用于治療b細(xì)胞介導(dǎo)的炎性疾病的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了用于治療CXCL13表達(dá)相關(guān)疾病的方法，包括某些自身免疫和炎性疾病(如干燥綜合征)。所述方法包括給予需要治療的對(duì)象有效量的抑制CXCL13活性的物質(zhì)。根據(jù)本文所示本發(fā)明的方面，提供了一種治療、預(yù)防對(duì)象中B細(xì)胞介導(dǎo)炎性病癥或減輕其惡化的方法，包括給予對(duì)象有效量的分離的特異性結(jié)合CXCL13的結(jié)合分子，所述分子阻止或抑制CXCL13的活性。
【專利說(shuō)明】用于治療B細(xì)胞介導(dǎo)的炎性疾病的方法
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【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003] 本發(fā)明一般地涉及炎性疾病的治療，尤其是B細(xì)胞介導(dǎo)的炎性疾病。
[0004] 發(fā)明背景
[0005] 產(chǎn)生有自身抗體（針對(duì)自身抗原的抗體）生成潛能的B細(xì)胞在正常生理情 況下是常見(jiàn)的。然而，這種天然自身抗體是低親和性IgM抗體，其表現(xiàn)出廣譜反應(yīng)性 并且對(duì)可溶性自身抗原相比細(xì)胞表面抗原具有強(qiáng)優(yōu)先性（參見(jiàn)例如Dichiero等，J. Immunol. 134(2):765-771 (1985);Cote等，Proc.Natl.Acad.Sci83:2959-2963(1986))。 自身反應(yīng)的低親和性B細(xì)胞經(jīng)歷細(xì)胞凋亡，并且因此不太可能危及健康生物體。
[0006] 在一些情況下，產(chǎn)生自身抗體的B細(xì)胞數(shù)目的增加、其被招募至特定區(qū)域或所產(chǎn) 生自身抗體的親和性增加會(huì)導(dǎo)致自身免疫疾病的發(fā)生。某些自身免疫疾病的特征是存在特 定的自身抗體，所述自身抗體被認(rèn)為有助于疾病發(fā)病和疾病狀態(tài)的維持。
[0007] 干燥綜合征（SS)是一種罕見(jiàn)的自身免疫疾病，影響約0. 2至0. 7%的總?cè)巳?。?常，其出現(xiàn)在40至60歲，且估計(jì)具有9:1女性傾向。值得注意的是，該疾病以原發(fā)和繼發(fā)形 式出現(xiàn)。原發(fā)形式主要影響唾液腺和淚腺，而繼發(fā)形式與其他自身免疫結(jié)締組織疾?。ㄈ珙?風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA)和系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE))共同出現(xiàn)?；加性l(fā)性和繼發(fā)性SS(分別為 pSS和sSS)的患者同時(shí)具有疾病的口部和眼部表現(xiàn)。雖然SS誘導(dǎo)的口腔干燥（口干癥）和 眼睛干燥（干眼病）對(duì)于患者的生活質(zhì)量具有顯著的消極影響，越來(lái)越多的文獻(xiàn)顯示了該 疾病的其他使人虛弱的方面，包括骨骼肌、肺和腎表現(xiàn)，皮膚病變，白細(xì)胞破壞性脈管炎，雷 諾氏現(xiàn)象，血液學(xué)并發(fā)癥，肝臟病變和B細(xì)胞淋巴瘤。因此，該疾病的兩種形式都造成了患病 個(gè)體顯著的發(fā)病率和死亡率。參見(jiàn)Voulgarelis等，ArthritisRheum(1999)42:1765-1772 ; Garcia-Carrasco等，JRheumatol(2002)29:726-730;Ramos_Casals等，Medicine (Baltimore) (2002) 81: 281-292 ；Fox,Lancet(2002) 366: 321-331；EkStrom等， Blood(2008) 111:4029-4038 ;和Delalande等，Medicine(Baltimore) (2008)83:280-291。 因此，存在對(duì)于自身免疫疾?。ㄈ绺稍锞C合征）和其他炎性疾病的治療療法研發(fā)的需要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供了用于治療CXCL13表達(dá)相關(guān)疾病的方法，包括某些自身免疫和炎性 疾病。根據(jù)本文所示本發(fā)明的方面，提供了一種治療、預(yù)防對(duì)象中B細(xì)胞介導(dǎo)炎性病癥或減 輕其惡化的方法，包括給予對(duì)象有效量的能夠阻止或抑制CXCL13活性的物質(zhì)。在一些實(shí)施 方式中，所述物質(zhì)抑制CXL13與其受體（如CXCR5或CXCR3)之間的相互作用。在某些實(shí)施 方式中，所述物質(zhì)是特異性結(jié)合CXCL13的分離的結(jié)合分子。在其他實(shí)施方式中，所述物質(zhì) 是特異性結(jié)合CXCL13受體（如CXCR5或CXCR3)或CXCL13受體（如CXCR5或CXCR3)可溶 形式的分離的結(jié)合分子。
[0009] 在本文所示某些方面，通過(guò)給予阻止或抑制CXCL13活性的物質(zhì)所治療的B細(xì)胞介 導(dǎo)炎性病癥是干燥綜合征。
[0010] 本發(fā)明涵蓋如下實(shí)施方式：
[0011] 1. -種治療對(duì)象中干燥綜合征的方法，所述方法包括給予需要治療的對(duì)象有效量 的抑制CXCL13活性的物質(zhì)。
[0012] 2.如實(shí)施方式1所述的方法，所述物質(zhì)是特異性結(jié)合CXCR5的結(jié)合分子。
[0013] 3.如實(shí)施方式1所述的方法，所述物質(zhì)是特異性結(jié)合CXCR13的結(jié)合分子。
[0014] 4.如實(shí)施方式2或3所述的方法，所述結(jié)合分子包括抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0015] 5.如實(shí)施方式4所述的方法，所述抗體是嵌合、人或人源化的。
[0016] 6.如實(shí)施方式4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段 包含重鏈可變（VH)結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQIDNO: 10或14中所列氨基酸序列 具有至少90%序列相同性。
[0017] 7.如實(shí)施方式4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段 包含重鏈可變（VH)結(jié)構(gòu)域，除20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代外，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域具 有與SEQIDNO: 10或14中所列序列相同的氨基酸序列。
[0018] 8.如實(shí)施方式6或7所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段 包含具有SEQ IDNO: 14中所列序列的VH結(jié)構(gòu)域。
[0019] 9.如實(shí)施方式4-8中任一項(xiàng)所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié) 合片段包含輕鏈可變（VL)結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQIDNO: 15、19或21中所列 氨基酸序列具有至少90%序列相同性。
[0020] 10.如實(shí)施方式4-8中任一項(xiàng)所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或其抗 原結(jié)合片段包含輕鏈可變（VL)結(jié)構(gòu)域，除20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代外，所述輕鏈可 變結(jié)構(gòu)域具有與SEQIDNO: 15、19或21中所列序列相同的氨基酸序列。
[0021] 11.如實(shí)施方式9或10所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片 段包含具有SEQIDNO: 19中所列序列的VL結(jié)構(gòu)域。
[0022] 12.如實(shí)施方式4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片 段包含重鏈可變（VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變（VL)結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域具有與選自下組的VL和VL序列具有至少90%相同性的氨基酸序列：
[0023] a)分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO: 19 ;
[0024] b)分別是 SEQIDNO: 14 和 SEQIDNO: 21 ;
[0025] c)分別是 SEQIDNO: 10 和 SEQIDNO: 15。
[0026] 13.如實(shí)施方式4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片 段包含重鏈可變（VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變（VL)結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域各自除20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代外，具有與選自下組的VH和VL序列相同的氨 基酸序列：
[0027] a)分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO: 19 ;
[0028] b)分別是 SEQIDNO: 14 和 SEQIDNO: 21 ;
[0029] c)分別是SEQIDNO: 10 和SEQIDNO: 15。
[0030] 14.如實(shí)施方式4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片 段包含重鏈可變（VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變（VL)結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域具有與選自下組的VH和VL序列相同的氨基酸序列：
[0031] a)分別是SEQIDNO: 14 和 SEQIDNO: 19 ;
[0032] b)分別是SEQIDNO: 14 和 SEQIDNO: 21 ;
[0033] c)分別是SEQIDNO: 10 和 SEQIDNO: 15。
[0034] 15.如實(shí)施方式9所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包 含具有SEQIDNO: 14中所列序列的VH結(jié)構(gòu)域和具有SEQIDNO: 19中所列序列的VL結(jié)構(gòu) 域。
[0035] 16.如實(shí)施方式4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片 段包含具有至少一種以下互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R)的VH結(jié)構(gòu)域：
[0036] &)與5￡0 10勵(lì)：11具有至少90%序列相同性的〇?1;
[0037] 幻與5￡0 10勵(lì)：12具有至少90%序列相同性的〇)1?2;以及
[0038] (：)與5￡0 10勵(lì)：13具有至少90%序列相同性的〇)1?3。
[0039] 17.如實(shí)施方式4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片 段包含具有至少一種以下互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R)的VH結(jié)構(gòu)域：
[0040] a)除兩個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDN0:11相同的氨基酸序列的 CDR1 ;
[0041] b)除四個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDN0:12相同的氨基酸序列的 CDR2 ;
[0042] c)除四個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDN0:13相同的氨基酸序列的 CDR3 ;
[0043] 18.如實(shí)施方式16或17所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合 片段包含VH結(jié)構(gòu)域，所述VH結(jié)構(gòu)域包含具有SEQIDNO: 11中所列序列的⑶R1、具有SEQ IDNO: 12中所列序列的CDR2和具有SEQIDNO: 13中所列序列的CDR3。
[0044] 19.如實(shí)施方式4、5或16-18中任一項(xiàng)所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗 體或抗原結(jié)合片段包含具有至少一種以下互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)的VL結(jié)構(gòu)域：
[0045] a)與SEQIDNO: 17或20具有至少90%序列相同性的CDR1 ;
[0046] 幻與5￡〇10勵(lì)：17具有至少90%序列相同性的0)1?2;以及
[0047] (：)與5￡0 10勵(lì)：18具有至少90%序列相同性的〇)1?3。
[0048] 20.如實(shí)施方式4、5或16-18中任一項(xiàng)所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗 體或抗原結(jié)合片段包含具有至少一種以下互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)的VL結(jié)構(gòu)域：
[0049] a)除四個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDNO: 17或20相同的氨基酸序列 的CDR1 ;
[0050] b)除兩個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDN0:17相同的氨基酸序列的 ⑶R2 ;以及
[0051] c)除兩個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDN0:18相同的氨基酸序列的 CDR3〇
[0052] 21.如實(shí)施方式19或20所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合 片段包含VL結(jié)構(gòu)域，所述VL結(jié)構(gòu)域包含具有SEQIDN0:20中所列序列的⑶R1、具有SEQ IDNO: 17中所列序列的CDR2和具有SEQIDNO: 18中所列序列的CDR3。
[0053] 22.如實(shí)施方式4-21中任一項(xiàng)所述的方法，所述抗體是IgGlk抗體。
[0054] 23.如實(shí)施方式22所述的方法，所述抗體包含VH結(jié)構(gòu)域中的人IgGl恒定區(qū)和VL 結(jié)構(gòu)域的所述恒定區(qū)中的人k區(qū)。
[0055] 24.如實(shí)施方式4所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段選 自下組：
[0056] a)單克隆抗體5261 ;
[0057] b)單克隆抗體5378 ;
[0058] c)單克隆抗體5080 ;
[0059] d)單克隆抗體1476 ;
[0060] e)單克隆抗體3D2 ;
[0061] f)a)-e)中任一單克隆抗體的嵌合或人源化形式；
[0062] g)與選自a)-e)的參考單克隆抗體結(jié)合相同CXCL13表位的抗體或抗原結(jié)合片 段；
[0063] h)競(jìng)爭(zhēng)性抑制選自a)-e)的參考單克隆抗體的抗體或抗原結(jié)合片段；以及
[0064] i)a)-h)中任一個(gè)的抗原結(jié)合片段。
[0065] 25.如實(shí)施方式24所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體選自所述單克隆抗 體5261、所述單克隆抗體5378、所述單克隆抗體5080、所述單克隆抗體1476和所述單克隆 抗體3D2。
[0066] 26.如實(shí)施方式25所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體是所述單克隆抗體 5378〇
[0067] 27.如實(shí)施方式4-24中任一項(xiàng)所述的方法，所述抗原結(jié)合片段選自Fab、F(ab'）2、 Fv和scFv〇
[0068] 28.如實(shí)施方式1所述的方法，所述物質(zhì)是可溶形式的CXCR5或CXCR3。
[0069] 29.如實(shí)施方式1-28中任一項(xiàng)所述的方法，所述物質(zhì)抑制CXCL13與CXCL13受體 的相互作用。
[0070] 30.如實(shí)施方式29所述的方法，所述CXCL13受體是CXCR5或CXCR3。
[0071] 31.如實(shí)施方式1-30中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法預(yù)防所述對(duì)象中的干燥綜合 征。
[0072] 32.如實(shí)施方式1-31中任一項(xiàng)所述的方法，所述物質(zhì)與藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體一 起給予。
[0073] 33. -種治療對(duì)象中干燥綜合征的方法，包括給予需要治療的對(duì)象有效量的特異 性結(jié)合CXCL13的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段抑制CXCL13的活性。
[0074] 34.如實(shí)施方式33所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或其抗原結(jié)合片段 包含具有SEQIDNO: 14中所列序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和具有SEQIDNO: 19中所列序列的 輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0075] 35.如實(shí)施方式33所述的方法，所述抗體或其抗原結(jié)合片段抑制CXCL13與CXCR5 的相互作用。
[0076] 36.如實(shí)施方式1-35中任一項(xiàng)所述的方法，所述對(duì)象是動(dòng)物。
[0077] 37.如實(shí)施方式36所述的方法，所述動(dòng)物是哺乳動(dòng)物。
[0078] 38.如實(shí)施方式37所述的方法，所述哺乳動(dòng)物是人。
[0079] 下文發(fā)明的說(shuō)明書中更詳細(xì)地公開(kāi)了本發(fā)明的這些和其他方面。
[0080] 附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明
[0081] 圖1A顯示了來(lái)自雌性NOD/ShiLtJ(NOD)小鼠的蘇木精和伊紅（H&E)染色的唾液 腺樣品，所述小鼠用同種型對(duì)照抗體（左圖）或抗CXCL13抗體（右圖）治療，從4周齡開(kāi) 始每周治療3次共持續(xù)12周。在16周齡時(shí)處死后移出唾液組織用于分析。圖1B顯示了 同種型對(duì)照和抗CXCL13抗體治療的樣品的頒下組織中淋巴細(xì)胞病灶的數(shù)目。
[0082] 圖2顯示了上述同種型對(duì)照抗體或抗CXCL13抗體治療后小鼠唾液組織中CXCR5 mRNA的表達(dá)。
[0083] 圖3顯示了上述同種型對(duì)照抗體或抗CXCL13抗體治療后小鼠唾液組織中⑶19 mRNA的表達(dá)。
[0084] 圖4顯示了上述同種型對(duì)照抗體或抗CXCL13抗體治療后小鼠唾液組織中⑶4 mRNA的表達(dá)。
[0085] 發(fā)明詳述
[0086] 內(nèi)穩(wěn)態(tài)B細(xì)胞虜獲趨化因子l(BCA-l)也稱為CXCL13(或ANGIE、BLC、BLR1L、 ANGIE2或Scybl3)，在次級(jí)淋巴器官（如脾、淋巴結(jié)和派爾斑）中由濾泡型樹(shù)突細(xì)胞（FDC) 和巨細(xì)胞組成型表達(dá)。參見(jiàn)Gunn等，Nature391:799-803(1998)和Carlsen等，Blood 104(10):3021-3027(2004)。CXCL13主要通過(guò)G蛋白偶聯(lián)CXCR5受體（伯基特淋巴瘤 受體1)作用。例如在成熟的B淋巴細(xì)胞、⑶4+濾泡型輔助T細(xì)胞（Thf?細(xì)胞）、小部分 CD8+T細(xì)胞和活化的扁桃體調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg)上表達(dá)CXCR5。參見(jiàn)Legler等，J.Exp. Med. 187:655-660(1998);F6rster等，Blood84:830-840(1994);Fazilleau等，Immunity 30:324-335(2009);Ansel等，J.Exp.Med. 190:1123-1134(1999);Lim等，J.Clin. Invest. 114 (11): 1640-1649 (2004);和R.Fdrster，ChapterinAcademicPressCytokine Reference，2000年8月；上述各文獻(xiàn)都通過(guò)引用全文納入本文。CXCL13也可通過(guò)另一個(gè) 趨化因子受體CXCR3傳遞信號(hào)，其由例如中等至大血管的活化T細(xì)胞、自然殺傷（NK)細(xì) 胞、樹(shù)突細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)（Jenh等，Cytokine15:113-121 (2001) ;Garcia_L6pez等， LaboratoryInvestigation81:409-418(2001)，上述各文獻(xiàn)都通過(guò)引用全文納入本文。）。
[0087] 本文所用的術(shù)語(yǔ)"CXCL13"和"CXCL13多肽"可互換使用。在某些實(shí)施方式中， CXCL13可包括全長(zhǎng)CXCL13或其片段，或者CXCL13變體多肽，其中CXCL13的片段或CXCL13 變體多肽保持全長(zhǎng)CXCL13的一些或全部功能特性。人CXCL13多肽和多核苷酸序列（分別 為SEQIDNO: 1 和 2)已有描述，參見(jiàn)例如Legler等，J.Exp.Med. 187 (4): 655-660 (1998)。 小鼠CXCL13多肽和多核苷酸序列（分別為SEQIDNO: 3和4)已有描述，參見(jiàn)例如Gunn等， Nature391(6669):799-803(1998)。另外，描述了短尾猴CXCL13 多肽序列，如SEQIDN0:5 所示。
[0088] 本文所用的術(shù)語(yǔ)"CXCR5"和"CXCR5多肽"可互換使用。在某些實(shí)施方式中，CXCR5 可包括全長(zhǎng)CXCR5或其片段，或者CXCR5變體多肽，其中CXCR5的片段或CXCR5變體多肽 保持全長(zhǎng)CXCR5的一些或全部功能特性。術(shù)語(yǔ)"CXCR5"和"CXCR5多肽"還包括可溶形式CXCR5。本文所用術(shù)語(yǔ)"可溶形式CXCR5"是不結(jié)合質(zhì)膜的CXCR5形式。全長(zhǎng)CXCR5是7次 跨膜受體。因此，可溶形式CXCR5的非限制性示例包括基本由胞外結(jié)構(gòu)域組成的CXCR5片 段（例如約開(kāi)始的60個(gè)氨基酸）。人CXCR5多核苷酸和多肽序列是本領(lǐng)域已知的且在本文 中分別作為SEQIDNO:6和7提供。鼠CXCR5多核苷酸和多肽序列是本領(lǐng)域已知的且在本 文中分別作為SEQIDNO:8和9提供。
[0089] 本文所用的術(shù)語(yǔ)"CXCR3"和"CXCR3多肽"可互換使用。在某些實(shí)施方式中，CXCR3 可包括全長(zhǎng)CXCR3或其片段，或者CXCR3變體多肽，其中CXCR3的片段或CXCR3變體多肽 保持全長(zhǎng)CXCR3的一些或全部功能特性。術(shù)語(yǔ)"CXCR3"和"CXCR3多肽"還包括可溶形式 CXCR3。本文所用術(shù)語(yǔ)"可溶形式CXCR3"是不結(jié)合質(zhì)膜的CXCR3形式。全長(zhǎng)CXCR3是7次 跨膜受體。因此，可溶形式CXCR3的非限制性示例包括基本由胞外結(jié)構(gòu)域組成的CXCR3片 段。人CXCR3多核苷酸和多肽序列是本領(lǐng)域已知的且在本文中分別作為SEQIDNO: 22和 23提供，分別是人CXCR3變體1和變體3。
[0090] 如本文所示，CXCL13活性的抑制減少了干燥綜合征鼠模型中的唾液腺炎癥并導(dǎo) 致唾液腺中存在的B細(xì)胞數(shù)目減少。雖然不受任何理論或作用機(jī)理的限制，但認(rèn)為CXCL13 涉及干燥綜合征中B細(xì)胞至唾液組織的迀移。因此，提供了通過(guò)給予需要治療的對(duì)象抑制 CXCL13活性的物質(zhì)以治療炎性疾病（尤其是B細(xì)胞介導(dǎo)的炎性疾病，包括但不限于干燥綜 合征）的方法。
[0091] 本發(fā)明公開(kāi)的方法涉及與表達(dá)CXCL13的細(xì)胞相關(guān)的炎性疾病和免疫系統(tǒng)缺陷或 紊亂的治療或預(yù)防。"表達(dá)CXCL13的細(xì)胞"指表達(dá)CXCL13抗原的正常和惡性細(xì)胞。本領(lǐng) 域熟知檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CXCL13表達(dá)的方法，包括但不限于：PCR技術(shù)、免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)、 Western印跡、ELISA等。
[0092] 炎性疾病的特征是炎癥和組織破壞，或其組合。"抗炎活性"指減輕或預(yù)防炎癥。 "炎性疾病"包括任何炎癥免疫介導(dǎo)的過(guò)程，其中免疫應(yīng)答的啟動(dòng)事件或靶標(biāo)包括非自身抗 原，包括例如，同種抗原、異種抗原、病毒抗原、細(xì)菌抗原、未知抗原或變應(yīng)原。
[0093] 在一個(gè)實(shí)施方式中，所述炎性疾病是外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎性疾病。
[0094] 在一些實(shí)施方式中，所述炎性疾病是B細(xì)胞介導(dǎo)的炎性疾病。本文所用術(shù)語(yǔ)"B細(xì) 胞介導(dǎo)的炎性疾病"是本文所述的炎性疾病，其中疾病的發(fā)病、發(fā)展或發(fā)病和發(fā)展都主要依 賴B細(xì)胞的活性。B細(xì)胞介導(dǎo)的炎性疾病的非限制性示例包括以產(chǎn)生自身抗體為特征的那 些疾病。
[0095] "B細(xì)胞"是在骨髓中成熟的淋巴細(xì)胞，且包括初始B細(xì)胞、記憶B細(xì)胞或效應(yīng)B細(xì) 胞（漿細(xì)胞）。本文中的B細(xì)胞可以是正?；蚍菒盒訠細(xì)胞。
[0096] 本文中"B細(xì)胞表面標(biāo)記"或"B細(xì)胞表面抗原"是在可使用與之結(jié)合的拮抗劑靶 向的B細(xì)胞表面表達(dá)的抗原。示例性B細(xì)胞表面標(biāo)記包括，例如，⑶10、⑶19、⑶20、⑶21、 CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、 CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85 和CD86,和CXCR5。與哺乳動(dòng)物的其他非B細(xì) 胞組織相比，特別感興趣的B細(xì)胞表面標(biāo)記優(yōu)選在B細(xì)胞上表達(dá)且可在前體B細(xì)胞和成熟 B細(xì)胞上表達(dá)。本文中優(yōu)選的B細(xì)胞表面標(biāo)記是CD19和CXCR5。出于本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ) "炎性疾病"包括但不限于"自身免疫疾病"。本文所用的術(shù)語(yǔ)"自身免疫疾病"通常理解為 包括涉及"自身"抗原的炎癥免疫介導(dǎo)的過(guò)程。在自身免疫疾病中，自身抗原引發(fā)宿主免疫 應(yīng)答。
[0097] 在一個(gè)實(shí)施方式中，使用本發(fā)明的抗CXCL13結(jié)合分子（如抗體或抗原結(jié)合片段） 治療或預(yù)防干燥綜合征。
[0098] 本文中所用"干燥綜合征"也稱為西卡綜合征（Siccasyndrome)，是一種自身免 疫疾病或紊亂，其中免疫細(xì)胞攻擊產(chǎn)生淚和唾液的腺體。該疾病的標(biāo)志性癥狀是口腔干燥 和眼睛干燥。此外，干燥綜合征可導(dǎo)致皮膚、鼻和陰道干燥，并可影響身體的其他器官，包括 腎、血管、肺、肝、胰腺和大腦。干燥綜合征可以原發(fā)性疾?。?原發(fā)性干燥綜合征"）或繼發(fā) 性疾?。?繼發(fā)性干燥綜合征"）的形式存在，所述繼發(fā)性疾病與其他自身免疫疾病相關(guān)和 /或是其他自身免疫疾病繼發(fā)的，所述其他自身免疫疾病包括類風(fēng)濕性疾?。ㄈ珙愶L(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑、多肌炎、硬皮病和自身免疫肝炎）、淋巴瘤（如非霍奇金淋巴瘤）和內(nèi) 分泌紊亂（如甲狀腺炎）。本文所用術(shù)語(yǔ)"干燥綜合征"使用時(shí)不論干燥綜合征處于何種階 段（包括原發(fā)和繼發(fā)干燥綜合征）和干燥綜合征表現(xiàn)出何種癥狀，前提是做出了診斷。用 于該綜合征的診斷包括下文所列的那些。它還包括具有中度-嚴(yán)重西卡癥狀且不具有全身 表現(xiàn)的患者，以及具有全身癥狀的患者。
[0099] 在某些實(shí)施方式中，給予需要治療的對(duì)象物質(zhì)以治療以異位淋巴濾泡或生發(fā)中 心存在或者招募B細(xì)胞至受影響組織為特征的炎性疾病。在一些這類實(shí)施方式中，抑制 CXCL13活性的物質(zhì)抑制異位淋巴濾泡或生發(fā)中心的形成。
[0100] 在一個(gè)實(shí)施方式中，治療包括將抑制CXCL13活性的物質(zhì)（如抗CXCL13、抗CXCR5 或抗CXCR3結(jié)合分子）應(yīng)用于或給予患者，或?qū)⑺鑫镔|(zhì)應(yīng)用于或給予從患者處分離的組 織或細(xì)胞系，其中所述患者有疾病、疾病癥狀或疾病傾向。在另一實(shí)施方式中，治療還意在 包括將包含抑制CXCL13活性的物質(zhì)（如抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3結(jié)合分子）的藥物 組合物應(yīng)用于或給予患者，或?qū)鑫镔|(zhì)的藥物組合物應(yīng)用于或給予從患者處分離的 組織或細(xì)胞系，其中所述患者有疾病、疾病癥狀或疾病傾向。
[0101] 按照本發(fā)明的方法，使用至少一種抑制CXCL13活性的物質(zhì)（如抗CXCL13、抗 CXCR5或抗CXCR3結(jié)合分子）以促進(jìn)對(duì)自身免疫病癥和/或炎性疾病的治療或預(yù)防的積極 治療響應(yīng)。對(duì)于自身免疫病和/或炎性疾病，"積極治療響應(yīng)"指與這些給予的物質(zhì)的抗炎 活性、抗血管新生活性、抗凋亡活性等相關(guān)的疾病改善，和/或疾病相關(guān)癥狀的改善。也就 是說(shuō)，可觀察到抗增殖作用、防止表達(dá)CXCL13細(xì)胞的進(jìn)一步增殖、減輕炎癥反應(yīng)（包括但不 限于炎性細(xì)胞因子、粘著分子、蛋白酶、免疫球蛋白（在攜帶CXCL13的細(xì)胞是B細(xì)胞的情 況下）、其組合等的分泌減少）、抗炎蛋白產(chǎn)量增加、自身反應(yīng)性細(xì)胞數(shù)量減少、免疫耐受提 高、自身反應(yīng)性細(xì)胞存活被抑制、凋亡減少、內(nèi)皮細(xì)胞迀移減少、自發(fā)性單核細(xì)胞迀移增加、 異位淋巴濾泡數(shù)目的減少、受影響組織中存在的B細(xì)胞數(shù)目的減少、B細(xì)胞至受感染組織迀 移的減少、通過(guò)刺激CXCL13表達(dá)細(xì)胞介導(dǎo)的一種或多種癥狀減輕和/或降低。這種積極 治療響應(yīng)不僅限于給藥途徑，可包括給予供體、供體組織（如器官灌注）、宿主、其任何組合 等。可利用篩選技術(shù)評(píng)估臨床響應(yīng)，如磁共振成象（MRI)掃描、x-射線成像、計(jì)算機(jī)斷層成 像（CT)掃描、流式細(xì)胞術(shù)或熒光活化細(xì)胞分選儀（FACS)分析、組織學(xué)分析、大體病理學(xué)分 析和血液化學(xué)分析，包括但不限于可通過(guò)ELISA、RIA、色譜等檢測(cè)到的改變。除這些積極治 療響應(yīng)外，接受抑制CXCL13活性的物質(zhì)（如抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3結(jié)合分子）治 療的對(duì)象可產(chǎn)生疾病相關(guān)癥狀改善的有益效果。
[0102] 本文所用術(shù)語(yǔ)"治療"或"處理"都指治療性處理和預(yù)防性或預(yù)防方法，其目的是 防止或減緩（緩解）、減少不期望的生理改變或病癥（如干燥綜合征的發(fā)展）的惡化或者預(yù) 防其復(fù)發(fā)。有益或所需的臨床結(jié)果包括但不限于可檢測(cè)或不可檢測(cè)地：緩解癥狀、減輕疾病 程度、疾病狀態(tài)穩(wěn)定（即不惡化）、延遲或減緩疾病進(jìn)展、改善或減輕疾病狀態(tài)和緩解（部分 或完全）。"治療"也可以指與不接受治療的期望存活相比延長(zhǎng)生存期。需要治療的人包括 已經(jīng)患有病癥或疾病的人，以及傾向于患有病癥或疾病的人或需預(yù)防病癥或疾病的人。
[0103] "對(duì)象"或"個(gè)體"或"動(dòng)物"或"患者"或"哺乳動(dòng)物"指需要診斷、預(yù)防或治療的任 何對(duì)象，特別是哺乳動(dòng)物對(duì)象。哺乳動(dòng)物對(duì)象包括人、家養(yǎng)動(dòng)物、家畜和動(dòng)物園動(dòng)物、競(jìng)技動(dòng) 物或?qū)櫸?，如犬、貓、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、奶牛等等。
[0104] 本文中所用短語(yǔ)（如"因給予抑制CXCL13活性的物質(zhì)而受益的對(duì)象"和"需要治 療的動(dòng)物"）包括因給予抑制CXCL13活性的物質(zhì)（如抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體） 進(jìn)行治療而受益（即疾病得到緩解或預(yù)防）的對(duì)象（如哺乳動(dòng)物對(duì)象）。如本文更詳細(xì)所 述，抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體可以非偶聯(lián)形式使用，或者可偶聯(lián)于例如藥物、前藥 或同位素。
[0105] 用于抑制CXCL13活性的物質(zhì)包括小分子、多肽和多核苷酸。在某些實(shí)施方式中， 所述物質(zhì)阻斷CXCL13與其受體的結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，所述物質(zhì)阻斷CXCL13與CXCR5 之間的相互作用。在其他實(shí)施方式中，所述物質(zhì)阻斷CXCL13與CXCR3之間的相互作用。在 特定實(shí)施方式中，所述物質(zhì)是特異性結(jié)合CXCL13、CXCR5或CXCR3的特異性結(jié)合分子。在一 些這類實(shí)施方式中，所述物質(zhì)是抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體。在其他實(shí)施方式中， 所述物質(zhì)是可溶形式CXCR5或CXCR3。
[0106] 本文所用的術(shù)語(yǔ)"多肽"意在包括單數(shù)形式"多肽"和復(fù)數(shù)形式"多肽"，指由酰胺 鍵（也稱肽鍵）線性連接的單體（氨基酸）所組成的分子。術(shù)語(yǔ)"多肽"指兩個(gè)或多個(gè)氨 基酸的任何一條鏈或多條鏈，而非具體長(zhǎng)度的產(chǎn)物。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、"蛋白質(zhì)"、 "氨基酸鏈"或其它任何用于指兩個(gè)或多個(gè)氨基酸的一條或多條鏈的術(shù)語(yǔ)均包含于"多肽" 的定義內(nèi)，術(shù)語(yǔ)"多肽"可與任意這些術(shù)語(yǔ)替代或互換使用。術(shù)語(yǔ)"多肽"還指多肽表達(dá)后修 飾的產(chǎn)物，所述修飾包括但不限于糖基化、乙?；?、磷酸化、酰胺化、通過(guò)已知保護(hù)/阻斷 基團(tuán)衍生化、蛋白酶切割或非天然產(chǎn)生氨基酸修飾。多肽可能由天然生物來(lái)源衍生或由重 組技術(shù)產(chǎn)生，但不必定由指定核酸序列翻譯而來(lái)?？梢匀魏畏绞疆a(chǎn)生多肽，包括化學(xué)合成。
[0107] 本文公開(kāi)的方法中所用多肽的大小可以是約3個(gè)或更多個(gè)、5個(gè)或更多個(gè)、10個(gè)或 更多個(gè)、20個(gè)或更多個(gè)、25個(gè)或更多個(gè)、50個(gè)或更多個(gè)、75個(gè)或更多個(gè)、100個(gè)或更多個(gè)、200 個(gè)或更多個(gè)、500個(gè)或更多個(gè)、1，000個(gè)或更多個(gè)或者2, 000個(gè)或更多個(gè)氨基酸。多肽可具 有確定的三維結(jié)構(gòu)，但它們不必定具有這種結(jié)構(gòu)。具有確定三維結(jié)構(gòu)的多肽稱為折疊多肽， 不具有確定三維結(jié)構(gòu)、但可采用大量不同構(gòu)象的多肽稱為非折疊多肽。本文所用術(shù)語(yǔ)"糖蛋 白"指偶聯(lián)于至少一個(gè)糖部分的蛋白質(zhì)，所述糖部分通過(guò)某些氨基酸殘基，如絲氨酸殘基或 天冬酰胺殘基的含氧或含氮側(cè)鏈連接于蛋白質(zhì)。
[0108] "分離的"多肽或其片段、變體或衍生物指不在其天然環(huán)境中的多肽。不要求特定 的純化水平。例如，可從其自然或天然環(huán)境中移出分離多肽。就本發(fā)明目的而言，在宿主細(xì) 胞中表達(dá)的重組產(chǎn)生多肽和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是分離的，通過(guò)任何合適技術(shù)分離、分級(jí)、或者部 分或基本上純化的天然或重組多肽也如此。
[0109] 本文公開(kāi)的方法中所用多肽還包括多肽的片段、衍生物、類似物、變體及其任意組 合。提到抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體或抗體多肽時(shí)，術(shù)語(yǔ)"片段"、"變體"、"衍生物" 和"類似物"包括保持相應(yīng)抗體或抗體多肽的至少一部分抗原結(jié)合特性的任何多肽。除本文 他處討論的具體抗體片段外，本發(fā)明多肽的片段還包括蛋白酶水解片段以及缺失片段?？?CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體的變體包括上述片段，以及具有因氨基酸取代、缺失或插 入而改變氨基酸序列的多肽。變體可以是天然產(chǎn)生或非天然產(chǎn)生的?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的 誘變技術(shù)生成非天然產(chǎn)生變體。變體多肽可包含保守或非保守性氨基酸取代、缺失或添加。 多肽變體在本文中也稱作"多肽類似物"。本文所用抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體或 抗體多肽的"衍生物"指具有官能性側(cè)鏈基團(tuán)反應(yīng)化學(xué)所衍生的一個(gè)或多個(gè)殘基的對(duì)象多 肽。"衍生物"還包括那些含有一個(gè)或多個(gè)20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的天然產(chǎn)生氨基酸衍生物的肽。 例如，4-羥基脯氨酸可取代脯氨酸；5-羥基賴氨酸可取代賴氨酸；3-甲基組氨酸可取代組 氨酸；高絲氨酸可取代絲氨酸；且鳥(niǎo)氨酸可取代賴氨酸?？笴XCL13、抗CXCR5和抗CXCR3抗 體和抗體多肽的衍生物可包括經(jīng)過(guò)改變以表現(xiàn)出參考抗體或抗體多肽上未發(fā)現(xiàn)的其他特 性的多肽。
[0110] 對(duì)于多肽而言，"線性序列"或"序列"是多肽中從氨基到羧基末端方向上氨基酸的 順序，在序列中彼此相鄰的殘基是多肽一級(jí)結(jié)構(gòu)中的毗連殘基。
[0111] 術(shù)語(yǔ)"多核苷酸"包括單個(gè)核酸和多個(gè)核酸，指分離的核酸分子或構(gòu)建物，例如信 使RNA(mRNA)或質(zhì)粒DNA(pDNA)。多核苷酸可包含常規(guī)磷酸二酯鍵或非常規(guī)鍵（如酰胺鍵， 如肽核酸（PNA)中的酰胺鍵）。術(shù)語(yǔ)"核酸"指多核苷酸中存在的任何一種或多種核酸區(qū)段， 如DNA或RNA片段。"分離的"核酸或多核苷酸指從其天然環(huán)境中移出的核酸分子，DNA或 RNA。例如，就本發(fā)明目的而言，包含在載體中的編碼抗CXCL13、抗CXCR5和抗CXCR3結(jié)合分 子（如抗體或其抗原結(jié)合片段）的重組多核苷酸被認(rèn)為是分離的。經(jīng)分離多核苷酸的其它 例子包括保持于異源宿主細(xì)胞中的重組多核苷酸或溶液中的純化（部分或基本上純化的） 多核苷酸。經(jīng)分離的RNA分子包括本發(fā)明中多核苷酸的體內(nèi)或體外RNA轉(zhuǎn)錄物。本發(fā)明中 分離的多核苷酸或核酸還包括合成產(chǎn)生的此類分子。此外，多核苷酸或核酸可以是或可包 括調(diào)控元件，如啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)或轉(zhuǎn)錄終止子。
[0112] 本文所用的術(shù)語(yǔ)"編碼區(qū)"是由翻譯成氨基酸的密碼子組成的核酸部分。雖然"終 止密碼子"（TAG、TGA或TAA)不翻譯成氨基酸，但它可被認(rèn)為是編碼區(qū)的一部分，而任何側(cè) 接序列如啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄終止子、內(nèi)含子等均不是編碼區(qū)的一部分。本文公 開(kāi)的方法中所用兩個(gè)或多個(gè)編碼區(qū)可安置在同一多核苷酸構(gòu)建物中，例如在同一載體上， 或者在分開(kāi)的多核苷酸構(gòu)建物中，例如在分開(kāi)（不同）的載體上。而且，任何載體可包含單 個(gè)編碼區(qū)，或者可包含兩個(gè)或多個(gè)編碼區(qū)，例如，單一載體可單獨(dú)編碼免疫球蛋白重鏈可變 區(qū)和免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)。此外，本文公開(kāi)的方法中所用的載體、多核苷酸或核酸可編碼 與抗CXCL13、抗CXCR5和抗CXCR3抗體或其片段、變體或衍生物的編碼核酸融合或不融合的 異源編碼區(qū)。異源編碼區(qū)包括但不限于專用的元件或基序，如分泌信號(hào)肽或異源功能結(jié)構(gòu) 域。
[0113] 在某些實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的方法中所用的多核苷酸和核酸是DNA。對(duì)DNA而 言，包含多肽編碼核酸的多核苷酸通常包含啟動(dòng)子和/或其它轉(zhuǎn)錄或翻譯控制元件，這些 元件與一個(gè)或多個(gè)編碼區(qū)可操作連接?？刹僮鞯剡B接指，當(dāng)基因產(chǎn)物如多肽的編碼區(qū)與一 個(gè)或多個(gè)調(diào)控序列以此方式連接時(shí)，該基因產(chǎn)物的表達(dá)將受到該調(diào)控序列的影響或控制。 如果啟動(dòng)子功能的誘導(dǎo)使編碼所需基因產(chǎn)物的mRNA轉(zhuǎn)錄，且如果兩個(gè)DNA片段間連接的屬 性不干擾表達(dá)調(diào)控序列指導(dǎo)基因產(chǎn)物表達(dá)或不干擾轉(zhuǎn)錄DNA模板的能力，則兩個(gè)DNA片段 (如多肽編碼區(qū)及其相連的啟動(dòng)子）"可操作連接"。因此，如果啟動(dòng)子能夠影響核酸的轉(zhuǎn) 錄，則啟動(dòng)子區(qū)域與多肽編碼核酸可操作連接。啟動(dòng)子可以是僅在預(yù)定細(xì)胞中指導(dǎo)DNA實(shí) 質(zhì)轉(zhuǎn)錄的細(xì)胞特異性啟動(dòng)子。啟動(dòng)子以外的其它轉(zhuǎn)錄控制元件如增強(qiáng)子、操縱子、阻遏物和 轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)，能與多核苷酸可操作連接以指導(dǎo)細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄。本文公開(kāi)了合適的啟動(dòng) 子和其它轉(zhuǎn)錄控制區(qū)。
[0114] 許多轉(zhuǎn)錄控制區(qū)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。它們包括但不限于在脊椎動(dòng)物細(xì)胞 中發(fā)揮作用的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)，例如但不限于，來(lái)自巨細(xì)胞病毒（立即早期啟動(dòng)子，與內(nèi)含子-A 聯(lián)用）、猿病毒40(早期啟動(dòng)子）和逆轉(zhuǎn)錄病毒（如勞氏肉瘤病毒）的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子區(qū) 段。其它轉(zhuǎn)錄控制區(qū)包括衍生自脊椎動(dòng)物基因，例如肌動(dòng)蛋白、熱激蛋白、牛生長(zhǎng)激素和兔 珠蛋白的那些，以及能夠在真核細(xì)胞中控制基因表達(dá)的其它序列。其它合適的轉(zhuǎn)錄控制 區(qū)包括組織特異性啟動(dòng)子和增強(qiáng)子，以及淋巴因子誘導(dǎo)型啟動(dòng)子（如干擾素或白介素誘導(dǎo) 的啟動(dòng)子）。
[0115] 類似地，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員了解各種翻譯控制元件。它們包括但不限于：核糖體 結(jié)合位點(diǎn)、翻譯起始和終止密碼子以及衍生自小核糖核酸病毒的元件（特別是內(nèi)部核糖體 進(jìn)入位點(diǎn)或IRES，也稱為CITE序列）。
[0116] 在其它實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的方法中所用多核苷酸是RNA，例如，采用信使 RNA(mRNA)形式。
[0117] 本文公開(kāi)的方法中所用的多核苷酸和核酸編碼區(qū)可與編碼分泌或信號(hào)肽的其它 編碼區(qū)聯(lián)合，所述分泌或信號(hào)肽指導(dǎo)本發(fā)明多核苷酸編碼的多肽分泌。根據(jù)信號(hào)假說(shuō)，哺乳 動(dòng)物細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)具有信號(hào)肽或分泌前導(dǎo)序列，一旦生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)鏈向粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外 的輸出過(guò)程啟動(dòng)，所述序列從成熟蛋白質(zhì)上切除。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員了解，脊椎動(dòng)物細(xì) 胞分泌的多肽通常具有融合于所述多肽N末端的信號(hào)肽，它們從完整或"全長(zhǎng)"多肽上切割 產(chǎn)生分泌或"成熟"形式的多肽。在某些實(shí)施方式中，使用天然信號(hào)肽，例如免疫球蛋白重 鏈或輕鏈信號(hào)肽，或者使用仍然能夠指導(dǎo)與其可操作連接的多肽分泌的該序列的功能衍生 物?；蛘?，可采用異源哺乳動(dòng)物信號(hào)肽或其功能衍生物。例如，野生型前導(dǎo)序列可以用人組 織纖溶酶原激活物（TPA)或小鼠葡糖醛酸糖苷酶的前導(dǎo)序列代替。
[0118] 本文所用的術(shù)語(yǔ)"表達(dá)"指基因生成生化物質(zhì)如多肽的過(guò)程。該過(guò)程包括在細(xì)胞 內(nèi)基因功能存在的任何表現(xiàn)，包括但不限于，基因敲除以及瞬時(shí)表達(dá)和穩(wěn)定表達(dá)。它包括但 不限于，基因轉(zhuǎn)錄成信使RNA(mRNA)和這類mRNA翻譯成多肽。若最終期望產(chǎn)物是生化物 質(zhì)，則表達(dá)包括產(chǎn)生該生化物質(zhì)和任何前體?；虮磉_(dá)產(chǎn)生"基因產(chǎn)物"。本文所用的基因 產(chǎn)物可以是核酸，如基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的信使RNA，或由轉(zhuǎn)錄物翻譯得到的多肽。本文所述的基 因產(chǎn)物還包括具有轉(zhuǎn)錄后修飾的核酸，例如聚腺苷酸化，或具有翻譯后修飾的多肽，如甲基 化、糖基化、加入脂質(zhì)、連接其它蛋白質(zhì)亞基、經(jīng)蛋白酶水解切割等。
[0119] "結(jié)合分子"或"抗原結(jié)合分子"以其最寬泛的含義使用，指特異性結(jié)合抗原決定簇 的分子。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述結(jié)合分子特異性結(jié)合CXCL13(也稱為BCA-1)。在另一個(gè) 實(shí)施方式中，所述結(jié)合分子特異性結(jié)合CXCR5。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述結(jié)合分子特異性 結(jié)合CXCR3。而在另一實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的方法中所用的結(jié)合分子是抗體或其抗原結(jié)合 片段，如抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體。在另一個(gè)實(shí)施方式中，結(jié)合分子包括抗體分 子的至少一個(gè)重鏈或輕鏈CDR。在另一個(gè)實(shí)施方式中，結(jié)合分子包括來(lái)自一種或多種抗體分 子的至少兩個(gè)CDR。在另一個(gè)實(shí)施方式中，結(jié)合分子包括來(lái)自一種或多種抗體分子的至少三 個(gè)CDR。在另一個(gè)實(shí)施方式中，結(jié)合分子包括來(lái)自一種或多種抗體分子的至少四個(gè)CDR。在 另一個(gè)實(shí)施方式中，結(jié)合分子包括來(lái)自一種或多種抗體分子的至少五個(gè)CDR。在另一個(gè)實(shí)施 方式中，結(jié)合分子包括來(lái)自一種或多種抗體分子的至少六個(gè)CDR。在某些實(shí)施方式中，一個(gè) 或多個(gè)CDR來(lái)自MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476 或 3D2。
[0120] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明公開(kāi)的方法涉及某些抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗 體，或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。除非特別提到完整大小的抗體如天然產(chǎn)生的抗體， 術(shù)語(yǔ)"抗CXCL13抗體"、"抗CXCR5抗體"和"抗CXCR3抗體"包括完整大小的抗體以及這種 抗體的抗原結(jié)合片段、變體、類似物或衍生物，例如天然產(chǎn)生的抗體或免疫球蛋白分子，或 以類似于抗體分子的方式結(jié)合抗原的經(jīng)工程改造的抗體分子或片段。
[0121] 本文所用的"人"或"完全人"抗體包括具有人免疫球蛋白氨基酸序列的抗體，包 括分離自人免疫球蛋白文庫(kù)或不表達(dá)內(nèi)源性免疫球蛋白的一種或多種人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基 因動(dòng)物的抗體，如下文所述，例如，Kucherlapati等的美國(guó)專利號(hào)5,939,598。"人"或"完 全人"抗體也包括至少含重鏈可變區(qū)或至少重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗體，其中所述可變區(qū)具 有人免疫球蛋白可變區(qū)的氨基酸序列。
[0122] "人"或"完全人"抗體還包括上文所述包含已知的抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3 抗體分子（如VH區(qū)和/或VL區(qū)）的變體（包括衍生物）或基本由其組成或由其組成的 "人"或"完全人"抗體，所述抗體或其片段免疫特異性結(jié)合于CXCL13、CXCR5或CXCR3多肽 或其片段或變體。可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)在編碼人抗CXCL13、抗CXCR5或 抗CXCR3抗體的核苷酸序列中引入突變，包括但不限于，引起氨基酸取代的定點(diǎn)誘變和PCR 介導(dǎo)的誘變。優(yōu)選地，相對(duì)于參考VH區(qū)、￥此01?1、￥1^01?2、￥1^01?3、￥1區(qū)、￥10)1?1、￥10)1?2或 VIXDR3,該變體（包括衍生物）編碼少于50個(gè)氨基酸取代、少于40個(gè)氨基酸取代、少于30 個(gè)氨基酸取代、少于25個(gè)氨基酸取代、少于20個(gè)氨基酸取代、少于15個(gè)氨基酸取代、少于 10個(gè)氨基酸取代、少于5個(gè)氨基酸取代、少于4個(gè)氨基酸取代、少于3個(gè)氨基酸取代或少于 2個(gè)氨基酸取代。
[0123] 在某些實(shí)施方式中，氨基酸取代是保守性氨基酸取代，如下所詳述?；蛘撸部?沿所有或一部分編碼序列隨機(jī)引入突變，例如通過(guò)飽和誘變引入，可篩選所得突變體的生 物學(xué)活性以鑒定保持活性（例如，結(jié)合CXCL13、CXCR5或CXCR3多肽，例如人、鼠或人和鼠 CXCL13、CXCR5或CXCR3的能力）的突變體。"人"或"完全人"抗體的這類變體（或其衍生 物）也可稱為"優(yōu)化"或"就抗原結(jié)合優(yōu)化"的人或完全人抗體，包括對(duì)抗原親和性提高的 抗體。
[0124] 術(shù)語(yǔ)"抗體"和"免疫球蛋白"在本文中可互換使用?？贵w或免疫球蛋白至少包括 重鏈可變區(qū)，通常至少包括重鏈和輕鏈的可變區(qū)。較好地理解了脊椎動(dòng)物系統(tǒng)中的基本免 疫球蛋白結(jié)構(gòu)。參見(jiàn)例如，Harlow等（1988)Antibodies:ALaboratoryManual(《抗體：實(shí) 驗(yàn)室手冊(cè)》）（第2版；冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社（ColdSpringHarborLaboratoryPress))。
[0125] 正如下文中更詳細(xì)討論，術(shù)語(yǔ)"免疫球蛋白"包括可通過(guò)生化性質(zhì)區(qū)分的各種類 型多肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，重鏈分為Y、U、a、S或e，其中還有一些小類（如 Y卜Y4)。該鏈的特性決定抗體"類別"分別為IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白小 類（同種型）如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl等已被良好表征，且已知產(chǎn)生功能特化。根 據(jù)本文公開(kāi)內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員不難區(qū)分這些類別和同種型的修飾形式，因此，它們涵蓋 在本發(fā)明范圍內(nèi)。所有免疫球蛋白類別明顯屬于本發(fā)明范圍，以下討論通常針對(duì)免疫球蛋 白分子的IgG類。在IgG中，標(biāo)準(zhǔn)的免疫球蛋白分子包括分子量約為23, 000道爾頓的兩條 相同輕鏈多肽和分子量為53, 000-70, 000的兩條相同重鏈多肽。這四條鏈通常在"Y"構(gòu)型 中由二硫鍵連接起來(lái)，其中輕鏈從Y的口部開(kāi)始托起重鏈，并延續(xù)通過(guò)可變區(qū)。
[0126] 輕鏈分類為k或A。各重鏈類可與k或A輕鏈結(jié)合。通常，通過(guò)雜交瘤、B細(xì) 胞或遺傳工程改造的宿主細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白時(shí)，輕鏈和重鏈互相共價(jià)結(jié)合，兩條重鏈的 "尾部"通過(guò)共價(jià)二硫鍵或非共價(jià)連接互相結(jié)合。在重鏈中，氨基酸序列從Y構(gòu)型的分叉末 端的N末端走向每條鏈底部的C末端。
[0127] 輕鏈和重鏈都可以分成結(jié)構(gòu)和功能同源的區(qū)域。從功能角度使用術(shù)語(yǔ)"恒定"和 "可變"。在這方面，應(yīng)理解輕鏈（VL或VK)和重鏈（VH)部分的可變區(qū)決定抗原識(shí)別和特異 性。相反，輕鏈（CL)和重鏈（CH1、CH2或CH3)的恒定區(qū)產(chǎn)生重要的生物學(xué)特性，例如分泌、 跨胎盤移動(dòng)、Fc受體結(jié)合、補(bǔ)體結(jié)合等。通常，恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的編號(hào)越大，離抗體的抗原結(jié) 合位點(diǎn)或氨基末端越遠(yuǎn)。N-末端部分是可變區(qū)，C-末端部分是恒定區(qū)；CH3和CL結(jié)構(gòu)域?qū)?際上分別包括重鏈和輕鏈的羧基末端。
[0128] 如本文所述，可變區(qū)允許抗體選擇性識(shí)別并特異性結(jié)合抗原上的表位。也就是 說(shuō)，抗體的VL和VH結(jié)構(gòu)域、或這些可變區(qū)內(nèi)的互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R)亞組組合形成確定三維 抗原結(jié)合位點(diǎn)的可變區(qū)。這種四聯(lián)抗體結(jié)構(gòu)形成在Y的每條臂末端存在的抗原結(jié)合位 點(diǎn)。更具體地，所述抗原結(jié)合位點(diǎn)由各VH和VL鏈上的三個(gè)CDR確定。在一些情況下，例 如在衍生自羊駝種類或根據(jù)羊駝免疫球蛋白工程改造的某些免疫球蛋白分子中，完整的 免疫球蛋白分子可僅由重鏈構(gòu)成而不含輕鏈。參見(jiàn)例如Hamers-Casterman等，Nature 363:446-448(1993)。
[0129] 在天然產(chǎn)生的抗體中，每個(gè)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域上出現(xiàn)的六個(gè)"互補(bǔ)決定區(qū)"或"CDR" 是短的非毗連氨基酸序列，隨著抗體在水性環(huán)境中確定其三維構(gòu)型時(shí)，它們特別定位以形 成抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域中的其余氨基酸稱為"構(gòu)架"區(qū)，顯示較小的分子間 差異。構(gòu)架區(qū)主要采用片層構(gòu)象，⑶R形成連接片層結(jié)構(gòu)和某些情況下形成部分 片層結(jié)構(gòu)的環(huán)。因此，構(gòu)架區(qū)用于通過(guò)鏈間非共價(jià)相互作用形成為CDR提供正確方向位 置的支架。定位的CDR形成的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域確定了與免疫反應(yīng)性抗原上的表位互補(bǔ)的表 面。這種互補(bǔ)表面促進(jìn)抗體與其關(guān)聯(lián)表位的非共價(jià)結(jié)合。對(duì)于任何給定的重鏈或輕鏈可變 區(qū)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能容易地鑒定分別包含CDR和構(gòu)架區(qū)的氨基酸，因?yàn)樗鼈円驯痪?確定義（見(jiàn)下文）。
[0130] 除非明確表述為相反的含義，否則在本領(lǐng)域內(nèi)所使用和/或接受的某一術(shù)語(yǔ)有兩 種或多種定義的情況下，本文所用的術(shù)語(yǔ)定義應(yīng)包括所有這些含義。具體示例是使用術(shù)語(yǔ) "互補(bǔ)決定區(qū)"（"CDR"）描述在重鏈和輕鏈多肽的可變區(qū)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的非毗連抗原結(jié)合位點(diǎn)。 這一特定區(qū)域的描述可參見(jiàn)Kabat等（1983)美國(guó)健康和公共服務(wù)部（U.S.D印t.ofHealth andHumanServices)/'SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(具有免疫 學(xué)重要性的蛋白質(zhì)序列）"以及Chothia和Lesk，J.Mol.Biol. 196:901-917 (1987)(上述文 獻(xiàn)通過(guò)引用全文納入本文），互相比較時(shí)所述定義包括重疊的氨基酸殘基或氨基酸殘基亞 組。盡管如此，應(yīng)用任一定義指抗體或其變體的CDR均應(yīng)落入本文所定義和使用的術(shù)語(yǔ)范 圍。合適氨基酸殘基包括上文引用的各參考文獻(xiàn)中定義的CDR，所述氨基酸殘基列于下表1 以作比較。包括特定CDR的準(zhǔn)確殘基編號(hào)根據(jù)CDR的序列和大小而變化。在抗體的可變區(qū) 氨基酸序列給定的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可常規(guī)確定哪些殘基包含具體CDR。
[0131] 表 1.CDR 定義 1
[0132]

【權(quán)利要求】
1. 一種治療對(duì)象中干燥綜合征的方法，所述方法包括給予需要治療的對(duì)象有效量的抑 制CXCL13活性的物質(zhì)。
2. 如權(quán)利要求1中所述的方法，所述物質(zhì)是特異性結(jié)合CXCR5的結(jié)合分子。
3. 如權(quán)利要求1中所述的方法，所述物質(zhì)是特異性結(jié)合CXCL13的結(jié)合分子。
4. 如權(quán)利要求2或3所述的方法，所述結(jié)合分子包括抗體或其抗原結(jié)合片段。
5. 如權(quán)利要求4所述的方法，所述抗體是嵌合、人或人源化的。
6. 如權(quán)利要求4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包含 重鏈可變（VH)結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQ ID NO: 10或14中所列氨基酸序列具有 至少90%序列相同性。
7. 如權(quán)利要求4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包含 重鏈可變（VH)結(jié)構(gòu)域，除20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代外，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域具有與 SEQ ID NO: 10或14中所列序列相同的氨基酸序列。
8. 如權(quán)利要求6或7所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包含 具有SEQ ID NO: 14中所列序列的VH結(jié)構(gòu)域。
9. 如權(quán)利要求4-8中任一項(xiàng)所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片 段包含輕鏈可變（VL)結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQ ID NO: 15、19或21中所列氨基 酸序列具有至少90%序列相同性。
10. 如權(quán)利要求4-8中任一項(xiàng)所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或其抗原結(jié) 合片段包含輕鏈可變（VL)結(jié)構(gòu)域，除20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代外，所述輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域具有與SEQ ID NO: 15、19或21中所列序列相同的氨基酸序列。
11. 如權(quán)利要求9或10所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包 含具有SEQ ID NO: 19中所列序列的VL結(jié)構(gòu)域。
12. 如權(quán)利要求4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包 含重鏈可變（VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變（VL)結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域 具有與選自下組的VL和VL序列具有至少90%相同性的氨基酸序列： a) 分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO: 19 ; b) 分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO:21 ; c) 分別是 SEQ ID NO: 10 和 SEQ ID NO: 15。
13. 如權(quán)利要求4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包 含重鏈可變（VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變（VL)結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域 各自除20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代外，具有與選自下組的VH和VL序列相同的氨基酸 序列： a) 分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO: 19 ; b) 分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO:21 ; c) 分別是 SEQ ID NO: 10 和 SEQ ID NO: 15。
14. 如權(quán)利要求4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包 含重鏈可變（VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變（VL)結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域 具有與選自下組的VH和VL序列相同的氨基酸序列： a)分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO: 19 ; b) 分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO:21 ; c) 分別是 SEQ ID NO: 10 和 SEQ ID NO: 15。
15. 如權(quán)利要求9所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包含具 有SEQ ID NO: 14中所列序列的VH結(jié)構(gòu)域和具有SEQ ID NO: 19中所列序列的VL結(jié)構(gòu)域。
16. 如權(quán)利要求4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包 含具有至少一種以下互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R)的VH結(jié)構(gòu)域： a) 與SEQ ID NO: 11具有至少90%序列相同性的CDRl ; b) 與SEQ ID NO: 12具有至少90%序列相同性的CDR2 ;以及 c) 與SEQ ID NO: 13具有至少90%序列相同性的⑶R3。
17. 如權(quán)利要求4或5所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段包 含具有至少一種以下互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R)的VH結(jié)構(gòu)域： a) 除兩個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID NO: 11相同的氨基酸序列的CDRl; b) 除四個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID NO: 12相同的氨基酸序列的CDR2; c) 除四個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID NO: 13相同的氨基酸序列的CDR3。
18. 如權(quán)利要求16或17所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段 包含VH結(jié)構(gòu)域，所述VH結(jié)構(gòu)域包含具有SEQ ID NO: 11中所列序列的⑶R1、具有SEQ ID NO: 12中所列序列的CDR2和具有SEQ ID NO: 13中所列序列的CDR3。
19. 如權(quán)利要求4、5或16-18中任一項(xiàng)所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或 抗原結(jié)合片段包含具有至少一種以下互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)的VL結(jié)構(gòu)域： a) 與SEQ ID NO: 17或20具有至少90%序列相同性的CDRl ; b) 與SEQ ID NO: 17具有至少90%序列相同性的CDR2 ;以及 c) 與SEQ ID NO: 18具有至少90%序列相同性的⑶R3。
20. 如權(quán)利要求4、5或16-18中任一項(xiàng)所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或 抗原結(jié)合片段包含具有至少一種以下互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)的VL結(jié)構(gòu)域： a) 除四個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID N0:17或20相同的氨基酸序列的 CDRl ; b) 除兩個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID NO: 17相同的氨基酸序列的CDR2 ;以 及 c) 除兩個(gè)或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID NO: 18相同的氨基酸序列的⑶R3。
21. 如權(quán)利要求19或20所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段 包含VL結(jié)構(gòu)域，所述VL結(jié)構(gòu)域包含具有SEQ ID N0:20中所列序列的⑶R1、具有SEQ ID NO: 17中所列序列的CDR2和具有SEQ ID NO: 18中所列序列的CDR3。
22. 如權(quán)利要求4-21中任一項(xiàng)所述的方法，所述抗體是IgGl κ抗體。
23. 如權(quán)利要求22所述的方法，所述抗體包含VH結(jié)構(gòu)域中的人IgGl恒定區(qū)和VL結(jié)構(gòu) 域的所述恒定區(qū)中的人κ區(qū)。
24. 如權(quán)利要求4所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或抗原結(jié)合片段選自下 組： a) 單克隆抗體5261 ; b) 單克隆抗體5378 ; C)單克隆抗體5080 ; d) 單克隆抗體1476 ; e) 單克隆抗體3D2 ; f) a)_e)中任一項(xiàng)的單克隆抗體的嵌合或人源化形式； g) 與選自a)_e)的參考單克隆抗體結(jié)合相同CXCL13表位的抗體或抗原結(jié)合片段； h) 競(jìng)爭(zhēng)性抑制選自a)-e)的參考單克隆抗體的抗體或抗原結(jié)合片段；以及 i) a)-h)中任一個(gè)的抗原結(jié)合片段。
25. 如權(quán)利要求24所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體選自單克隆抗體5261、 單克隆抗體5378、單克隆抗體5080、單克隆抗體1476和單克隆抗體3D2。
26. 如權(quán)利要求25所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體是單克隆抗體5378。
27. 如權(quán)利要求4-24中任一項(xiàng)所述的方法，所述抗原結(jié)合片段選自Fab、F (ab'）2、Fv和 scFv〇
28. 如權(quán)利要求1所述的方法，所述物質(zhì)是可溶形式的CXCR5或CXCR3。
29. 如權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的方法，所述物質(zhì)抑制CXCL13與CXCL13受體的相 互作用。
30. 如權(quán)利要求29所述的方法，所述CXCL13受體是CXCR5或CXCR3。
31. 如權(quán)利要求1-30中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法在所述對(duì)象中預(yù)防干燥綜合征。
32. 如權(quán)利要求1-31中任一項(xiàng)所述的方法，所述物質(zhì)與藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體一起給 予。
33. -種治療對(duì)象中干燥綜合征的方法，包括給予需要治療的對(duì)象有效量的特異性結(jié) 合CXCL13的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段抑制CXCL13的活性。
34. 如權(quán)利要求33所述的方法，特異性結(jié)合CXCL13的所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含 具有SEQ ID NO: 14中所列序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和具有SEQ ID NO: 19中所列序列的輕鏈 可變結(jié)構(gòu)域。
35. 如權(quán)利要求33所述的方法，所述抗體或其抗原結(jié)合片段抑制CXCL13與CXCR5的相 互作用。
36. 如權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)所述的方法，所述對(duì)象是動(dòng)物。
37. 如權(quán)利要求36所述的方法，所述動(dòng)物是哺乳動(dòng)物。
38. 如權(quán)利要求37所述的方法，所述哺乳動(dòng)物是人。
【文檔編號(hào)】A61P37/00GK104520323SQ201380022683
【公開(kāi)日】2015年4月15日 申請(qǐng)日期:2013年3月1日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月2日
【發(fā)明者】E·S·史密斯, M·左德勒 申請(qǐng)人:瓦西尼斯公司