包含融合蛋白的癌癥治療用藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的目的在于將癌特異性抗原與細(xì)胞因子的融合蛋白用作癌癥的預(yù)防劑或治療劑。一種癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其包含癌特異性抗原與選自由人IL2(hIL2)、人IL4(hIL4)、人IL7(hIL7)、人GMCSF(hGMCSF)、小鼠IL4(mIL4)和小鼠GMCSF(mGMCSF)組成的組中的細(xì)胞因子的融合蛋白作為有效成分。
【專利說(shuō)明】包含融合蛋白的癌癥治療用藥物組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及癌癥治療用藥物組合物。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前，作為新的癌癥治療戰(zhàn)略的"癌癥疫苗"受到矚目，對(duì)樹(shù)突細(xì)胞療法及肽 疫苗等進(jìn)行了各種研究，2011年4月美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局通過(guò)了對(duì)于針對(duì)前列腺 癌的癌抗原PAP(前列腺酸性磷酸酶；prostatic acid phosphatase)的樹(shù)突細(xì)胞疫苗 Sipuleucel-T (Provenge (注冊(cè)商標(biāo)））（參照非專利文獻(xiàn)1)。該藥劑是采集患者的外周血 單核細(xì)胞（PBMC)并添加作為融合蛋白的PAP-hGMCSF劑（在昆蟲(chóng)細(xì)胞中產(chǎn)生）培養(yǎng)約2天 所制作的細(xì)胞藥物，該細(xì)胞藥物通過(guò)靜脈注射給藥至同一患者中。
[0003] 作為促進(jìn)樹(shù)突細(xì)胞的分化、使抗癌免疫活化的細(xì)胞因子，報(bào)道了 IL2、IL4、IL7、 61?^?(參照非專利文獻(xiàn)2和3)。非專利文獻(xiàn)2中記載了：11^2、11^4、11^7、61?^?作用于人的 外周血單核細(xì)胞（PBMC)，促進(jìn)樹(shù)突細(xì)胞的分化，使抗癌免疫活化；非專利文獻(xiàn)3中記載了： IL2、IL4、IL7作用于人的外周血單核細(xì)胞（PBMC)，促進(jìn)淋巴細(xì)胞的分化，使抗癌免疫活化。
[0004] 但是，Sipuleucel-T所產(chǎn)生的改善生存期間的治療效果僅限為4. 1個(gè)月，開(kāi)發(fā)出 治療效果更強(qiáng)的治療法成為了緊迫的課題。另外，對(duì)于非專利文獻(xiàn)2和非專利文獻(xiàn)3所示 的作為細(xì)胞因子的IL2、IL4、IL7和GMCSF，一直以來(lái)期待具有抗腫瘤效果，但實(shí)際上關(guān)于各 個(gè)細(xì)胞因子并未報(bào)道在前列腺癌等癌癥治療中具有有效的治療效果，各個(gè)細(xì)胞因子并未用 于前列腺癌等癌癥治療的臨床中。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) [0006] 非專利文獻(xiàn)
[0007] 非專利文獻(xiàn) I :Kantoff PW et al.，N Engl J Med. 2010Jul 29 ;363(5) :411-22
[0008] 非專利文獻(xiàn) 2 :Zou GM et al.，Eur Cytokine Netw. 2002Apr_Jun ; 13 (2) : 186-99
[0009] 非專利文獻(xiàn) 3 :Alderson MR et al. J Exp Med. 1990Aug I ;172(2) :577-87


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 發(fā)明要解決的課題
[0011] 本發(fā)明的目的在于將癌特異性抗原和細(xì)胞因子的融合蛋白用作癌的預(yù)防劑或治 療劑。特別是，目的在于提供一種癌的預(yù)防劑或治療劑，其包含癌特異性抗原與細(xì)胞因子 的融合蛋白作為有效成分，癌特異性抗原為前列腺特異性抗原（PSA)、前列腺酸性磷酸酶 (PAP)、前列腺特異性膜抗原（PSM)、MAGEA4(人類黑色素瘤相關(guān)抗原4)、CD147或癌胚抗 原（CEA)，細(xì)胞因子為人 IL2(hIL2)、人 IL4(hIL4)、人 IL7(hIL7)、人 GMCSF(hGMCSF)、小鼠 IL4 (mIL4)或小鼠 GMCSF (mGMCSF)。
[0012] 用于解決課題的方案
[0013] 本發(fā)明人以前列腺癌為對(duì)象，對(duì)基于促進(jìn)生物體的抗癌活性的癌癥治療法的開(kāi)發(fā) 進(jìn)行了深入研究。確認(rèn)了人PSA或人PAP與人IL2 (hIL2)、人IL4 (hIL4)、人IL7 (hIL7)、人 GMCSF (hGMCSF)、小鼠 IL4 (mIL4)或小鼠 GMCSF (mGMCSF)的融合蛋白在生物體中對(duì)于抗癌免 疫活性的效果。
[0014] 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：人PSA或PAP與小鼠來(lái)源的mGMCSF或mIL4的融合蛋白在前列腺癌小 鼠模型的治療實(shí)驗(yàn)中顯示出抗癌效果；以及人PSA或PAP與小鼠來(lái)源的mGMCSF和mIL4的 融合蛋白在小鼠來(lái)源的外周血單核細(xì)胞中具有樹(shù)突細(xì)胞分化誘導(dǎo)能力。該結(jié)果表明，人PSA 或PAP與小鼠來(lái)源的mGMCSF或mIL4的融合蛋白在小鼠前列腺癌模型的體內(nèi)可增強(qiáng)對(duì)人 PSA或PAP進(jìn)行抗原提呈的小鼠樹(shù)突細(xì)胞的作用，誘導(dǎo)表達(dá)這些抗原的癌細(xì)胞中的抗腫瘤 效果。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，人PSA或PAP與人來(lái)源的hGMCSF或hIL4的融合蛋白在人來(lái)源 的外周血單核細(xì)胞中具有樹(shù)突細(xì)胞分化誘導(dǎo)能力，與在人前列腺癌小鼠模型中確認(rèn)到的情 況同樣地，發(fā)現(xiàn)人PSA或PAP與人來(lái)源的hGMCSF或hIL4的融合蛋白在人前列腺癌患者中 也可以誘導(dǎo)基于對(duì)人PSA或PAP的免疫的抗癌治療效果。此外發(fā)現(xiàn)，人PSA或PAP與hIL2 或hIL7的融合蛋白同樣地在人前列腺癌患者中也可以誘導(dǎo)基于對(duì)人PSA或PAP的免疫的 抗癌治療效果。本發(fā)明人進(jìn)一步對(duì)PSMA、MAGEA4、⑶147和CEA也制作了與細(xì)胞因子的融合 蛋白，發(fā)現(xiàn)在癌癥患者中可以誘導(dǎo)基于對(duì)PSMA、MAGEA4、CD147或CEA的免疫的抗癌治療效 果，從而完成了本發(fā)明。
[0015] SP，本發(fā)明如下所述。
[0016] [1] 一種癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其包含癌特異性抗原與下述細(xì)胞因子 的融合蛋白中的單獨(dú)一種或兩種以上作為有效成分，該細(xì)胞因子選自由人IL2(hIL2)、人 IL4 (hIL4)、人 IL7 (hIL7)、人 GMCSF (hGMCSF)、小鼠 IL4 (mIL4)和小鼠 GMCSF (mGMCSF)組成 的組。
[0017] [2]如[1]所述的癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其中，癌特異性抗原為前列腺特 異性抗原（PSA)或前列腺酸性磷酸酶（PAP)，所要預(yù)防或治療的癌為前列腺癌。
[0018] [3]如[1]所述的癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其中，癌特異性抗原為前列腺特 異性膜抗原（PSM)，所要預(yù)防或治療的癌為前列腺癌。
[0019] [4]如[1]所述的癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其中，癌特異性抗原為選自由 MAGEA4、CD147和癌胚抗原（CEA)組成的組中的癌特異性抗原。
[0020] [5]如[4]所述的癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其中，所要預(yù)防或治療的癌選自 由腦?神經(jīng)腫瘤、皮膚癌、胃癌、肺癌、肝癌、肝細(xì)胞癌、口腔癌、淋巴瘤?白血病等血液癌、惡 性淋巴瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、大腸癌、膽囊癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肛門?直腸癌、食道癌、 宮頸癌等子宮癌、卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌、腎上腺癌、腎癌、腎盂輸尿管癌、膀胱癌、 前列腺癌、尿道癌、陰莖癌、睪丸癌、骨瘤?骨肉瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤和間皮瘤組成的組。
[0021] [6] -種制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方法，其包括以下步驟：在體 外（in vitro)，在癌特異性抗原與選自由人IL2(hIL2)、人IL4(hIL4)、人IL7(hIL7)、人 GMCSF (hGMCSF)、小鼠 IL4(mIL4)和小鼠 GMCSF (mGMCSF)組成的組中的細(xì)胞因子的融合蛋白 中的單獨(dú)一種或兩種以上的存在下，對(duì)可分化為免疫活性細(xì)胞的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
[0022] [7]如[6]所述的制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方法，其中，癌特異性 抗原為前列腺特異性抗原（PSA)或前列腺酸性磷酸酶（PAP)，所要預(yù)防或治療的癌為前列 腺癌。
[0023] [8]如[6]所述的制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方法，其中，癌特異性 抗原為前列腺特異性膜抗原（PSM)，所要預(yù)防或治療的癌為前列腺癌。
[0024] [9]如[6]所述的制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方法，其中，癌特異性 抗原為選自由MAGEA4、⑶147和癌胚抗原（CEA)組成的組中的癌特異性抗原。
[0025] [10]如[9]所述的制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方法，其中，所要 預(yù)防或治療的癌選自由腦?神經(jīng)腫瘤、皮膚癌、胃癌、肺癌、肝癌、肝細(xì)胞癌、口腔癌、淋巴 瘤?白血病等血液癌、惡性淋巴瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、大腸癌、膽囊癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、 肛門?直腸癌、食道癌、宮頸癌等子宮癌、卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌、腎上腺癌、腎癌、腎 盂輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、尿道癌、陰莖癌、睪丸癌、骨瘤?骨肉瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤 和間皮瘤組成的組。
[0026] [11]如[6]?[10]的任一項(xiàng)所述的制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方 法，其中，可分化為免疫活性細(xì)胞的細(xì)胞為由外周血、骨髓液或臍帶血得到的單核細(xì)胞。
[0027] [12]如[6]?[10]的任一項(xiàng)所述的制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方 法，其中，可分化為免疫活性細(xì)胞的細(xì)胞為干細(xì)胞。
[0028] [13]如[6]?[12]的任一項(xiàng)所述的制備免疫活性細(xì)胞的方法，其中，免疫活性細(xì) 胞為抗原提呈細(xì)胞或活化淋巴細(xì)胞。
[0029] [14] -種癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其包含利用[6]?[13]的任一項(xiàng)所述的 方法所制備的免疫活性細(xì)胞。
[0030] [15] -種DNA構(gòu)建體，其在具有以下所示的結(jié)構(gòu)的3個(gè)構(gòu)建體中的任一個(gè)插 入基因的部分插入有編碼以 PSA-hIL2、PSA-hIL4、PSA-hIL7、PSA-hGMCSF、PSA-mIL4、 PSA-mGMCSF、PAP-hIL2、PAP-hIL4、PAP-hIL7、PAP-hGMCSF、PAP-mIL4、PAP-mGMCSF、 PSMA-hIL2、PSMA-hIL4、PSMA-hIL7、PSMA-hGMCSF、PSMA-mIL4、PSMA-mGMCSF、MAGEA4-hIL2、 MAGEA4-hIL4、MAGEA4-hIL7、MAGEA4-hGMCSF、MAGEA4-mIL4、MAGEA4-mGMCSF、CD147-hIL2、 CD147-hIL4、CD147-hIL7、CD147-hGMCSF、CD147-mIL4、CD147-mGMCSF、CEA-hIL2、CEA-hIL4、 CEA-hIL7、CEA-hGMCSF、CEA-mIL4、CEA-mGMCSF、CEAl-hIL2、CEAl-hIL4、CEAl-hIL7、 CEAl-hGMCSF、CEAl-mIL4、CEAl-mGMCSF、CEA2-hIL2、CEA2-hIL4、CEA2-hIL7、CEA2-hGMCSF、 CEA2-mIL4和CEA2-mGMCSF表示的48種融合蛋白的DNA中的任一種：
[0031]
[0032」

【權(quán)利要求】
1. 一種癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其包含癌特異性抗原與下述細(xì)胞因子的 融合蛋白中的單獨(dú)一種或兩種以上作為有效成分，該細(xì)胞因子選自由人IL2(hIL2)、人 IL4 (hIL4)、人 IL7 (hIL7)、人 GMCSF (hGMCSF)、小鼠 IL4 (mIL4)和小鼠 GMCSF (mGMCSF)組成 的組。
2. 如權(quán)利要求1所述的癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其中，癌特異性抗原為前列腺 特異性抗原（PSA)、前列腺酸性磷酸酶（PAP)或前列腺特異性膜抗原（PSM)，所要預(yù)防或治 療的癌為前列腺癌。
3. 如權(quán)利要求1所述的癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其中，癌特異性抗原為選自由 MAGEA4、CD147和癌胚抗原（CEA)組成的組中的癌特異性抗原，所要預(yù)防或治療的癌選自由 腦?神經(jīng)腫瘤、皮膚癌、胃癌、肺癌、肝癌、肝細(xì)胞癌、口腔癌、淋巴瘤?白血病等血液癌、惡性 淋巴瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、大腸癌、膽囊癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肛門?直腸癌、食道癌、宮 頸癌等子宮癌、卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌、腎上腺癌、腎癌、腎盂輸尿管癌、膀胱癌、前 列腺癌、尿道癌、陰莖癌、睪丸癌、骨瘤?骨肉瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤和間皮瘤組成的組。
4. 一種制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方法，其包括以下步驟：在體外，在 癌特異性抗原與選自由人IL2 (hIL2)、人IL4 (hIL4)、人IL7 (hIL7)、人GMCSF (hGMCSF)、小鼠 IL4(mIL4)和小鼠 GMCSF(mGMCSF)組成的組中的細(xì)胞因子的融合蛋白中的單獨(dú)一種或兩種 以上的存在下，對(duì)可分化為免疫活性細(xì)胞的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 如權(quán)利要求4所述的制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方法，其中，癌特 異性抗原為前列腺特異性抗原（PSA)、前列腺酸性磷酸酶（PAP)或前列腺特異性膜抗原 (PSM)，所要預(yù)防或治療的癌為前列腺癌。
6. 如權(quán)利要求4所述的制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方法，其中，癌特異 性抗原為選自由MAGEA4、CD147和癌胚抗原（CEA)組成的組中的癌特異性抗原，所要預(yù)防或 治療的癌選自由腦?神經(jīng)腫瘤、皮膚癌、胃癌、肺癌、肝癌、肝細(xì)胞癌、口腔癌、淋巴瘤?白血 病等血液癌、惡性淋巴瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、大腸癌、膽囊癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肛門?直 腸癌、食道癌、宮頸癌等子宮癌、卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌、腎上腺癌、腎癌、腎盂輸尿 管癌、膀胱癌、前列腺癌、尿道癌、陰莖癌、睪丸癌、骨瘤?骨肉瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤和間皮 瘤組成的組。
7. 如權(quán)利要求4?6的任一項(xiàng)所述的制備具有抗癌免疫活性的免疫活性細(xì)胞的方法， 其中，可分化為免疫活性細(xì)胞的細(xì)胞為從外周血、骨髓液或臍帶血得到的單核細(xì)胞；或選自 由誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、胚性干細(xì)胞（ES細(xì)胞）、包括骨髓中的造血干細(xì)胞的血球系干細(xì)胞、間 充質(zhì)干細(xì)胞和組織特異性干細(xì)胞組成的組中的干細(xì)胞。
8. 如權(quán)利要求4?7的任一項(xiàng)所述的制備免疫活性細(xì)胞的方法，其中，免疫活性細(xì)胞為 選自由樹(shù)突細(xì)胞、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞、輔助T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞組成的組中的免疫活 性細(xì)胞。
9. 一種癌的預(yù)防或治療用藥物組合物，其包含利用權(quán)利要求4?8的任一項(xiàng)所述的方 法所制備的免疫活性細(xì)胞。
10. -種DNA構(gòu)建體，其在具有以下所示的結(jié)構(gòu)的3個(gè)構(gòu)建體中的任一個(gè)插 入基因的部分插入有對(duì)以 PSA-hIL2、PSA-hIL4、PSA-hIL7、PSA-hGMCSF、PSA-mIL4、 PSA-mGMCSF、PAP-hIL2、PAP-hIL4、PAP-hIL7、PAP-hGMCSF、PAP-mIL4、PAP-mGMCSF、 PSMA-hIL2、PSMA-hIL4、PSMA-hIL7、PSMA-hGMCSF、PSMA-mIL4、PSMA-mGMCSF、MAGEA4-hIL2、 MAGEA4-hIL4、MAGEA4-hIL7、MAGEA4-hGMCSF、MAGEA4-mIL4、MAGEA4-mGMCSF、CD147-hIL2、 CD147-hIL4、CD147-hIL7、CD147-hGMCSF、CD147-mIL4、CD147-mGMCSF、CEA-hIL2、CEA-hIL4、 CEA-hIL7、CEA-hGMCSF、CEA-mIL4、CEA-mGMCSF、CEAl-hIL2、CEAl-hIL4、CEAl-hIL7、 CEAl-hGMCSF、CEAl-mIL4、CEAl-mGMCSF、CEA2-hIL2、CEA2-hIL4、CEA2-hIL7、CEA2-hGMCSF、 CEA2-mIL4和CEA2-mGMCSF表示的48種融合蛋白進(jìn)行編碼的DNA中的任一種：

11. 一種載體，其包含權(quán)利要求10所述的DNA構(gòu)建體。
12. -種癌癥治療用制劑，其包含權(quán)利要求11所述的載體。
13. 如權(quán)利要求12所述的癌癥治療用制劑，其用于治療選自由腦?神經(jīng)腫瘤、皮膚癌、 胃癌、肺癌、肝癌、肝細(xì)胞癌、口腔癌、淋巴瘤?白血病等血液癌、惡性淋巴瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑 色素瘤、大腸癌、膽囊癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肛門?直腸癌、食道癌、宮頸癌等子宮癌、卵巢癌、 乳腺癌、甲狀腺髓樣癌、腎上腺癌、腎癌、腎盂輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、尿道癌、陰莖癌、 睪丸癌、骨瘤?骨肉瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤和間皮瘤組成的組中的癌。
14. 一種⑶147參與的疾病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其包含⑶147與下述細(xì)胞因 子的融合蛋白中的單獨(dú)一種或兩種以上作為有效成分，所述細(xì)胞因子選自由人IL2 (hIL2)、 人11^4〇111^4)、人11^7〇111^7)、人61?^?〇161?^?)、小鼠11^4(11111^4)和小鼠61?^?(11161?^?)組 成的組。
15. -種制備可用于CD147參與的疾病的預(yù)防或治療的細(xì)胞的方法，其包括以下步驟： 在體外，在〇)147與選自由人11^2〇111^2)、人11^4〇111^4)、人11^7〇111^7)、人61?^?〇161?^?)、 小鼠 IL4(mIL4)和小鼠 GMCSF(mGMCSF)組成的組中的細(xì)胞因子的融合蛋白中的單獨(dú)一種或 兩種以上的存在下，對(duì)可分化為免疫活性細(xì)胞的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
16. 如權(quán)利要求14所述的預(yù)防或治療用藥物組合物、或如權(quán)利要求15所述的制備可用 于預(yù)防或治療的細(xì)胞的方法，其中，CD147參與的疾病選自由肺疾病、惡性疾病、免疫相關(guān)疾 病、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、纖維化和感染癥組成的組。
【文檔編號(hào)】A61P31/00GK104220085SQ201380019776
【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2013年2月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月16日
【發(fā)明者】渡部昌實(shí), 公文裕巳, 那須保友 申請(qǐng)人:渡部昌實(shí)