6g)、具有7. 4的pH的氯化鈉（8. 5g)、80g的具有50?60KD的MW 的CS (Seikagaku Kogyo, Tokyo)而形成，混合物在40°C經(jīng)機(jī)械攪拌1個小時，直到兩種組分 完成并均勻地溶解。
[0075] 冷卻混合物至室溫，然后，通過在20°C使用Thermo Haake Mars II Rheometer而 測定它的模量。
[0076] 從0. 01?100rad/sec在10%的固定的應(yīng)變值下測量以Pa計的所述值。用Haake Rheowin Job Manager 4. 0軟件處理所有的樣品。結(jié)果：圖1顯示了 HAS1/CS的粘件模量 G〃如何在全部的實驗頻率具有遠(yuǎn)高于起始HAS1衍生物的G"值的值。新組合物的粘性模 量在全部的實驗頻率同時大于0A患者的滑液（來自Balazs E.，膝蓋疾病中，1974,63-75) 的G"和對照粘性補(bǔ)充劑Hyalgar，的G"，所以顯示意外的和完全出乎意料的流變模式（對 于滑液特異），HAS1最初（未與CS組合）未顯示。
[0077] 實施例 2 :鉬合物HYADD?, /CS :1:1
[0078] 對于該實驗，使用了具有5 %的平均酰胺化程度的HA十六酰胺（HYADD)，該HA 十六酰胺通過使用具有包括150KD與750KD之間的重均MW的起始HA如根據(jù)EP 1095064 制備。
[0079] 8g的HYADD溶解于1L的水性緩沖液中，所述水性緩沖液通過向其加入磷酸二氫 鈉（0. llg)、磷酸氫二鈉（0. 45g)、具有7. 0的pH的氯化鈉（8. 5g)、8g的具有50?60KD的 MW的CS (Seikagaku Kogyo, Tokyo)而制成，混合物在60°C經(jīng)機(jī)械攪拌10至12個小時，直 到兩種組分完全并均勻地溶解。
[0080] 冷卻混合物至室溫，然后，通過在20°C使用Thermo Haake Mars II Rheometer而 測定它的模量。
[0081] 從0. 01?100rad/sec在10%的固定的應(yīng)變值下測量以Pa計的所述值。
[0082] 用 Haake Rheowin Job Manager 4. 0 軟件處理所有的樣品。
[0083] 益果：圖2顯示了在其粘性模量G"基本保持不變的同時，新的組合物的彈性模量 G'如何顯著地減小。
[0084] 實施例 3 :鉬合物ΑΓΡΚ +HBC/CS :1:1
[0085] 對于該實驗，使用根據(jù)W02011/023355的實施例12中制備的ACP+HBC衍生物， 以獲得1L包含25g ACP+HBC的凝膠。加入25g的具有50?60KD的MW的CS (Seikagaku Kogyo, Tokyo)，混合物在40°C經(jīng)機(jī)械攪拌1個小時，直到兩種組分完全并均勻地溶解。
[0086] 冷卻混合物至室溫，然后，通過在20°C使用Thermo Haake Mars II Rheometer而 測定它的模量。
[0087] 從0. 01?100rad/sec在10%的固定的應(yīng)變值下測量以Pa計的所述值。
[0088] 用 Haake Rheowin Job Manager 4. 0 軟件處理所有的樣品。
[0089] 益果：圖3也顯示了在其粘性模量G"基本保持不變的同時，該新的組合物的彈性 模量G'如何顯著地減小。
[0090] 實施例 4 :鉬合物 HA-HMW/CS :1:1
[0091] 對于該實驗，使用了根據(jù)EP0716688制備的具有包括2500KD與3000KD之間的重 均麗的HA-HMW衍生物的鈉鹽。
[0092] 20g的HA-HMW溶解于1L的水性緩沖液中，所述水性緩沖液通過向其加入磷酸二 氫鈉（0· 05g)、磷酸氫二鈉（0· 6g)、具有7. 4的pH的氯化鈉（8. 5g)、20g的具有50?60KD 的MW的CS (Seikagaku Kogyo, Tokyo)而制成，混合物在40°C經(jīng)機(jī)械攪拌8個小時，直到兩 種組分完全并均勻地溶解。
[0093] 冷卻混合物至室溫，然后，通過在20°C使用Thermo Haake Mars II Rheometer而 測定它的模量。
[0094] 從0. 01?100rad/sec在10%的固定的應(yīng)變值下測量以Pa計的所述值。用Haake Rheowin Job Manager 4.0軟件處理所有的樣品。
[0095] 益果：圖4也顯示了在其粘性模量G"基本保持不變的同時，該新的組合物的彈性 模量G'如何顯著地減小。
[0096] 結(jié)論：如上述，實驗數(shù)據(jù)確認(rèn)和證實了前面列出和檢測的CS與HA衍生物的組合， 確定了與檢測的起始衍生物的相應(yīng)模量相比，制備的所述新組合物的彈性模量出乎意料地 減小，同時粘性模量顯著增加（對于用特定的衍生物例如HAS1制備的某些組合物），或者與 起始HA衍生物的粘性模量相比，上述模量G 〃實際上"保持不變（hold)"。因此，已經(jīng)獲得 了具有粘性補(bǔ)充劑特有的流變特征的藥物組合物，其中，粘性組分相對于起始衍生物成比 例地增加，因此，這樣的組合能夠更耐摩擦，并且將顯示更大的潤滑關(guān)節(jié)的能力，所以可通 過組合以前顯示的CS的高抗炎性能與HA衍生物的抗炎能力而用作粘性潤滑劑。由于這些 原因，在上面列出的疾病的處理和/或治療中，例如，如0A和軟骨下骨的損失的關(guān)節(jié)內(nèi)治療 中，在疾病例如骨質(zhì)疏松癥--特別是短暫性局部骨質(zhì)疏松癥--的局部處理和/或治療 中，可使用新的組合物，并且最終作為洗液，以及因此在骨軟骨手術(shù)后作為滑液的替代物。
【權(quán)利要求】
1. 粘性潤滑劑，包括與透明質(zhì)酸（HA)衍生物組合的硫酸軟骨素（CS)，所述透明質(zhì)酸 (HA)衍生物選自下面組成的類別： a) 具有包括1500?3000KD之間、優(yōu)選2500?3000KD之間的重均分子量的與堿金屬 或堿土金屬成鹽的透明質(zhì)酸； b) 具有0. 1?10%范圍內(nèi)的酰胺化百分比的具有脂族、芳基脂族、脂環(huán)族、芳族、環(huán)狀 或雜環(huán)系列的胺的HA酰胺； c) 一級硫酸化的透明質(zhì)酸0-硫酸化衍生物； d) 具有不超過10%的酯化百分比的透明質(zhì)酸內(nèi)酯或自交聯(lián)酯； e) 透明質(zhì)酸衍生物，所述透明質(zhì)酸衍生物由10:90至90:10的⑴：（ii)的重量比的 ⑴內(nèi)酯或自交聯(lián)酯與（ii)通過與1，4-丁二醇二縮水甘油醚（BDDE)交聯(lián)獲得的HA衍生 物的混合物組成， 所述粘性潤滑劑用于選自由骨關(guān)節(jié)病、軟骨下?lián)p傷、骨質(zhì)疏松癥并且特別是短暫性局 部骨質(zhì)疏松癥、由創(chuàng)傷/微創(chuàng)傷引起的骨軟骨損傷、滑膜炎和腱鞘炎、腱炎和/或肌腱變性 組成的組中的病癥和/或疾病的關(guān)節(jié)內(nèi)或局部治療中。
2. 粘性潤滑劑，包括與透明質(zhì)酸（HA)衍生物組合的硫酸軟骨素（CS)，所述透明質(zhì)酸 (HA)衍生物選自由下述組成的類別： a) 具有包括1500?3000KD之間、優(yōu)選2500?3000KD之間的重均分子量的與堿金屬 或堿土金屬成鹽的透明質(zhì)酸； b) 具有0. 1?10%范圍內(nèi)的酰胺化百分比的具有脂族、芳基脂族、脂環(huán)族、芳族、環(huán)狀 或雜環(huán)系列的胺的HA酰胺； c) 一級硫酸化的透明質(zhì)酸0-硫酸化衍生物； d) 具有不超過10%的酯化百分比的透明質(zhì)酸內(nèi)酯或自交聯(lián)酯； e) 透明質(zhì)酸衍生物，所述透明質(zhì)酸衍生物由10:90至90:10的⑴：（ii)的重量比的 ⑴內(nèi)酯或自交聯(lián)酯與（ii)通過與1，4-丁二醇二縮水甘油醚（BDDE)交聯(lián)獲得的HA衍生 物的混合物組成， 所述粘性潤滑劑用于用作特別粘的關(guān)節(jié)內(nèi)洗液或用作骨軟骨手術(shù)后的滑液的粘性替 代物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的具有所述用途的粘性潤滑劑，其中，所述透明質(zhì)酸衍生 物選自類別a，并且CS加到所述HA衍生物中，包括的HA衍生物與CS的重量比在1:0. 1與 1:6之間，優(yōu)選在1:0. 5與1:2之間，甚至更優(yōu)選1:1。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的具有所述用途的粘性潤滑劑，其中，所述HA衍生物選自 類別b，其中，所述透明質(zhì)酸酰胺用具有包括500KD與750KD之間的重均分子量的透明質(zhì)酸 制備，并且所述透明質(zhì)酸酰胺優(yōu)選為具有包含1%與8%之間的平均酰胺化程度的十六酰 胺，并且其中，CS加到所述HA衍生物中，包括的HA衍生物與CS的重量比為1:0. 1與1:6之 間，優(yōu)選1:0. 2與1:1之間。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的具有所述用途的粘性潤滑劑，其中，所述HA衍生物選自 類別c，并且由具有包括150KD與300KD之間的重均分子量的透明質(zhì)酸獲得，其中，CS加到 所述HA衍生物中，包括的HA衍生物與CS的重量比為1:0. 1與1:6之間，優(yōu)選1:2與1:6 之間，甚至更優(yōu)選1:4。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的具有所述用途的粘性潤滑劑，其中，所述HA衍生物選自 類別d，并且由具有包括150KD與300KD之間的重均分子量的透明質(zhì)酸制備，其中，CS加到 所述HA衍生物中，包括的HA衍生物與CS的重量比為1:0. 1與1:6之間，優(yōu)選1:0. 2與1:2 之間。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的具有所述用途的粘性潤滑劑，其中，所述HA衍生物選自 類別e，其中，CS加到所述HA衍生物中，包括的HA衍生物與CS的重量比為1:0. 1與1:6之 間，優(yōu)選1:0. 2與1:1. 5之間。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或7的任一項所述的具有所述用途的臨時制成的粘性潤滑劑，其中， 就在關(guān)節(jié)內(nèi)給藥或局部給藥之前發(fā)生CS與所述HA衍生物的組合或在兩種組分單獨給藥后 直接在治療位點內(nèi)發(fā)生CS與所述HA衍生物的組合。
9. 粘性藥物組合物，包括與透明質(zhì)酸（HA)衍生物組合的CS，所述透明質(zhì)酸（HA)衍生 物選自由下面組成的類別： a) 具有包括1500?3000KD之間、優(yōu)選2500?3000KD之間的重均分子量的與堿金屬 或堿土金屬成鹽的透明質(zhì)酸； b) 具有0. 1?10%范圍內(nèi)的酰胺化百分比的具有脂族、芳基脂族、脂環(huán)族、芳族、環(huán)狀 或雜環(huán)系列的胺的HA酰胺； c) 一級硫酸化的透明質(zhì)酸0-硫酸化衍生物； d) 具有不超過10%的酯化百分比的透明質(zhì)酸內(nèi)酯或自交聯(lián)酯； e) 透明質(zhì)酸衍生物，所述透明質(zhì)酸衍生物由10:90至90:10的⑴：（ii)的重量比的 ⑴內(nèi)酯或自交聯(lián)酯與（ii)通過與1，4-丁二醇二縮水甘油醚（BDDE)交聯(lián)獲得的HA衍生 物的混合物組成， 所述粘性藥物組合物用于間質(zhì)性膀胱炎的膀胱內(nèi)治療中。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的具有所述用途的粘性藥物組合物，其中，所述HA衍生物選自 類別a。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的具有所述用途的粘性藥物組合物，其中，所述HA衍生物選自 具有包括500KD與750KD之間的重均分子量的類別b，并且所述HA衍生物優(yōu)選為具有包含 1 %與8%之間的平均酰胺化程度的十六酰胺。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9?11的任一項所述的具有所述用途的粘性藥物組合物，所述粘性 藥物組合物為臨時制成的形式，其中，就在膀胱內(nèi)給藥前發(fā)生硫酸軟骨素與所述透明質(zhì)酸 衍生物的組合，或者在兩種組分單獨給藥后直接在治療位點內(nèi)發(fā)生硫酸軟骨素與所述透明 質(zhì)酸衍生物的組合。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1?8的任一項所述的具有所述用途的粘性潤滑劑，或根據(jù)權(quán)利要求 9?12的任一項所述的用途的藥物組合物，包括選自如下的緩沖液： ?磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉，兩者以生理濃度溶解于氯化鈉的水溶液中，具有包括6. 5 與7. 4之間的pH和包括100m0s/l與350m0s/l之間的滲透濃度，和 ?也在生理濃度的氯化鈉，具有包括6. 5與7. 4之間的pH和包括100m0s/l與350m0s/ 1的滲透濃度。
【文檔編號】A61K31/728GK104220078SQ201380018447
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2013年3月27日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月30日
【發(fā)明者】安娜·瑪麗亞·扎內(nèi)拉托, 溫琴扎·科爾薩, 賈恩卡洛·卡爾帕內(nèi)塞, 莫妮卡·坎皮西 申請人:菲迪亞醫(yī)藥公司