在回腸和闌尾上有活性的胃腸位點特異性口服接種疫苗制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了將抗原遞送到回腸遠(yuǎn)端附近和回腸制動和/或闌尾區(qū)域附近的口服疫苗制劑。這些疫苗可用于各種障礙包括病毒和細(xì)菌感染和癌癥的治療和/或預(yù)防。還提供了使用本發(fā)明的口服疫苗制劑的相關(guān)治療方法。
【專利說明】在回腸和闌尾上有活性的胃腸位點特異性口服接種疫苗制 劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明提供了將抗原遞送到回腸遠(yuǎn)端附近（在某些實施方式中，在結(jié)腸中，在闌 尾附近）和回腸制動（ileal break)區(qū)域附近的口服疫苗制劑。這些疫苗可用于各種障礙、 包括病毒和細(xì)菌感染和癌癥的治療和/或預(yù)防。
[0002] 還提供了使用本發(fā)明的口服疫苗制劑的相關(guān)治療方法。
[0003] 相關(guān)申請
[0004] 本申請要求2012年3月29日提交的標(biāo)題相同的臨時申請系列號US61/617,367 的優(yōu)先權(quán)利益，所述臨時申請以其全部內(nèi)容通過參考并入本文。
[0005] 發(fā)明背景
[0006] 胃腸（GI)道具有由5. 5至8. 2范圍內(nèi)的局部pH截然劃分開的幾個區(qū)域?；啬c遠(yuǎn) 端還獨特地含有通常pH在7. 3至8. 2之間的區(qū)域。值得注意的是，這一區(qū)域相對缺少抗原 例如疫苗構(gòu)建物的降解途徑，并且還對它們的存在敏感得多。
[0007] 許多抗原被胃和GI道前端的酸和蛋白水解條件降解，從技術(shù)觀點來看，所述條件 使口服接種疫苗（vaccination)不切實際或近乎不可能。因此，對于營養(yǎng)平衡的控制感受 器來說最理想的回腸遠(yuǎn)端和回腸制動區(qū)域，也獨特地含有對于接種疫苗（抗原性物質(zhì)的穩(wěn) 定性）的最適PH條件，并且含有大量特化的感應(yīng)細(xì)胞（例如派伊爾淋巴集結(jié)），所述感應(yīng)細(xì) 胞有助于限定免疫系統(tǒng)對外來侵入病原體以及在某些情況下腫瘤的應(yīng)答。
[0008] 作為本領(lǐng)域中的實例，闌尾是位于右結(jié)腸中回腸遠(yuǎn)端的特化的感受器。它含有淋 巴樣組織，并且長期以來被認(rèn)為參與針對所有類型抗原的B細(xì)胞應(yīng)答的激活。由于制劑相 對難以到達(dá)，因此回腸遠(yuǎn)端或闌尾都未被用作口服接種疫苗的靶位點，盡管這些淋巴樣組 織區(qū)域的使用是用于疫苗遞送的邏輯上的靶點，但它被認(rèn)為是不可能實現(xiàn)的。
[0009] 因此，對于能夠?qū)V泛的各種抗原有效遞送到回腸遠(yuǎn)端和回腸制動區(qū)域中，由此 避免已知的口服給藥疫苗所遇到的抗原降解的口服疫苗，存在著需求。
[0010] 發(fā)明概述
[0011] 在一種實施方式中，本發(fā)明提供了一種將抗原遞送到回腸遠(yuǎn)端附近的口服疫苗制 齊IJ，所述制劑包含：
[0012] (a)多個核心，每個所述核心包含：
[0013] (1)抗原；
[0014] (2)包封所述抗原的第一腸溶包衣，其在低于以下范圍的pH下基本上不溶：約7. 0 至約7. 6,并且優(yōu)選地包含選自以下的一種或多種組合物：聚（dl-乳酸-共-乙醇酸）、用 PVA(聚乙烯醇）穩(wěn)定化的殼聚糖（Chi)、脂類、藻酸鹽、羧甲基乙基纖維素（CMEC)、纖維素乙 酸偏苯三酸酯（CAT)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯（HPMCP)、羥丙基甲基纖維素、乙基 纖維素、顏色濃縮物（color con)、食品級釉料、羥丙基甲基纖維素與乙基纖維素的混合物、 聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯（PVAP)、纖維素乙酸鄰苯二甲酸酯（CAP)、蟲膠、甲基丙烯酸與丙 烯酸乙酯的共聚物、和在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯 的共聚物；以及任選地
[0015] (3)第二腸溶包衣，其在組成上與所述第一包衣相同或不同，在低于以下范圍的 pH下基本上不溶：約5. 5至約6. 0,被包含在所述第一制劑的包封包衣內(nèi)，并且優(yōu)選地包含 選自以下的一種或多種組合物：聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯（PVAP)、纖維素乙酸鄰苯二甲酸 酯（CAP)、蟲膠、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、和在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯 單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物；以及任選地
[0016] (b)可藥用賦形劑。
[0017] 在一種實施方式中，所述抗原選自：
[0018] (a)失活的病毒或其適合于抗原的片段（例如具有在患者中引發(fā)免疫原性應(yīng)答 的表位的肽片段），所述病毒選自腺病毒科（Adenoviridae)、黃病毒科（Flaviviridae)、 痛疫病毒科（Herpesviridae)、嗜肝DNA病毒科（Herpadnaviridae)、正粘病毒科 (Orthomyxoviridae)、乳多空病毒科（Papovaviridae)、副粘病毒科（Paramyxoviridae)、 微小核糖核酸病毒科（Picornaviridae)、痘病毒科（Poxviridae)、呼腸孤病毒科 (Reoviridae)、反轉(zhuǎn)錄病毒科（Retroviridae)、彈狀病毒科（Rhabdoviridae)、披膜病毒 科（Togaviridae)、腺病毒、單純性皰疫病毒、水痘帶狀皰疫病毒、細(xì)胞肥大病毒、埃波斯 坦-巴爾病毒、H型1-7和N型1-9流感病毒、人類乳頭瘤病毒、副流感病毒、麻疹病毒、呼 吸道合胞病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒、鼻病毒、痘苗病毒、天花病毒、輪狀病毒、人類 T淋巴細(xì)胞病毒-1、人類免疫缺陷病毒（HIV)、狂犬病病毒、風(fēng)疹病毒、蟲媒病毒、腸道病毒 例如脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯沙奇病毒、Ebstein-Barr病毒、細(xì)胞肥大病毒（CMV)、單核細(xì)胞增 多癥、輪狀病毒、諾瓦克病毒以及甲肝、乙肝、丙肝病毒；或
[0019] (b)失活的細(xì)胞內(nèi)病原體或其適合于寄生蟲抗原的片段（例如如上所述的肽片 段），所述病原體或寄生蟲選自阿菲波菌屬物種（Afipia spp)、布魯氏菌屬物種（Brucella spp)、類鼻疽伯克霍爾德菌（Burkholderia pseudomallei)、衣原體（Chlamydia)、伯納特氏 立克次氏體（Coxiella burnetii)、土拉熱弗郎西絲菌（Francisella tularensis)、嗜肺軍 團(tuán)菌（Legionella pneumophila)、單核細(xì)胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes)、 鳥分枝桿菌（Mycobacterium avium)、麻風(fēng)分枝桿菌（Mycobacterium leprae)、結(jié)核分 枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis)、淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae)、立 克次體（Rickettsiae)、傷寒沙門氏菌（Salmonella typhi)、痢疾志賀氏菌（Shigella dysenteriae)、鼠疫耶爾森氏菌（Yersinia pestis)、痕原蟲屬物種（Plasmodium spp)、 小泰累爾氏梨楽蟲（Theileria parva)、剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii)、小球隱孢 子蟲(Cryptosporidium parvum)、利什曼原蟲（Leishmania)、克氏維蟲（Trypanosoma cruzi)和新型隱球菌（Cryptococcus neoformans)、賈第鞭毛蟲（Giardia)、隱抱子蟲 (Cryptosporidia);或
[0020] (C)失活的病媒傳播的（vector transmitted)抗原或其適合于抗原的片段，包括 痕原蟲（Plasmodium)或疏螺旋體（borrelia);或
[0021] (d)失活的細(xì)菌或其適合于抗原的片段，所述細(xì)菌包括霍亂弧菌（cholera)、 沙門氏菌（salmonella)、志賀氏菌（Shigella)、彎曲桿菌（Campylobacter)、鉤端螺旋 體（Leptospirosis)、幽門螺旋桿菌（Helicobacter pylori)和包括大腸埃希式桿菌 (E. Coli) 0157的產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏桿菌（enterotoxigenic e-coli)，以及李斯特菌屬物 種（Listeria spp)，或人類病原細(xì)菌或細(xì)菌的適合于抗原的片段，所述細(xì)菌包括金黃色葡 萄球菌（staphylococcus aureus)和月市炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae);或
[0022] (e)癌相關(guān)或癌細(xì)胞衍生抗原，包括但不限于選自膀胱、腦、乳腺、食管、胃腸、肝細(xì) 胞、腎、肺、黑素瘤、卵巢、前列腺、肉瘤、宮頸和子宮腫瘤的NY-ES0-1抗原、GD2神經(jīng)節(jié)苷脂、 GD2的47-LDA模擬表位、熱休克蛋白、睪丸癌（CT)抗原、上皮性卵巢癌（EOC)抗原的癌相 關(guān)抗原；針對MUCl的Oncothyreon 0NT-10治療性疫苗以及Oncothyreon的帶有或不帶有 伴隨的佐劑PET-脂質(zhì)A的其他靶向治療性疫苗；以及具體描述或以其他方式公開在本文中 引用的參考文獻(xiàn)中的其他癌相關(guān)（例如卵巢、宮頸、胰腺、肝細(xì)胞、結(jié)腸、乳腺、肺和腦癌）抗 原。
[0023] 在優(yōu)選實施方式中，所述抗原是減毒活病毒或細(xì)菌。
[0024] 在優(yōu)選實施方式中，所述抗原在所述口服制劑中伴有旨在提高所述抗原產(chǎn)生的免 疫應(yīng)答的特異性佐劑，并且如圖2-3中所示通過制劑釋放在受試者的回腸中。
[0025] 在又一種實施方式中：（1)將所述抗原與可以作為回腸制動激素釋放性物質(zhì) (ileal break hormone releasing substance)的非特異性佐劑合并（例如混合），所述回 腸制動激素釋放性物質(zhì)是選自糖、游離脂肪酸、多肽、氨基酸和在消化后產(chǎn)生糖、游離脂肪 酸、多肽或氨基酸的組合物的物質(zhì)；并且（2)將所述合并的抗原和回腸制動激素釋放性物 質(zhì)用所述第一腸溶包衣包封。
[0026] 在又一種實施方式中，本發(fā)明提供了一種將抗原遞送到回腸遠(yuǎn)端附近的口服疫苗 制劑，所述制劑包含：
[0027] (a)第一核心群，其包含多個核心，每個所述核心包含：
[0028] (1)抗原和任選的佐劑；
[0029] (2)包封所述抗原和任選的佐劑的第一腸溶包衣，其在低于以下范圍的pH下基 本上不溶：約7. 0至約7. 6,并且優(yōu)選地包含選自以下的一種或多種組合物：聚（dl-乳 酸-共-乙醇酸）、用PVA(聚乙烯醇）穩(wěn)定化的殼聚糖（Chi)、脂類、藻酸鹽、羧甲基乙基纖 維素（CMEC)、纖維素乙酸偏苯三酸酯（CAT)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯（HPMCP)J^ 丙基甲基纖維素、乙基纖維素、顏色濃縮物、食品級釉料、羥丙基甲基纖維素與乙基纖維素 的混合物、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯（PVAP)、纖維素乙酸鄰苯二甲酸酯（CAP)、蟲膠、甲基 丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、和在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯單體的甲基丙烯酸和 丙烯酸乙酯的共聚物；以及任選地（參見圖4-6)
[0030] (3)另外的靶向闌尾劑量的所述抗原和任選的佐劑，其中第二腸溶包衣在組成上 與所述第一包衣相同或不同，在低于約5. 5范圍的pH下基本上不溶，并且優(yōu)選地包含選自 在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物的一種或多 種組合物，以確保在pH 5. 5至6. 0下釋放內(nèi)含物；
[0031] (b)第二核心群，其包含多個核心，每個所述核心包含：
[0032] (1)所述抗原和任選的佐劑；以及
[0033] (2)包封所述抗原的腸溶包衣，其在低于以下范圍的pH下基本上不溶：約5. 0至 約6. 5,并且優(yōu)選地包含選自以下的一種或多種組合物：蟲膠、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯的 共聚物、和在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物； 以及任選地
[0034] (C)可藥用賦形劑。
[0035] 在又一種實施方式中，本發(fā)明提供了一種以例如圖4-6所示的方式將抗原遞送到 闌尾和/或右結(jié)腸附近的口服疫苗制劑，所述制劑包含：
[0036] (a)多個核心，每個所述核心包含：
[0037] (1)抗原和任選的佐劑；
[0038] (2)內(nèi)部或第一包衣層，其（i)是腸溶的，（ii)包封所述抗原和任選的佐劑，（iii) 在低于以下范圍的pH下基本上不溶：約1.0至約5.0,并且（iv)優(yōu)選地包含選自以下的一 種或多種組合物：蟲膠、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、和在聚合期間已向其添加丙烯 酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物；
[0039] (3)任選的第二包衣層，其包封所述第一腸溶包衣層，并且包含選自糖、游離脂肪 酸、多肽、氨基酸和在消化后產(chǎn)生糖、游離脂肪酸、多肽或氨基酸的組合物的可以起到佐劑 作用的營養(yǎng)物質(zhì)；以及
[0040] (4)第二/第三包衣層，其（i)是腸溶的，（ii)包封所述第一或第二包衣層，（iii) 在低于以下范圍的pH下基本上不溶：約7.0至約7.6,并且（iv)優(yōu)選地包含選自以下的一 種或多種組合物：聚（dl-乳酸-共-乙醇酸）、用PVA (聚乙烯醇）穩(wěn)定化的殼聚糖（Chi)、 脂類、藻酸鹽、羧甲基乙基纖維素（CMEC)、纖維素乙酸偏苯三酸酯（CAT)、羥丙基甲基纖維 素鄰苯二甲酸酯（HPMCP)、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、顏色濃縮物、食品級釉料、羥丙 基甲基纖維素與乙基纖維素的混合物、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯（PVAP)、纖維素乙酸鄰苯 二甲酸酯（CAP)、蟲膠、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、和在聚合期間已向其添加丙烯 酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物；以及任選地
[0041] (b)可藥用賦形劑。
[0042] 在本文中所描述的口服疫苗制劑的一種實施方式中，所述核心被制備成具有約1 納米至約100微米直徑之間的平均直徑的微粒的形式（例如如圖5中所提到的）。
[0043] 例如，在一種實施方式中，所述口服疫苗制劑如本文中所述和圖5中所示包含第 一和第二核心群，所述第一核心群和第二核心群的核心是微粒，所述第一核心群的核心的 平均直徑大于所述第二核心群的核心的平均直徑，所述第二核心群的核心具有約1納米至 約99微米直徑之間的平均直徑，并且所述第一核心群的核心具有約2納米至約100微米之 間的平均直徑。
[0044] 本文中描述的核心可以包含惰性組分，例如在后文中描述的獨特球珠或生物相容 性聚合物。
[0045] 在另一種實施方式中，所述核心是納米粒子，并且所述核心的平均直徑在0. 5至 IOOnm之間，更優(yōu)選地在1至50nm之間，更優(yōu)選地在1至20nm之間。所述平均直徑可以使 用本領(lǐng)域中公知的技術(shù)例如透射電子顯微術(shù)來測量。
[0046] 在又一種實施方式中，本發(fā)明提供了通過向需要的受試者給藥藥用有效量的包含 適合的抗原并且在其他方面如本文中所述的口服疫苗制劑，來治療和/或預(yù)防病毒、病原 體、寄生蟲、細(xì)菌、與病媒傳播相關(guān)或與癌癥相關(guān)的障礙的方法。
[0047] 例如，在一種實施方式中，本發(fā)明提供了在受試者中引發(fā)針對病毒、細(xì)菌、寄生蟲、 微生物或癌相關(guān)抗原的免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括向所述受試者給藥包含適合的抗原 并且在其他方面如本文中所述的口服疫苗制劑。
[0048] 在另一種實施方式中，本發(fā)明提供了一種在受試者中引發(fā)針對癌相關(guān)抗原的免疫 應(yīng)答的方法，所述方法包括向所述受試者共同給藥包含本文中所描述的適合的抗癌抗原的 口服疫苗制劑和一種或多種熱休克蛋白。
[0049] 本發(fā)明的這些和其他方面在發(fā)明詳述中進(jìn)一步描述。
[0050] 附圖簡述
[0051] 圖1是常規(guī)的腸溶釋放--十二指腸靶點的示意圖，所述靶點鄰近本發(fā)明的口服 接種疫苗的新的靶點。
[0052] 圖2示出了疫苗的回腸制動遞送：用于釋放的pH目標(biāo)是約7. 2-7. 5。在圖中提供 了 GI道位置和回腸中的pH目標(biāo)的情況。
[0053] 圖3示出了為了確保構(gòu)成疫苗的所要求的疫苗抗原和任何佐劑和/或回腸制動激 素釋放性物質(zhì)的回腸釋放而應(yīng)用的制劑的詳細(xì)情況。制劑本身可以是微顆粒、顆?；蚍勰?的混合物，其每種可以合并在制劑中并受到包衣保護(hù)，直到它到達(dá)高于7. 3的pH值和至少 一開始在回腸中的GI釋放靶點。
[0054] 圖4示出了由于腸溶包衣在單獨的pH 5. 5下的釋放靶向于十二指腸，并且在十二 指腸中釋放的抗原不能幸存通過到達(dá)結(jié)腸，因此右結(jié)腸和闌尾遞送需要外部和內(nèi)部藥丸。 需要內(nèi)部藥丸策略以避過十二指腸，其中僅在約7. 3-7. 6的pH下溶解的外部包衣可以將其 活性內(nèi)含物，如果存在的話，釋放到回腸中。由此將內(nèi)部藥丸完整地釋放在回腸中但不溶解 在那里；它通入到pH為5. 5至6. 0的結(jié)腸中，并在其中釋放其內(nèi)含物。
[0055] 圖5示出了 "疫苗藥丸內(nèi)的疫苗藥丸"概念：內(nèi)部疫苗藥丸的回腸制動靶點釋放 (pH 7. 3-7. 5)和結(jié)腸/闌尾釋放，所述內(nèi)部疫苗藥丸含有用于在約5. 5-6. 2的pH下的闌尾 靶點釋放的疫苗制劑。
[0056] 圖6示出了疫苗藥丸內(nèi)的疫苗藥丸的兩個新的胃腸溶解位點。
[0057] 發(fā)明詳述
[0058] 當(dāng)在本文和在隨附的權(quán)利要求書中使用時，單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)指稱物，除非上下 文明確陳述不是如此。因此，例如，對本發(fā)明的"化合物"或其他要素的指稱，包括多個這樣 的要素（例如兩個或更多個要素）等。在任何情況下，本專利都不應(yīng)被解釋為限于本文中 具體公開的特定實例或?qū)嵤┓绞交蚍椒ā?br> [0059] 除非另有指明，否則當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語"化合物"是指任何特定化學(xué)化合物、 包括本文中公開的抗原，并包括其互變異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體以及適用情況下光 學(xué)異構(gòu)體，及其可藥用鹽。當(dāng)它在上下文中使用時，術(shù)語化合物一般是指單一化合物、包括 抗原，但是也可能包括其他化合物，例如所公開的化合物的立體異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體和/或 光學(xué)異構(gòu)體（包括消旋混合物）以及特定對映異構(gòu)體或?qū)τ钞悩?gòu)體富集的混合物。
[0060] 當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語"抗原"或"免疫原"是指可用于在本發(fā)明的組合物所給 藥的患者的闌尾或回腸中引發(fā)免疫原性應(yīng)答的任何化合物（例如肽、糖、細(xì)胞片段、微生物 或病毒（通常為減毒的或失活的）或DNA或RNA片段）。注意，在某些疫苗策略中DNA或 RNA片段被當(dāng)作抗原，或者可以被給藥以表達(dá)抗原，其每種在其他情況下在本文中被定義為 化合物。術(shù)語"抗原性組合物"是指含有一個或多個抗原的組合物。抗原性組合物被用于 在給藥或?qū)牒笤诨颊呋蚴茉囌咧挟a(chǎn)生免疫原性應(yīng)答。
[0061] 應(yīng)該指出，本發(fā)明設(shè)想了包含被設(shè)計用于引發(fā)免疫原性應(yīng)答而不引起疾病的減毒 的微生物（尤其包括細(xì)菌）或病毒的抗原性組合物的給藥。減毒的微生物或病毒的疫苗株 系是本質(zhì)上侵入性的物種，在許多情況下具有高毒力，并且即使使用低至IO3的小接種量也 可以引起嚴(yán)重疾病。因此，微生物、尤其是細(xì)菌的疫苗毒株從不以大劑量給藥，優(yōu)選地在每 劑約IO 2至約5X IO4或約IO2至約5X IO3個微生物之間，即使是給藥于非無菌的表面例如 人類胃腸道，這是由于較大的量將引起侵入性疾病和/或組織損傷的可能性。此外，在本發(fā) 明中使用的細(xì)菌菌株是失活的或減毒的。使用減毒微生物包括減毒細(xì)菌以在患者或受試者 中引發(fā)免疫原性應(yīng)答，與出于完全不同目的給藥于受試者并且與本發(fā)明相比具有顯著不同 特點的活細(xì)菌例如益生細(xì)菌群體的使用相反。在給藥益生生物體的情況下，所述生物體是 活的和充滿活力的，并且以大的數(shù)量給藥（高達(dá)約1〇 12個生物體或更多）以使所述生物體 在患者或受試者的胃腸道中恢復(fù)種群。因此，在替換策略中遞送例如與益生菌一起使用的 生物體的本性和生物體的數(shù)量，與按照本發(fā)明使用微生物包括減毒微生物以引發(fā)免疫原性 應(yīng)答完全相反。
[0062] 優(yōu)選的抗原可以含有或可以不含有佐劑物質(zhì)，但是在本領(lǐng)域技術(shù)人員施用的任何 情況下，必須在它所給藥的患者中表現(xiàn)出足夠的保護(hù)性應(yīng)答。
[0063] 在整個本說明書中，術(shù)語"患者"或"受試者"被用于描述向其提供使用本發(fā)明的組 合物和/或方法的治療、包括預(yù)防性治療的動物、一般為哺乳動物、通常包括馴養(yǎng)動物（包 括農(nóng)場動物）或?qū)嶒炇以囼瀯游?、?yōu)選為人類的上下文中。對于對特定動物例如人類患者 特有的特定病癥或疾病狀態(tài)的治療來說，術(shù)語患者是指該特定動物。
[0064] 除非另有指明，否則術(shù)語"有效的"在本文中被用于描述化合物、組合物或組分的 量，并且對于適合的暴露時間長度來說，所述量在這種情形中被用于產(chǎn)生或引起目標(biāo)結(jié)果， 不論所述結(jié)果是否與引發(fā)免疫原性應(yīng)答、闡明對給藥的抗原的特定免疫應(yīng)答相關(guān)，或者所 述結(jié)果是否與本發(fā)明相關(guān)障礙或病癥的治療或防止/預(yù)防相關(guān)，或者被用于產(chǎn)生另一種化 合物、藥劑或組合物。該術(shù)語包含以其他方式在本申請中描述的所有其他有效量或有效濃 度。
[0065] 當(dāng)提供值的范圍時，應(yīng)該理解，除非上下文另有明確規(guī)定，否則在該范圍的上限與 下限之間的直至下限的單位的十分之一的每個居間值，以及在該陳述的范圍內(nèi)的任何其他 陳述的或居間值，都被涵蓋在本發(fā)明內(nèi)。這些較小范圍的上限和下限，在從所陳述的范圍內(nèi) 排除任何具體的限值之后，可以被獨立地包含在也涵蓋在本發(fā)明中的較小的范圍內(nèi)。在所 陳述的范圍包括一個或兩個限值時，排除任一或兩個所包括的限值的范圍，也包含在本發(fā) 明中。
[0066] 除非另有定義，否則在本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語，具有與本發(fā)明所屬領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員所通常理解的相同的意義?，F(xiàn)在描述優(yōu)選的方法和材料，盡管與本文中 所描述的相似或等同的任何方法和材料也可用于本發(fā)明的實踐或試驗。
[0067] 在本文中的某些情形中，術(shù)語"營養(yǎng)物質(zhì)"與"藥物組合物"和"回腸制動激素釋放 性物質(zhì)"同義使用，并且是指根據(jù)本發(fā)明在患者或受試者的回腸中產(chǎn)生目標(biāo)效果的物質(zhì)。 [0068] "營養(yǎng)物質(zhì)"包括但不限于蛋白質(zhì)和相關(guān)氨基酸、脂肪包括飽和脂肪、單飽和脂肪、 多不飽和脂肪、必需脂肪酸、《_3和《_6脂肪酸、反式脂肪酸、膽固醇、脂肪代用品、碳水化 合物例如膳食纖維（可溶和不可溶纖維兩者）、淀粉、糖（包括單糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、 右旋糖、二糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖和醇）、聚合糖包括菊糖和聚右旋糖、天然糖代用品（包 括布拉齊因、仙茅糖蛋白、赤蘚糖醇、果糖、甘草甜素、甘油、氫化淀粉水解物、麥芽糖、異麥 芽糖、乳糖醇、馬檳榔甜蛋白、麥芽糖醇、甘露糖醇、神秘果甜蛋白、應(yīng)樂果甜蛋白、倍他丁 (pentadin)、山梨糖醇、甜葉菊苷、塔格糖、奇異果甜蛋白和木糖醇）、sahlep和halwa根提 取物。D-葡萄糖（右旋糖）是優(yōu)選的營養(yǎng)物質(zhì)。營養(yǎng)物質(zhì)包括在消化后產(chǎn)生上述營養(yǎng)物或 包含這樣的營養(yǎng)物、包括這些營養(yǎng)物的聚合形式的所有組合物。
[0069] 可以包含在本發(fā)明的組合物中的其他營養(yǎng)組分包括大麥草，已知其是高度可代謝 的維生素和礦物質(zhì)例如維生素A、B1、B2、B6和C、鉀、鎂和鋅的豐富來源。此外，大麥草還具 有高濃度的超氧化物歧化酶（SOD)，其已被顯示具有高的抗氧化活性水平。大麥草及其衍 生物被FDA分類為通常認(rèn)為是安全的（GRAS)。據(jù)信大麥草是消化過程調(diào)控中的重要營養(yǎng) 物，這是因為大麥草中包含的微量營養(yǎng)物、酶（例如S0D)和纖維據(jù)信改進(jìn)腸的免疫和修復(fù) 功能。
[0070] 紫花苜蓿的新鮮或干燥葉茶也可用于本發(fā)明，以促進(jìn)食欲并作為葉綠素和纖維的 良好來源。紫花苜蓿含有生物素、鈣、膽堿、肌醇、鐵、鎂、PABA、磷、鉀、蛋白質(zhì)、鈉、硫、色氨酸 (氨基酸）和維生素A、B復(fù)合物、C、D、E、K、P和U。紫花苜蓿增補(bǔ)劑被推薦用于治療消化 不良，并且在動物研究中顯示出降低膽固醇水平。紫花苜蓿被FDA分類為通常認(rèn)為是安全 的（GRAS)。劑量可以在每天25-1500mg、優(yōu)選地500-1000mg干葉的范圍內(nèi)。
[0071] 小球藻是可以與營養(yǎng)物質(zhì)（優(yōu)選為D-葡萄糖或右旋糖）組合使用在本發(fā)明中的 又一種物質(zhì)，它是單細(xì)胞綠藻的一個屬，生長并收獲在罐中，純化、加工并干燥，以形成粉 末。小球藻富含葉綠素、胡蘿卜素類，并含有全部維生素B復(fù)合物、維生素E和C，并具有廣 泛的各種礦物質(zhì)，包括鎂、鉀、鐵和鈣。小球藻還提供膳食纖維、核酸、氨基酸、酶、CGF(小球 藻生長因子）和其他物質(zhì)。劑量可以在300-1500mg/天的范圍內(nèi)。
[0072] 葉綠素銅鈉鹽是又一種營養(yǎng)物質(zhì)，其是已知的食品添加劑，并且已被用作可替選 藥物。葉綠素銅鈉鹽是葉綠素的水溶性、半合成的鈉/銅衍生物，并且是許多旨在減少與失 禁、結(jié)腸造口術(shù)和類似手術(shù)相關(guān)的氣味以及總體體臭的內(nèi)服制劑中的活性成分。它也可以 作為表面用制劑獲得，旨在用于傷口、損傷和其他皮膚病癥的治療和氣味控制，例如用于輻 射燒傷。
[0073] 藻酸鈉也可用作營養(yǎng)物質(zhì)，優(yōu)選地與D-葡萄糖或右旋糖組合。
[0074] 術(shù)語"回腸"被用于描述胃腸道中小腸即將變成大腸之前的小腸的（三個部分中 的）第三個部分。在大多數(shù)高等脊椎動物包括哺乳動物中，回腸是小腸的最后區(qū)段。在小 腸中，回腸在十二指腸和空腸之后，并且通過回盲瓣（ICV)與"盲腸"分開。在人類中，回腸 長約2-4米，并且pH通常在7至8之間的范圍內(nèi)（中性或微堿性）?；啬c的功能主要是吸 收維生素B12膽汁鹽以及沒有被空腸吸收的任何消化產(chǎn)物。它的壁由折皺構(gòu)成，每個折皺 在其表面上具有許多被稱為"絨毛"的小的指狀突起。進(jìn)而，沿著這些絨毛邊緣排列的上皮 細(xì)胞具有甚至更大數(shù)量的微絨毛。這些絨毛內(nèi)的區(qū)域含有被稱為派伊爾淋巴集結(jié)的免疫系 統(tǒng)的重要組分。沿著回腸邊緣排列的DNES(彌散神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)）細(xì)胞含有較少量的負(fù)責(zé) 蛋白質(zhì)和碳水化合物消化的最后階段的蛋白酶和糖酶（胃泌素、分泌素、膽囊收縮素）。這 些酶存在于上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。
[0075] 延遲大部分營養(yǎng)物質(zhì)和/或抗原的體內(nèi)釋放直至劑型到達(dá)受試者的回腸或闌 尾和右結(jié)腸，意味著：（1)在劑型到達(dá)受試者的回腸或闌尾和右結(jié)腸之前，不少于約50重 量％、不少于約70重量％、更優(yōu)選地不少于約80重量％、更優(yōu)選地不少于約90%的營養(yǎng)物 質(zhì)和/或抗原在體內(nèi)保持未被釋放；和（2)到劑型進(jìn)入受試者的回腸或闌尾和右結(jié)腸之時， 不少于約50%、不少于約70重量％、更優(yōu)選地不少于約80重量％、更優(yōu)選地不少于約90% 的營養(yǎng)物質(zhì)在體內(nèi)保持未被釋放。
[0076] 在本發(fā)明的優(yōu)選情況下，營養(yǎng)物質(zhì)的這種量是至少約1克、至少約2. 5克、至少約 3克、至少約5克、至少約7. 5克、優(yōu)選地約10克至約12-12. 5克或更多（約12. 5至約20 克，尤其是聚合材料例如聚右旋糖或那些較高分子量的化合物）的營養(yǎng)物質(zhì)、特別是葡萄 糖，在小腸內(nèi)被釋放到回腸中，以便刺激回腸激素和相關(guān)激素，并產(chǎn)生與誘導(dǎo)飽腹感和/或 影響下列一種或多種功能相關(guān)的輔助結(jié)果：胰島素抗性（降低抗性）、血糖（降低/穩(wěn)定葡 萄糖水平）、瘦蛋白（增加）、胰高血糖素分泌（降低）、胰島素釋放（降低和/或穩(wěn)定釋放和 /或水平）、回腸激素釋放（增加）或其他激素釋放，特別是GLP-I，腸高血糖素，C-端甘氨酸 延長的 GLP-1 (7 37)，（PG(78 108)) ;C-肽、中間肽-2(PG(111 122)酰胺）；GLP-2(PG(126 158))，GRPP(PG(1 30))，胃泌酸調(diào)節(jié)素（PG(33 69))和待分離的其他肽級份，PYY(1-36)， PYY (3-36)，膽囊收縮素（CCK)，胃泌素，腸胰高血糖素，分泌素以及瘦蛋白、IGF-I和IGF-2 中的一種或多種，優(yōu)選為GLPl、GLP2、C-肽、PYY (1-36和/或3-36)、胰高血糖素、瘦蛋白、 IGF-I和IGF-2中的一種或多種、兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多 種、六種或更多種、七種或更多種或全部。
[0077] 在本發(fā)明中，所有抗原、佐劑和共同給藥的活性成分都以有效提供與所述化合物 的使用相關(guān)的活性的量使用。例如，在組合療法中，癌抗原、任選的佐劑和任選的回腸制動 激素釋放劑都以有效量使用。在本發(fā)明中使用的這樣的組合物的量可以根據(jù)組合物的本 質(zhì)、患者的年齡和體重以及可能影響組合物的生物利用度和藥物動力學(xué)的大量其他因素而 變，給藥于患者的組合物的量一般在每天約0. 〇〇lmg/kg至約50mg/kg或更高、約0. 5mg/kg 至約25mg/kg、約0? 1至約15mg/kg、約Img至約10mg/kg以及本文中描述的其他范圍內(nèi)。本 領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地認(rèn)識到在治療過程中應(yīng)該做出的劑量日程安排或量的變化。 [0078] 術(shù)語"回腸激素"包括與刺激所述激素釋放的管腔內(nèi)食物相關(guān)、可以與來自于回 腸或回腸相關(guān)的胰島素分泌的刺激或胰高血糖素分泌的抑制的飽腹感反饋相關(guān)的所有激 素。因此，"回腸激素"包括但不限于GLP-1，腸高血糖素，C-端甘氨酸延長的GLP-1 (7 37)， (PG(78108));中間肽-2(PG(111 122)酰胺）；GLP-2(PG(126 158))，GRPP(PG(1 30))，胃泌 酸調(diào)節(jié)素 （PG (33 69))和待分離的其他肽級份，PYY (PYY 1-36)和PYY (3-36)，膽囊收縮素 (CCK)，胃泌素，腸胰高血糖素和分泌素。
[0079] 術(shù)語"刺激回腸激素的量的營養(yǎng)物質(zhì)"或"回腸制動激素釋放性物質(zhì)"意味著在 回腸中有效誘導(dǎo)可測量的激素釋放、尤其是在本發(fā)明的某些情況下干擾素（IFN)的輸出和 腸毒素釋放的減少的營養(yǎng)物質(zhì)的任何量。許多回腸制動激素在患者中通過來自于回腸或 回腸相關(guān)的胰島素分泌的刺激或胰高血糖素分泌的抑制的反饋或其他效應(yīng)例如關(guān)閉或降 低胰島素抗性和提高葡萄糖耐受性，來誘導(dǎo)飽腹感。因此"刺激回腸激素的量的營養(yǎng)物質(zhì)" 在劑量上可以隨著多種因素廣泛變化，所述因素例如所討論的具體營養(yǎng)物、給藥的所需效 果、最小化卡路里攝入的所需目標(biāo)、以及被給藥營養(yǎng)物質(zhì)的受試者的特征。例如，使用至少 約500mg的D-葡萄糖，并且D-葡萄糖的特別優(yōu)選的刺激回腸激素的量包括約7. 5-8g至約 12-12. 5g之間（優(yōu)選在IOg左右）。
[0080] 在本發(fā)明的方法中使用的劑型可以采取適合于口服使用的形式，例如作為片劑、 含片、錠劑、懸液、微懸液、可分散粉劑或顆粒劑、乳液、微乳液、硬質(zhì)或軟質(zhì)膠囊。有用的 劑型包括美國專利號4, 256, 108、5, 650, 170和5, 681，584中所描述的滲透遞送系統(tǒng)，美國 專利號4, 193, 985中所公開的多顆粒系統(tǒng)，美國專利號6, 638, 534中所公開的將營養(yǎng)物 質(zhì)用疏水性有機(jī)化合物-腸溶聚合物的混合薄膜包衣的系統(tǒng)，如美國專利號7, 081，239、 5, 900, 252、5, 603, 953和5, 573, 779中所描述的系統(tǒng)，腸溶包衣干燥乳液制劑（例如 Journal of Controlled Release，vol. 107,第 1 期，2005 年 9 月 20 日，第 91-96 頁），以及 乳液例如OHbra?的乳液系統(tǒng)和美國專利號5, 885, 590中所公開的乳液。本領(lǐng)域普通技術(shù) 人員在一旦了解本發(fā)明之后，就可知道如何配制這些各種不同的劑型并改良這些形式，以 便如本文中別處所述通過調(diào)節(jié)所述劑型的溶解性和PH釋放特征使它們將其大部分營養(yǎng)物 質(zhì)釋放在受試者的回腸或十二指腸中。
[0081] 在到達(dá)回腸后將大部分營養(yǎng)物質(zhì)在體內(nèi)釋放的示例性劑型，包括通過將營養(yǎng)物質(zhì) 用腸溶包衣（例如腸溶纖維素衍生物、腸溶丙烯酸類共聚物、腸溶馬來酸類共聚物、腸溶聚 乙烯基衍生物或蟲膠）包衣而形成的口服劑型，例如片劑、含片、錠劑、可分散粉劑或顆粒 劑或硬質(zhì)或軟質(zhì)膠囊。優(yōu)選的腸溶包衣具有延遲大部分營養(yǎng)物質(zhì)的體內(nèi)釋放直至劑型到 達(dá)回腸的pH溶解曲線。腸溶包衣可以由單一組合物構(gòu)成，或者可以包含兩種或更多種組 合物，例如兩種或更多種聚合物或疏水性有機(jī)化合物-腸溶聚合物組合物，如美國專利號 6, 638, 534 中所述。
[0082] 具有延遲大部分營養(yǎng)物質(zhì)和/或抗原的體內(nèi)釋放直至劑型到達(dá)回腸、回腸遠(yuǎn)端 或闌尾附近的結(jié)腸的PH溶解曲線的材料，包括但不限于纖維素乙酸偏苯三酸酯（CAT)、 羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯（HPMCP)、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯（PVAP)、纖維素乙 酸鄰苯二甲酸酯（CAP)、蟲膠、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、在聚合期間已向其添 加丙烯酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物、直鏈淀粉-丁-1-醇復(fù)合物 (玻璃態(tài)直鏈淀粉）與丨:丨h(huán)iHxli:水性分散系的混合物（Milojevic等，Proc. Int. Symp. Contr. Rel. Bioact. Mater. 20, 288, 1993)、包含玻璃態(tài)直鏈淀粉的內(nèi)部包衣和纖維素或 丙烯酸類聚合物材料的外部包衣的包衣制劑（Allwood等，GB 9025373.3)、果膠酸鈣 (Rubenstein 等，Pharm. Res. ,10, 258, 1993)、果膠、硫酸軟骨素（Rubenstein 等，Pharm. Res. 9, 276, 1992)、抗性淀粉（PCT WO 89/11269)、葡聚糖水凝膠（Hovgaard 等，3^已111'. Symp. Control. Drug Del.，Abstract Book, 1994, 87)、改性的瓜爾膠例如硼砂改性的瓜爾 膠（Rubenstein 和 Gliko-Kabir，S. T. P. Pharma Sciences 5, 41-46, 1995)、0 -環(huán)糊精 (Sidke 等，Eu. J. Pharm. Biopharm. 40 (suppl), 335, 1994)、含糖聚合物例如包含合成的含寡 糖生物聚合物包括與寡糖例如纖維二糖、乳果糖、棉籽糖和水蘇糖共價偶聯(lián)的甲基丙烯酸 聚合物的聚合構(gòu)建物、或含糖天然聚合物包括改性的粘多糖例如交聯(lián)果膠酸鹽（Sintov和 Rubenstein，PCT/US 91/03014)、丙烯酸甲酯-半乳甘露聚糖（Lehmann 和 Dreher，Proc. Int. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 18, 331，1991)和 pH 敏感性水凝膠（Kopecek 等， J. Control. Rel. 19, 121，1992)以及抗性淀粉，例如玻璃態(tài)直鏈淀粉。
[0083] 甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸與甲基丙烯酸甲酯的共聚物，是具有延遲大部分抗 原的體內(nèi)釋放直至劑型到達(dá)闌尾和/或右結(jié)腸的pH溶解曲線的優(yōu)選材料。這樣的材料可以 作為 Eudragit?聚合物（Rohm Pharma, Darmstadt, Germany)獲得。例如，Encll*agit_ LlOO 和Eudragit? SlOO可以單獨或組合使用。Eudragit? LlOO在pH 6和以上溶解，并且每g 干物質(zhì)包含48. 3 %的甲基丙烯酸單元；Eudragit? SlOO在pH 7和以上溶解，并且每g干 物質(zhì)包含29. 2%的甲基丙烯酸單元。一般來說，包封聚合物具有聚合骨架和酸或其他增溶 性官能團(tuán)。已發(fā)現(xiàn)適用于本發(fā)明的目的的聚合物包括聚丙烯酸酯、環(huán)狀丙烯酸酯聚合物、聚 丙烯酸和聚丙烯酰胺。另一組優(yōu)選的包封聚合物是聚丙烯酸Eudragit? L和EudragitcD S,其任選地可以與Eudragit? RL或RS組合。這些改性的丙烯酸是有用的，因為取決于所 選的具體Eudragit以及在制劑中使用的I 'udrapt K S與r.udmgh.:^; L、RS和RL的比例，可 以將它們制造成在6或7. 5的pH下可溶。通過將Eudragk? L和Eudragit? S中的一種 或兩種與Eudragit? RL和RS(5-25% )組合，可以獲得更強(qiáng)的膠囊壁，并仍保留膠囊的pH 依賴性溶解性。在本發(fā)明的其他優(yōu)選情況下，可以使用蟲膠包衣（其也包括一種或多種乳 化劑例如羥丙甲纖維素和/或三醋精），其被選擇成具有適合的PH依賴性溶解曲線，以將劑 型例如片劑的內(nèi)含物釋放在患者或受試者的回腸內(nèi)。這種類型的包衣提供了使用天然存在 的非合成組分延遲和/或受控釋放的nutrateric方法。
[0084] 在某些實施方式中，延遲大部分抗原的體內(nèi)釋放直至劑型到達(dá)闌尾和/或右結(jié)腸 的包衣包含Eudragit? LlOO和蟲膠或食品/制藥級釉料，以及100份LlOO :0份SlOO至 20份LlOO :80份S100,更優(yōu)選地70份LlOO :30份SlOO至80份LlOO :20份SlOO范圍內(nèi) 的Eiidragit .R〕S100。隨著包衣開始溶解時的pH的升高，獲得回腸特異性遞送所需的厚度減 小。對于Eudragit? L 100 :S 100的比率高的制劑來說，可以使用150-200 iim量級的包 衣厚度。對于Eudragit? LlOO :S100的比率低的包衣來說,可以使用80-120um量級的包 衣厚度。在本發(fā)明的方法中使用的劑型可以包括一種或多種可藥用載體、添加劑或賦形劑。
[0085] 術(shù)語"可藥用的"是指載體、添加劑或賦形劑對它所給藥的受試者沒有不可接受的 毒性。除了本領(lǐng)域中公知的其他可藥用載體之外，可藥用賦形劑詳細(xì)描述在E. W. Martin， 《Remington 制藥學(xué)》（Remington，s Pharmaceutical Sciences)中，可藥用的載體例如朽1 檬酸鈉或磷酸二鈣和/或下列任何載體：（1)填充劑或增量劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄 糖、甘露糖醇和/或硅酸；（2)粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、 蔗糖和/或阿拉伯樹膠；(3)保濕劑，例如甘油；(4)崩解劑，例如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、馬鈴 薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉；（5)溶液阻滯劑，例如石蠟；(6)吸收加速劑，例 如季銨化合物；（7)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(8)吸附劑，例如高嶺土和膨潤 土； (9)潤滑劑，例如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物； 和（10)著色劑。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，藥物組合物還可以包含緩沖劑。在使用諸 如乳糖或牛奶糖以及高分子量聚乙二醇等的賦形劑的軟質(zhì)和硬質(zhì)填充明膠膠囊中，相似類 型的固體組合物也可以用作填充物。
[0086] 乳液和微乳液可以含有本領(lǐng)域中常用的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑，增溶劑 和乳化劑例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1，3-丁二 醇、油類（尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油）、甘油、四氫糠 醇、聚乙二醇和失水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀釋劑之外，口服組合物也 可以包括佐劑例如潤濕劑、乳化和懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑、增香劑和防腐劑。
[0087] 除了營養(yǎng)物質(zhì)之外，懸液還可以含有懸浮劑例如乙氧基化的異硬脂醇、聚氧乙烯 山梨糖醇和失水山梨糖醇酯、微晶纖維素、氫氧化鋁氧化物、膨潤土、瓊脂_瓊脂和黃耆膠 及其混合物。
[0088] 用于配制上述有用劑型的技術(shù)公開在上面引用的參考文獻(xiàn)中，或者對于本領(lǐng)域普 通技術(shù)人員來說是公知的。如圖5-6中示例的疫苗丸劑劑型的疫苗丸劑或其改良形式，是 在本發(fā)明的治療方法中有用的特別優(yōu)選的劑型。
[0089] 當(dāng)在本文中使用時，"生物相容聚合物"旨在描述對細(xì)胞無毒性的聚合物。如果在 體外向細(xì)胞添加化合物引起少于或等于20%的細(xì)胞死亡，并且如果化合物在體內(nèi)不誘導(dǎo)顯 著炎癥或其他這樣的顯著副作用，則所述化合物是"生物相容的"。
[0090] 生物相容聚合物可以被分類為可生物降解和不可生物降解的。可生物降解的聚合 物在體內(nèi)隨著化學(xué)組成、制造方法和植入物結(jié)構(gòu)的不同而不同地降解?？梢允褂煤铣珊吞?然的聚合物，盡管由于更均勻和可重現(xiàn)的降解以及其他物理性質(zhì)，合成聚合物是優(yōu)選的。合 成聚合物的實例包括聚酸酐，聚羥基酸例如聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物，聚酯，聚酰胺，聚 原酸酯和一些聚磷腈。天然存在的聚合物的實例包括蛋白質(zhì)和多糖例如膠原蛋白、透明質(zhì) 酸、白蛋白和明膠?？乖?或藥物可以被包封在植入物內(nèi)、貫穿植入物和/或在植入物表 面上。抗原和/或藥物通過擴(kuò)散、聚合物的降解或其組合被釋放。存在兩大類可生物降解 聚合物：通過主體溶蝕降解的聚合物和通過表面溶蝕降解的聚合物。描述聚酸酐用于物質(zhì) 的受控遞送的美國專利包括Domb和Langer的美國專利號4, 857, 311、Langer等的美國專 利號4, 888, 176和Domb和Langer的美國專利號4, 789, 724。
[0091] 其他聚合物例如聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物，多年來已在商業(yè)上可用作縫合材 料，并且可以容易地造型成用于藥物遞送的裝置。
[0092] 不可生物降解的聚合物在體內(nèi)長時間（例如至少約一年或更多年）保持完整。裝 載在不可生物降解的聚合物基質(zhì)內(nèi)的抗原和/或藥物，通過經(jīng)聚合物的微孔點陣的擴(kuò)散以 持續(xù)和可預(yù)測的方式釋放，通過改變藥物裝載百分率、基質(zhì)的孔隙度和植入物結(jié)構(gòu)，可以 定制所述釋放方式以提供快速或較慢的釋放速率。乙烯-乙酸乙烯酯共聚物（EVAc)是 已被用作蛋白質(zhì)和其他微分子的局部遞送系統(tǒng)的不可生物降解的聚合物的實例，正如在 Langer, R?和 J. Folkman, Nature(London) 263:797-799(1976)中所報告的。其他不可生物 降解的聚合物包括聚氨酯、聚丙烯腈和某些聚磷腈。
[0093] 陽離子型聚合物由于它們濃縮并保護(hù)帶負(fù)電荷的DNA鏈的便利性，已被 廣泛用作轉(zhuǎn)染載體。含有胺的聚合物例如聚賴氨酸（Zauner等，Adv. Drug Del. Rev.，30:97-113, 1998 ;Kabanov 等，Bioconjugate Chem.，6:7-20, 1995,每個上述參考文 獻(xiàn)的整個教示內(nèi)容通過參考并入本文）、聚（乙烯亞胺）（PEI) (Boussif等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:7297-7301，1995,其整個教示內(nèi)容通過參考并入本文）和聚（酰胺-胺） 樹枝狀聚合物（Kukowska-Latallo 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93:4897-4902, 1996 ; Tang 等，Bioconjugate Chem. 7:703-714, 1996 ;Haensler 等，Bioconjugate Chem. ,4:372-379, 1993 ;每個上述參考文獻(xiàn)的整個教示內(nèi)容通過參考并入本文）在生理pH 下帶有正電荷，與核酸形成離子對，并在各種細(xì)胞系中介導(dǎo)轉(zhuǎn)染。
[0094] 也已經(jīng)開發(fā)了帶有陽離子側(cè)鏈的可降解聚酯（Putnam等，Macromolecules, 32: 3658-3662, 1999 ;Barrera 等，J. Am. Chem. Soc, 115:11010-11011，1993 ;Kwon 等，Macrom olecules，22:3250-3255，1989;Lim 等，J. Am. Chem. Soc, 121: 5633-5639, 1999 ;Zhou 等， Macromolecules, 23:3399-3406, 1990,每個上述參考文獻(xiàn)的整個教示內(nèi)容通過參考并入 本文）。這些聚酯的實例包括聚（L-丙交酯-共-L-賴氨酸）（Barrera等，J. Am. Chem. Soc.，115:11010-11011，1993 ;其整個教示內(nèi)容通過參考并入本文）、聚絲氨酸酯（Zhou 等，Macromolecules, 23:3399-3406, 1990,每個上述參考文獻(xiàn)的整個教示內(nèi)容通過參考并 入本文）、聚（4-輕基腦氨酸酯）（Putnam 等，Macromolecules, 32:3658-3662, 1999 ; Lim等，J. Am. Chem. Soc, 121:5633-5639, 1999,每個上述參考文獻(xiàn)的整個教示內(nèi)容通過參 考并入本文）。聚（4-羥基-L-脯氨酸酯）最近被證實通過靜電相互作用濃縮質(zhì)粒DNA 并介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移（Putnam 等，Macromolecules, 32:3658-3662, 1999 ;Lim 等，J. Am. Chem. Soc, 121:5633-5639, 1999,每個上述參考文獻(xiàn)的整個教示內(nèi)容通過參考并入本文）。重要的 是，這些新的聚合物的毒性明顯比聚賴氨酸和PEI更低，并且它們降解成無毒代謝物。
[0095] 腸溶包衣可以通過常規(guī)的包衣技術(shù)例如鍋包衣或流化床包衣，使用聚合物在水 或適合的有機(jī)溶劑中的溶液或使用水性聚合物分散系來施加。作為可替選的實施方式， 控制釋放的腸溶包衣可以在核心上分離其他抗原和/或藥物層；例如，在用控制釋放的物 質(zhì)包衣后，可以施加另一種抗原和/或藥物層，然后施加另一個控制釋放的層等。例如， 適用于控制釋放的層的材料包括Fa;DRAGrr:s (丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的共聚物）、 EUDRAGITDRS (丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的共聚物）、纖維素衍生物例如乙基纖維素 水性分散系（AQUACOAT⑧，SURELEASE? )、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基 甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物、OPADfW:等。 [0096] 包衣的厚度影響在空腸和回腸中的釋放情況，因此這一參數(shù)可用于定制所述釋放 情況。建議的包衣水平為約1 %至約5%，優(yōu)選地約5%至約10% (w/w)，最優(yōu)選實施方式為 約6%或約8%。8% w/w的包衣將在攝入后3-3. 5小時內(nèi)釋放約80%的抗原和/或藥物， 6% w/w的包衣將導(dǎo)致在攝入后2. 8-3. 2小時內(nèi)釋放約80%的抗原和/或藥物。在本發(fā)明 的許多情況下，目標(biāo)包衣厚度通常在6-10重量％之間，并且目標(biāo)吸收時間長達(dá)3. 5小時。 [0097] 本文中描述的方法還可以包括給藥一種或多種其他治療劑或藥物，包括但不限于 抗病毒劑、抗細(xì)菌劑、抗真菌劑、抗癌和抗微生物劑。出于本發(fā)明的目的，術(shù)語治療劑或藥物 不打算包含活的生物體例如益生菌，并且這樣的解釋在本文中被具體排除。
[0098] 抗病毒劑的實例包括但不限于反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑例如齊多夫定、去羥肌苷、扎西他 濱、拉米夫定、司他夫定、阿巴卡韋、奈韋拉平、地拉韋啶和依法韋侖，蛋白酶抑制劑例如沙 奎那韋、利托那韋、奈非那韋、茚地那韋、安普那韋和洛匹那韋，用于治療皰疹病毒的藥劑例 如阿昔洛韋、伐昔洛韋、泛昔洛韋、更昔洛韋、膦甲酸鈉和西多福韋，以及用于治療流感的藥 劑例如奧司他韋、金剛烷胺、金剛乙胺和扎那米韋。抗細(xì)菌劑的實例包括但不限于青霉素 類、頭孢菌素類、喹諾酮類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類。抗真菌劑的實例包括但不限于兩性霉素 B、氟康唑、伏立康唑等。
[0099] 術(shù)語"癌癥"在整個本說明書中被用于指稱導(dǎo)致癌性或惡性贅生物的形成和生長 的病理過程，所述癌性或惡性贅生物即是通過細(xì)胞增殖、通常比正常組織更快地生長，并在 引發(fā)新的生長停止的刺激之后繼續(xù)生長的異常組織。惡性贅生物顯示出結(jié)構(gòu)組織和與正常 組織的功能協(xié)調(diào)的部分或完全缺乏，并且大多數(shù)侵入周圍組織，轉(zhuǎn)移到幾個位點，并在嘗試 移除后可能復(fù)發(fā)，并且除非充分治療否則可能引起患者死亡。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語贅生 物被用于描述所有癌性疾病狀態(tài)，并包含或涵蓋與惡性的造血、腹水和實體腫瘤相關(guān)的病 理過程。
[0100] 利用本發(fā)明的一種有希望的方法是并入已經(jīng)表征過的癌抗原（1-10)并將它們遞 送到回腸和闌尾，以提高得到的免疫應(yīng)答。具體抗原公開在實例中，所述實例出現(xiàn)在本說明 書中但不意味著限制，因為本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地改編本文中公開的制劑以適應(yīng)于任 何現(xiàn)有的或新發(fā)現(xiàn)的腫瘤抗原。
[0101] 被自體CD8+T細(xì)胞和/或抗體識別的腫瘤抗原已被分類到一個或多個下列范疇 內(nèi)：a)分化抗原，例如酪氨酸酶、Melan-A/MART-1、gplOO ;b)突變抗原，例如CDK4、￠-連 環(huán)蛋白、半胱天冬酶-8和P53 ;c)擴(kuò)增抗原，例如Her2/neu和P53 ;d)剪接變體抗原，例如 NY-C0-37/PDZ-45和INGl ;e)病毒抗原，例如人類乳頭瘤病毒和EBV ;以及f)CT抗原，例如 MAGE、NY-ES0-1和LAGE-1. (7)。CT抗原是一類不同且獨特的分化抗原。這些抗原的界定 特征是在成年男性生殖細(xì)胞中高水平表達(dá)，但是在其他正常成人組織中一般不高表達(dá)，并 且在不同癌癥類型中以廣范圍的可變比例異常表達(dá)。
[0102] 本發(fā)明的制劑和方法，除了灌輸免疫原性和/或針對感染的免疫力之外，還可用 于"免疫療法"以治療癌性疾病狀態(tài)，尤其是藥物抗性癌癥、多藥物抗性癌癥、白血病或相關(guān) 的造血癌癥，包括T-ALL和相關(guān)白血病、特別是（多）藥物抗性白血病例如T-ALL，以及在本 文中別處描述的大量癌性腫瘤。這些疾病可以包括任一種或多種造血贅生物和這樣的贅生 物的轉(zhuǎn)移，包括霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、白血病包括非急性和急性白血病例如急性 髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL)、急性T細(xì)胞成淋巴 細(xì)胞白血病、T-譜系急性成淋巴細(xì)胞白血?。═-ALL)、成人T細(xì)胞白血病、嗜堿性粒細(xì)胞白 血病、嗜酸性粒細(xì)胞白血病、粒細(xì)胞白血病、毛細(xì)胞白血病、白細(xì)胞減少性白血病、淋巴性白 血病、成淋巴細(xì)胞白血病、淋巴細(xì)胞性白血病、巨核細(xì)胞白血病、小原粒型白血病、單核細(xì)胞 白血病、中性粒細(xì)胞白血病和干細(xì)胞白血病?？梢允褂帽景l(fā)明治療的其他癌癥、包括癌性腫 瘤，包括例如胃（特別是包括胃基質(zhì)細(xì)胞）、結(jié)腸、直腸、肝、胰腺、肺、乳腺、宮頸、子宮體、卵 巢、前列腺、睪丸、膀胱、腎、腦/CNS、頭頸部、喉的癌癥、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、多 發(fā)性骨髓瘤、白血病、皮膚癌包括黑素瘤和非黑素瘤、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性髓細(xì)胞性 白血病、尤因氏肉瘤、小細(xì)胞肺癌、絨毛膜上皮癌、橫紋肌肉瘤、腎母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、 毛細(xì)胞白血病、口 /咽、食管、喉、腎臟的癌癥和淋巴瘤等?？赡軐Ρ景l(fā)明的治療方法特別具 有響應(yīng)性的其他癌癥包括例如T-譜系急性成淋巴細(xì)胞白血?。═-ALL)，T-譜系成淋巴細(xì)胞 淋巴瘤（T-LL)、外周T細(xì)胞淋巴瘤、成人T細(xì)胞白血病、前-B ALL、前-B淋巴瘤、大B細(xì)胞 淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、B細(xì)胞ALL、費城染色體陽性ALL和費城染色體陽性CML、乳腺癌、尤 因氏肉瘤、骨肉瘤和未分化的高等級肉瘤等。
[0103] 術(shù)語"贅生物形成"或"贅生物"在整個本說明書中被用于指稱導(dǎo)致癌性或惡性贅 生物的形成和生長的病理過程，所述癌性或惡性贅生物即是通過細(xì)胞增殖、通常比正常組 織更快地生長，并在引發(fā)新的生長停止的刺激之后繼續(xù)生長的異常組織。惡性贅生物顯示 出結(jié)構(gòu)組織和與正常組織的功能協(xié)調(diào)的部分或完全缺乏，并且可能侵入周圍組織。當(dāng)在本 文中使用時，術(shù)語贅生物形成/贅生物被用于描述所有癌性疾病狀態(tài)，并包含或涵蓋與癌 癥、包括造血癌癥、大量癌性腫瘤和它們的轉(zhuǎn)移相關(guān)的病理過程。
[0104] "造血贅生物"或"造血癌癥"是血液或淋巴系統(tǒng)的造血細(xì)胞的贅生物或癌癥，并包 括疾病狀態(tài)例如霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、白血病包括非急性和急性白血病例如急 性髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL)、成人T細(xì)胞白血 病、T-譜系急性成淋巴細(xì)胞白血病（T-ALL)、嗜堿性粒細(xì)胞白血病、嗜酸性粒細(xì)胞白血病、 粒細(xì)胞白血病、毛細(xì)胞白血病、白細(xì)胞減少性白血病、淋巴性白血病、成淋巴細(xì)胞白血病、淋 巴細(xì)胞性白血病、巨核細(xì)胞白血病、小原粒型白血病、單核細(xì)胞白血病、中性粒細(xì)胞白血病 和干細(xì)胞白血病等。
[0105] 在本公開的上下文中使用的術(shù)語"預(yù)防"具有與"提供免疫原性應(yīng)答"相似的意義， 或者"接種疫苗"被用于描述使用本文描述的化合物在患者或受試者中降低病癥或疾病狀 態(tài)發(fā)生的可能性。術(shù)語"降低可能性"所指的事實是在給定患者群體中，本發(fā)明可用于在所 有患者的群體內(nèi)的一個或多個患者中降低疾病發(fā)生、復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的可能性，而不是在所有 患者中防止疾病狀態(tài)的發(fā)生、復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。
[0106] 在本發(fā)明的某些情況下，在將要治療各種癌癥時，制劑可以與至少一種其他抗癌 藥劑共同給藥，所述抗癌藥劑例如抗代謝物、Ara C、依托泊苷、阿霉素、紫杉醇、羥基脲、長 春新堿、Cytoxan (環(huán)磷酰胺）或絲裂霉素C，以及大量其他抗癌藥劑包括拓?fù)洚悩?gòu)酶I和拓 撲異構(gòu)酶II抑制劑，例如阿霉素、拓?fù)涮婵怠⑾矘鋲A和伊立替康，其他藥劑例如吉西他濱和 基于喜樹堿和順鉬的藥劑。"共同給藥"意味著將本發(fā)明的化合物給藥于患者，使得可以同 時在患者的血流中發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物以及共同給藥的化合物，而不論所述化合物實際上 何時給藥，包括同時給藥。在許多情況下，本發(fā)明的化合物與傳統(tǒng)抗癌藥劑的共同給藥產(chǎn)生 意料之外的協(xié)同增效（即超過累加）結(jié)果。
[0107] 可以與本發(fā)明的制劑組合使用的其他化合物包括例如：阿霉素，阿那曲唑，三氧 化二砷，天冬酰胺酶，氮雜胞苷，活卡介苗，貝伐單抗，貝沙羅汀膠囊，貝沙羅汀凝膠，博來霉 素，硼替佐米，靜脈用白消安，口服白消安，卡魯睪酮，喜樹堿，卡培他濱，卡鉬，卡莫司汀，卡 莫司汀與聚苯丙生20植入物，塞來昔布，西妥昔單抗，苯丁酸氮芥，順鉬，克拉屈濱，氯法拉 濱，環(huán)磷酰胺，阿糖胞苷，環(huán)磷酰胺，阿糖胞苷脂質(zhì)體，達(dá)卡巴嗪，放線菌素，放線菌素D，達(dá)肝 素鈉，達(dá)依泊汀a，達(dá)沙替尼，柔紅霉素脂質(zhì)體，柔紅霉素，道諾霉素，地西他濱，地尼白介 素，地尼白介素，右雷佐生，右雷佐生，多西他奇，多柔比星，多柔比星脂質(zhì)體，甲雄烷酮丙酸 酯，依庫麗單抗，Elliott's B溶液，表柔比星，表柔比星鹽酸鹽，紅細(xì)胞生成素a，厄洛替 尼，雌氮芥，磷酸依托泊苷，依托泊苷VP-16,依西美坦，芬太尼檸檬酸酯，非格司亭，氟尿苷 (動脈內(nèi)），氟達(dá)拉濱，氟尿嘧啶5-FU，氟維司群，吉非替尼，吉西他濱，吉西他濱鹽酸鹽，吉 西他濱，吉妥珠單抗奧唑米星，格列衛(wèi)，醋酸戈舍瑞林，醋酸戈舍瑞林，醋酸組氨瑞林，羥基 脲，替伊莫單抗，伊達(dá)比星，異環(huán)磷酰胺，伊馬替尼甲磺酸酯，干擾素a _2a、干擾素a _2b， 伊立替康，伊立替康-PEG，拉帕替尼二對甲苯磺酸酯，來那度胺，來曲唑，亞葉酸，醋酸亮丙 瑞林，左旋咪唑，洛莫司汀CCNU，二氯甲基二乙胺，氮芥，醋酸甲地孕酮，美法侖L-PAM，巰基 嘌呤6-MP，美司鈉，氨甲喋呤，甲氧補(bǔ)骨脂素，絲裂霉素C，米托坦，米托蒽醌，苯丙酸諾龍， 奈拉濱，諾菲單抗，奧普瑞白介素，奧沙利鉬，紫杉醇，紫杉醇蛋白結(jié)合粒子，帕利夫明，帕米 膦酸鹽，帕尼單抗，培加酶，聚乙二醇化天冬酰胺酶，聚乙二醇化非格司亭，聚乙二醇化干擾 素a-2b，培美曲塞二鈉，噴司他丁，哌泊溴烷，普卡霉素，光神霉素，嚇吩姆鈉，甲基芐肼，奎 納克林，拉布立酶，利妥昔單抗，沙莫司亭，索拉非尼，鏈脲佐菌素、舒尼替尼，舒尼替尼馬來 酸酯，滑石，他莫昔芬，替莫唑胺，替尼泊苷VM-26,睪內(nèi)酯，沙利度胺，硫鳥嘌呤6-TG，塞替 派，拓?fù)涮婵?，拓?fù)涮婵蝶}酸鹽，托瑞米芬，托西莫單抗，托西莫單抗/1-131托西莫單抗，曲 妥珠單抗，維甲酸ATRA，尿嘧啶氮芥，戊柔比星，長春堿，長春新堿，長春瑞濱，伏諾立他，唑 來膦酸鹽，唑來膦酸及其混合物。
[0108] 正如本文中所述，可以使用本發(fā)明的制劑治療或針對其接種疫苗的其他疾病包括 但不限于任何感染和由感染引起的疾病。在一種實施方式中，所述感染是急性感染。在一 種實施方式中，所述感染是細(xì)菌感染。在另一種實施方式中，所述感染是病毒感染。在另 一種實施方式中，所述感染是真菌感染。在一種實施方式中，所述疾病是膿毒癥。在另一 種實施方式中，所述疾病是引起呼吸道疾病的感染（或由感染引起的呼吸道疾病），包括但 不限于由革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細(xì)菌、分枝桿菌（例如結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis))引起的感染和疾病、真菌感染（例如肺囊蟲（Pneumocystis)、假絲酵母 (Candida)和組織胞漿菌（Histoplasma)的感染）和病毒感染（例如流感病毒、水痘病毒和 冠狀病毒例如與SARS相關(guān)的冠狀病毒的感染）。在另一種實施方式中，所述疾病是腦膜炎。 在另一種實施方式中，所述疾病是流感。在一種實施方式中，所述疾病是肺炎（不論它是由 細(xì)菌、病毒還是真菌感染引起）。在特定實施方式中，所述肺炎是社區(qū)獲得性肺炎（CAP)。 在一種實施方式中，所述病毒感染是反轉(zhuǎn)錄病毒感染。在一種實施方式中，所述反轉(zhuǎn)錄病毒 感染是HIV感染。在另一種實施方式中，所述感染是任何變種的肝炎，包括甲肝、乙肝、丙肝 等。在另一種實施方式中，所述相關(guān)疾病與低MIF表達(dá)相關(guān)，并且是被使用CCR5受體進(jìn)行 感染的病毒或其他病原體包括但不限于HIV-I、HCV、CMV、埃波斯坦-巴爾病毒和鼠疫耶爾 森氏菌（Yersinia pestis)引起的感染。
[0109] 本發(fā)明的制劑還可以與腫瘤壞死因子-a (TNFa )拮抗劑或干擾素（IFN)拮抗劑 (例如IFNy拮抗劑）相組合給藥于受試者。TNFa和IFNy拮抗劑的實例包括但不限于 抗TNF、可溶性TNF受體、抗IFN Y、可溶性IFN Y受體、p38MAPK抑制劑和JAK-STAT抑制劑。
[0110] 因此，本發(fā)明的制劑可以治療和/或預(yù)防例如病毒感染（包括反轉(zhuǎn)錄病毒感染）、 細(xì)菌感染、真菌感染、引起呼吸疾病的感染、HIV感染、CMV感染、肝炎病毒（特別是甲型、乙 型或丙型）感染、肺炎、社區(qū)獲得性肺炎（CAP)、腦膜炎和流感。在某些實施方式中，本發(fā)明 的制劑被用于在感染的急性階段中，包括感染爆發(fā)期間、療法改變期間、當(dāng)在受試者中顯示 出對療法的抗性的征兆時治療和/或預(yù)防病原體感染，或作為早期干預(yù)。
[0111] 在一種實施方式中，本發(fā)明提供了治療和/或預(yù)防引起呼吸疾病的感染的方 法，所述方法包括向受試者給藥治療有效量的本發(fā)明的制劑。引起或可能引起呼吸疾病 的感染包括但不限于由革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細(xì)菌、分枝桿菌（例如結(jié)核分枝桿菌 (Mycobacterium tuberculosis))引起的感染、真菌感染（例如肺囊蟲（Pneumocystis)、假 絲酵母（Candida)和組織胞漿菌（Histoplasma)的感染）和病毒感染（例如流感病毒、水 痘病毒和冠狀病毒例如與SARS相關(guān)的冠狀病毒的感染）。
[0112] 本發(fā)明還提供了治療和/或預(yù)防由感染引起的呼吸疾病的方法，所述方法包括向 受試者給藥治療有效量的本發(fā)明的制劑。
[0113] 在某些實施方式中，本發(fā)明提供了在受試者中治療和/或預(yù)防肺炎的方法，所 述方法包括向受試者給藥治療有效量的本發(fā)明的制劑。引起肺炎的微生物感染包括但 不限于細(xì)菌感染（例如革蘭氏陽性細(xì)菌、革蘭氏陰性細(xì)菌和分枝桿菌例如結(jié)核分枝桿菌 (Mycobacterium tuberculosis)的感染）、真菌感染（例如肺囊蟲（Pneumocystis)、假絲酵 母（Candida)和組織胞漿菌（Histoplasma)的感染）和病毒感染（例如流感病毒、水痘病 毒和冠狀病毒例如與SARS相關(guān)的冠狀病毒的感染）。
[0114] 在某些實施方式中，本發(fā)明提供了治療和/或預(yù)防反轉(zhuǎn)錄病毒感染的方法，所述 方法包括向受試者給藥治療有效量的本發(fā)明的制劑。
[0115] 在某些實施方式中，本發(fā)明提供了治療和/或預(yù)防HIV感染的方法，所述方法包括 向受試者給藥治療有效量的本發(fā)明的制劑。
[0116] 本發(fā)明還包括將本發(fā)明的制劑用作免疫佐劑，也簡稱為佐劑。已在可獲得的疫苗 中使用的佐劑的實例包括但不限于下列佐劑：明礬，磷酸鋁，氫氧化鋁，聚山梨酸酯80,病 毒顆粒、尤其是增強(qiáng)對流感和肝炎疫苗的應(yīng)答的病毒顆粒，角鯊烯，弗氏佐劑，AS03佐劑系 統(tǒng)，其是含有維生素E、角鯊烯和聚山梨酸酯80的水包油乳液。這通常被用于流感疫苗。細(xì) 菌內(nèi)毒素或脂多糖或其衍生物通常被用作癌癥疫苗的佐劑；在到目前為止的試驗中，帶有 腺病毒載體的DNA疫苗對丙肝病毒具有高免疫原性。
[0117] 同樣地，本文描述的方法還可以包括給藥一種或多種其他治療劑，包括但不限于 抗細(xì)菌劑、抗真菌劑和抗微生物劑?？共《緞┑钠渌麑嵗ǖ幌抻诜崔D(zhuǎn)錄酶抑制劑例 如齊多夫定、去羥肌苷、扎西他濱、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韋、奈韋拉平、地拉韋啶和依 法韋侖，蛋白酶抑制劑例如沙奎那韋、利托那韋、奈非那韋、茚地那韋、安普那韋和洛匹那 韋，用于治療痛疫病毒的藥劑例如阿昔洛韋、伐昔洛韋、泛昔洛韋、更昔洛韋、勝甲酸納和西 多福韋，以及用于治療流感的藥劑例如奧司他韋、金剛烷胺、金剛乙胺和扎那米韋?？辜?xì)菌 劑的實例包括但不限于青霉素類、頭孢菌素類、喹諾酮類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類?？拐婢鷦?的實例包括但不限于兩性霉素、氟康唑。
[0118] 在另一種實施方式中，本發(fā)明提供了在被病毒感染或處于被病毒感染的風(fēng)險中的 受試者中抑制所述病毒的生命周期的方法，所述方法包括向受試者給藥本發(fā)明的制劑。在 一種實施方式中，所述病原體是HIV-I。
[0119] 當(dāng)在本文中使用時，"抑制病毒的生命周期"包括抑制病毒復(fù)制、抑制病毒感染、潛 伏和腫瘤發(fā)生。
[0120] 在特定實施方式中，本發(fā)明提供了在被HIV感染或處于被HIV感染的風(fēng)險中的受 試者中治療或預(yù)防HIV(HIV 1或2)感染的方法，所述方法包括向受試者給藥本發(fā)明的制 齊[J。在某些實施方式中，抗原是gpl20或gp41或HIV病毒的整個三聚體結(jié)構(gòu)或病毒樣粒子 (VLP)。少部分被HIV感染的個體產(chǎn)生超常幅度和廣度的中和抗體（NAb)應(yīng)答。廣泛中和 抗體所靶向的關(guān)鍵表位的詳細(xì)分析將有助于為疫苗設(shè)計限定最適靶點。通過針對一組多進(jìn) 化枝的12種"2層（tier 2)"病毒（亞型A、B和C各4種）分析來自于308位受試者的血 清，鑒定了具有強(qiáng)交叉反應(yīng)性血清中和抗體的HIV-I感染的受試者。使用一組詳盡的測定 法，為排名前9的中和者、包括進(jìn)化枝A、進(jìn)化枝B、進(jìn)化枝C和進(jìn)化枝A/C感染的供體確定了 各種中和表位的特異性。在某些受試者中，中和廣度由兩種或更多種抗體特異性介導(dǎo)。盡管 在某些受試者中鑒定到針對gp41近膜外部區(qū)域（MPER)的抗體，但具有最大中和廣度的受 試者靶向gpl20表位，包括CD4結(jié)合位點，其是由V2和V3環(huán)形成的含有聚糖的四級表位， 或靶向在N332殘基處含有聚糖的外部結(jié)構(gòu)域表位。在某些受試者中觀察到的廣泛反應(yīng)性 HIV-I中和，由靶向HIV-I包膜糖蛋白上的幾個保守區(qū)域的抗體介導(dǎo)（11，12)。HIV病毒有 許多策略避開針對它的侵入的T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答以及甚至是體液B細(xì)胞應(yīng)答（13-19)， 并且這些途徑對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是公知的。這些文獻(xiàn)通過參考并入本文。
[0121] 在某些實施方式中，本發(fā)明的制劑在急性HIV感染期間或爆發(fā)期間給藥于受試 者。這些方法也可以包括給藥一種或多種其他治療劑。在一種實施方式中，本文描述的方 法包括將本發(fā)明的制劑與抗病毒劑相組合給藥?？共《緞┑膶嵗ǖ幌抻诜崔D(zhuǎn)錄酶抑 制劑例如齊多夫定、去羥肌苷、扎西他濱、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韋、奈韋拉平、地拉韋 啶和依法韋侖，蛋白酶抑制劑例如沙奎那韋、利托那韋、奈非那韋、茚地那韋、安普那韋和洛 匹那韋，用于治療痛疫病毒的藥劑例如阿昔洛韋、伐昔洛韋、泛昔洛韋、更昔洛韋、勝甲酸納 和西多福韋，以及用于治療流感的藥劑例如奧司他韋、金剛烷胺、金剛乙胺和扎那米韋。
[0122] 在另一種情況下，本發(fā)明提供了在受試者中治療或預(yù)防HIV感染的方法，所述方 法包括向受試者給藥治療有效量的本發(fā)明的制劑。在一種實施方式中，HIV感染處于急性 階段。在一種實施方式中，方法還包括向受試者給藥另一種抗病毒劑。
[0123] 在特定實施方式中，本發(fā)明提供了在被乙肝或丙肝病毒感染或處于被其感染的風(fēng) 險中的受試者中治療和/或預(yù)防肝炎感染、最通常為乙肝和丙肝感染的方法，所述方法包 括向受試者給藥本發(fā)明的將藥物遞送到患者的回腸和/或闌尾的制劑。
[0124] 術(shù)語"丙肝病毒"或"HCV"被用于描述丙肝病毒的各種毒株。HCV是可以引起肝炎 的幾種病毒之一。它與其他常見的肝炎病毒（例如甲肝或乙肝病毒等）無關(guān)。HCV是黃病 毒科（Flaviviridae)病毒的成員。這個病毒科的其他成員包括引起黃熱病和登革熱的病 毒。屬于這一科的病毒都具有核糖核酸（RNA)作為它們的遺傳物質(zhì)。所有丙肝病毒都由外 殼（包膜）構(gòu)成，并含有允許病毒在身體的細(xì)胞、尤其是肝臟細(xì)胞內(nèi)繁殖的酶和蛋白質(zhì)。盡 管這種基本結(jié)構(gòu)是所有丙肝病毒公有的，但存在至少6種截然不同的病毒毒株，它們具有 不同的遺傳狀況（基因型）。本發(fā)明的HCV治療針對HCV的所有毒株、包括上面描述的6種 或更多種不同毒株，以及作為藥物抗性和多藥物抗性毒株的相關(guān)毒株。在美國，基因型1是 最常見的HCV形式。即使在單一基因型內(nèi)，也可能存在一些變異（例如基因型Ia和lb)。 基因分型被視為對于指導(dǎo)治療來說是重要的，因為某些病毒基因型與其他基因型相比對療 法的響應(yīng)更好。HCV的遺傳多樣性是難以開發(fā)有效疫苗的一個原因，因為疫苗必須針對所有 基因型提供保護(hù)。
[0125] "丙肝病毒感染"或"丙肝感染"是由丙肝病毒（HCV)引起的肝臟的感染。
[0126] 在某些實施方式中，本發(fā)明的制劑在急性丙肝感染期間（第12周至第42周）或 爆發(fā)期間給藥于受試者（20)。Raghuraman和同事調(diào)查了丙肝的時間過程以及它與宿主免 疫系統(tǒng)的細(xì)胞的相互作用。他們注意到，丙肝病毒通過耗盡HCV特異性T細(xì)胞并避開中和 抗體，容易地建立起慢性感染。從慢性感染自發(fā)恢復(fù)是罕見的，并且在過去進(jìn)行了不完全研 究。他們在65周后自發(fā)清除HCV基因型Ia的白人男性中，從感染之前直至超過2年的跟 蹤，前瞻性地研究了細(xì)胞因子、HCV特異性T細(xì)胞和抗體以及病毒序列的演變。在急性階段 中，顯著的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和血漿細(xì)胞因子升高以及CD4和CD8T細(xì)胞的廣泛的HCV特異 性T細(xì)胞應(yīng)答不引起HCV清除。隨后，HCV特異性T細(xì)胞的頻率和效應(yīng)功能降低，并且HCV 滴度穩(wěn)定，這對于慢性期來說是典型的。65周后HCV的清除在第48周中和抗體出現(xiàn)之后， 并且與HCV特異性T細(xì)胞耗盡的逆轉(zhuǎn)有關(guān)，正如由程序化死亡-I (PD-I)表達(dá)的降低和T細(xì) 胞功能的改進(jìn)所證實的。清除的發(fā)生不伴有炎癥或乙肝病毒、人類細(xì)胞肥大病毒、流感病毒 和埃波斯坦-巴爾病毒的二重感染。他們得出結(jié)論，T細(xì)胞耗盡至少在慢性HCV感染的前 兩年中是可逆的，并且這種逆轉(zhuǎn)與綜合抗體相結(jié)合可以清除HCV(20)。他們指出丙肝一般不 自發(fā)清除，并且將T細(xì)胞缺陷歸因于識別受損和T細(xì)胞耗盡等。在適合的免疫應(yīng)答的背景 中顯著部分的被感染者自發(fā)地控制HCV感染這一事實，建議用于HCV的疫苗是現(xiàn)實的目標(biāo) (21)。具有不同臨床結(jié)果的被感染者的比較性分析，能夠表征與病毒控制相關(guān)的許多重要 的先天性和適應(yīng)性免疫過程。顯然，成功的HCV疫苗需要利用和增強(qiáng)這些天然免疫防御機(jī) 制。新的HCV疫苗方法，包括基于肽、重組蛋白、DNA和載體的疫苗，最近已進(jìn)入I/II期人 類臨床試驗。這些技術(shù)中的一些已在健康志愿者和被感染患者中產(chǎn)生了魯棒的抗病毒免疫 力。
[0127] 干擾素IFN的作用仍在深入研究之中；顯然，作為活化的⑶8+T細(xì)胞的產(chǎn)物（在T 細(xì)胞耗盡期間不存在）的這種細(xì)胞因子具有抗病毒性質(zhì)，并且在肝細(xì)胞瘤細(xì)胞中容易地抑 制丙肝病毒復(fù)制（21)。顯然，這些發(fā)現(xiàn)證明了繼續(xù)使用IFN產(chǎn)品作為用于丙肝的整體藥物 治療策略的一部分的合理性。此外，顯然，正在使用的沒有附加IFN的許多口服治療方案不 能完全清除丙肝病毒（22)。Grafmueller已推測，IL-17在丙肝病毒以及HIV中具有與IFN 類似的作用。她發(fā)現(xiàn)，一種亞類的⑶8 (+) T細(xì)胞可以分泌白介素17 (IL-17)。為了解決抗原 特異性、組織分布和生物學(xué)相關(guān)性問題，她在具有慢性丙肝病毒（HCV)感染的患者組群中 全面分析了外周和肝內(nèi)CD8(+) T-細(xì)胞應(yīng)答的IL-17和干擾素（IFN) Y的抗原特異性產(chǎn)生。 在血液和肝臟中可以檢測到HCV特異性的產(chǎn)IL-17并表達(dá)視黃酸受體相關(guān)孤兒受體Y t的 CD8(+)T細(xì)胞，并且它們與產(chǎn)IFN-Y的CD8(+)T細(xì)胞相比靶向不同表位。它們的最高頻率 出現(xiàn)在具有低炎性活性的患者中，表明了 IL-17在慢性HCV感染中的保護(hù)性作用（23)。
[0128] 本發(fā)明的目的是通過使用回腸制動激素釋放性物質(zhì)作為CD4和CD8T細(xì)胞調(diào)控物， 并與活性丙肝疫苗相組合來刺激CD8+T細(xì)胞以增加IFN的內(nèi)源生產(chǎn)，并與針對丙肝病毒的 高活性抗病毒劑相組合，來增強(qiáng)IFN和可能的IL-17的作用。
[0129] 這些發(fā)現(xiàn)與丙肝接種疫苗、接種疫苗的時間安排相關(guān)，并且也隨之產(chǎn)生了慢性丙 肝感染的免疫療法。針對丙肝感染的階段安排接種疫苗的時間，顯然是本發(fā)明的優(yōu)選實施 方式的重要部分。這些方法還可以包括在帶有或不帶有免疫療法給藥的疫苗使用期間或之 后，給藥一種或多種其他治療劑。將疫苗或免疫療法與藥物相組合以降低丙肝病毒載量的 邏輯，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的，但事實上還沒有單獨的抗病毒治療提供針對丙 肝的長期持續(xù)的免疫力的情況。例如，Rahman和同事調(diào)查了在患有急性丙肝的所選患者中 的恢復(fù)（24)。在大多數(shù)情況下，自發(fā)恢復(fù)與強(qiáng)烈和長期持續(xù)的細(xì)胞免疫應(yīng)答相關(guān)。在急性 期中進(jìn)行治療、尤其是使用含有干擾素的治療方案治療的大多數(shù)患者中，可以獲得藥物治 療誘導(dǎo)的恢復(fù)，但是病毒清除和免疫應(yīng)答能力的動力學(xué)和機(jī)制尚未很好地理解。已經(jīng)提出 了直接抗病毒效應(yīng)和間接免疫介導(dǎo)效應(yīng)兩者，例如Th2對Thl應(yīng)答的免疫調(diào)制和病毒滴度 的快速降低對細(xì)胞應(yīng)答耗盡的阻止。為了調(diào)查早期抗病毒療法如何影響丙肝病毒（HCV)特 異性T細(xì)胞應(yīng)答，Rahman對患有急性丙肝、接受抗病毒治療并且以2至4周的時間間隔跟 蹤1至2年的7位患者，進(jìn)行了詳細(xì)的前瞻性臨床、病毒學(xué)和免疫學(xué)研究。通過離體酶聯(lián)免 疫印跡（ELISpot)、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色和增殖測定法，使用600個交疊的HCV肽和6種蛋 白，分析了總CD4(+)和CD8(+)細(xì)胞應(yīng)答。與較早使用所選HCV表位的研究相反，這項擴(kuò)展 分析在每位患者中檢測到了多特異性干擾素Y (+) (IFN-Y (+))應(yīng)答，即使在不存在T-細(xì) 胞增殖的情況下。在抗病毒療法開始后（平均在感染后20周），所有持續(xù)響應(yīng)者表現(xiàn)出逐 漸減少、隨后幾乎不存在的HCV特異性T細(xì)胞應(yīng)答，而在初始的HCV控制后發(fā)生病毒突破的 唯一患者，維持細(xì)胞免疫應(yīng)答。他們的工作指出了在丙肝中單獨使用抗病毒藥物的根本問 題，即用藥物降低病毒載量與在血液中不存在HCV特異性T-細(xì)胞應(yīng)答能力的持續(xù)增加之間 缺乏關(guān)聯(lián)性（24)。
[0130] 這樣的觀察提示了將回腸或闌尾遞送的丙肝疫苗與常規(guī)或新的口服藥物療法相 組合這一在本發(fā)明的【具體實施方式】中要求的策略。需要這種所公開的組合來克服在感染期 間宿主對丙肝病毒的總體弱的T細(xì)胞應(yīng)答，由抗病毒劑提供的可忽略的累加免疫力，以及 對將可選替淋巴組織暴露于丙肝以便產(chǎn)生耐久的T細(xì)胞應(yīng)答的需要，所述耐久的T細(xì)胞應(yīng) 答隨后可以被擴(kuò)增并轉(zhuǎn)移到脾臟、胸腺和骨髓中的長期存活的記憶B細(xì)胞。
[0131] 最近，候選的疫苗已被Strickland和同事綜述，并且其中包含的整個名單被要求 作為用于口服遞送到回腸和/或闌尾中的候選抗原/佐劑（25)。這個名單不意味著是限制 性的，因為制劑可用于任何可獲得的抗原。
[0132] 最近，Rajkannan和同事開發(fā)了一種用于乙肝的口服疫苗（26)。通過將代表乙肝 表面抗原（HBsAg)的免疫顯性B細(xì)胞表位的127-145位殘基的免疫原性肽成功地包封在 聚（D，L-乳酸-共-乙醇酸）（PLG)微粒中，制備了所述口服乙肝疫苗制劑。具有約10微 米直徑的光滑的球形PLG微粒，使用W/0/W雙重乳液溶劑蒸發(fā)方法來制備。B-細(xì)胞表位肽 (BCEP)進(jìn)入PLG微粒中的捕獲效率為64%。體外研究顯示，裝載有B-細(xì)胞表位的PLG微 粒（BCEM)以持續(xù)方式釋放所述肽，并且到第25天時達(dá)到64. 9 %的效率。小鼠使用BCEM的 單次口服免疫接種導(dǎo)致特異性血清IgG和IgM抗HB抗體的顯著誘導(dǎo)。在抗體誘導(dǎo)結(jié)束后， 將口服免疫接種的小鼠用ffisAg感染，其作為二次免疫應(yīng)答的結(jié)果引起針對HbsAg的抗體 的快速產(chǎn)生。PLG微粒制劑方法在提高用于乙肝疫苗的口服給藥的微粒系統(tǒng)的效率方面可 能具有潛力（26)。這種方法是值得注意的，因為它是十二指腸釋放產(chǎn)品，但是產(chǎn)生良好的免 疫力。尚不清楚這種策略是否對丙肝產(chǎn)生同樣量的免疫力。
[0133] 在一種實施方式中，本文中描述的方法包括在抗病毒劑給藥之前或與抗病毒劑相 組合給藥本發(fā)明的制劑。用于乙肝或丙肝的抗病毒劑的實例包括但不限于抗病毒藥劑，包 括在本文中別處描述的抗乙肝藥劑和抗丙肝藥劑，并包括例如用于乙肝病毒感染的賀維力 (阿德福韋二匹伏酯）、拉米夫定、恩替卡韋、替比夫定、替諾福韋、恩曲他濱、克拉夫定、維 特西他濱（valtoricitabine)、氨多索韋、帕拉德福韋、萊西韋（racivir)、BAM 205、硝唑尼 特、UT231-B、Bay41-4109、EHT899、日達(dá)仙（胸腺素a -1)及其混合物，以及用于丙肝病毒 感染的利巴韋林、聚乙二醇化干擾素、波西普韋、德克萊特斯韋（daclatasvir)、阿瑟納帕韋 (asunapavir)、INX-189、FV-100、NM 283、VX-950(特拉普韋（telaprevir))、SCH 50304、 TMC435、VX-500、BX-813、SCH503034、R1626、ITMN-191 (R7227)、R7128、PF-868554、TT033、 CGH-759、GI 5005、MK-7009、SIRNA-034、MK-0608、A-837093、GS 9190、GS 9256、GS 9451、 GS 5885、GS 6620、GS 9620、GS9669、ACH-1095、ACH-2928、GSK625433、TG4040 (MVA-HCV)、 A-831、F351、NS5A、NS4B、ANA598、A-689、GNI-104、IDX102、ADX184、ALS-2200、ALS-2158、BI 201335、BI 207127、BIT-225、BIT-8020、GL59728、GL60667、PSI-938、PSI-7977、PSI-7851、 SCY-635、TLR9 激動劑、PHX1766、SP-30 及其混合物。
[0134] 當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語"免疫應(yīng)答"是指引起B(yǎng)-和/或T-淋巴細(xì)胞和/或抗原 呈遞細(xì)胞的活化或增殖的體液免疫應(yīng)答和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答。然而，在某些情況下，免疫 應(yīng)答可能是低強(qiáng)度的，并且只有在使用本發(fā)明的至少一種物質(zhì)時才變得可檢測。"免疫原性 的"是指用于刺激活生物體的免疫系統(tǒng)的試劑，其使得免疫系統(tǒng)的一種或多種功能增加并 且所述功能針對所述免疫原性試劑。"免疫原性多肽"是在存在或不存在佐劑的情況下，單 獨或與載體連接的引發(fā)細(xì)胞和/或體液免疫應(yīng)答的多肽。優(yōu)選地，抗原呈遞細(xì)胞可以被激 活。
[0135] 為了評估免疫原性，例如如果制劑誘導(dǎo)了針對病毒的高滴度抗體應(yīng)答，可以在例 如治療幾周（例如3或4周）后和在給藥幾劑（例如3或4劑）后，測量抗病毒幾何平均 滴度（GMT)。也可以確定在治療幾周（例如3或4周）后和在給藥幾劑（例如3或4劑） 后對病毒發(fā)生血清轉(zhuǎn)變的受試者的百分率，以評估免疫原性。
[0136] 為了確定預(yù)防效能，可以在激惹后各個不同終點時，對保持病毒血清陰性和對病 毒PCR陰性的受試者（拭子和活檢樣品）進(jìn)行免疫原性分析。
[0137] 通過下面的非限制性實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明。 實施例
[0138] 背景
[0139] 腸來源的粘膜免疫力以及因此對疫苗的響應(yīng)，取決于在特化的淋巴上皮結(jié)構(gòu)例如 派伊爾淋巴集結(jié)中的抗原刺激（27,28)。記憶細(xì)胞從這些GI活性淋巴樣組織向所有外分泌 組織的整體散播，是口服疫苗的功能基礎(chǔ)。存在良好的證據(jù)表明，對GI相關(guān)淋巴樣細(xì)胞具 有親和性的內(nèi)皮決定簇，是派伊爾淋巴集結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)和腸固有層所共有的（29-39)。 從這些派伊爾淋巴集結(jié)分離的樹突狀細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，并且已被顯示在混合淋巴細(xì)胞反 應(yīng)中刺激T細(xì)胞，并支持IgA B細(xì)胞發(fā)育（40-48)。骨髓和胸腺的終端分化的B細(xì)胞負(fù)責(zé)免 疫系統(tǒng)長期記憶，這些細(xì)胞在本領(lǐng)域中通常被稱為漿細(xì)胞。
[0140] 被給藥的抗原和佐劑的口服定向制劑的最初接觸，是與免疫系統(tǒng)的樹突狀細(xì)胞， 通常為特定T細(xì)胞例如CD4和CD8。由這些初始細(xì)胞進(jìn)行抗原加工，然后將抗原的訊息傳遞 到用于記憶并將所述記憶散布到脾臟、肝臟、胸腺和骨髓中的淋巴樣細(xì)胞之間的B細(xì)胞。
[0141] 在掌握了這些教示的知識之后，好奇的是在現(xiàn)有技術(shù)中口服疫苗策略已被限于它 們向這些派伊爾淋巴集結(jié)的靶向，并且大部分中僅向抗原施加腸溶包衣。這些腸溶包體的 疫苗避過胃酸，并且通常在5. 6-6. 0的pH下釋放內(nèi)含物，所述制劑途徑示出在圖1中。另 一方面，不存在具有超過7. 0的pH釋放的腸溶包衣用作藥物或疫苗，這是因為觀點是它們 避過十二指腸，并且十二指腸是藥物吸收的主要位點。在正常個體中遠(yuǎn)端小腸具有高于7. 3 直至8. 0的pH值，這一點沒有被廣泛認(rèn)識到。此外，對于回腸中的這種高pH，還沒有被廣泛 接受的機(jī)制或解釋?？偟膩碚f，可以說回腸遠(yuǎn)端是迄今為止在本領(lǐng)域中未被研究的新的位 點特異性藥物遞送靶點，并且由于藥物遞送性質(zhì)未被探索，因此回腸和闌尾也被認(rèn)為是全 新的疫苗遞送靶點。這后一種概念由于派伊爾淋巴集結(jié)的已知免疫調(diào)節(jié)作用和回腸制動激 素釋放性物質(zhì)模擬RYGB對GI道來源的免疫力的最近發(fā)現(xiàn)的作用而產(chǎn)生，這兩種作用通過 參考并入本公開。
[0142] 然而仍存在被忽視的事實，即通過我們的工作已被鑒定為是營養(yǎng)、飽腹感和代謝 綜合征控制的主要感受器的遠(yuǎn)端腸，（由于闌尾、回腸和闌尾中的被稱為派伊爾淋巴集結(jié)的 感覺細(xì)胞和其他淋巴樣組織），顯然是針對病原體通過GI道的侵入的免疫應(yīng)答的守衛(wèi)者。 通過派伊爾淋巴集結(jié)和闌尾中的樹突狀細(xì)胞起作用，抗原和佐劑影響細(xì)胞和體液免疫途徑 兩者，所述途徑進(jìn)而受到回腸遠(yuǎn)端和闌尾的細(xì)胞控制。闌尾（右結(jié)腸的一部分）長期以來 被稱為先天免疫的主要調(diào)控者，并且尚未提出直接靶向闌尾的疫苗。事實上，靶向闌尾尚未 被認(rèn)為是可能的，然而我們能夠根據(jù)腸中闌尾和右結(jié)腸的獨特PH特征，在用于這些位點遞 送的丸劑制劑策略內(nèi)發(fā)明有效且可靠的丸劑。
[0143] 實施例1
[0144] 包含在靶向回腸和闌尾的疫苗制劑中的抗原材料的制備
[0145] 抗原和它們的相關(guān)免疫原性潛力，在預(yù)防性接種疫苗和疾病的免疫治療性治療兩 者中是最適疫苗應(yīng)答的關(guān)鍵組分。存在多種常用于制備疫苗用抗原的方法，在本發(fā)明的新 制劑的公開內(nèi)容范圍之內(nèi)考慮到了所有這些方法?？乖ǔＪ羌?xì)胞或細(xì)菌或病毒DNA/RNA 的具有完整細(xì)胞的免疫識別性質(zhì)的非侵入性或無活性的片段。它們通過細(xì)胞分級分離然后 進(jìn)行組分分離，從完整細(xì)胞制備，焦點在于細(xì)胞壁組分。由于抗原性片段的精確序列是確定 的，因此它可以在細(xì)菌、植物或淋巴細(xì)胞系中大量制備。所有這些抗原制備物和所選抗原的 實例，作為用于新的位點特異性GI遞送到回腸和闌尾的要素而被要求保護(hù)。
[0146] 包含在靶向于回腸和闌尾的制劑中的佐劑的制備
[0147] 在疫苗開發(fā)領(lǐng)域中，當(dāng)針對所施加的抗原的免疫應(yīng)答弱、壽命短或在其他方面不 足時，通常通過在應(yīng)用的制劑中向抗原添加佐劑來增強(qiáng)對抗原的應(yīng)答。成功的佐劑的關(guān)鍵 要素是得到的針對特定抗原的免疫原性應(yīng)答高于單獨抗原的情況。對抗原的增強(qiáng)的應(yīng)答可 以延長疫苗保護(hù)的持續(xù)時間，或者可以增加保護(hù)的量，或兩者。凈利益是在預(yù)防性接種疫苗 和疾病的免疫治療性治療兩者中總體疫苗應(yīng)答的提高。存在多種常用于制備疫苗用佐劑的 方法，并且考慮將所有已知或新開發(fā)的抗原-佐劑組合包含在本發(fā)明的新制劑的公開內(nèi)容 范圍之內(nèi)。配制的抗原_佐劑的準(zhǔn)確組成整體在所公開的制劑的范圍之內(nèi)，并且對具體材 料進(jìn)行選擇以避免抗原或佐劑的失活。
[0148] 通用配制方法：
[0149] 本文中提供的通用配制方法將遞送抗原，其帶有或不帶有佐劑，并且?guī)в谢虿粠?有回腸制動激素釋放性物質(zhì)，后者本身優(yōu)化了回腸的樹突狀細(xì)胞的免疫應(yīng)答，從而起到非 特異性佐劑的作用。本文中公開的所有制劑所靶向的GI道中的位點，與在口服疫苗遞送領(lǐng) 域中應(yīng)用的被限定靶向以在十二指腸中釋放抗原的腸溶包衣制劑不同（參見圖1)。使用 SmartPill技術(shù)進(jìn)行的用于研究患者的研究確立了整個GI道的pH讀數(shù)，并揭示了在十二指 腸中溶解的目標(biāo)PH為5. 5至6. 0 (49, 50)。已發(fā)現(xiàn)，在十二指腸之外的腸的pH讀數(shù)，使得用 于本文中公開的位點特異性口服疫苗遞送的先進(jìn)配制策略得以實現(xiàn)。將疫苗配制成丸中丸 形式，具有一些共同要素以及一些對所使用的抗原特異性的材料。所述共同要素公開在本 實施例中，并且用于特定抗原的策略顯示在后面的實施例中。
[0150] 制劑1，如圖2-3中所示，演示了具有或不具有佐劑的抗原向回腸和回腸制動的GI 位點特異性遞送的最簡單方式：
[0151] 1.鑒定并生產(chǎn)用于刺激免疫系統(tǒng)的回腸遠(yuǎn)端靶細(xì)胞的抗原的疫苗量
[0152] 2.添加可以進(jìn)一步提高靶細(xì)胞應(yīng)答能力的任何佐劑
[0153] 3.摻入任何營養(yǎng)要素以維持活生物體抗原的存活性
[0154] 4.確?；旌衔镌?. 3-8. 0的pH值下穩(wěn)定
[0155] 5.將混合物的組分包封在微顆粒、粉末或顆粒中
[0156] 6.包衣膠囊表面使得在pH〈7. 3下不溶
[0157] 7.將該膠囊給藥于受試者，目的在于根據(jù)實測的得到的抗體應(yīng)答來確定有效的接 種疫苗劑量。
[0158] 進(jìn)一步的系統(tǒng)改良（制劑2的演化，"丸中丸"），如圖4-6中所示：
[0159] 1.開發(fā)在約5. 5至6. 0的pH值下穩(wěn)定的疫苗抗原的第二制劑
[0160] 2.用約5. 5的pH釋放包衣包封所述混合物
[0161] 3.向含有第一抗原性混合物并在約pH 7. 3下釋放的膠囊添加該第二種較小的內(nèi) 部丸劑。第二膠囊將在回腸遠(yuǎn)端處保持完整。它將通過進(jìn)入右結(jié)腸并到達(dá)5. 5的pH處，由 此將其內(nèi)含物釋放到右結(jié)腸中并直接到達(dá)闌尾。
[0162] 4.抗原和佐劑的內(nèi)部包封的目的是將內(nèi)含物呈遞到右結(jié)腸，將右結(jié)腸和闌尾的已 知淋巴樣組織暴露于疫苗抗原。
[0163] 5.將該雙重丸劑混合物給藥于受試者，目的在于根據(jù)實測的得到的抗體應(yīng)答來確 定有效的接種疫苗劑量。
[0164] 合并制劑1和制劑2的要素的其他實施方式：
[0165] 1.產(chǎn)生制劑1的混合物的微顆粒，包封，以便在約pH 7. 0至7. 6釋放包含的抗原， 由此將微顆粒鋪展在空腸和回腸中，并由此增加GI表面例如派伊爾淋巴集結(jié)與抗原混合 物的接觸。
[0166] 2.這些微顆粒可以與任何液體或食品例如蘋果醬或酸奶一起口服，并且它們將到 達(dá)回腸和回腸制動中的釋放位點。
[0167] 3.或者，可以將這些微顆粒包在膠囊中并在pH 7.0下釋放。
[0168] 4.作為另一種實施方式，該膠囊也可以含有與制劑2中相同的第二種較小膠囊， 其隨后在右結(jié)腸中和闌尾附近釋放。
[0169] 5.制劑1或制劑2可以含有回腸制動激素釋放性物質(zhì)，因為它們是調(diào)節(jié)抗原識別 和針對它的免疫應(yīng)答所需的有益免疫應(yīng)答的刺激物
[0170] 6.制劑1或制劑2可以含有活性量的針對疾病的治療活性物質(zhì)，并因此可用于組 合免疫療法和感染或癌癥的預(yù)防。
[0171] 概述-GI位點特異性口服接種疫苗制劑的優(yōu)點：
[0172] 1.與腸胃外給藥相比較低的抗原劑量，特別是當(dāng)接種疫苗的靶點是存在大量免疫 系統(tǒng)抗原受體例如樹突狀細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞的回腸和相關(guān)免疫應(yīng)答性區(qū)域時。
[0173] 2. 口服疫苗與注射用疫苗相比表現(xiàn)出更少的穩(wěn)定性問題，并且它們便于在資源貧 乏國家中的疫苗使用。在某些情況下，口服疫苗和策略的使用甚至可以避免對冷藏的任何 需要。
[0174] 3.當(dāng)所有接種疫苗作為口服產(chǎn)品使用時，不需要針頭或?qū)I(yè)人員進(jìn)行注射
[0175] 4.安全性優(yōu)點最大化，這是因為與在身體中循環(huán)的較高的量相比，可以使用較低 量的抗原通過GI道進(jìn)行接種疫苗。
[0176] 5.在為了最大化免疫應(yīng)答而需要超過一劑藥劑的情況下，加強(qiáng)口服藥劑在技術(shù)上 更容易給藥。
[0177] 6.即使在第一劑疫苗注射給藥的情況下，也更容易定期提供加強(qiáng)口服疫苗，提供 了容易且安全地保護(hù)有風(fēng)險人群的手段。
[0178] 7.由于選擇性地僅應(yīng)用于回腸遠(yuǎn)端和闌尾中的免疫監(jiān)督細(xì)胞，因此需要較少量的 抗原。
[0179] 8.這將是真正能夠到達(dá)闌尾并在那里有活性以刺激免疫系統(tǒng)的第一種口服給藥 的疫苗。
[0180] 9.由于口服接種疫苗，對作為防腐劑的外來組分或針對注射到身體內(nèi)的蛋白質(zhì)的 系統(tǒng)性免疫反應(yīng)的顧慮較少或甚至沒有這樣的顧慮
[0181] 10. 口服膠囊便于加強(qiáng)疫苗策略，不需進(jìn)行注射，僅僅在幾周后服用第二粒膠囊。 通過這種方式，口服膠囊適合于在抗原應(yīng)答弱或壽命短（HIV、葡萄球菌、流感、丙肝和癌 癥）的情況下連續(xù)使用。
[0182] 實施例2
[0183] 使用支持性文獻(xiàn)或所公開的抗原的制劑的開發(fā)
[0184] 葡萄球菌（Staphylococci)
[0185] 已經(jīng)調(diào)查了生物相容性和可生物降解的微球作為受控釋放口服疫苗遞送系統(tǒng)的 潛力。口服給藥的1-10微米的由聚（DL-乳酸-共-乙醇酸）構(gòu)成的微球被特異性攝取進(jìn) 腸的派伊爾淋巴集結(jié)淋巴樣組織中，大于或等于5微米的微球在那里保留長達(dá)35天。小于 5微米的微球在巨噬細(xì)胞內(nèi)散布到腸系膜淋巴結(jié)和脾臟。與可溶性葡萄球菌腸毒素B類毒 素相反，使用微球中的腸類毒素的口服免疫接種誘導(dǎo)了循環(huán)的毒素特異性抗體，以及在唾 液和腸液中的同時分泌性IgA抗毒素應(yīng)答（51)。
[0186] Theilacker和同事最近圍繞脂磷壁酸的結(jié)構(gòu)改良開發(fā)了新的疫苗抗原，并且感 興趣的是，已顯示它們發(fā)展出針對幾種病原性革蘭氏陽性物種的廣泛保護(hù)。1型脂磷壁酸 (LTA)存在于許多臨床上重要的革蘭氏陽性細(xì)菌包括腸球菌、鏈球菌和葡萄球菌中，并且已 顯示針對LTA的抗體調(diào)理了未被包封的糞腸球菌（Enterococcus faecalis)菌株。在所 述研究中，他們顯示針對糞腸球菌（E. faecalis) LTA的抗體也結(jié)合來自于其他革蘭氏陽性 物種的1型LTA，并調(diào)理表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis)和金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)菌株以及B組鏈球菌。使用磷壁酸寡聚體的抑制研究指出，交叉 反應(yīng)性調(diào)理抗體結(jié)合于磷壁酸骨架。使用針對糞腸球菌（E. faecalis)LTA的兔抗體的被動 免疫，在小鼠中促進(jìn)了由糞腸球菌（E. faecalis)和表皮葡萄球菌（S.印idermidis)引起的 菌血癥的清除。此外，被動保護(hù)還在鼠類金黃色葡萄球菌（S. aureus)腹膜炎模型中降低了 死亡率。針對LTA的兔抗體的有效性表明這種保守的細(xì)菌結(jié)構(gòu)能夠起到靶向多種革蘭氏陽 性病原體的單一疫苗抗原的作用（52)。作為具體實例，在遠(yuǎn)端GI道制劑中的這種抗原的口 服施用在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，向待接種疫苗的受試者的回腸或闌尾的遞送也是如此。
[0187] 適合于口服遞送到回腸和闌尾的候選疫苗的另一個實例是StaphVAX。StaphVAX 是一種二價的多糖和蛋白質(zhì)偶聯(lián)的疫苗，針對與80至90%的金黃色葡萄球菌（S. aureus) 臨床感染相關(guān)的有莢膜的金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) 5型和8型。這種疫 苗由Nabi開發(fā)，用于在接受腹膜透析并易于發(fā)生嚴(yán)重葡萄球菌感染的腎病患者中感染的 潛在治療。StaphVAX與針對金黃色葡萄球菌的其他疫苗的共同之處在于不是高度免疫原性 的，并且保護(hù)相當(dāng)短暫。在2001年2月，贊助公司Nabi披露了在患有晚期腎病（ESRD)的 患者中進(jìn)行StaphVAX的加強(qiáng)研究的計劃。這項研究將在第一次III期試驗中征召的患者 中進(jìn)行，并且公司預(yù)期在2002年初完成[283114]。該公司還在用于所述疫苗的商業(yè)化生產(chǎn) 的制造方法的規(guī)模放大方面取得進(jìn)展。后續(xù)試驗的結(jié)果是驗證了總體弱的免疫原性和壽命 短的應(yīng)答，并且目前這種疫苗正等待提高其免疫原性和持續(xù)時間的策略（53-57)。
[0188] 針對革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要成分脂磷壁酸（LTA)的疫苗株最近完成了表 明效能的II期研究，并正在為臨床調(diào)查進(jìn)行進(jìn)一步開發(fā)（58)。
[0189] 白喉
[0190] 從1974年起，脂質(zhì)體已被用于包封抗原和佐劑。在口服疫苗中使用脂質(zhì)體的一個 主要限制是由十二指腸中的酶活性引起的脂類結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性。作者的目的是將能夠包封抗 原（即Dtxd，白喉類毒素）的脂質(zhì)體與保護(hù)粒子并促進(jìn)粘膜附著能力的殼聚糖相組合。他們 使用物理技術(shù)來了解可以將脂質(zhì)體（SPC :Cho, 3:1)用殼聚糖（Chi)夾心并用作為可生物降 解、生物相容的聚合物的PVA(聚乙烯醇）穩(wěn)定的過程。獲得了用PVA穩(wěn)定化的REVs-Chi (被 Chi夾心的反相囊泡）的圓形光滑表面的粒子。REV包封效率（使用Dtxd作為抗原）直接 取決于制劑中存在的Chi和PVA。Chi在REV表面上的吸附伴有電位的提高。相反， PVA在REVs-Chi表面上的吸附伴有4 -電位的降低。Dtxd的存在增加了 Chi表面吸附效 率。粘蛋白（mucine)對PVA的親和性比單獨使用Chi所觀察到的高2, 000倍，并且不依賴 于溶液中或吸附在脂質(zhì)體表面上的分子。被包封Dtxd的釋放，被在REVs-Chi-PVA內(nèi)的包 封所遲滯。這些結(jié)果使我們得出結(jié)論，這些新的、穩(wěn)定化的粒子能夠被腸表面吸附，抵抗降 解并控制抗原釋放。因此，REVs-Chi-PVA粒子可用作口服遞送佐劑（59)。
[0191] 在12位健康志愿者中進(jìn)行了雙盲研究，以便確定在口服免疫接種后是否存在循 環(huán)免疫細(xì)胞。在攝入核糖體疫苗（D53)或安慰劑后的各個不同時間收集外周血的順序樣 品。在免疫熒光中鑒定含有免疫球蛋白的細(xì)胞，并在瓊脂糖ELISA斑點中檢測特異性抗體 形成細(xì)胞。在接受核糖體提取物的個體組中，觀察到更高數(shù)量的這兩種類型的細(xì)胞。開放 性研究提供了更好的手段以研究這種與在抗原性刺激后激活的B細(xì)胞從派伊爾淋巴集結(jié) 的釋放相關(guān)的現(xiàn)象的動力學(xué)。這種方法學(xué)手段已在動物模型中描述，但是在人類中很少報 道（60)。
[0192] 為了闡明口服接種疫苗的粘膜免疫的生理基礎(chǔ)并提出用于調(diào)查口服遞送疫苗的 微?；蚣{米粒子的必需載體，分析了在腸相關(guān)淋巴樣組織中抗原呈遞和粘膜免疫反應(yīng)的特 點?？紤]胃腸道的形態(tài)和生理屏障，進(jìn)一步討論了顆粒的吸收和運(yùn)輸，并且在這篇綜述中 還概述了關(guān)于用于口服疫苗遞送的顆粒劑型的研究。參與免疫調(diào)節(jié)的派伊爾淋巴集結(jié)和 M-細(xì)胞，是在口服疫苗遞送策略中發(fā)揮關(guān)鍵作用的顯著區(qū)域。施用的微粒囊泡可以克服胃 腸道的屏障和降解途徑?？诜臃N疫苗被賦予了新的內(nèi)涵，特別是由凝集素錨定的粒子促 進(jìn)的運(yùn)輸和免疫效率的提高。結(jié)論是，由顆粒載體介導(dǎo)的通過粘膜免疫系統(tǒng)的口服接種疫 苗，將有助于位點特異性觸發(fā)和信號放大。對于疫苗來說，這些有希望的載體系統(tǒng)的應(yīng)用前 景對科學(xué)研究和商業(yè)開發(fā)可能具有潛在吸引力（61)。本文中公開的制劑1和制劑2的使用 使這些GI靶點特異性疫苗成為可能，并提供了降低它們到實用水平的特定手段。在這個實 例中，我們對將任何靶向回腸遠(yuǎn)端或右結(jié)腸的疫苗遞送到GI道中的那些特定位點，以優(yōu)化 免疫系統(tǒng)的疫苗應(yīng)答的口服手段，提出權(quán)利要求。
[0193] 肝炎
[0194] 使用基于植物的口服疫苗針對乙肝病毒（HBV)和其他病原體的有效免疫接種，已 由Pniewski描述（62)，并需要適合的植物表達(dá)者以及疫苗組成和給藥方案的優(yōu)化。隨后， 這些免疫原性組分需要GI位點特異性靶向制劑用于在受試者中產(chǎn)生最適免疫應(yīng)答。以前 的免疫接種研究主要是基于HBV的小表面抗原（S-HBsAg)的注射與增補(bǔ)有佐劑的含抗原原 始組織的口服的組合，所述原始組織來自于賦予對卡那霉素的抗性的植物。他們的研究目 的是開發(fā)適用于人類免疫接種的原型口服疫苗制劑。工程化產(chǎn)生了除草劑抗性萵苣，其通 過后代穩(wěn)定地表達(dá)每克濕重微克級的S-HBsAg，并被形成為病毒樣粒子（VLP)。含有相對低 的100-ng VLP組裝抗原藥劑的冷凍干燥組織，以引發(fā)和加強(qiáng)免疫接種之間60天的長時間 間隔，并且沒有外源佐劑，僅通過口服給藥于小鼠，以名義上的保護(hù)水平引發(fā)粘膜和系統(tǒng)性 體液抗HB應(yīng)答。將冷凍干燥組織轉(zhuǎn)變成片劑，其在室溫儲存下保存S-HBsAg內(nèi)含物至少一 年。研究結(jié)果為使用針對乙肝的耐久、高效和方便的源自于植物的原型口服疫苗的免疫接 種方法，提供了指示（62)。
[0195] 目前針對乙肝病毒（HBV)的免疫接種計劃越來越通常地包含新的三組分疫苗，其 同時含有HBV的?。⊿-HBsAg)以及中和大表面抗原（M-和L-HBsAg)。產(chǎn)生所有HBsAg蛋白 的植物可以是用于潛在的口服"三體"抗HBV疫苗的組分來源。所呈現(xiàn)的研究的目的是研究 在葉組織中M/L-HBsAg表達(dá)的潛力及其加工以用于原型口服疫苗的條件。工程化產(chǎn)生了帶 有M-或L-HBsAg基因并對除草劑草銨膦有抗性的煙草和萵苣，并通過PCR和Southern雜交 證實了轉(zhuǎn)入基因的整合。通過Western印跡證實了 M-和L-HBsAg表達(dá)，并通過ELISA測定 了每克濕重具有毫克級水平。抗原顯示出共同的S結(jié)構(gòu)域和特征性結(jié)構(gòu)域preS2和preSl， 并且被組裝成病毒樣粒子（VLP)。將含有M-和L-HBsAg的葉組織冷凍干燥，以產(chǎn)生口服給 藥疫苗配方的起始材料。就S和preS結(jié)構(gòu)域的穩(wěn)定性和多體粒子的形成而言，抗原明顯對 冷凍干燥條件和儲存溫度敏感。冷凍干燥和儲存的效率也取決于植物組織中的初始抗原含 量，但M-HBsAg顯得比L-HBsAg更穩(wěn)定約1. 5-2倍。研究結(jié)果提供了與針對乙肝的植物來 源的原型口服三組分疫苗的與S-HBsAg之外的兩種其他組成成分的制備相關(guān)的指示（63)。
[0196] 通過將代表乙肝表面抗原（HBsAg)的免疫顯性B細(xì)胞表位的127-145位殘基的免 疫原性肽成功包封在聚（D，L-乳酸-共-乙醇酸）（PLG)微粒中，制備了口服乙肝疫苗制 齊IJ。使用W/0/W雙重乳液溶劑蒸發(fā)方法，制備了具有約10微米直徑的光滑球形PLG微粒。 B-細(xì)胞表位肽（BCEP)進(jìn)入PLG微粒中的捕獲效率為64 %。體外研究顯示，裝載有B-細(xì)胞 表位的PLG微粒（BCEM)以持續(xù)方式釋放所述肽，并且到第25天時達(dá)到64. 9%的效率。小 鼠使用BCEM的單次口服免疫接種導(dǎo)致特異性血清IgG和IgM抗HB抗體的顯著誘導(dǎo)。在抗 體誘導(dǎo)結(jié)束后，將口服免疫接種的小鼠用ffisAg感染，其作為二次免疫應(yīng)答的結(jié)果引起針 對HbsAg的抗體的快速產(chǎn)生。PLG微粒制劑在提高用于乙肝疫苗的口服給藥的微粒系統(tǒng)的 效率方面可能具有潛力（26)。
[0197] 由淀粉微粒和偶聯(lián)的抗原構(gòu)成的口服疫苗制劑正在開發(fā)之中，并且作者研究了這 樣的微粒被腸粘膜的攝入，并研究了偶聯(lián)的抗原是否能夠影響攝入。使用了兩種模型抗原： 重組霍亂毒素B亞基（rCTB)，其已知結(jié)合于遍在的GMl-受體，以及人血清白蛋白（HSA)，其 尚未了解到具有任何特異性結(jié)合性質(zhì)。攝取的研究在注入了微粒的小鼠結(jié)扎腸袢中進(jìn)行。 將腸袢切下，固定在冰冷的95%乙醇中。將整個樣本固定，暴露于對細(xì)胞骨架、粒子和/或 M細(xì)胞進(jìn)行染色的熒光標(biāo)記的試劑，并在共聚焦激光掃描顯微鏡中檢查。觀察到rCTB-和 HSA-偶聯(lián)的微粒的攝取的定性差異。在絨毛和派伊爾淋巴集結(jié)的囊泡兩者中均發(fā)現(xiàn)了 rCTB-偶聯(lián)的微粒。HSA-偶聯(lián)的微粒只能在派伊爾淋巴集結(jié)的囊泡中而不能在絨毛中檢測 至IJ。正如使用GM1-ELISA所顯示的，偶聯(lián)到微粒的rCTB不喪失其結(jié)合GMl-受體的能力，并 且rCTB-偶聯(lián)的微粒在絨毛中的攝取最可能由rCTB與GMl-受體的結(jié)合促進(jìn)。攝取的定性 差異對于免疫應(yīng)答的發(fā)生可能是重要的，因為抗原呈遞期間的細(xì)胞因子和趨化因子微環(huán)境 將決定誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答的分化（64)。
[0198] 流感
[0199] 通過口服免疫接種誘導(dǎo)粘膜免疫，是控制流感感染的有效方式。這種方法如此成 功，使得即使是例如在HIV和癌癥中所發(fā)生的免疫系統(tǒng)受損的患者也可以獲得對流感的免 疫力。在使用與實施方式相關(guān)的產(chǎn)品的動物試驗過程中，將表現(xiàn)出流感血細(xì)胞凝集素的桿 狀病毒包封在磷脂酰膽堿的反膠束結(jié)構(gòu)中，并遞送到小鼠的胃腸道，以研究它作為針對交 叉進(jìn)化枝H5N1感染的口服疫苗的效能。用表現(xiàn)出HA的包封的桿狀病毒（En-BacHA)接種 疫苗的小鼠，當(dāng)與其非包封的形式（BacHA)相比時，顯示出明顯提高的HA特異性血清IgG 和粘膜IgA抗體以及更高的血細(xì)胞凝集素抑制（HI)滴度。血清中和抗體的估算也表明， En-BacHA制劑能夠誘導(dǎo)針對異源H5N1毒株的強(qiáng)的交叉進(jìn)化枝中和（進(jìn)化枝1. 0、進(jìn)化枝 2. 1、進(jìn)化枝4. 0和進(jìn)化枝8. 0)。此外，單獨用En-BacHA接種疫苗的小鼠能夠針對HPAI異 源H5N1毒株（進(jìn)化枝1)的5MLD50提供100%的保護(hù)。在疫苗制劑中包含重組霍亂毒素B 亞基作為粘膜佐劑，在系統(tǒng)性和粘膜免疫應(yīng)答兩者中沒有顯示出任何顯著效果。作者得出 結(jié)論，包封的在桿狀病毒表面上表達(dá)的重組H5HA的口服遞送，是在小鼠中引發(fā)免疫系統(tǒng)對 抗H5N1感染的有效方式，并且沒有與它們的生產(chǎn)或給藥相關(guān)的生物安全性顧慮（65)。
[0200] 這些是需要靶向遞送的產(chǎn)品。使用本發(fā)明，可以將這些產(chǎn)品容易地配制成用于向 回腸和闌尾遞送，具有預(yù)期的抗體保護(hù)性應(yīng)答的提高，這是抗原在胃酸和十二指腸中的蛋 白酶下存活的直接益處。
[0201] 出于許多科學(xué)、管理或商業(yè)原因，有效的實驗疫苗可能不能變成治療現(xiàn)實。在這篇 綜述中，作者作為基于大學(xué)的研究人員分享了他們的一些個人經(jīng)驗，并提供了在口服流感 疫苗制劑的初步規(guī)模放大和評估期間遇到的一些問題的報告。面臨的許多問題是非科學(xué)上 的，并且涉及鑒定項目資助來源，發(fā)現(xiàn)符合GMP的適合的合同制造公司，以及保護(hù)從科學(xué)研 究產(chǎn)生的知識產(chǎn)權(quán)。所述綜述旨在作為實用指南，允許其他研究人員采取有效策略以允許 將有效的實驗制劑轉(zhuǎn)化成商業(yè)上可行的產(chǎn)品（66)。
[0202] 流感似乎是通過回腸和闌尾的口服接種疫苗的有希望的候選者，并且采取這 種接種疫苗路線與目前可用的肌肉內(nèi)注射或鼻吸入方法相比具有許多潛在和明顯的優(yōu) 點。每年，F(xiàn)DA召開制造商會議以確定將在秋季使用的疫苗株。在2012年，F(xiàn)DA委員會 確立了含有3個毒株的三價流感疫苗：毒株A/California/7/2009(HlNl)樣病毒，毒株A Victoria/361/2011 (H3N2)樣病毒，毒株 B/Wisconsin/1/2010 樣病毒（B/Yamagata 譜系）。 為了產(chǎn)生使用本發(fā)明靶向回腸和闌尾的口服流感疫苗，將每種這些FDA選定的毒株分開地 包封在微顆粒中。將微顆粒以1:1:1的比率混合并放置在膠囊中，然后包衣至在高于7.3 的pH下釋放。為了靶向于闌尾，將微顆粒的混合物首先包封在在5. 5至6. O之間的pH下 溶解的內(nèi)部丸劑中。通過這種方式，根據(jù)圖4-6中的教示，當(dāng)微顆粒被包封在制劑1和2中 時，內(nèi)部丸劑的內(nèi)含物將到達(dá)闌尾。提出了將這種用于2012年流感疫苗的制劑的口服使用 作為將這些相同毒株混合在待注射或吸入疫苗中的可選替方案。我們在含有和不含非特異 性佐劑的情況下試驗這種流感制劑。根據(jù)這種針對流感的制劑方法的教示，類似的方法將 適用于由FDA委員會選擇的毒株，這種選擇在每年做出。
[0203] 肥胖癥可能是流感病毒感染的嚴(yán)重性和死亡率提高的最重要的風(fēng)險因子￠7)，并 據(jù)信對疫苗效能具有不利影響。最近，作為大流行的甲型流感病毒HlNl亞型的結(jié)果而出現(xiàn) 了死亡，因此有必要開發(fā)可能靶向于免疫應(yīng)答性胃腸道的更有效的疫苗策略。
[0204] 在肥胖小鼠中，Kim和同事調(diào)查了飲食誘導(dǎo)的肥胖癥對疫苗誘導(dǎo)的針對大流行的 HlNl流感病毒的免疫應(yīng)答和保護(hù)效能的影響。將飲食誘導(dǎo)的肥胖和瘦的C57BL/6J小鼠用 商品化單價2009年HlNl疫苗免疫接種，并觀察抗原特異性抗體應(yīng)答和中和活性。在接種 疫苗后，將小鼠用同源HlNl病毒激惹，并研究發(fā)病機(jī)理和死亡率。在肥胖小鼠中，疫苗誘導(dǎo) 的HlNl特異性抗體應(yīng)答和中和活性顯著降低。與抗體應(yīng)答相一致，在肥胖癥小鼠中，與瘦 的對照相比，在激惹后肺病毒滴度明顯更高。此外，肥胖組顯示出在肺組織中極大提高的前 炎性細(xì)胞因子和趨化因子表達(dá)，嚴(yán)重的肺部炎癥，以及與瘦的對照小鼠（14%)相比更高的 最終死亡率（100% )。研究結(jié)果顯示,在飲食誘導(dǎo)的肥胖癥中，由2009年HlNl疫苗誘導(dǎo)的 預(yù)防性免疫應(yīng)答和保護(hù)性可能極端受損。這些結(jié)果建議，對于高風(fēng)險組、包括肥胖人群，需 要新的接種疫苗策略。（68)
[0205] 值得注意的是，在肥胖癥中，回腸的pH與正常情況下不同，并且這些結(jié)果導(dǎo)致以 模仿RYGB手術(shù)的方式改良地使用回腸制動激素釋放性物質(zhì)，其結(jié)果通過參考并入本文。顯 然，用于流感的口服疫苗制劑和可能其他回腸靶向口服疫苗，應(yīng)該對肥胖受試者的回腸中 存在的多少降低的PH進(jìn)行調(diào)整。因此，我們將釋放目標(biāo)設(shè)定到7. 3的pH，這將允許將口服 疫苗有效使用在肥胖癥患者以及正常和瘦的患者中。
[0206] 其他人注意到需要針對流感疫苗的更好的免疫原性應(yīng)答，并且Kim和同事提出了 開發(fā)簡單并允許容易地自我給藥的新的皮膚遞送方法。他們制備了具有穩(wěn)定化的流感疫 苗的微針貼片，并在小鼠中調(diào)查了它們的保護(hù)性免疫應(yīng)答。用海藻糖穩(wěn)定化的流感疫苗的 單一微針?biāo)巹┙臃N疫苗的小鼠發(fā)展出了長期的強(qiáng)的抗體應(yīng)答。與傳統(tǒng)的肌肉內(nèi)接種疫苗相 t匕，穩(wěn)定化的微針接種疫苗在誘導(dǎo)保護(hù)性免疫方面是優(yōu)越的，正如由從致死性激惹100%存 活后病毒從肺的有效清除和提高的體液和抗體分泌細(xì)胞免疫應(yīng)答所證實的。已發(fā)現(xiàn)，疫苗 穩(wěn)定化是重要的，因為與穩(wěn)定化的微針疫苗相比，用未穩(wěn)定化的微針接種疫苗的小鼠引發(fā) 更弱的免疫球蛋白G 2a抗體應(yīng)答，并且針對病毒激惹僅僅部分受到保護(hù)。他們的假設(shè)是， 作為微針遞送到皮膚的結(jié)果的樹突狀細(xì)胞向區(qū)域性淋巴結(jié)的增加的運(yùn)輸可能在有助于提 高保護(hù)性免疫中發(fā)揮作用。結(jié)論：這些發(fā)現(xiàn)表明，使用微針貼片的皮膚接種疫苗可以提高保 護(hù)性效能并誘導(dǎo)長期持續(xù)的免疫原性，并且也可以提供簡單的給藥方法，以提高流感接種 疫苗覆蓋率。（69)
[0207] 這些實驗提供了通過靶向回腸和闌尾的樹突狀細(xì)胞和淋巴樣組織的口服制劑，將 疫苗定向給藥到GI道的另一種潛在優(yōu)點。具體來說，當(dāng)以這種方式施用時，接種疫苗將更 強(qiáng)。
[0208] 霍亂
[0209] 幾十年來，能夠引起嚴(yán)重脫水性霍亂的霍亂弧菌（Vibrio cholerae)的霍亂弧菌 0139血清型的出現(xiàn)，引起了配制疫苗以針對這種病原體提供保護(hù)的嘗試。盡管有記錄的由 霍亂弧菌0139造成的腹瀉的流行程度降低，但對疫苗開發(fā)的努力仍在繼續(xù)，以配制能夠刺 激腸粘膜系統(tǒng)的口服疫苗。我們已在孟加拉國成人中研究了針對由霍亂弧菌0139以及霍 亂弧菌01菌株與重組霍亂毒素B亞基（CTB) -起（WC-01/0139/CTB)構(gòu)成的殺死的全細(xì)胞 (WC)二價霍亂疫苗的粘膜免疫原性，并將所述免疫應(yīng)答與針對使用批準(zhǔn)的單價霍亂疫苗 Dukoral (WC-01/CTB)獲得的免疫應(yīng)答進(jìn)行比較。使用從十二指腸活檢樣品、腸洗出液和糞 便分離的淋巴細(xì)胞，進(jìn)行了 WC-01/0139/CTB疫苗特異性粘膜應(yīng)答的直接估算。疫苗在十二 指腸中誘導(dǎo)了特異性針對CTB以及01和0139脂多糖（LPS)的魯棒的抗體分泌細(xì)胞應(yīng)答。 在所有三種抗體同種型中，在腸中的應(yīng)答幅度比在循環(huán)中更高。在腸洗出液和糞便提取物 中，也觀察到CTB和LPS特異性粘膜抗體應(yīng)答。在血漿中觀察到了針對霍亂弧菌01和0139 兩種血清型的殺弧菌抗體應(yīng)答（應(yīng)答率分別為76%和57% )。針對CTB的血漿IgA和IgG 應(yīng)答以及針對01和0139LPS兩者的IgA應(yīng)答升高。在研究的所有組分中，免疫應(yīng)答與對單 價WC-00/CTB受試者觀察到的相當(dāng)。總的來說，二價霍亂疫苗誘導(dǎo)強(qiáng)的粘膜應(yīng)答，并且0139 組分的添加不干擾針對批準(zhǔn)的疫苗Dukoral的應(yīng)答。這為在孟加拉國在大面積試驗中試 驗這樣的疫苗建立了基礎(chǔ)，并且也證實了向現(xiàn)有的霍亂疫苗添加其他弧菌組分不改變對01 疫苗組分的應(yīng)答。（70)
[0210] 本工作的目的是評估使用甲基丙烯酸共聚物Eudragit.? L30D-55和FS30D，通過 失活霍亂弧菌的噴霧干燥進(jìn)行的微包封。獲得的微粒表現(xiàn)出約3. Omum的粒子大小。制備溫 度影響微粒的形態(tài)和抗原性，但是它不影響霍亂弧菌含量。體外釋放研究顯示，在酸性介質(zhì) 中少于5%的細(xì)菌被釋放，在中性介質(zhì)中，丨'11 (.丨「:舊丨丨>(_1300-55微粒在24小時后釋放86%， 而FS30D釋放少于30%。用微粒接種的大鼠表現(xiàn)出殺弧菌抗體滴度?？梢蕴岢鰧⑼ㄟ^失活 霍亂弧菌的噴霧干燥進(jìn)行的微包封作為獲得提供細(xì)菌的受控釋放的口服疫苗的方法。（71)
[0211] 用于 TB 的 BCG
[0212] 由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis)感染引起的牛結(jié)核（bTB)，由于發(fā)病率越 來越高，正對英國的農(nóng)民和政府造成相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)損失。在英國，控制bTB的努力受到了狗 獾（Meles meles)中感染的阻礙，所述狗獾代表了牛分枝桿菌反復(fù)暴露于牛的野生動物儲 庫和來源。在口服餌中用人類TB疫苗牛分枝桿菌卡介苗（BCG)對獾接種疫苗，代表了可能 的疾病控制工具，并且對于傳播到廣地理區(qū)域內(nèi)的獾群體來說保有最好的前景。使用小鼠 和豚鼠模型，我們分別評估了基于在脂質(zhì)基質(zhì)、藻酸鹽球珠或脂類和藻酸鹽兩者的新的微 膠囊雜合體中的BCG制劑的候選獾口服疫苗的免疫原性和保護(hù)效能。在每種制劑中評估了 兩種不同的BCG 口服劑量在豚鼠中的保護(hù)效能，同時在小鼠中評估了單一劑量。在小鼠中， 僅僅在使用脂類基質(zhì)和脂類在藻酸鹽微膠囊制劑時觀察到顯著的免疫應(yīng)答（基于IFN-Y 的淋巴細(xì)胞增殖和表達(dá)），所述制劑對應(yīng)于活的BCG與消化道淋巴結(jié)的分離。在豚鼠中， 在使用牛分枝桿菌進(jìn)行氣溶膠途徑激惹后，只有配制在脂類基質(zhì)中的BCG為脾和肺提供保 護(hù)。使用10(6)_10(7)CFU范圍內(nèi)的遞送劑量時觀察到保護(hù)，盡管這在較高劑量下在脾臟中 更加一致。使用在藻酸鹽球珠或脂類在藻酸鹽微膠囊中給藥的BCG時，在器官CFU方面沒 有觀察到保護(hù)，盡管在后一種制劑中，10(7)在激惹后體重增加和尸檢時更小的肺與體重之 比方面提供保護(hù)。這些結(jié)果突出了基于脂類而不是藻酸鹽的疫苗制劑作為在獾中用于口服 BCG疫苗的適合的遞送介質(zhì)的潛力。（72)
[0213] 使用腸溶聚合物Eudragit L100-55和羧甲基乙基纖維素（CMEC)作為穩(wěn)定劑，配 制了用于口服疫苗遞送的新的聚（dl-乳酸-共-乙醇酸）微粒。為了用作對照，還使用常 規(guī)的PVA表面活性劑生產(chǎn)了微粒。在所有三種情況下，產(chǎn)生的裝載有抗原卵清蛋白（OVA) 的微粒直徑小于5微米，并具有球形圓滑的外觀。表面活性劑在微粒表面處的存在，通過表 面分析技術(shù)XPS和SSMS得到證實。將微粒與胃蛋白酶和胰蛋白酶溶液溫育，導(dǎo)致移除一 部分與所有三種系統(tǒng)結(jié)合的抗原。然而，在三種CMEC穩(wěn)定化的微粒制劑和三種Eudragit 制劑之一中，與PVA穩(wěn)定化的微粒相比，從胃蛋白酶溶液在pH 1. 2下的移除得以保留高百 分率的結(jié)合抗原。此外，使用某些CMEC和Eudragit制劑時，對于結(jié)合的OVA抵抗pH 7.4 下胰蛋白酶的移除也提供了一定程度的保護(hù)。在將微粒在模擬胃液中溫育后，在使用CMEC 穩(wěn)定化的微粒中，與PVA和Eudragit穩(wěn)定化的制劑相比，檢測到完整的抗原性O(shè)VA的更高 百分率。用使用三種表面活性劑中的任一種穩(wěn)定化的裝載有OVA的微粒對小鼠口服免疫接 種，導(dǎo)致誘導(dǎo)了特異性血清IgG和唾液IgA抗體。在用CMEC穩(wěn)定化的微粒免疫接種的小鼠 中，與使用另外兩種制劑的情況相比，測量到明顯更高水平的針對OVA的特異性唾液IgA抗 體。PLG微粒配制中的這種新方法，在提高用于疫苗口服給藥的微顆粒系統(tǒng)的效能中可能具 有潛力。（73)
[0214] 概括來說，與用于人類免疫接種相比，用于口服接種疫苗的策略更通常被用于免 疫動物群體。然而，用于本文中公開的抗原的新的制劑策略，將會允許廣泛使用口服接種疫 苗來預(yù)防嚴(yán)重傳染病，并允許口服免疫療法以支持慢性病毒感染或癌癥的治療。
[0215] 實施例3
[0216] 來自于癌抗原和可以容易地遞送到闌尾的片段的B細(xì)胞應(yīng)答的通用刺激物
[0217] 在Buffalo NY的Roswell Park癌癥中心，已進(jìn)行了大量關(guān)于癌抗原的工作。這 些研究產(chǎn)生了大量針對實體腫瘤的抗原（1-10)。這些抗原在將它們遞送到回腸和闌尾的制 劑（制劑2)中的使用，在本文中被要求在本技術(shù)的范圍之內(nèi)。
[0218] 腫瘤抗原的其他實例，為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。例如，Kozbor研究了 GD2神經(jīng)節(jié) 苷脂，其通過在神經(jīng)外胚層來源的腫瘤上表達(dá)的附連于錨定細(xì)胞膜中的神經(jīng)節(jié)苷脂的神經(jīng) 酰胺鏈的五糖 Neu5Aca 2_8Neu5Aca 2_3(GalNAcP l-4)Gal@ 1-4G1C0 殘基來顯示。⑶2 已 在患有惡性黑素瘤和成神經(jīng)細(xì)胞瘤的患者中被用作被動和主動免疫療法的靶。Kozbor通 過用抗⑶2mAb 14G2a篩選噬菌體展示肽文庫，產(chǎn)生了⑶2的47-LDA模擬表位，并報告了用 47-LDA模擬表位接種疫苗引發(fā)了 GD2交叉反應(yīng)性IgG抗體應(yīng)答以及針對同源成神經(jīng)細(xì)胞瘤 腫瘤細(xì)胞的I類MHC限制性CD8 (+) T細(xì)胞。疫苗誘導(dǎo)的CTL的細(xì)胞毒性活性不依賴于GD2 表達(dá)，表明了與47-LDA交叉反應(yīng)的新的腫瘤相關(guān)抗原的識別。使用14G2a mAb的免疫印跡 研究證實了這種抗體與GD2(+)和GD2(_)成神經(jīng)細(xì)胞瘤和黑素瘤細(xì)胞表達(dá)的105kDa糖蛋 白交叉反應(yīng)。在含有14G2a mAb的三維（3D)膠原蛋白培養(yǎng)物中生長的腫瘤細(xì)胞的功能研 究，顯示出基質(zhì)金屬蛋白酶-2活化的降低，所述活化是由105kDa的活化的白細(xì)胞粘附分子 (ALCAM/⑶166)調(diào)控的過程。已顯示，⑶166糖蛋白被14G2a抗體識別，并且通過RNA干擾 抑制CD 166表達(dá)，在體外和體內(nèi)消除了細(xì)胞對由47-LDA誘導(dǎo)的CD8 (+) T細(xì)胞引起的裂解 的敏感性。這些結(jié)果表明，疫苗誘導(dǎo)的CTL識別由⑶166表達(dá)的47-LDA交叉反應(yīng)性表位， 并揭示了由腫瘤相關(guān)糖抗原的模擬表位誘導(dǎo)強(qiáng)力腫瘤特異性細(xì)胞應(yīng)答的新的機(jī)制。（74)
[0219] Segal等研究了熱休克蛋白（HSP)，其是免疫力的強(qiáng)力誘導(dǎo)物，并且已被利用作為 靶向癌癥和感染的疫苗佐劑。HSP是一組遍在的細(xì)胞內(nèi)分子，其在大量過程例如蛋白質(zhì)折疊 和運(yùn)輸中起到分子伴侶的作用，并且在應(yīng)激條件例如發(fā)熱和輻射下被誘導(dǎo)。某些HSP是先 天和抗原特異性免疫的強(qiáng)力誘導(dǎo)物。它們部分地通過toll樣受體激活樹突狀細(xì)胞，激活自 然殺傷細(xì)胞，增加抗原向效應(yīng)細(xì)胞的呈遞，并增強(qiáng)針對它們的相關(guān)抗原的T-細(xì)胞和體液免 疫應(yīng)答。它們在引發(fā)多宿主防御途徑中的作用正被用于癌癥和傳染病的疫苗開發(fā)中。（75)
[0220] 關(guān)于熱休克蛋白的其他具體細(xì)節(jié)：某些研究證實，某些應(yīng)激蛋白當(dāng)從特定腫瘤純 化時，可以起到針對同一癌癥的強(qiáng)力疫苗的作用。兩種長期認(rèn)識到但尚未核查的應(yīng)激蛋白 熱休克蛋白（HSP) 110和葡萄糖調(diào)控蛋白（grp) 170的最新研究，已顯示它們是有效的肽鏈 結(jié)合蛋白。這一調(diào)查研究了 HSP 110和grp 170的疫苗潛力。首先，已顯示用從甲基膽蒽 誘導(dǎo)的纖維肉瘤純化的HSPllO或grp 170先前接種疫苗，引起腫瘤的完全退化。在第二種 腫瘤模型中，從結(jié)腸26腫瘤純化的HSPllO或grp 170引起這種腫瘤的顯著生長抑制。此 夕卜，當(dāng)在腫瘤移植后施用時，HSPllO或grp 170免疫接種顯著延長了帶有結(jié)腸26腫瘤的小 鼠的生命跨度。在用腫瘤來源的HSPllO或grp 170免疫接種的小鼠中，發(fā)生了腫瘤特異性 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答。此外，使用用來自于腫瘤的這兩種蛋白脈沖的骨髓來源的樹突 狀細(xì)胞治療小鼠，也引發(fā)了強(qiáng)烈的抗腫瘤應(yīng)答。研究顯示，輕度的發(fā)燒樣體溫過高狀況提高 了 HSPllO以及熱休克同源物70的疫苗效率，但是不提高grpl70的疫苗效率。這些研究表 明，HSPllO和grpl70可用于基于HSP的癌癥免疫療法，呈遞抗原的樹突狀細(xì)胞可用于介導(dǎo) 這種治療性方法，并且發(fā)熱水平的體溫過高可以顯著提高HSP的疫苗效率。（76)
[0221] 卵巢癌。睪丸癌（CT)抗原表達(dá)在各種不同癌癥中，但是不表達(dá)在除了睪丸的生 殖細(xì)胞之外的正常成人組織中，因此似乎是用于免疫療法的理想靶點。在研究NY-ES0-1 和LAGE-ICT抗原在上皮性卵巢癌（EOC)中用于免疫療法的潛力的嘗試中，我們通過反轉(zhuǎn) 錄PCR(RT-PCR)和免疫組織化學(xué)（IHC)，在一大組EOC組織和細(xì)胞系中檢查了這些抗原的 表達(dá)。通過ELISA試驗了來自于患者亞組的血清的NY-ES0-1/LAGE-1抗體。數(shù)據(jù)表明，四 種卵巢癌細(xì)胞系對一種或兩種CT抗原呈陽性。在190個樣本中的82個（43% )中，通過 RT-PCR和/或IHC證實了 NY-ES0-1在EOC中的表達(dá)。通過IHC檢測的NY-ES0-1表達(dá)從均 質(zhì)至非均質(zhì)模式不同。LAGE-ImRNA表達(dá)出現(xiàn)在107個腫瘤組織中的22個（21%)中?？?體來說，NY-ES0-1或LAGE-ImRNA表達(dá)出現(xiàn)在107個EOC樣本中的42個（40% )中，并且在 11%的樣本中證實了兩種抗原的共表達(dá)。針對附450-1/1^^^-1的抗體出現(xiàn)在其腫瘤表達(dá) NY-ES0-1或LAGE-I的37位患者中的11位（30% )中。在初始診斷后，可檢測的抗體存在 長達(dá)3年。盡管在NY-ES0-1/LAGE-1抗原表達(dá)與存活之間沒有統(tǒng)計上顯著的關(guān)系，但數(shù)據(jù)顯 示通過IHC/RT-PCR在顯著比例的EOC患者中檢測到NY-ES0-1和LAGE-I的異常表達(dá)。這 些發(fā)現(xiàn)表明，NY-ES0-1和LAGE-I是在EOC中進(jìn)行抗原特異性免疫療法的有吸引力的靶點。 (77)
[0222] 佐劑不一定是蛋白質(zhì)，特別是如果利用本發(fā)明靶向回腸相關(guān)的派伊爾淋巴集結(jié)的 話。
[0223] 實施例4
[0224] 口服疫苗制劑
[0225] 開發(fā)了由淀粉微粒和偶聯(lián)的抗原構(gòu)成的口服疫苗制劑。
[0226] 測量了這樣的微粒被腸粘膜的攝取，并且作者檢查了偶聯(lián)的抗原是否能夠影響攝 取。
[0227] 在這種疫苗的制備中使用了兩種模型抗原：重組霍亂毒素B亞基（rCTB)，其已知 結(jié)合于遍在的GMl-受體，以及人血清白蛋白（HSA)，其尚未了解到具有任何特異性結(jié)合性 質(zhì)。在小鼠的注射有微粒的結(jié)扎腸袢中對攝取進(jìn)行了研究。將腸袢切下，固定在冰冷的95% 乙醇中。將整個樣本固定，暴露于對細(xì)胞骨架、粒子和/或M細(xì)胞染色的熒光標(biāo)記的試劑， 并在共聚焦激光掃描顯微鏡中檢查。觀察到rCTB-和HSA-偶聯(lián)的微粒的攝取的定性差異。 在絨毛和派伊爾淋巴集結(jié)的囊泡兩者中發(fā)現(xiàn)了 rCTB-偶聯(lián)的微粒。HSA-偶聯(lián)的微粒只能在 派伊爾淋巴集結(jié)的囊泡中而不能在絨毛中檢測到。正如使用GM1-ELISA所顯示的，偶聯(lián)到 微粒的rCTB不喪失其結(jié)合GMl-受體的能力，并且rCTB-偶聯(lián)的微粒在絨毛中的攝取最可 能由rCTB與GMl-受體的結(jié)合促進(jìn)。攝取的定性差異對于免疫應(yīng)答的發(fā)生可能是重要的， 因為抗原呈遞期間的細(xì)胞因子和趨化因子微環(huán)境將決定誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答的分化￠4)。這一 工作的實驗發(fā)現(xiàn)使得可以將制劑1用于疫苗的口服GI位點特異性靶向中，這是因為通過所 述位點特異性釋放方法，在實驗制備物中到達(dá)的腸中的位點與在口服接種疫苗的人類應(yīng)用 中能夠到達(dá)的位點相同。
[0228] 實施例5涉及疫苗口服制劑的制造和試驗，所述制劑用于將含有或不含佐劑的抗 原一開始GI位點特異性遞送到回腸，并隨后遞送到闌尾，用于刺激免疫系統(tǒng)的回腸遠(yuǎn)端靶 點和/或闌尾細(xì)胞。
[0229] 靶向遞送：用于遞送到pH 7. 3至7. 6下的回腸和pH 5. 5-6. 2下的闌尾的 疫苗（含有或不含肽融合蛋白的活的減毒細(xì)菌"單核細(xì)胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes) "作為抗原，"L-亮氨酸"作為藥物助劑）
[0230] 活性藥物成分（API):
[0231] 活的高度減毒的細(xì)菌：單核細(xì)胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes)由 Denisco, CHR Hansen, Institu Risell-Lallemand和/或其他高質(zhì)量全球供應(yīng)商提供
[0232] L-亮氨酸（分散性能助劑）_由Ajinomoto和Tyloxapol供應(yīng)，USP(抗傾倒助劑） 由 Sigma Aldrich 供應(yīng)
[0233] 無活性成分（賦形劑）--微晶體纖維素、乳糖、預(yù)明膠化淀粉、二氧化硅、HPMC或 等同的"聚合物"、硬質(zhì)明膠或HPMC膠囊、明膠、植物油和其他填充劑等--從當(dāng)?shù)孛绹?應(yīng)商例如 FMC、Capsugel、Colorcon、Evonik 等購買。
[0234] 中間體制劑/制造過程（在當(dāng)?shù)谻M0,在整個過程中在受控的房間和濕度條件 下）：
[0235] "疫苗干粉（10-100微米）中間體制劑"
[0236]

【權(quán)利要求】
1. 一種口服疫苗制劑，其將抗原遞送到胃腸道的回腸遠(yuǎn)端附近和任選地闌尾附近，所 述制劑包含： (a) 多個核心，每個所述核心包含： (1) 抗原和任選的佐劑； (2) 包封所述抗原的第一腸溶包衣，其在低于以下范圍的pH下基本上不溶：約7. 0至 約7. 6,并且包含選自以下的一種或多種組合物：聚（dl-乳酸-共-乙醇酸）、用PVA(聚乙 烯醇）穩(wěn)定化的殼聚糖（Chi)、脂類、藻酸鹽、羧甲基乙基纖維素（CMEC)、纖維素乙酸偏苯三 酸酯（CAT)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯（HPMCP)、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、顏 色濃縮物、食品級釉料、羥丙基甲基纖維素與乙基纖維素的混合物、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸 酯（PVAP)、纖維素乙酸鄰苯二甲酸酯（CAP)、蟲膠、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、和 在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物；以及任選地 (3) 第二腸溶包衣，其在組成上與所述第一包衣相同或不同，在低于以下范圍的pH下 基本上不溶：約1. 〇至約5. 3,被包封在所述第一包衣內(nèi)，并且包含選自以下的一種或多種 組合物：聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯（PVAP)、纖維素乙酸鄰苯二甲酸酯（CAP)、蟲膠、甲基丙 烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、和在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙 烯酸乙酯的共聚物；并且還任選地包含 (b) 可藥用賦形劑。
2. 權(quán)利要求1的口服疫苗，其中所述抗原是通過GI道進(jìn)入的病毒。
3. 權(quán)利要求1的口服疫苗制劑，其中所述抗原選自： (a) 病毒或源自于病毒的抗原，所述病毒選自腺病毒科（Adenoviridae)、黃病毒科 (Flaviviridae)、痛疫病毒科（Herpesviridae)、嗜肝 DNA 病毒科（Herpadnaviridae)、 正粘病毒科（Orthomyxoviridae)、乳多空病毒科（Papovaviridae)、副粘病毒科 (Paramyxoviridae)、微小核糖核酸病毒科（Picornaviridae)、痕病毒科（Poxviridae)、呼 腸孤病毒科（Reoviridae)、反轉(zhuǎn)錄病毒科（Retroviridae)、彈狀病毒科（Rhabdoviridae) 和披膜病毒科（Togaviridae); (b) 細(xì)胞內(nèi)病原體或寄生蟲或源自于它們的抗原，所述病原體或寄生蟲選自 阿菲波菌屬物種（Afipia spp)、布魯氏菌屬物種（Brucella spp)、類鼻疽伯克霍爾 德菌（Burkholderia pseudomallei)、衣原體（Chlamydia)、伯納特氏立克次氏體 (Coxiella burnetii)、土拉熱弗郎西絲菌（Francisella tularensis)、嗜肺軍團(tuán)菌 (Legionella pneumophila)、單核細(xì)胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes)、 鳥分枝桿菌（Mycobacterium avium)、麻風(fēng)分枝桿菌（Mycobacterium leprae)、結(jié)核分 枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis)、淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae)、立 克次體（Rickettsiae)、傷寒沙門氏菌（Salmonella typhi)、痢疾志賀氏菌（Shigella dysenteriae)、鼠疫耶爾森氏菌（Yersinia pestis)、痕原蟲屬物種（Plasmodium spp)、 小泰累爾氏梨楽蟲（Theileria parva)、剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii)、小球隱孢 子蟲(Cryptosporidium parvum)、利什曼原蟲（Leishmania)、克氏維蟲(Trypanosoma cruzi)和新型隱球菌（Cryptococcus neoformans)、賈第鞭毛蟲（Giardia)、隱抱子蟲 (Cryptosporidia);或 (c) 病媒傳播的抗原包括痕原蟲（Plasmodium)或疏螺旋體（borrelia);或 (d) 腸細(xì)菌或源自于它們的抗原，所述腸細(xì)菌包括霍亂弧菌（cholera)、沙門 氏菌（salmonella)、志賀氏菌（Shigella)、彎曲桿菌（Campylobacter)、鉤端螺旋 體（Leptospirosis)、幽門螺旋桿菌（Helicobacter pylori)、包括大腸埃希式桿菌 (E.Coli) 0157的產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏桿菌（enterotoxigenic e-coli)、包括金黃色葡萄球 菌（staphylococcus aureus)和肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae)的李斯特菌屬 (Listeria)細(xì)菌；以及 (e) 被顯示為在人類患者中具有免疫原性的癌相關(guān)抗原，所述癌相關(guān)抗原更具體來說 選自針對MUC1的0NT-10,以及Oncothyreon的帶有或不帶有伴隨的佐劑PET-脂質(zhì)A的其 他靶向治療性疫苗；膀胱、腦、乳腺、食管、胃腸、肝細(xì)胞、腎、肺、黑素瘤、卵巢、前列腺、肉瘤 和子宮腫瘤的NY-ES0-1抗原，⑶2神經(jīng)節(jié)苷脂，⑶2的47-LDA模擬表位，熱休克蛋白，睪丸 癌（CT)抗原，上皮性卵巢癌（E0C)抗原；宮頸和卵巢、胰腺、肝細(xì)胞、結(jié)腸、乳腺、肺和腦癌抗 原。
4. 權(quán)利要求2的口服疫苗制劑，其中所述抗原是在人類患者中顯示出具有免疫原性的 病毒的組分，所述病毒更具體來說選自腺病毒、單純性皰疹病毒、水痘帶狀皰疹病毒、細(xì)胞 肥大病毒、埃波斯坦-巴爾病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、流感病毒、人類乳頭瘤病 毒、副流感病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒、鼻病毒、痘苗病 毒、天花病毒、輪狀病毒、人類T淋巴細(xì)胞病毒-1、人類免疫缺陷病毒（HIV)、狂犬病病毒、風(fēng) 疹病毒、蟲媒病毒、腸道病毒例如脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯沙奇病毒和諾瓦克病毒。
5. 權(quán)利要求2的口服疫苗制劑，其中所述抗原是減毒活病毒。
6. 權(quán)利要求1-5任一項的口服疫苗制劑，其中所述抗原與佐劑物質(zhì)混合以加強(qiáng)免疫應(yīng) 答。
7. -種口服疫苗制劑，其將抗原遞送到回腸遠(yuǎn)端附近和右結(jié)腸或闌尾附近，所述制劑 包含： (a) 第一核心群，其包含多個核心，每個所述核心包含： (1) 抗原和任選的佐劑； (2) 包封所述抗原的第一腸溶包衣，其在低于以下范圍的pH下基本上不溶：約7. 0至 約7. 6,并且包含選自以下的一種或多種組合物：聚（dl-乳酸）-共-乙醇酸、用PVA(聚乙 烯醇）穩(wěn)定化的殼聚糖（Chi)、脂類、藻酸鹽、羧甲基乙基纖維素（CMEC)、纖維素乙酸偏苯三 酸酯（CAT)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯（HPMCP)、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、顏 色濃縮物、食品級釉料、羥丙基甲基纖維素與乙基纖維素的混合物、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸 酯（PVAP)、纖維素乙酸鄰苯二甲酸酯（CAP)、蟲膠、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、和 在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物；以及任選地 (3) 第二腸溶包衣，其在組成上與所述第一包衣相同或不同，在低于以下范圍的pH下 基本上不溶：約1. 〇至約5. 5,被包封在所述第一包衣內(nèi)，并且包含選自以下的一種或多種 組合物：在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物； (b) 第二核心群，其包含多個核心，每個所述核心包含： (1) 所述抗原和任選地佐劑；以及 (2) 包封所述抗原的腸溶包衣，其在低于以下范圍的pH下基本上不溶：約5. 0至約6. 5 之間，并且選自：蟲膠、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、和在聚合期間已向其添加丙烯 酸甲酯單體的甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物；以及任選地 (C)可藥用賦形劑。
8. 權(quán)利要求7的口服疫苗制劑，其中所述抗原是減毒活病毒。
9. 權(quán)利要求1的口服疫苗制劑，其中將所述抗原與選自糖、游離脂肪酸、多肽、氨基酸 和在消化后產(chǎn)生糖、游離脂肪酸、多肽或氨基酸的組合物的營養(yǎng)物質(zhì)混合，并用所述第一腸 溶包衣包封混合的抗原和營養(yǎng)物質(zhì)。
10. 權(quán)利要求1的口服疫苗制劑，其中所述核心是具有約1納米至約100微米直徑之間 的平均直徑的微粒。
11. 權(quán)利要求10的口服疫苗制劑，其中所述第一核心群和第二核心群的核心是微粒， 所述第一核心群的核心的平均直徑大于所述第二核心群的核心的平均直徑，所述第二核心 群的核心具有約1納米至約99微米直徑之間的平均直徑，并且所述第一核心群的核心具有 約2納米至約100微米之間的平均直徑。
12. 權(quán)利要求11的口服疫苗制劑，其中將所述抗原與選自糖、游離脂肪酸、多肽、氨基 酸和在消化后產(chǎn)生糖、游離脂肪酸、多肽或氨基酸的組合物的營養(yǎng)物質(zhì)混合，并且其中混合 的抗原和營養(yǎng)物質(zhì)用所述第一腸溶包衣包封。
13. 權(quán)利要求1的口服疫苗制劑，其中所述抗原是選自腺病毒科（Adenoviridae)、黃病 毒科（Flaviviridae)、痛疫病毒科（Herpesviridae)、嗜肝DNA病毒科（Herpadnaviridae)、 正粘病毒科（Orthomyxoviridae)、乳多空病毒科（Papovaviridae)、副粘病毒科 (Paramyxoviridae)、微小核糖核酸病毒科（Picornaviridae)、痕病毒科（Poxviridae)、呼 腸孤病毒科（Reoviridae)、反轉(zhuǎn)錄病毒科（Retroviridae)、彈狀病毒科（Rhabdoviridae) 或披膜病毒科（Togaviridae)的病毒。
14. 權(quán)利要求1的口服疫苗制劑，其中所述抗原是選自腺病毒、單純性皰疹病毒、水痘 帶狀皰疹病毒、細(xì)胞肥大病毒、埃波斯坦-巴爾病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、流感 病毒、人類乳頭瘤病毒、副流感病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇 病毒、鼻病毒、痘苗病毒、天花病毒、輪狀病毒、人類T淋巴細(xì)胞病毒-1、人類免疫缺陷病毒 (HIV)、狂犬病病毒、風(fēng)疹病毒、蟲媒病毒、腸道病毒例如脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯沙奇病毒和諾 瓦克病毒的病毒。
15. 權(quán)利要求1的口服疫苗制劑，其中所述抗原是在患者中顯示出具有免疫原性 的細(xì)胞內(nèi)病原體或寄生蟲的組分，并且所述組分選自阿菲波菌屬物種（Afipia spp)、布 魯氏菌屬物種（Brucella spp)、類鼻疽伯克霍爾德菌（Burkholderia pseudomallei)、 衣原體（Chlamydia)、伯納特氏立克次氏體（Coxiella burnetii)、土拉熱弗郎西絲菌 (Francisella tularensis)、嗜肺軍團(tuán)菌（Legionella pneumophila)、單核細(xì)胞增多性李 斯特菌（Listeria monocytogenes)、鳥分枝桿菌（Mycobacterium avium)、麻風(fēng)分枝桿菌 (Mycobacterium leprae)、結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis)、淋病奈瑟氏菌 (Neisseria gonorrhoeae)、立克次體（Rickettsiae)、傷寒沙門氏菌（Salmonella typhi)、 痢疾志賀氏菌（Shigella dysenteriae)、鼠疫耶爾森氏菌（Yersinia pestis)、痕原蟲屬 物種（Plasmodium spp)、小泰累爾氏梨楽蟲（Theileria parva)、剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii)、小球隱孢子蟲（Cryptosporidium parvum)、利什曼原蟲（Leishmania)、克氏錐蟲 (Trypanosoma cruzi)和新型隱球菌（Cryptococcus neoformans)、賈第鞭毛蟲（Giardia) 和隱孢子蟲（Cryptosporidia)。
16. 權(quán)利要求1的口服疫苗制劑，其中所述抗原是病媒傳播的抗原。
17. 權(quán)利要求16的口服疫苗制劑，其中所述病媒傳播的抗原是瘧原蟲（Plasmodium)或 疏螺旋體（borrelia)。
18. 權(quán)利要求1的口服疫苗制劑，其中所述抗原是腸細(xì)菌的抗原，所述腸細(xì)菌 選自霍亂弧菌（cholera)、沙門氏菌（salmonella)、志賀氏菌（Shigella)、彎曲桿菌 (Campylobacter)、鉤端螺旋體（Leptospirosis)、幽門螺旋桿菌（Helicobacter pylori)、 包括大腸埃希式桿菌（E.Coli)0157的產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏桿菌（enterotoxigenic e-coli)、以及李斯特菌屬（Listeria)細(xì)菌：金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus)和 月市炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae)。
19. 權(quán)利要求1的口服疫苗制劑，其中所述抗原是癌相關(guān)抗原，所述癌相關(guān)抗原選自膀 胱、腦、乳腺、食管、胃腸、肝細(xì)胞、腎、肺、黑素瘤、卵巢、前列腺、肉瘤和子宮腫瘤的NY-ES0-1 抗原，GD2神經(jīng)節(jié)苷脂，GD2的47-LDA模擬表位，熱休克蛋白，睪丸癌（CT)抗原，上皮性卵巢 癌（E0C)抗原和宮頸、卵巢、胰腺、肝細(xì)胞、結(jié)腸、乳腺、肺和腦癌抗原。
20. 權(quán)利要求7的口服疫苗制劑，其中所述抗原是選自腺病毒科（Adenoviridae)、黃病 毒科（Flaviviridae)、瘤疫病毒科（Herpesviridae)、嗜肝DNA病毒科（Herpadnaviridae)、 正粘病毒科（Orthomyxoviridae)、乳多空病毒科（Papovaviridae)、副粘病毒科 (Paramyxoviridae)、微小核糖核酸病毒科（Picornaviridae)、痕病毒科（Poxviridae)、呼 腸孤病毒科（Reoviridae)、反轉(zhuǎn)錄病毒科（Retroviridae)、彈狀病毒科（Rhabdoviridae) 和披膜病毒科（Togaviridae)的病毒。
21. 權(quán)利要求7的口服疫苗制劑，其中所述抗原是選自腺病毒、單純性皰疹病毒、水痘 帶狀皰疹病毒、細(xì)胞肥大病毒、埃波斯坦-巴爾病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、流感 病毒、人類乳頭瘤病毒、副流感病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇 病毒、鼻病毒、痘苗病毒、天花病毒、輪狀病毒、人類T淋巴細(xì)胞病毒-1、人類免疫缺陷病毒 (HIV)、狂犬病病毒、風(fēng)疹病毒、蟲媒病毒、腸道病毒例如脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯沙奇病毒和諾 瓦克病毒的病毒。
22. 權(quán)利要求7的口服疫苗制劑，其中所述抗原是細(xì)胞內(nèi)病原體或寄生蟲，其選 自阿菲波菌屬物種（Afipia spp)、布魯氏菌屬物種（Brucella spp)、類鼻疽伯克霍 爾德菌（Burkholderia pseudomallei)、衣原體（Chlamydia)、伯納特氏立克次氏體 (Coxiella burnetii)、土拉熱弗郎西絲菌（Francisella tularensis)、嗜肺軍團(tuán)菌 (Legionella pneumophila)、單核細(xì)胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes)、 鳥分枝桿菌（Mycobacterium avium)、麻風(fēng)分枝桿菌（Mycobacterium leprae)、結(jié)核分 枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis)、淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae)、立 克次體（Rickettsiae)、傷寒沙門氏菌（Salmonella typhi)、痢疾志賀氏菌（Shigella dysenteriae)、鼠疫耶爾森氏菌（Yersinia pestis)、癥原蟲屬物種（Plasmodium spp)、 小泰累爾氏梨菜蟲（Theileria parva)、剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii)、小球隱孢 子蟲（Cryptosporidium parvum)、利什曼原蟲（Leishmania)、克氏維蟲（Trypanosoma cruzi)和新型隱球菌（Cryptococcus neoformans)、賈第鞭毛蟲（Giardia)和隱抱子蟲 (Cryptosporidia)〇
23. 權(quán)利要求7的口服疫苗制劑，其中所述抗原是病媒傳播的抗原包括瘧原蟲 (Plasmodium)或疏螺旋體（borrelia)。
24. 權(quán)利要求7的口服疫苗制劑，其中所述抗原是腸細(xì)菌的抗原，所述腸細(xì)菌 包括霍亂弧菌（cholera)、沙門氏菌（salmonella)、志賀氏菌（Shigella)、彎曲桿菌 (Campylobacter)、鉤端螺旋體（Leptospirosis)、幽門螺旋桿菌（Helicobacter pylori)、 包括大腸埃希式桿菌（E.Coli)0157的產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏桿菌（enterotoxigenic e-col i)、以及包括金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus)和肺炎鏈球菌 (Streptococcus pneumoniae)的李斯特菌屬（Listeria)細(xì)菌。
25. 權(quán)利要求7的口服疫苗制劑，其中所述抗原是癌相關(guān)抗原，所述癌相關(guān)抗原選自 膀胱、腦、乳腺、食管、胃腸、肝細(xì)胞、腎、肺、黑素瘤、宮頸、卵巢、前列腺、肉瘤和子宮腫瘤的 NY-ES0-1抗原，⑶2神經(jīng)節(jié)苷脂，⑶2的47-LDA模擬表位，熱休克蛋白，睪丸癌（CT)抗原， 上皮性卵巢癌（E0C)抗原和卵巢、胰腺、肝細(xì)胞、結(jié)腸、乳腺、肺和腦癌抗原。
26. -種治療或預(yù)防病毒性障礙的發(fā)生的方法，所述方法包括向需要的受試者給藥藥 用有效量的權(quán)利要求1-25任一項的口服疫苗制劑。
27. -種治療或預(yù)防與病媒傳播的抗原相關(guān)的障礙的發(fā)生的方法，所述方法包括向需 要的受試者給藥藥用有效量的權(quán)利要求16或23的口服疫苗制劑。
28. -種治療或預(yù)防與細(xì)胞內(nèi)病原體或寄生蟲相關(guān)的障礙的發(fā)生的方法，所述方法包 括向需要的受試者給藥藥用有效量的權(quán)利要求3、15或22的口服疫苗制劑。
29. -種治療或預(yù)防細(xì)菌性障礙的發(fā)生的方法，所述方法包括向需要的受試者給藥藥 用有效量的權(quán)利要求3、18或24的口服疫苗制劑。
30. -種治療癌癥的方法，所述方法包括向需要的受試者給藥藥用有效量的權(quán)利要求 3、19或25的口服疫苗制劑。
31. -種口服疫苗制劑，其將抗原遞送到回腸遠(yuǎn)端附近和右結(jié)腸或闌尾附近，所述制劑 包含： (a)多個核心，每個所述核心包含： (1)抗原和任選的佐劑； ⑵第一包衣層，其⑴是腸溶的，（ii)包封所述抗原和任選的佐劑，（iii)在低于以 下范圍的pH下基本上不溶：約1.0至約5.0,并且（iv)包含選自以下的一種或多種組合 物：蟲膠、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、和在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯單體的 甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物； (3) 任選的第二包衣層，其包封第一腸溶包衣層，并且包含選自糖、游離脂肪酸、多肽、 氨基酸和在消化后產(chǎn)生糖、游離脂肪酸、多肽或氨基酸的組合物的營養(yǎng)物質(zhì)；以及 (4) 第三包衣層，其（i)是腸溶的，（ii)包封所述第二包衣層，（iii)在低于以下范 圍的pH下基本上不溶：約7. 0至約7. 6,并且（iv)包含選自以下的一種或多種組合物： 聚（dl-乳酸-共-乙醇酸）、用PVA(聚乙烯醇）穩(wěn)定化的殼聚糖（Chi)、脂類、藻酸鹽、羧 甲基乙基纖維素（CMEC)、纖維素乙酸偏苯三酸酯（CAT)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯 (HPMCP)、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、顏色濃縮物、食品級釉料、羥丙基甲基纖維素與 乙基纖維素的混合物、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯（PVAP)、纖維素乙酸鄰苯二甲酸酯（CAP)、 蟲膠、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物、和在聚合期間已向其添加丙烯酸甲酯單體的甲 基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物；并且還任選地包含 (b)可藥用賦形劑。
32. -種治療或預(yù)防病毒性障礙的發(fā)生的方法，所述方法包括向需要的受試者給藥藥 用有效量的權(quán)利要求31的口服疫苗制劑。
33. -種治療或預(yù)防與病媒傳播的抗原相關(guān)的障礙的發(fā)生的方法，所述方法包括向需 要的受試者給藥藥用有效量的權(quán)利要求31的口服疫苗制劑，其中所述抗原是病媒傳播的 抗原。
34. 權(quán)利要求33的方法，其中所述病媒傳播的抗原是瘧原蟲（Plasmodium)或疏螺旋體 (borrelia)〇
35. -種治療或預(yù)防與細(xì)胞內(nèi)病原體或寄生蟲相關(guān)的障礙的發(fā)生的方法，所述方 法包括向需要的受試者給藥藥用有效量的權(quán)利要求31的口服疫苗制劑，其中所述抗原 是細(xì)胞內(nèi)病原體或寄生蟲，所述病原體或寄生蟲選自阿菲波菌屬物種（Afipia spp)、布 魯氏菌屬物種（Brucella spp)、類鼻疽伯克霍爾德菌（Burkholderia pseudomallei)、 衣原體（Chlamydia)、伯納特氏立克次氏體（Coxiella burnetii)、土拉熱弗郎西絲菌 (Francisella tularensis)、嗜肺軍團(tuán)菌（Legionella pneumophila)、單核細(xì)胞增多性李 斯特菌（Listeria monocytogenes)、鳥分枝桿菌（Mycobacterium avium)、麻風(fēng)分枝桿菌 (Mycobacterium leprae)、結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis)、淋病奈瑟氏菌 (Neisseria gonorrhoeae)、立克次體（Rickettsiae)、傷寒沙門氏菌（Salmonella typhi)、 痢疾志賀氏菌（Shigella dysenteriae)、鼠疫耶爾森氏菌（Yersinia pestis)、痕原蟲屬 物種（Plasmodium spp)、小泰累爾氏梨楽蟲（Theileria parva)、剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii)、小球隱孢子蟲（Cryptosporidium parvum)、利什曼原蟲（Leishmania)、克氏錐蟲 (Trypanosoma cruzi)和新型隱球菌（Cryptococcus neoformans)、賈第鞭毛蟲（Giardia) 和隱孢子蟲（Cryptosporidia)。
36. -種治療或預(yù)防細(xì)菌性障礙的發(fā)生的方法，所述方法包括向需要的受試者給藥 藥用有效量的權(quán)利要求31的口服疫苗制劑，其中所述抗原是選自霍亂弧菌（cholera)、 沙門氏菌（salmonella)、志賀氏菌（Shigella)、彎曲桿菌（Campylobacter)、鉤端螺 旋體（Leptospirosis)、幽門螺旋桿菌（Helicobacter pylori)、包括大腸埃希式桿 菌（E.Coli)0157的產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏桿菌（enterotoxigenic e-coli)、李斯特菌 (Listeria)、金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus)和肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae)的細(xì)菌。
37. -種治療癌癥的方法，所述方法包括向需要的受試者給藥藥用有效量的權(quán)利要求 31的口服疫苗制劑，其中所述抗原是癌相關(guān)抗原，所述癌相關(guān)抗原選自膀胱、腦、乳腺、食 管、胃腸、肝細(xì)胞、腎、肺、黑素瘤、卵巢、前列腺、肉瘤和子宮腫瘤的NY-ES0-1抗原，GD2神經(jīng) 節(jié)苷脂，GD2的47-LDA模擬表位，熱休克蛋白，睪丸癌（CT)抗原，上皮性卵巢癌（E0C)抗原 和宮頸、卵巢、胰腺、肝細(xì)胞、結(jié)腸、乳腺、肺和腦癌抗原。
38. -種在受試者中引發(fā)針對病毒抗原的免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括向所述受試 者給藥權(quán)利要求4、13、14、20或21的口服疫苗制劑。
39. -種在受試者中引發(fā)針對細(xì)胞內(nèi)病原體或寄生蟲抗原的免疫應(yīng)答的方法，所述方 法包括向所述受試者給藥權(quán)利要求15或22的口服疫苗制劑。
40. -種在受試者中引發(fā)針對病媒傳播的抗原的免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括向所 述受試者給藥權(quán)利要求16、17或23的口服疫苗制劑。
41. 一種在受試者中引發(fā)針對腸道細(xì)菌的抗原的免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括向所 述受試者給藥權(quán)利要求18或24的口服疫苗制劑。
42. -種在受試者中引發(fā)針對癌相關(guān)抗原的免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括向所述受 試者給藥權(quán)利要求19或25的口服疫苗制劑。
【文檔編號】A61K39/12GK104302278SQ201380025444
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2013年3月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月29日
【發(fā)明者】杰羅姆·J·申塔基, 莫漢·卡巴迪 申請人:塞拉拜姆有限責(zé)任公司