優(yōu)化的皮下治療藥劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種用于皮下給藥的方法和劑型，將所述治療藥劑改性，相對于所述治療藥劑的原始形態(tài)，以增加親水性以及改變分子尺寸，其中，其Cmax:Caverage的比例低于靜脈遞送該藥劑的Cmax:Caverage的比例。
【專利說明】優(yōu)化的皮下治療藥劑
[0001] 本發(fā)明涉及一種皮下遞送的治療藥劑（therapeuticagents)，以及對這些藥劑的 改性，以使它們適合皮下遞送。
[0002] 許多疏水（親油）分子被用在治療感染、疾病和失調(diào)（disorders)中。親油分子 通常是直接給藥到病人的血液中，以確?？焖俚倪f送到感染、疾病等的部位。然而，這類分 子的半衰期和/或生物利用度可能不是最優(yōu)化的。靜脈內(nèi)給藥的缺點包括局部和全身反應(yīng) 使得需要遞送相對大量的藥劑到患者以及靜脈內(nèi)給藥并不方便。
[0003] 本發(fā)明的發(fā)明人意外的發(fā)現(xiàn)，改性治療藥劑來增加該藥劑的親水性和分子尺寸， 將得到不能直接進入血管系統(tǒng)的這樣的藥劑。然而，該改性藥劑由于其具有由含水淋巴系 統(tǒng)（aqueouslymphaticsystem)進入患者的循環(huán)系統(tǒng)的能力仍然為生物可利用的。選擇改 性是為了減少所述治療藥劑與結(jié)締組織的表面粘附作用，并增加其在組織液中的溶解度。 本發(fā)明的改性治療藥劑在被遞送到皮下空間時便特別地有效，因為它們太大以至于難以直 接從皮下空間進入血管系統(tǒng)，因而通過淋巴系統(tǒng)在周身輸送，通過胸導(dǎo)管（thoracicduct) (右淋巴管和鎖骨下靜脈）進入循環(huán)系統(tǒng)。這樣便意外地使得所述藥劑可預(yù)測地、穩(wěn)定地輸 注入患者體內(nèi)的循環(huán)系統(tǒng)。因此，本發(fā)明涉及的是改性藥劑的皮下遞送，以使得該改性藥劑 的效果即壽命、輸注速率（infusionrate)和清除速率以及由此而得的持續(xù)效果可以更好 地被預(yù)測。這些的實現(xiàn)是通過使所述藥劑更為親水，并改變分子尺寸使得在皮下遞送到患 者時，所述改性藥劑不能穿過血管壁進入血流，但卻可通過組織液輸送入淋巴系統(tǒng)。這將獲 得一種從淋巴系統(tǒng)到血管系統(tǒng)的可控的、可預(yù)測的釋放。它消除了對遞送位點周圍的血管 形成水平進行考慮的需求，如下所討論的。
[0004] 本發(fā)明可應(yīng)用于多肽、生物分子，包括所有的血液因子、激素、抗生素、單克隆抗 體和一些小分子。任何合適的改性都可以使用只要不會干擾該分子的治療效果即可，并 且通過增加親水性以及改變它的分子尺寸（可包括改變藥劑的分子量或者物理尺寸），以 此確保它不能在沒有首先通過胸導(dǎo)管處的淋巴系統(tǒng)進入鎖骨下的靜脈下而直接進入血管 (vasculature)。所選擇的改性可以具有調(diào)節(jié)該藥劑在體內(nèi)清除（通過排泄、消化、免疫攻 擊或者其他方法）的伴隨效果，從而該藥劑的輸注速率和清除速率將"平衡"至一個最佳治 療效果。
[0005]合適的改性的例子包括將所述藥劑與聚合物的綴合，合適的生物相容 性聚合物，例如，聚乙二醇（PEG)、聚磷脂酰膽堿（poly-phosphatidylcholine) (PC)、聚丙二醇（PPG)、乙二醇和丙二醇的共聚物、聚環(huán)氧乙烷（ΡΕ0)、聚氧乙烯多元 醇（polyoxyethylatedpolyol)、聚烯醇（polyolefinicalcohol)、聚輕燒基甲基丙 烯酸酯（polyhydroxyalkylmethacrylate)、多糖、聚α-輕基酸、聚乙烯醇、聚磷腈 (polyphosphosphasphazene)、聚N-丙烯酰嗎啉、聚烯經(jīng)氧化物聚合物（polyalkyene oxidepolymers)、聚馬來酸、聚DL-丙氨酸、羧甲基纖維素、右旋糖酐、淀粉或淀粉衍生 物、透明質(zhì)酸、甲殼素、聚甲基丙烯酸酯、聚唾液酸（PSA)、聚輕基鏈燒酸酯（polyhydroxy alkanoates)、聚氨基酸以及它們的組合。所述生物相容性聚合物可以具有線性或分支狀結(jié) 構(gòu)。
[0006] 所述生物相容性聚合物的其他例子為蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)選自但不限于：由 白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、免疫球蛋白包括單克隆抗體、抗體片段如單域抗體（single-domain antibodies)、Vl、Vh、Fab、F(ab'）2、Fab'、Fab3、scFv、di_scFv、sdAb、Fe以及它們的組合 組成的組中。
[0007] 改性所述治療藥劑的其他方法可以是通過使用融合蛋白（fusionproteins);進 入囊泡遞送載體，例如脂質(zhì)體、傳遞體（transfersomes)或者微膠粒（micelles);進入/附 著于樹枝狀大分子；形成所述藥劑的低聚體復(fù)合物。所選擇的改性可以具有調(diào)節(jié)體內(nèi)該藥 劑在體內(nèi)清除（通過排泄、消化、免疫攻擊或者其他方法）的伴隨效果，從而該藥劑的輸注 速率和清除速率將"平衡"至一個最佳治療效果。
[0008] 所述改性藥劑一旦被遞送到皮下空間，便能夠通過淋巴系統(tǒng)進入鎖骨下靜脈輸注 入血管系統(tǒng)中，然后這樣的改性也控制了從體內(nèi)對該藥劑的清除通過的方式為可以以一定 方式平衡和控制從皮下空間進入循環(huán)的輸注速率與體內(nèi)的藥物產(chǎn)品的清除速率的比例從 而優(yōu)化所述改性藥劑的治療效率和效力。
[0009] 可以通過這樣的方式改性以用于皮下遞送的所述治療藥劑的例子包括凝血因子 (bloodcoagulationfactors)。凝血級聯(lián)涉及多個不同的蛋白質(zhì)進而從多個方面去作用 于彼此激活和促進血塊的形成和維持健康的止血。在一些實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的用于 改性凝血因子選自因子VII、因子Vila、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子 Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子（vonWillebrand'sFactor)和蛋白C組成的 組中。在一些實施方式中，所述凝血因子更適于為因子VII、因子VIII或者因子IX。
[0010] 本發(fā)明涉及的所述治療藥劑的例子包括，凝血因子VII(本文中稱為FVII)， FVII為53000道爾頓（Da),糖基化的（glycosylated)、維生素K依賴性的（VitaminK dependent)、單鏈酶原、含有 12 個天然的二硫鍵（0'Haraetal·，Proc.Nat'IAcad.Sci. USA, 84:5158-5162(1987))。該蛋白主要在肝中產(chǎn)生。FVII參與了外在的凝血級聯(lián)（圖 1)。該蛋白形成有四個離散的結(jié)構(gòu)域：一個N-端的Y-羧基谷氨酸（Gla)結(jié)構(gòu)域、兩個表 皮生長因子樣（EGF)結(jié)構(gòu)域和一個C-端絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域。在不存在它的輔因子組織 因子（TF)(可在血管內(nèi)皮下膜發(fā)現(xiàn)）時循環(huán)酶原顯示出非常小的蛋白酶活性。隨著血管受 到損傷，F(xiàn)VII以高親和力結(jié)合TF從而通過特異性裂解精氨酸152和異亮氨酸153之間的 肽鍵以轉(zhuǎn)換為活躍的、雙鏈酶FVIIa。FVIIa的輕鏈由所述N-端Gla和EGF-樣結(jié)構(gòu)域組成 并且其重鏈由絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域組成。所述重鏈和輕鏈則通過半胱氨酸135和半胱氨酸 262之間的單一的二硫鍵緊密相連。一旦被激活，F(xiàn)VIIa迅速催化FX轉(zhuǎn)換為FXa以及FIX 轉(zhuǎn)換為FIXa。然后FXa與FVa形成復(fù)合體的裂解凝血酶原（prothrombin),以產(chǎn)生少量的 凝血酶（Aitken，M.G.EMA, 16:446-455(2004))。該凝血酶生成激活了血小板和血小板表 面的輔因子V、VIII以及XI。該激活導(dǎo)致凝血酶大量形成，并引起纖維蛋白聚合和止血栓 (haemostaticplug)的形成。
[0011] 人類重組FVIIa已經(jīng)開發(fā)并被NovoNordisk商業(yè)化為NuvoSeven'(ePtacog alfa[激活的]，ATC碼B02BD08)。NovoSeven*獲得了治療已經(jīng)分別引發(fā)有對抗FVIII 或者IX的抑制性抗體的血友病A患者或者血友病B患者中的出血事件的許可（Jurlander etal.,SeminarsinThrombosisandHemostasis, 27:373-383 (2001)；Robertset al·，Blood, 15:3858-3864(2004))。從1996年推出后其治療就已經(jīng)證實為安全和有效 的。然而，由于該蛋白質(zhì)的體內(nèi)半衰期比較短（2. 3小時；許可的isiovoSeven1"+摘要概述(SummaryBasisforApprovalNmOSewnFDA編號 96-0597)，在單個出血事件的時 間內(nèi)需要多次輸注高劑量的該產(chǎn)品（90μg^kg4)以實現(xiàn)止血。該產(chǎn)品的短半衰期，以及為 了獲得所期望的治療效果所需的高劑量將排除NovoSeven?在帶有抑制物的血友病患者 的預(yù)防性治療的普通應(yīng)用中。明顯地，所以有必要開發(fā)具有增長的半衰期的FVIIa分子，并 在藥代動力學(xué)（PK)和藥效學(xué)（PD)中有所改進。
[0012] 因子VIII(FVIII)是一種重要的凝血因子也是熟知的抗血友病因子（AHF)。人類 中，因子VIII是由F8基因編碼。這個基因的缺乏導(dǎo)致血友病A，一種眾所周知隱性X-連鎖 凝血功能障礙，在5000個男性中大約有1個受影響。
[0013]X連鎖的F8基因通過26個外顯子編碼著2351個氨基酸的多肽并在 信號肽裂解后轉(zhuǎn)換為2332個氨基酸的成熟的FVIII分子（Wangetal.Int. J.Pharmaceutics, 259:1-15(2003))。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可通過血管、腎小球和腎小管內(nèi)皮細胞 (tubularendothelium)合成FVIII并釋放到血流中，以及肝臟的肝竇細胞（sinusoidal cells)(盡管對此并不十分明確）是人類的主要釋放位點。所述FVIII分子形成有六 個蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域；NH2-AI-A2-B-A3-CI-C2-C00H。其成熟的分子含有一些翻譯后修飾 (post-translationalmodification)，包括N-連接和〇-連接的糖基化、磺化和二硫鍵 的形式。FVIII含有共計23個半胱氨酸殘基，其中有16個在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域A和C中形 成 8 個二硫鍵（McMullenetal.ProteinScience, 4:740-746(1995))。由于該蛋白質(zhì)具 有翻譯后修飾，基于糖基化的程度和類型，它的循環(huán)分子量可高達330KDa。FVIII也要進 行蛋白水解處理以使其循環(huán)的種類成為由重鏈（A1-A2-B)和輕鏈（A3-C1-C2)組成的異 源二聚體。當(dāng)FVIII被分泌到循環(huán)系統(tǒng)中時，它便以非共價的方式與馮維勒布蘭德因子 (vWF)結(jié)合。兩個分子的結(jié)合涉及FVIII的輕鏈的結(jié)構(gòu)域A3和C2 (Lacroix-Desmazeset al.Blood, 112:240-249(2008))。與vWF結(jié)合將增加FVIII的穩(wěn)定性和循環(huán)的半衰期。雖 然結(jié)合vWF增加了FVIII的循環(huán)的半衰期，但是它的天然半衰期為15-19小時。
[0014]因子VIII是一種參與內(nèi)在的凝血通道（intrinsicbloodcoagulationpathway) 的重要的輔因子。它在凝血級聯(lián)中的作用是充當(dāng)"成核模板"（nucleationtemplate) 以在激活的血小板表面上組織Fxase復(fù)合體的組件形成正確的空間定向（Shenet al.Blood, 111:1240-1247(2008))。FVIII最初是被凝血酶（因子IIa)或FXa所激活，然 后從vWF以FVIIIa的形式游離。然后FVIIIa在血管損傷的部位結(jié)合激活的血小板，并且 通過A2和A3介導(dǎo)的相互作用（mediatedinteraction)結(jié)合FIXa。在血小板的表面上在 Ca2+存在下FIXa與FVIII的結(jié)合將增加FIXa的蛋白水解活性至大約200000倍。其復(fù)合 體再激活FX轉(zhuǎn)換為FXa。而后因子Xa，與它的輔因子Va-起，激活更多的凝血酶。凝血酶 依次裂解纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，然后聚合和交聯(lián)（使用因子XIII)轉(zhuǎn)化為纖維蛋白 血塊。
[0015] 不再受vWF的保護時，被激活的FVIII是在過程中通過蛋白水解而失活（最顯著 地由活化的蛋白質(zhì)C和因子IXa)并且迅速從血流清除。
[0016] 因子IX(又稱為克雷司馬斯因子（Christmasfactor)為凝血系統(tǒng)的絲氨酸蛋白 酶，并且該蛋白質(zhì)的缺陷將導(dǎo)致血友病B。因子IX是作為非活性的酶原前體而產(chǎn)生的，隨 后經(jīng)過處理以去除信號肽，接著進一步糖基化而后通過因子XIa或者因子Vila裂解，以產(chǎn) 生由二硫鍵連接的雙鏈的形式（ScipioetalJClinInvest. 1978 ;61 (6) :1528 - 1538)。 一旦被激活為因子IXa并在Ca2+、膜磷脂以及因子VIII輔因子的存在下，它將水解因子X中 的精氨酸-異亮氨酸鍵以形成因子Xa。因子IX通過抗凝血酶抑制。
[0017] 血友病B是一種X-連鎖的出血性疾?。╔-linkedbleedingdisorder)，是由凝血 因子IX基因過多的突變引起，并致使缺乏有效的促凝蛋白質(zhì)。血友病B又是熟知的克雷司 馬斯?。–hristmasdisease),是由非功能性的或者缺乏FIX(防止固有級聯(lián)的正常啟動） 引起的后果。嚴重和潛在的威脅生命的出血事件可以通過及時給藥足夠量的FIX以得到改 善。只要循環(huán)酶原是在治療的范圍內(nèi)則止血即可維持。
[0018] 有史以來，通過靜脈遞送血漿FIX或者凝血酶原復(fù)合體濃縮物，以及最近通過高 純化的血漿和重組FIX來治療血友病B。來自于中國倉鼠的卵巢細胞（CH0細胞）的重組人 類FIX的出現(xiàn)改變了克雷司馬斯病的治療使得預(yù)防性治療成為可能特別是在小孩子中。然 而該方式的限制因素為短半衰期和潛在的"超級效力"限制預(yù)防性治療至大約3天的間隔。
[0019] 醫(yī)師在尋求治療患者的血液凝固和其他病癥所面臨的問題為如何實現(xiàn)治療藥劑 的長期治療劑量，例如給予這類患者凝血因子組合物。另一個問題，尤其是這類藥劑的預(yù)防 性應(yīng)用是保持可預(yù)測的、穩(wěn)態(tài)水平的輸注，以及體內(nèi)治療藥劑的分布和清除，這樣就避免了 藥劑水平及其效果出現(xiàn)鋸齒形"爆發(fā)"或者"波峰"。
[0020] 例如，凝血的調(diào)節(jié)是一個會存在多種主導(dǎo)性的健康問題的過程，包括未能形成血 塊和血栓，形成不需要的血塊。防止不需要的血塊的藥劑被用在許多情況中并且可以得 到多種藥劑。遺憾的是，現(xiàn)在大多治療方法具有不良的副作用。口服的抗凝血劑如華法林 (Warfarin)通過抑制肝臟中維生素K的作用，從而防止維生素K依賴性蛋白質(zhì)中谷氨酸殘 基的完全羧基化，導(dǎo)致循環(huán)系統(tǒng)中的活性蛋白濃度下降并降低了形成血塊的能力。華法林 治療較為復(fù)雜在于該藥物與它的靶標的競爭性。飲食維生素K的波動可能導(dǎo)致過多劑量或 過低劑量的華法林。凝結(jié)能力的波動是這種治療的不良效果。
[0021] 注入的物質(zhì)如肝素，包括低分子量的肝素，也常用的抗凝血劑。再次，這些化合物 需要過量給藥并且必須仔細監(jiān)測。
[0022] 另一種限制治療性多肽的使用的現(xiàn)象為一些多肽顯示出的相對短的體內(nèi)半衰期。 總的來說，短體內(nèi)半衰期的問題意味著治療性糖肽類必須頻繁地且高劑量地給藥，這最終 將轉(zhuǎn)換為更高風(fēng)險的局部不良反應(yīng)和更高的醫(yī)療費用，與假設(shè)存在的又可能必要的維持治 療糖蛋白的治療有效水平更長的更有效的方法相比。
[0023] 確保治療藥劑通過淋巴系統(tǒng)遞送的能力提供了該藥劑的可控輸注。增加的親水性 將避免該分子被降解酶、免疫系統(tǒng)等損壞。此外，在水中增加的移動性使得所述治療藥劑生 物相容性更好，因此獲得更低的劑量需求。這反過來又可以獲得更少的副作用、更有效的治 療和在醫(yī)師的照顧中花費的時間減少。
[0024] 本發(fā)明的發(fā)明人出人意料的展示了當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的改性和遞送至皮下空間時可 以系統(tǒng)地獲得一種更持續(xù)'穩(wěn)態(tài)'（steadystate)水平的治療藥劑。該'穩(wěn)態(tài)'的增加持續(xù) 性可以歸因于通過淋巴系統(tǒng)進入血管系統(tǒng)速率（即輸注）（平衡了代謝速率和/或免疫系 統(tǒng)的降解速率）與通過腎臟或胃腸道（GItract)清除速率的結(jié)合。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明的改性藥劑的皮下遞送，因此，可以在減輕了反復(fù)團注（bolus injection)遞送時使得"鋸齒"波峰和波谷常見。然而，皮下遞送可以給藥大劑量使得Cmax 為與靜脈注射所達到的相同，在這種情況下，由于通過淋巴系統(tǒng)進入血管系統(tǒng)中輸注速率 減慢，將會獲得改性藥劑的持續(xù)更長的治療效果。因此，本發(fā)明可以得到低頻率給藥的結(jié) 果?；蛘撸?dāng)根據(jù)本發(fā)明采用皮下遞送時，可以采用相同的給藥頻率但更低的劑量，以替代 靜脈遞送。
[0026] 換句話說，在給定的持續(xù)時間內(nèi)（如4天）改性藥劑的皮下給藥劑量的Cmax:Ca_age 比例低于靜脈注射同樣劑量時的。這明顯是一個優(yōu)勢，因為改性藥劑在血液中水平更為一 致的。
[0027] 如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解得，低Cmax可能有利于患者，即Cmax:CavOTage;或者Cmax:Cmin 的比例更低（即相比于靜脈注射藥物的典型的"鋸齒"圖時波峰和波谷的曲線變平）。
[0028] 因子Vila，例如，說明了這個問題并且其改性也顯示出本發(fā)明的技術(shù)方案。人類 中的因子VII和Vila具有的循環(huán)的半衰期大約為2-4小時。也就是說，在2-4小時之內(nèi)， 血清中的肽濃度被減少一半。當(dāng)使用因子Vila作為促凝血劑（procoagulant)去治療某種 血友病時，標準的規(guī)程為每兩個小時注射Vila并以高劑量注入（45-90μg/kg體重，參見， Hedneretal·，Transfus.Med.Rev. 7:78-83 (1993))。因此，使用這些蛋白質(zhì)作為促凝血劑 或者抗凝血劑（如因子VII的這種情況）要求所述蛋白質(zhì)在頻繁的間隔內(nèi)給藥并且以高劑 量給藥。
[0029] 生化藥物與生物相容性聚合物綴合目前已經(jīng)成功地用于提高這樣的治療產(chǎn)品 的物理化學(xué)特性。通過綴合進行改良的蛋白質(zhì)的特性包括PK、ro和免疫原性。將化 學(xué)基團附著于蛋白質(zhì)可以顯著地提高其循環(huán)半衰期（Jevsevaretal. ,Biotechnol. J.，5:113-128 (2010))。對于分子量低于腎小球濾過限制的分子種類大分子量部分的綴合 可以防止產(chǎn)品的腎清除率。并且，化學(xué)基團添加到藥物產(chǎn)品上可以通過空間位阻防止受體 介入移除該分子。
[0030] 使用分子改性，例如生物相容性聚合物可以使所述治療藥劑更具親水性從而可以 有助于減少或防止對引入的治療藥劑的免疫反應(yīng)。改性提供了一個'水屏障'（shieldof water)包圍著所述藥劑，其可以'隱藏'任何可能引起免疫系統(tǒng)響應(yīng)的表位（epitopes)。在 水溶液中所述改性藥劑周圍存在的水分子可以形成籠形結(jié)構(gòu)（clathratestructure)。
[0031] 此外，使用所述改性可以使得皮下遞送所述藥劑通過淋巴系統(tǒng)逐步治療藥劑引入 體內(nèi)，避免與團注或者靜脈大劑量輸注相關(guān)的反應(yīng)，例如與靜脈注射給定抗生素相關(guān)的"紅 色人綜合征"（red-mansyndrome)。
[0032] 因此，可以預(yù)料的是通過改性這樣的治療藥劑以用于皮下遞送并隨后通過淋巴系 統(tǒng)后續(xù)輸注到血管系統(tǒng)中將獲得許多優(yōu)勢。
[0033] 因此，本發(fā)明提供，作為第一方面，一種對患者給藥治療藥劑的方法，該方法包含 對患者皮下給藥所述治療藥劑，使其cmax:cavOTage;的比例小于靜脈遞送該藥劑時Cmax:CavOTage; 的比例，其中，將所述治療藥劑改性，相對于所述治療藥劑的原始形態(tài)，以增加親水性以及 改變分子尺寸。相比于靜脈給藥，皮下給藥可以使得在治療期間這樣的藥劑在患者的血流 中更為一致的濃度，這致使cmax:c_rage的比例得到降低。
[0034] 本發(fā)明還提供一種對患者的淋巴系統(tǒng)給藥治療藥劑的方法，該方法包括下皮下給 藥所述治療藥劑的步驟，使得該治療藥劑不在注射部位直接進入患者的循環(huán)系統(tǒng)，并且其 中，將所述治療藥劑改性，相對于所述治療藥劑的原始形態(tài)，以增加親水性以及改變分子尺 寸，使得該改性藥劑無法直接從給藥部位進入循環(huán)。
[0035] 本發(fā)明還提供了一種在對患者皮下給藥治療藥劑時防止所述治療藥劑直接進入 患者的局部循環(huán)系統(tǒng)的方法，該方法包括對患者皮下給藥該改性藥劑的步驟，其中，將所述 治療藥劑改性，相對于所述治療藥劑的原始形態(tài)，以增加親水性以及改變分子尺寸。
[0036] 皮下給藥所述改性治療藥劑使得患者被給藥到比通過靜脈團注更高劑量的該藥 齊U;使得所述患者能夠比靜脈給藥該改性藥劑更早再次給藥（re-dosed);使得產(chǎn)生的免疫 反應(yīng)要少于或者等于靜脈給藥該改性藥劑所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)；為患者提供的治療效果所持 續(xù)的時間要比靜脈注射給藥該改性藥劑的治療效果所持續(xù)的時間長至少12小時；以及所 述藥劑可以以比安全地靜脈遞送該改性藥劑的濃度更高的濃度進行遞送。
[0037] 至少通過所述改性藥劑與未改性的藥劑的分子尺寸比率增加親水性。親水性是指 親水親油平衡（HLB)，其可以被定義為水的親和力，在本發(fā)明的內(nèi)容中意味著較低的表面粘 附力和水中更高的分散性。
[0038] 本發(fā)明提供一種調(diào)整患者（subject)的皮下I&庫（subcutaneousdepot)中的治 療藥劑遞送速度的方法，該方法包括改性所述治療藥劑以改變該藥劑的親水性，其中，親水 程度與生物利用度成比例。
[0039] 意外地發(fā)現(xiàn)，越是要獲得從皮下貯庫釋放最長的持續(xù)時間，越是需要更小程度的 改性。不被理論所束縛，這可能被合理的說明的是更小程度的改性使得治療藥劑暴露于通 過淋巴擴散慢的皮下組織。與之相對，較高程度的改性完全地覆蓋所述治療藥劑并使得其 產(chǎn)品自由快速地進入血液循環(huán)。
[0040] 本發(fā)明還表明更高改性治療藥劑（即二-(di-)或者三-(tri-)改性的種類與 單-(mono-)改性的種類相比）則生物利用度更高。因此，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)證實，較高 程度的改性和水合水平促進了更高的改性以及由此而得的生物利用度。
[0041] 因此，對于任何給予治療藥劑，從皮下貯庫的釋放現(xiàn)在可以通過增加或者減少所 述治療藥劑的改性水平進行調(diào)整。
[0042] 根據(jù)本發(fā)明，皮下遞送可以是通過皮下注射、局部施覆（topicalapplication)、 經(jīng)皮貼劑（transdermalpatch)、微皮膚磨削（microdermalabrasion)、高壓干粉遞送或者 任何其他將治療劑引入皮下空間的方法。
[0043] 本發(fā)明的再一個方面提供了改性藥劑在根據(jù)所述第一和其他方面的方法中的應(yīng) 用，該改性藥劑包括治療藥劑和改性，其中，相對于該治療藥劑的原始形態(tài)，所述改性增加 了該藥劑的親水性并改變了該藥劑的分子尺寸。相比于所述治療藥劑的原始形態(tài)，所述改 性使該藥劑親水性增加了至少50%和分子尺寸增加了至少50%。
[0044] 已經(jīng)在幾種市售的生化藥物產(chǎn)品中使用的生物相容性聚合物的例子是聚乙二 醇（以下簡稱PEG)。共價連接PEG分子到另一個分子的過程被稱為聚乙二醇化。迄今 為止，九種聚乙二醇化產(chǎn)品已經(jīng)獲得了FDA的上市批準,其中四種暢銷藥：Peglntron?(Schering-Plough)、Pegasysx(Hoffman-LaRoche)、Neulastafw(Amgen)和MicemK; (Hoffman-LaRoche)。已存在許多不同的化學(xué)成分用于結(jié)合蛋白質(zhì)治療劑以活化PEG分子。 已經(jīng)成功地采用隨機聚乙二醇化通過蛋白質(zhì)上的氨基基團共價連接PEG基團到蛋白質(zhì)。附 著位點最常見的是，但是不唯一的，為賴氨酸殘基側(cè)鏈上的ε-氨基。這種隨機的反應(yīng)可能 產(chǎn)生非常復(fù)雜的綴合物的混合物并在PEG殘基的附著數(shù)量和位點上有所不同。甚至隨后對 隨機綴合反應(yīng)進行純化，仍可能存在具有非常不同的物理化學(xué)性質(zhì)和藥學(xué)特性的位置異構(gòu) 體（positionalisomers)。許多位點特異性聚乙二醇化（site-specificPEGylation)技術(shù) 已經(jīng)開發(fā)出來，現(xiàn)在被利用于生產(chǎn)更好界定的生化藥物。使位點特異性聚乙二醇化的方法 包括N-端、半胱氨酸、聚糖、二硫化物和聚組氨酸定向的聚乙二醇化。
[0045] 在使用PEG衍生化的肽治療劑已被證實降低了多肽類的免疫原性，例如 US4179337公開了非免疫原性的多肽，例如酶和肽類激素與聚乙二醇（PEG)或者聚丙二醇 結(jié)合。除了降低免疫原性外，由于所討論的多肽的PEG綴合物的尺寸增加，使得在循環(huán)中的 清除時間有所延遲。
[0046]PEG及其衍生物附著多肽的主要方式是通過肽的氨基酸殘基的非特異性鍵合（見 US4088538、US4496689、US4414147、US4055635 以及TO87/00056)。另一個PEG附著 肽方式是通過糖肽上的糖基殘基的非特異性氧化（見WO94/05332)。
[0047] 在這些非特異性的方法中，將聚乙二醇以隨機的、非特異性方式加到在肽主鏈上 的反應(yīng)性殘基上。當(dāng)然，PEG分子的隨機加入也有它的缺點，包括最終產(chǎn)品缺乏均勻性，以 及存在肽的生物學(xué)活性或者肽的酶活性的減少的可能性。因此，對于治療藥劑的生產(chǎn)，可獲 得特異性標記的、容易表征的、本質(zhì)上均勻的產(chǎn)品的衍生策略更為有利。
[0048] 本領(lǐng)域中治療藥劑的聚乙二醇化的狀況，如重組凝血因子（如FVIIa、FVIII和 FIX)可以總結(jié)如下。W098/32466表明FVII可以聚乙二醇化，但關(guān)于這方面并不包括任何 進一步的信息。US2008/0200651表明具有野生型的（wild-type)，或者增強的，活性的FVII 多肽并且通過人工引入半胱氨酸殘基而綴合有聚乙二醇分子，顯示出增加的體內(nèi)半衰期。 US2008/0221032描述了FVIIa-聚唾液酸綴合物的生產(chǎn)，得到的分子顯示出顯著的體內(nèi)半 衰期的增加。US2009/0176967教導(dǎo)了酶可以用于在FVII多肽的C-端引入特定的官能團由 此可以結(jié)合如PEG的生物相容性聚合物。US2009/0227504描述了FVIIa(或者FVIIa-樣 分子）的制備，即將一個或多個天冬酰胺-和/或絲氨酸-連接的低聚糖鏈與至少一個聚 合物基團共價地改性，并由此證實有所改善的血清半衰期。US2010/0028939描述了怎樣采 用半乳糖氧化酶這樣的酶對天然的糖蛋白進行改性以在多糖末端產(chǎn)生反應(yīng)性的醛官能度 (aldehydefunctionalities)。該反應(yīng)性的醒然后可以用來綴合聚合物基團和蛋白質(zhì)以生 成具有改進藥理學(xué)特性的產(chǎn)品。US2010/0056428表明在FVIIa中在糖基基團處通過聚合物 基團如PEG的肟來衍生糖蛋白可以獲得改進的藥代動力學(xué)特性。關(guān)于FVIII和FIX的也有 公開的相關(guān)報道，分別見US2008/0255026和US7683158。
[0049] 另一個類似蛋白質(zhì)聚乙二醇化已經(jīng)被Polytherics開發(fā)并且被稱為TheraPEG?, 其中PEG聚合物通過該蛋白質(zhì)中的一對半胱氨酸殘基的還原的二硫鍵附屬于感興趣的 蛋白質(zhì)（W02005/007197)。該技術(shù)已經(jīng)被用于準備無因子FIXa污染的聚乙二醇化的因 子IX(W02009/130602)、聚乙二醇化的因子VII(W02011/135308)和聚乙二醇化的因子 VIII(W02011/135307)。
[0050] 現(xiàn)在由本發(fā)明的發(fā)明人所發(fā)現(xiàn)的，與靜脈注射給藥的相同形式的相比，皮下給藥 改性治療藥劑，如凝血因子的聚乙二醇化形式，可以改善半衰期并延長在血漿中的活性，尤 其是當(dāng)"劑量調(diào)整"(doseadjusted)時。給受皮下注射的具體位置可以增加或者減少所述 改性藥劑出現(xiàn)在血液系統(tǒng)中的有效時間。無論如何，獲得了較低的cmax:caverage比例；相似的 藥代動力學(xué)分布（pharmacokineticprofiles)通常與相關(guān)的緩釋劑型同等視之。皮下給藥 未改性的治療藥劑的缺陷是治療藥劑可以直接進入心血管系統(tǒng)，從而Cmax和持續(xù)時間結(jié)果 主要取決于皮下注射部位的血管狀況。當(dāng)皮下注射至高度血管化的區(qū)域時將明顯地比在注 射于低血管化的區(qū)域中時更為快速地吸收大量的藥劑。這種矛盾可以用本發(fā)明的用于皮下 遞送的改性藥劑來克服。
[0051] 根據(jù)本發(fā)明提供的改性治療藥劑得到了通過淋巴系統(tǒng)遞送到心血管系統(tǒng)的分子， 并因此在不依賴注射部位的血管下，得到了通過淋巴系統(tǒng)進入循環(huán)的更可預(yù)測的、一致的 遞送速率。
[0052] 本領(lǐng)域中現(xiàn)有的治療藥劑的配方考慮，包括凝血因子，沒有重視配制這樣的用于 皮下給藥的因子所衍生而得的優(yōu)勢。特別地，也沒有暗示或者啟示這樣的配方在皮下給藥 時可以遞送并維持正常止血至有所延長的時間或者它們可以提供更穩(wěn)定的藥物生物利用 度（更低Cmax:Caverage比例），這是由于獲得了穩(wěn)定輸注效果。所述淋巴系統(tǒng)提供了含水液 體，在其中血管壁為含有膠原蛋白。任何太大而不能通過血管壁的分子必須依靠淋巴引流 (lymphaticdrainage)去到血流中。然而，如果分子中存在一定程度的疏水性，它很有可能 在進入淋巴系統(tǒng)前粘附于組織上以及粘附于淋巴管壁，并因此其將被固定在上述液體中。 相比之下當(dāng)提供的親水基團（hydrophilicmoiety)時,所述改性藥劑將更容易分散在淋巴 中的水相中從而很容易地引流入系統(tǒng)中并進入到胸導(dǎo)管的血流中。
[0053] 任何方面的所述治療藥劑可以為小分子、大分子、聚合物和多肽，其中，小分子包 括催眠藥和鎮(zhèn)靜藥、抗心律失常藥、抗氧化劑、抗哮喘劑（anti-asthmaagents)，激素類藥 劑包括避孕藥、擬交感神經(jīng)藥（sympathomimetics)、利尿藥、調(diào)脂藥（lipidregulating agents)、抗雄激素藥物、抗寄生蟲藥、抗凝血劑、腫瘤藥（neoplasties)、抗腫瘤藥、降糖藥 (hypoglycemics)、精神興奮劑（psychicenergizers)、鎮(zhèn)靜劑、呼吸藥物（respiratory drugs)、抗驚厥藥（anticonvulsants)、肌肉松弛劑、抗帕金森藥（多巴胺對抗物）、細胞激 素、生長因子、抗癌劑、抗血栓劑、抗高血壓藥、心血管藥、止痛藥、消炎藥、抗焦慮藥（鎮(zhèn)定 劑）、食欲抑制劑（appetitesuppressants)、抗偏頭痛藥、肌肉收縮劑、抗感染藥（抗生素、 抗病毒藥、抗真菌劑、疫苗）抗關(guān)節(jié)炎藥、抗痕疾藥、止吐藥、抗癲癇藥（anepileptics)、支 氣管擴張劑、營養(yǎng)劑和補充劑、生長補充劑、抗腸炎劑、疫苗、抗體、診斷劑以及造影劑。
[0054]本發(fā)明適用的藥劑的例子包括，但并不限制于此，降鈣素、紅細胞生成素（EPO)、阿 糖苷酶（ceredase)、伊米苷酶（cerezyme)、環(huán)孢菌素、粒細胞集落刺激因子（GCSF)JiSLlinyh 板生成素（TPO)、α-l蛋白酶抑制劑、依降鈣素、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（GMCSF)、 生長激素、人類生長激素（HGH)、生長激素釋放激素（GHRH)、肝素、低分子量肝素（LMWH)、 干擾素α、干擾素β、干擾素Υ、白細胞介素-1受體、白細胞介素-2、白細胞介素-1受體 拮抗劑、白細胞介素-3、白細胞介素_4、白細胞介素-6、促黃體激素釋放激素（LHRH)、因子 IX胰島素、胰島素原、胰島素類似物（例如，美國專利號NO. 5922675中描述的單酰化胰島 素）、胰淀素、C-肽、生長激素抑制素、生長激素抑制素類似物包括奧曲肽、抗利尿激素、促 卵泡激素（FSH)、胰島素樣生長因子（IGF)、促胰島素激素（insulintropin)、巨噬細胞集 落刺激因子（M-CSF)、神經(jīng)生長因子（NGF)、組織生長因子、角質(zhì)細胞生長因子（KGF)、神經(jīng) 膠質(zhì)生長因子（GGF)、腫瘤壞死因子（TNF)、內(nèi)皮生長因子、甲狀旁腺素（PTH)、胰高血糖素 樣肽胸腺素α1、Ilb/IIIa抑制劑、α1抗胰蛋白酶、磷酸二酯酶（PDE)化合物、VLA-4抑 制劑、二磷酸鹽、呼吸道合胞病毒的抗體、囊性纖維化跨膜調(diào)控子（CFTR)基因、脫氧核糖核 苷酸酶（Dnase)、抗假單胞菌青霉素類如羧芐青霉素、替卡西林、阿洛西林、美洛西林以及 哌拉西林；頭孢菌素類如頭孢泊肟、頭孢丙烯、頭孢布烯、頭孢唑肟、頭孢曲松、頭孢噻吩、 頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢拉啶、頭孢西丁、頭孢羥唑、頭孢唑啉、頭孢噻啶、頭孢克洛、頭孢 輕氨節(jié)、頭孢來星（cephaloglycin)、頭孢呋辛、頭孢雷特（ceforanide)、頭孢噻廂、頭孢曲 秦（cefatrizine)、頭孢乙腈、頭孢批廂、頭孢克廂、頭孢尼西、頭孢哌酮、頭孢替坦、頭孢美 唑、頭孢他啶、氯碳頭孢和拉氧頭孢，單環(huán)β-內(nèi)酰胺類如氨曲南；殺菌/滲透性增強蛋白 質(zhì)（BPI)、抗-CMV抗體、13-順式維甲磺酸，大環(huán)內(nèi)酯類如紅霉素、竹桃霉素、醋竹桃霉素、 羅紅霉素、克拉霉素、環(huán)酯紅霉素、阿奇霉素、氟紅霉素（flurithromycin)、地紅霉素、交沙 霉素、螺旋霉素、麥迪霉素、白霉素、美地霉素、羅他霉素、andazithromycin和swinolide A;喹諾酮類如環(huán)丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、曲伐沙星、阿拉曲沙星、莫西沙星、諾氟沙 星、依諾沙星、格雷沙星、加替沙星、洛美沙星、司帕沙星、替馬沙星、培氟沙星、氨氟沙星、 氟羅沙星、妥舒沙星、普盧利沙星、依爾沙星、帕珠沙星、克林沙星和西他沙星，氨基糖苷 類如慶大霉素、乙基西梭霉素、草履蟲素、妥布霉素、阿米卡星、卡那霉素、新霉素、以及鏈 霉素、萬古霉素、替考拉寧、雷冒拉寧（rampolanin)、麥地拉寧、粘菌素、達托霉素、短桿菌 肽、粘桿菌素，多粘菌素類如多粘菌素B、卷曲霉素、桿菌肽、青霉烯類；青霉素類包括青霉 素酶敏感劑（penicllinase-sensitiveagents)如青霉素G、青霉素V、青霉素酶耐受劑 (penicllinase-resistantagents)如甲氧西林、苯唑西林、氯唑西林、雙氯唑西林、氟氯西 林（floxacillin)、萘夫西林、革蘭陰性微生物活性劑如氨芐西林、阿莫西林以及海他西林、 西林（cillin)、以及革蘭西林（galampicillin);碳青霉烯類如亞胺培南、美羅培南、依西 酸噴他脒（pentamidineisethiouate)、硫酸沙丁胺醇、利多卡因、硫酸奧西那林、二丙酸倍 氯米松（beclomethasonediprepionate)、去炎松乙酉先胺（triamcinoloneacetamide)、布 地奈德縮丙酮（budesonideacetonide)、氟替卡松、異丙托溴銨、氟尼縮松、色甘酸鈉、酒石 酸麥角胺，以及上述抗生素，血因子、激素、生長因子、另一種治療肽或者蛋白質(zhì)、或者單克 隆抗體或者小分子的可適用的、類似物、激動劑、拮抗劑、抑制劑以及其藥學(xué)可接受的鹽的 形式。適當(dāng)?shù)兀糜诟男运巹┛梢赃x自由因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因 子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子和蛋白C組成的組中。在一些實施 方式中所述凝血因子適于為因子VII、因子VIII或者因子IX。
[0055] 根據(jù)本發(fā)明的藥劑可以通過任何生物相容性聚合物被改性，例如，聚乙二醇 (PEG)、聚磷脂酰膽堿（PC)、聚丙二醇（PPG)、乙二醇和丙二醇的共聚物、聚環(huán)氧乙烷（PEO)、 聚氧乙烯多元醇、聚烯醇、聚羥烷基甲基丙烯酸酯、多糖、聚α-羥基酸、聚乙烯醇、聚磷腈、 聚N-丙烯酰嗎啉、聚烯烴氧化物聚合物、聚馬來酸、聚DL-丙氨酸、羧甲基纖維素、右旋糖 酐、淀粉或淀粉衍生物、透明質(zhì)酸、甲殼素、聚甲基丙烯酸酯、聚唾液酸（PSA)、聚羥基鏈烷酸 酯、聚氨基酸以及它們的組合。所述生物相容性聚合物可以具有線性或分支狀結(jié)構(gòu)。
[0056] 在另一種實施方式中，所述生物相容性聚合物為選自但并不限于由白蛋白、轉(zhuǎn)鐵 蛋白、免疫球蛋白包括單克隆抗體、抗體片段如單域抗體、'、VH、Fab、F(ab' )2、Fab'、 Fab3、scFv、di-scFv、sdAb、Fe以及它們的組合組成的組中的蛋白質(zhì)。
[0057]在一些實施方式中，增加改性治療藥劑的親水性/溶解性并被遞送到皮下能夠 使得該藥劑比通過靜脈遞送以更高的濃度存在在遞送介質(zhì)中。在藥物通過注射給藥的這 種情況下，可以確保使用較小的注射量，其更適合皮下給藥。另外，在較高的濃度下，未 改性的藥劑可能預(yù)計為自動催化（auto-catalyze)，所述改性可以防止該藥劑自動消化 (auto-digestion)，從而未改性的形式可能導(dǎo)致有不良的、危險的副產(chǎn)品。例如，未改性的 血因子IX將以高濃度自動催化并產(chǎn)生因子IXa，具有形成血栓的危險。
[0058] 于是，本發(fā)明的另一方面，所述改性治療藥劑的皮下遞送體積為不多于2ml。適當(dāng) 地，所述遞送體積可以為 5μ1、10μ1、25μ1、50μ1、100μ1、250μ1、500μ1、750μ1 或者 lml。在另一種實施方式中，所述藥劑的遞送體積可以為不超過I. 5ml、2ml、2. 5ml、3.Oml或 者3. 5ml。值得注意的是本發(fā)明可以以較高濃度的活性的藥劑通過單次皮下注射進行遞送 且比靜脈內(nèi)注射更安全，因為沒有直接遞送至患者的血流里。這對于凝血因子來說是特別 重要的，因為靜脈注射高濃度的凝血因子可能在患者中導(dǎo)致不良的和危險血塊。皮下遞送 使得活性的藥劑可以通過淋巴系統(tǒng)穩(wěn)定輸注入血流中，從而避免了活性的藥劑直接遞送到 血流中產(chǎn)生的危險水平。因此，由于藥劑遞送進入血流的濃度被患者淋巴系統(tǒng)所調(diào)控，可以 以較高濃度皮下給藥的劑量進行遞送，這將使得可以以相比靜脈遞送傳統(tǒng)使用的更小的體 積使用。
[0059] 在本發(fā)明范圍內(nèi)包括的治療藥劑能夠通過親水改性進行改性去增加親水性和改 變分子尺寸以防止其穿過血管壁直接進入血管系統(tǒng)，從而可通過皮下遞送對患者進行給 藥，以此通過淋巴系統(tǒng)到達循環(huán)系統(tǒng)。改性這種藥劑的方法也包括在本發(fā)明中。
[0060] 本發(fā)明的劑型可以給藥每天至少一次、每天至少兩次、每周約一次、每周約兩次、 每兩周約一次或者每月約一次。調(diào)控所述改性治療藥劑自皮下貯庫的釋放速率的能力意味 著給藥可以更便于控制。
[0061] 對某些的治療藥物，每天一次的劑量方案將是足夠的，但是對于其他的更頻繁的 劑量方案可能更適合或者更期望，其中，相對于標準靜脈劑量每一皮下給藥劑量的量可以 被減少。所以，本發(fā)明的劑型可以為每天一次給藥、每天兩次（或者更多次如果需要）進行 給藥。
[0062] 本發(fā)明可以阻止血液中藥劑濃度快速升高和隨后下降（即"鋸齒"）。相比未改性 的藥劑傳統(tǒng)上可見的或者當(dāng)反復(fù)的靜脈注射同樣的改性的產(chǎn)品時的，本發(fā)明提供了一種更 長時間地在患者血液中更一致的、更可預(yù)期的藥劑濃度。
[0063] 本發(fā)明的另一個好處是它使皮下給藥的試劑的劑量比安全地靜脈給藥的劑量高。 這將可以提供更長的治療效果持續(xù)時間相比于以更高劑量或者更頻繁劑量的通常的和安 全的靜脈遞送所持續(xù)時間來說。例如，至于血液因子，因為該產(chǎn)品通過胸導(dǎo)管被遞送進入鎖 骨下靜脈，所述方法能夠使更大量的產(chǎn)品單時間點單劑量進行皮下給藥相比于單時間點靜 脈注射入靜脈來說。高劑量團注入血管可以引起不良的血栓事件。
[0064] 本發(fā)明的另一個好處能夠使所述藥劑間隔地再次給藥以使該藥劑的血藥濃度維 持一致的水平，從而提供一個持久不變的和可預(yù)期的治療效果而不需要等待直到該藥劑的 血藥濃度下降到與治療不相關(guān)的水平時再次給藥。在傳統(tǒng)的做法中，靜脈再次給藥，伴隨著 即刻的Cmax和起始作用，被推遲直到估計治療劑水平已經(jīng)下降到由新注射而加入的Cmax不 會達到可能形成血栓水平（即減少不良事件的風(fēng)險），但是這意味著患者在他或者她的血 液系統(tǒng)中已經(jīng)達到了一種"不健康的"藥劑水平范圍。換句話說，當(dāng)血流中仍存在"健康水 平"或治療有效水平的藥劑，該藥劑隨后劑量便不能正常的給予患者。然而，本發(fā)明能夠在 藥劑的血藥水平仍處于治療有效范圍內(nèi)時進行該藥劑的再次給藥，從而本發(fā)明使得在血液 系統(tǒng)中蛋白質(zhì)的治療劑水平更一致，那是很理想的適合于預(yù)防治療。由于通過胸導(dǎo)管進入 入血流的藥劑的一致性遞送，避免了該藥劑在血流中增加到不期望的高水平的問題。
[0065] 根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種用于皮下給藥的改性凝血因子的藥物組合 物的劑型，當(dāng)配置用于皮下給藥到患者時，提供了一種足夠維持所述患者全血凝固時間 (wholebloodclottingtime)不多于20分鐘的每月不多于一次的劑型。也提供了用于皮 下給藥每月不多于一次的聚乙二醇化凝血因子的液體劑型在治療凝血失調(diào)中的應(yīng)用，該劑 型具有的Cmax為靜脈注射給藥的同等參考劑型（equivalentreferencedosageform)的至 少10%且不多于90%。適當(dāng)?shù)?，所述Cniax為20% -80%，或者30% -70%，或者40% -60%。 適當(dāng)?shù)?，所述凝血因子可以為FVII、FVIII或者FIX。
[0066] "不多于"的意思是所述劑型可以以比指定的時間周期更頻繁地進行給藥，但并不 必然這樣做；這種劑型的皮下給藥效果是指檢測在該時間周期里的持續(xù)時間。然而，由于較 低的和一致的Cmax，可以更頻繁地給藥且對患者沒有不良效果。
[0067] 適當(dāng)?shù)?，所述凝血因子的劑型可以足夠維持所述患者全血凝固時間為少于15分 鐘，或者適當(dāng)?shù)?，少?2分鐘。在一種【具體實施方式】，所述凝血因子的劑型為每周至少一次 的劑型，或者每月至少一次、每兩周至少一次、每半周至少一次的劑型。
[0068] 根據(jù)本發(fā)明的劑型可以包括選自由因子Vila、因子VII、因子VIII、因子IX、因子 X、因子Xa、因子XI、因子XIII、因子V、馮維勒布蘭德因子和蛋白C組成的組中的凝血因子。 適當(dāng)?shù)?，所述凝血因子為FVII、FVIII或者FIX。
[0069] 本發(fā)明的劑型可以通過任何生物相容性聚合物進行改性，如本文所定義的。適當(dāng) 地，所述改性為聚乙二醇化。
[0070] 所述劑型具有的Cmax可以為靜脈注射給藥的同等參考劑型的至少10%且不多于 90%。在一種【具體實施方式】中，所述劑型具有的Cmax可以為靜脈注射給藥的同等參考劑型 的10% -25%。在一種【具體實施方式】中，所述劑型具有的Cmax可以為靜脈注射給藥的同等 參考劑型的40% -60%。在一種【具體實施方式】中，所述劑型具有的Cmax可以為靜脈注射給 藥的同等參考劑型的75% -80%。在一種【具體實施方式】中，所述劑型具有的Cmax可以為靜 脈注射給藥的同等參考劑型的75%或78. 8%。在一種實施方式中，Cmax為75% -80%并且 所述血因子可以為FVII。在另一種實施方式中，Cmax為10% -25%并且所述血因子可以為 FVIII。在另一個實施方式中，Cmax為40% -60%并且所述血因子可以為FIX。
[0071] 還提供了一種根據(jù)本發(fā)明的劑型，劑量為l-l〇〇〇IU/kg，或者5-500IU/kg，或者 100-250IU/kg或者 25-50IU/kg。
[0072] 本發(fā)明的劑型可以使得所述劑型的少頻率給藥，卻足夠維持患者的全血凝固時間 不多于20分鐘、或者不多于15分鐘、或者不多于10分鐘。在一種【具體實施方式】中，所述劑 型足以維持全血凝固時間少于12分鐘。所述劑型可以提供兩周不多于一次、每周不多于一 次、每周不多于兩次、每三天不多于一次、每兩天不多于一次、每天不多于一次或者更多或 者更少頻率的劑型。
[0073] 值得注意是本發(fā)明的一個好處為當(dāng)藥劑為凝血因子時的劑型，不需要更頻繁地對 患者給藥來至通過這樣的時間間隔來繼續(xù)維持全血凝固時間在健康范圍內(nèi)，而是可以更頻 繁地給藥以助于提供一種與那些控釋劑（controlledreleaseformulation)相似的"穩(wěn)定 狀態(tài)"。通常本領(lǐng)域技術(shù)人員認為"正常"全血凝固時間為10-12分鐘，并且任何15分鐘以 下的都認為是健康的非血友病的人群。一旦全血凝固時間超過20分鐘，則被認為是在不健 康的范圍中。在15-20分鐘之間則被認為是表明了盡管出血可控，但卻不正常。
[0074] 在另一種實施方式中，所述劑型以比靜脈團注的血漿半衰期更低的頻率進行給 藥。例如，團注改性的因子IX需要每周一次，然而，根據(jù)本發(fā)明的皮下遞送相同的藥劑，可 能僅需要每十天一次，或者更少。
[0075] 根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了一種具有25_50IU/kg的改性凝血因子的藥物 組合物以用于比靜脈給藥該凝血因子更低頻率或相同頻率的皮下給藥。
[0076] 本發(fā)明的劑型因此能維持止血在標準值至高到七天，所述標準值被定義為少于15 分鐘的全血凝固時間（WBCT)，適當(dāng)?shù)?，大約為12分鐘或者更少。
[0077] 本發(fā)明的劑型具有的Cmax為靜脈注射給藥的同等參考劑型的至少10%到不多于 90%。在本發(fā)明的一些實施方式中，該值可以為至少75%、78%或者80%，并且所述凝血因 子可以為FVII。在本發(fā)明的一些實施方式中，該值可以為至少15%、18%或者20%，并且所 述凝血因子可以為FVIII。在本發(fā)明的一些實施方式中，該值可以為40^^45%或者50%， 并且所述凝血因子可以為FIX。
[0078] 本發(fā)明的【具體實施方式】的劑型，其中，所述改性藥劑為聚乙二醇化血因子，當(dāng)配置 用于不多于每月一次皮下給藥時，包括25_50IU/kg的劑量。在一些實施方式中，所述劑量 可以為 25、30、35、40、45 或者 50IU/kg。所述劑量可以 25IU/kg-30IU/kg、35IU/kg-40IU/kg 或者 40IU/kg-50IU/kg。
[0079] 在一種實施方式中，當(dāng)所述劑型被準備為150IU/kg的劑量時，所述劑型可以適合 于在需要的患者中每兩周給藥一次。適當(dāng)?shù)?，所述劑型可以每兩周給藥不多于一次。
[0080] 根據(jù)本發(fā)明的一種【具體實施方式】，當(dāng)皮下給藥改性凝血因子的劑型時能導(dǎo)致正常 止血維持至少一個半星期。
[0081] 根據(jù)本發(fā)明的劑型，當(dāng)皮下給藥時可以少量的所述改性的血凝（凝結(jié)）因子達到 相同的治療終點，從而為需要治療的患者提供更安全的產(chǎn)品。在一種實施方式中，靜脈給藥 的所述改性凝血因子調(diào)整劑量（adjusteddose)的一半就足以實現(xiàn)在患者體內(nèi)維持正常止 血至少一周，特別地其中所述凝血因子為因子Vila或者因子VIII。對于正常止血的適合的 值為約12分鐘的全血凝固時間（WBCT)，如上所述的。
[0082] 本發(fā)明的劑型可以適當(dāng)?shù)匕ㄉ儆谟糜陟o脈給藥的參考劑型（包括有相同改性 凝血因子）的調(diào)整治療有效量一半的劑量以達到相同治療效果。例如，在一種具體實施方 式中，所述凝血因子為因子IX。
[0083] 本發(fā)明因此也提供了一種用于皮下給藥的改性凝血因子的劑型，該劑型包括靜脈 給藥所需的劑量調(diào)整量的50%以實現(xiàn)相同的有效作用的持續(xù)。
[0084] 一種適用于皮下給藥的劑型可以適當(dāng)?shù)乇粶蕚錇楹幕蛘呋旧虾膭?型。所述劑型可以包括所需的添加鹽、防腐劑和穩(wěn)定劑和/或賦形劑或者助劑。本發(fā)明的 劑型可以被提供作無水粉末以備用于在適當(dāng)?shù)暮橘|(zhì)中的臨時劑型（extemporaneous formulation)〇
[0085] 通?？梢詢?yōu)選將劑型配制為緩沖含水劑型（bufferedaqueousformulation)。適 合的緩沖溶液可以包括，但不限制于氨基酸（例如組氨酸）、無機酸的和堿金屬或者堿土金 屬的鹽（例如鈉鹽、鎂鹽、鉀鹽、鋰鹽或者鈣鹽-例如氯化鈉、磷酸鈉）?？梢源嬖谄渌某?分如洗滌劑或者乳化劑（例如，TweenSO8或者任何其它形式的Tweens )以及穩(wěn)定劑（例 如苯甲脒或者苯甲脒的衍生物）。還可以存在賦形劑如糖類（例如蔗糖）。合適的PH值為 生理學(xué)的pH，例如，pH6. 8-7. 4。液體劑型可以被制備為在給藥載體中隨時可用。
[0086] 一種"改性凝血因子"為連接有一個或多個如上所述的改性用試劑的凝血因子 (bloodcoagulationfactors)(凝血因子，bloodclottingfactors)。在一些實施方式 中，所述改性為PEG。所述PEG分子可以直接連接或者間接連接到所述凝血因子。所述聚乙 二醇化的凝血因子還可以被定義為"綴合有PEG分子的凝血因子"或者一種"凝血因子-PEG 綴合物"。
[0087]改性凝血因子（bloodcoagulationfactors)(凝血因子，bloodclotting factors)適于包括因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子 V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子和蛋白C中的至少一種。在一些【具體實施方式】中，所述凝血 因子適于為因子VII、因子VIII或者因子IX。
[0088] 如本文所使用的術(shù)語"血因子綴合物"指的是具有改性凝血因子蛋白，如PEG部 分、如上文所述的其它綴合部分。
[0089] 除非文中特別指定，術(shù)語因子VIIa(FVIIa)和因子VII(FVII)也可以交換使用。 FVIII用為因子VIII的縮寫以及FIX用為因子IX的縮寫，并適用于本發(fā)明中描述的其他血 因子。
[0090] 所述凝（凝結(jié)）血因子可以來自于任何合適的來源和可以是通過DNA重組技術(shù) 利用分子生物技術(shù)或者化學(xué)合成或者在哺乳動物的轉(zhuǎn)基因牛奶生產(chǎn)的重組蛋白，或者所 述因子可以從自然來源分離而得（即純化血漿）。適當(dāng)?shù)厮鲆蜃邮遣溉轭惖哪蜃樱?如人類的凝血因子。引用的凝血因子（bloodclottingfactor)包括凝血因子（blood coagulationfactor)〇
[0091] 正如本文中所指出的本發(fā)明涉及改性凝血因子的劑型，該改性凝血因子通過綴合 一個或者更多改性用的試劑進行改性，如聚乙二醇聚合物（"聚乙二醇化"）。所述凝血因 子的改性可以通過任何方便的方法進行。
[0092] Tween*現(xiàn)在廣泛應(yīng)用于血液廣品的劑型中。Tween+3+ 80為一種聚乙_醇化的脂 肪酸并每個Tween"'分子攜帶有分子當(dāng)量大約〇.SkDa的PEG。
[0093] 如上文所述，血因子為特異性化的尤其是表面粘附的性質(zhì)。這是所述凝血級聯(lián)的 必要特征，即需要酶和輔因子粘附其它在級聯(lián)中參與者，粘附血小板的表面以及損傷部位 組織。的確特別重要的是血塊保持在損傷部位而不漂移以引起血栓風(fēng)險。此屬性給藥物產(chǎn) 品的劑型提出了挑戰(zhàn)，因為血因子如Vila、VIII和IX將過度地粘附在任何玻璃和塑料表 面。實際上，通過使用大量聚山梨酯（即Twee…80)對此有所減輕。
[0094] 在本發(fā)明的一種【具體實施方式】中，F(xiàn)VIII具有20kDa的直鏈聚乙二醇部分與之綴 合。綴合peg減輕了這種因子的表面粘附性質(zhì)至不必要進一步使用Tween?的程度。
[0095] 當(dāng)在凝固過程中被激活，PEG-FVin-直粘附于血小板的表面，并且在整個凝血過 程作為一個小部分。在這個方面中，血塊將以正常的方式形成于損傷部位的血小板上。
[0096] 通過具有一個單-聚乙二醇化因子（mono-PEGylatedfactor)并因此避免了在劑 型中加入Tweer^的需求，從而可以實現(xiàn)聚乙二醇的量的減少。使用KogenateeFs(拜耳 FVIII)進行計算以確定在所述劑型中的每摩爾FVIII具有的PEG的總量，并且與單一綴合 2〇kDa部分（在它的劑型中不需要任何進一步TweenK )進行比較。因此，在劑量對劑量的 基礎(chǔ)（dose-for-dosebasis)上，本發(fā)明的一種【具體實施方式】提供了聚乙二醇的25. 8倍減 少量，當(dāng)給藥的減少頻率也考慮到，那么這可以獲得總體上減少大約80倍PEG的給藥量。
[0097] 本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)增加所述目標治療劑的水-承載能力（water-carrying capability)(例如，通過雙-聚乙二醇化產(chǎn)品相對于單-聚乙二醇化該產(chǎn)品），該產(chǎn)品經(jīng)皮 下給藥后進入血流的過程，可以被加速。相反地，減少所述水-承載能力（例如，單-聚乙 二醇化產(chǎn)品相對于雙-聚乙二醇化該產(chǎn)品），該產(chǎn)品經(jīng)皮下給藥后進入血液系統(tǒng)的過程，可 能被減速，給出了貯庫作用（depoteffect)。不希望受理論的束縛，顯示出同樣的產(chǎn)品具有 較小的水-承載能力（例如，通過單-聚乙二醇化或者具有較小的聚乙二醇分子）抵抗穿 過皮下空間進行分散的時間長于被改性為具有較大的水-承載能力的同樣的產(chǎn)品（例如， 多-聚乙二醇化或者結(jié)合有較大的PEG分子），因此提供了增強的貯庫作用。
[0098] 不希望受理論的束縛，設(shè)計一種具有更大水-承載能力特性的產(chǎn)品（例如，通過 雙-或者多-聚乙二醇化增加它的PEG覆蓋范圍，增加PEG的尺寸或者相對于直鏈的使用 支鏈的PEG分子）似乎可使得在皮下空間內(nèi)分散水性更好，使得通過淋巴管進入血漿的速 率更快；將減少了親水性的產(chǎn)品設(shè)計為具有較小的水-承載能力特性（例如，通過單-聚乙 二醇化或者通過使用較小的PEG分子），似乎將留下更多的疏水性治療藥劑被暴露、減少其 分散性和減慢了它通過含水的淋巴系統(tǒng)進入血漿。
[0099] 這種改性用于皮下給藥的分子的分散特性的能力，通過選擇性地調(diào)整親水性和疏 水性之間的平衡，提供產(chǎn)品通過淋巴從皮下空間到血漿中的控制釋放的控制精準度，其可 以根據(jù)治療藥劑的特性、患者的需要和生理機能或者這些的結(jié)合或者其它影響因素進行調(diào) 整。
[0100] 在一些【具體實施方式】中，當(dāng)所述改性為PEG，所述聚乙二醇（PEG)可以具有線性或 分支狀結(jié)構(gòu)并且可以通過任何方便的路線連接所述治療藥劑。在所述治療藥劑為蛋白質(zhì) 時，例如，凝血因子或者其它治療蛋白如本文所描述的，綴合PEG可以通過天然蛋白中絲氨 酸或者蘇氨酸殘基，通過與天然蛋白連接的糖殘基上的羥基殘基，或者通過一個或者多個 半胱氨酸殘基。所述PEG部分可以通過這樣的殘基連接天然的或者重組形式的蛋白。由重 組表達制得的蛋白質(zhì)可以通過位點特異性工程（sitespecificengineering)向蛋白質(zhì)序 列插入想要的氨基酸殘基和/或控制特定的糖基化酶的糖基化模式。其它聚乙二醇化路線 包括酰胺或者N-端氨基聚乙二醇化，或者羧基聚乙二醇化。
[0101] 所述PEG部分也可以通過一個或者多個被還原的半胱氨酸二硫鍵以綴合凝血因 子，也就是因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子 XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C。游離的半胱氨酸殘基是還原在蛋白質(zhì)中的胱氨酸二硫 鍵的結(jié)果。例如，所述綴合可以通過連接基團橋接兩個半胱氨酸殘基的硫殘基從而在因子 VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭 德因子或者蛋白C中形成二硫鍵。因此，所述二硫鍵可以為天然二硫鍵或者重組引入的二 硫鍵。
[0102] 在本發(fā)明的一種【具體實施方式】中，所述親水基團，例如聚乙二醇鏈通過橫跨半 胱氨酸殘基的二價連接基團（通常在天然形式的凝血因子中形成二硫橋鍵（disulphide bridge))進行連接。
[0103] 所述PEG分子可以為任何合適的分子量，例如，從IkDa-IOOkDa, 10_500kDa，適當(dāng) 地5-30kDa或者 20-30kDa。一些適當(dāng)?shù)姆肿恿堪?、10、20或者30kDa。適當(dāng)?shù)?，所述PEG 分子可以具有5kDa-40kDa。
[0104] 這有幾種不同類型的聚乙二醇聚合物可以與因子VII、因子VIII、因子IX、因子 X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C形成綴合 物。既可以是含有單一聚乙二醇鏈的線性的PEG聚合物，還可以是支鏈或者多臂PEG聚合 物（multi-armPEGpolymers)。支鏈聚乙二醇含有2條或者2條以上的單獨的線性的PEG 鏈并通過共同的基團鍵合。例如，兩個PEG聚合物可以通過賴氨酸殘基鍵合在一起。其中 一條線性的PEG鏈鍵合其α-氨基，而另一條PEG鏈則鍵合其ε-氨基。賴氨酸核心的剩 余羧基則留下用于共價連接蛋白質(zhì)。分支狀和線性的聚乙二醇聚合物都可市售得到其一系 列的分子量的產(chǎn)品。
[0105] 本發(fā)明的一種【具體實施方式】中，所述因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、 因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C-綴合物含有一個或者 多個與因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、 馮維勒布蘭德因子或者蛋白C鍵合的線性的聚乙二醇聚合物。在一些【具體實施方式】中，所 述凝血因子為因子III、因子VIII或者因子IX，其中，PEG具有的分子量大約為2-100kDa。 在本發(fā)明的另一方面中，因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、 因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C-綴合物含有一個或者多個與因子VII、 因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德 因子或者蛋白C鍵合的線性的聚乙二醇聚合物，其中，線性的PEG具有的分子量為約1-約 40kDa。在某些【具體實施方式】中，線性的PEG具有的分子量大約為10-30kDa。在某些具體實 施方式中，線性的PEG具有的分子量大約為20kDa。在某些【具體實施方式】中，線性的PEG具 有的分子量大約為10kDa。在確定的【具體實施方式】中，線性的PEG具有的分子量大約為少于 10kDa。在具體的實施方式中，所述血液因子綴合物含有多于一個與凝血因子鍵合的線性的 PEG聚合物，例如將兩個、三個或多達八個線性的PEG聚合物鍵合到因子VII、因子VIII、因 子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白 C。在一些實施方式中，所述血液因子綴合物含有多個線性的PEG聚合物，其中，每個線性的 PEG具有的分子量大約為5-30kDa。
[0106] 本發(fā)明的血因子綴合物可以含有一個或多個綴合因子VII、因子VIII、因子IX、因 子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C的分支 狀的PEG聚合物，其中，每個分支狀的PEG具有的分子量為約2-約100kDa。本發(fā)明的另一 個方面，血因子綴合物可以含有一個或多個綴合因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子 Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C的分支狀的聚乙二 醇聚合物，其中，每個分支狀的PEG具有的分子量為約1-約100kDa。在某些【具體實施方式】 中，每個分支狀的PEG具有的分子量為約5-約40kDa。在某些【具體實施方式】中，每個分支 狀的PEG具有的分子量為約10kDa、20kDa或者30kDa。在某些【具體實施方式】中，每個分支 狀的PEG具有的分子量少于約lOkDa。在具體的實施方式中，所述血因子綴合物可以含有 多于一個綴合因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因 子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C的分支狀的PEG聚合物，例如將兩個、三個或多達八 個直鏈PEG聚合物鍵合到因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、 因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C。在一些實施方式中，所述因子VII、因子 VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子或 者蛋白C-綴合物含有多達八個分支狀的PEG聚合物，其中，每個分支狀的PEG具有的分子 量為約5-40kDa，適合地10-30kDa。
[0107] 所述血因子-PEG綴合物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的層析方法進行純化，包 括但不限制于離子交換色譜法和尺寸排阻色譜法、親和色譜法、沉淀以及基于膜的分離。
[0108] 適合地，所述因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因 子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C-PEG綴合物的PEG部分鍵合兩個半胱氨酸殘 基，以在凝血因子中形成二硫鍵。因此，所述PEG含有連接子來橋接二硫鍵。這樣的綴合方 法的例子如在WO2005/007197、WO2009/047500 和WO2010/010324 中所描述的。
[0109]如上所述，聚乙二醇化的其他路線可以包括標準的糖基聚乙二醇化 (glycoPEGylation)方法如Stennickeetal(Thromb.Haemost. 2008, 100 (5)，920-8)中描 述的，或者N-端酰胺聚乙二醇化如US5644029中描述的。
[0110] 本發(fā)明的一種實施方式中，PEG部分可以根據(jù)圖2中給出的路線綴合因子VII、因 子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、馮維勒布蘭德因子 或者蛋白C。在圖2中，Rl基團表示在所述PEG部分和連接基團之間，所述連接基團跨越 (spanning) 了在血因子分子上的二硫鍵的硫原子。
[0111]Rl表示的取代基為直接的鍵（directbond)、亞烷基（優(yōu)選Cpltl亞烷基）、或任選 取代的芳基或雜芳基；其中所述芳基包括苯基、苯甲酰基和萘基；其中合適的雜芳基包括 吡陡、吡咯、呋喃、吡喃、咪唑、吡唑、噁唑、噠嗪、嘧啶和嘌呤；其中與聚合物的連接可以為通 過水解作用不穩(wěn)定的鍵的方式或通過穩(wěn)定的鍵的方式。
[0112] 在任選取代的芳基或者雜芳基上存在的具體取代基包括例如選自-CN、-N02、-C02R 、-COH、-CH20H、-COR、-OR、-0C0R、-0C02R、-SR、-S0R、-S02R、-NHC0R、-NRC0R、-NHC02R、-NR'C02R、-NO、 -ΝΗ0Η、-NR'OH、-C=N-NHC0R、-C=N-NR'COR、-N+R3、-N+H3、-N+HR2、-N+H2R、鹵素例如氟或 氯、-C=CR、-C=CR2和13C=CHR中的一種或多種相同或不同的取代基，其中每個R或R' 獨立地代表氫原子或者烷基（優(yōu)選Cp6)或者芳基（優(yōu)選苯基）。特別優(yōu)選地存在吸電子取 代基（electronwithdrawingsubstituents)。在一種實施方式中，Rl中所述任選取代的 芳基或雜芳基包括被酰胺基（NHCO)取代的芳基或雜芳基，所述酰胺基將Rl單元與PEG部 分連接。
[0113] 在因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因 子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C的半胱氨酸殘基之間的原始二硫鍵的兩個硫原子 之間的連接基團可以含有3-碳橋（3-carbonbridge)。在一種實施方式中，在因子VII、 因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因子XIII、血管性血友 病因子或者蛋白C的半胱氨酸殘基之間的原始二硫鍵的兩個硫原子之間的連接基團是 (CH2)2CHC(O)-。
[0114] 在本發(fā)明的一種實施方式中，PEG部分可以如上所述的進行綴合，其中包括有與 PEG部分綴合的因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子Vila、因子V、因 子XIII、馮維勒布蘭德因子或者蛋白C的成分具有以下結(jié)構(gòu)：
[0115]
【權(quán)利要求】
1. 一種對患者給藥治療藥劑的方法，該方法包括對患者皮下給藥所述治療藥劑，使其 Cmax: cavOTage的比例小于靜脈遞送該藥劑時cmax: caverage的比例，其中，將所述治療藥劑改性，相 對于所述治療藥劑的原始形態(tài)，以增加親水性以及改變分子尺寸。
2. -種對患者的淋巴系統(tǒng)給藥治療藥劑的方法，該方法包括皮下給藥所述治療藥劑的 步驟，使得該治療藥劑不在注射部位直接進入患者的循環(huán)系統(tǒng)，并且其中，將所述治療藥劑 改性，相對于所述治療藥劑的原始形態(tài)，以增加親水性以及改變分子尺寸。
3. -種在對患者皮下給藥治療藥劑時防止所述治療藥劑直接進入患者的局部循環(huán)系 統(tǒng)的方法，該方法包括對患者皮下給藥改性藥劑的步驟，其中，將所述治療藥劑改性，相對 于所述治療藥劑的原始形態(tài)，以增加親水性以及改變分子尺寸，使所述改性治療藥劑不能 從給藥的位置直接進入局部血管。
4. 一種調(diào)整患者的皮下貯庫中的治療藥劑遞送速度的方法，該方法包括改性所述治療 藥劑以改變該藥劑的親水性，其中，親水程度與生物利用度成比例。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項所述的方法，其中，皮下給藥所述改性治療藥劑使得 患者能夠被給藥到比通過單次靜脈團注的安全遞送量更高劑量的該改性藥劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的方法，其中，皮下給藥所述改性治療藥劑使患 者能夠比靜脈給藥該改性藥劑更早再次給藥。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項所述的方法，其中，皮下給藥所述改性治療藥劑所產(chǎn) 生的免疫反應(yīng)要少于或者等于靜脈給藥改性或原始形式的該藥劑所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項所述的方法，其中，所述治療藥劑的親水性相比于原 始形態(tài)的所述治療藥劑提高了至少50%。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項所述的方法，其中，所述治療藥劑為抗生素、凝血因 子、激素、其它治療肽或者蛋白質(zhì)、小分子或者單克隆抗體。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9中所述的方法，其中，所述凝血因子選自由因子VII、因子Vila、因 子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子XIII、因子V、馮維勒布蘭德因子和蛋白C組 成的組中。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項所述的方法，其中，所述改性為將所述治療藥劑與 生物相容性聚合物綴合。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中，所述生物相容性聚合物為聚乙二醇（PEG)、聚 磷脂酰膽堿（PC)、聚丙二醇（PPG)、乙二醇和丙二醇的共聚物、聚環(huán)氧乙烷（PEO)、聚氧乙烯 多元醇、聚烯醇、聚羥烷基甲基丙烯酸酯、多糖、聚a-羥基酸、聚乙烯醇、聚磷腈、聚N-丙烯 酰嗎啉、聚烯烴氧化物聚合物、聚馬來酸、聚DL-丙氨酸、羧甲基纖維素、右旋糖酐、淀粉或 淀粉衍生物、透明質(zhì)酸、甲殼素、聚甲基丙烯酸酯、聚唾液酸（PSA)、聚羥基鏈烷酸酯、聚氨基 酸以及它們的組合。
13. 根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的方法，其中，所述生物相容性聚合物為PEG。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1-13中任意一項所述的方法，其中，所述改性為融合到多肽以產(chǎn)生 融合蛋白質(zhì)；進入囊泡遞送載體，如脂質(zhì)體、傳遞體或者微膠粒；進入或者附著于樹枝狀大 分子或者形成治療藥劑的低聚體復(fù)合物。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1-14中任意一項所述的方法，其中，所述治療藥劑的皮下遞送體積 為不多于2ml。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1-15中任意一項所述的方法，其中，將所述改性治療藥劑以比安全 地靜脈遞送所述改性藥劑的濃度更高的濃度進行遞送。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1-16中任意一項所述的方法，其中，皮下遞送所述改性治療藥劑為 患者提供的治療效果所持續(xù)的時間要比靜脈給藥該改性藥劑的治療效果所持續(xù)的時間長 至少12小時。
18. 根據(jù)權(quán)利要求1-17中任意一項所述的方法，其中，所述皮下遞送為皮下注射、局部 施覆、經(jīng)皮貼劑、微皮膚磨削或者高壓干粉遞送。
19. 根據(jù)權(quán)利要求1-18中任意一項所述的方法，其中，所述皮下遞送為每天至少一次、 每天至少兩次、每周至少一次、每周至少兩次、每兩周至少一次或者每月至少一次。
20. 改性藥劑在權(quán)利要求1-19中任意一項所述的方法中的應(yīng)用，該改性藥劑包括治療 藥劑和改性，其中，相對于該治療藥劑的原始形態(tài)，所述改性增加了該藥劑的親水性并改變 了該藥劑的分子尺寸。
21. 改性藥劑在權(quán)利要求19所述的方法中的應(yīng)用，其中，相對于該治療藥劑的原始形 態(tài)，所述改性使該藥劑的親水性增加了至少50 %。
22. 根據(jù)權(quán)利要求20或21所述的改性藥劑，其中，所述改性為將生物相容性聚合物融 合到所述治療藥劑中。
23. 根據(jù)權(quán)利要求20-22中任意一項所述的改性藥劑，其中，皮下遞送所述改性藥劑為 患者提供的治療效果所持續(xù)的時間要比靜脈給藥該改性藥劑的治療效果所持續(xù)的時間長 至少12小時。
24. -種改性治療藥劑的藥物組合物的劑型，其中，皮下遞送所述改性治療藥劑為患者 提供的治療效果所持續(xù)的時間要比靜脈注射給藥該改性藥劑的治療效果所持續(xù)的時間長 至少12小時。
25. -種用于皮下給藥的改性凝血因子的藥物組合物的劑型，其中，當(dāng)配置用于皮下給 藥到患者時，提供了足夠維持該患者全血凝固時間不多于20分鐘的每月不多于一次的劑 型。
26. 用于皮下給藥每月不多于一次的聚乙二醇化凝血因子的液體劑型在治療凝血失調(diào) 中的應(yīng)用，其中，該劑型具有的C_為靜脈給藥的同等參考劑型的至少10%且不多于90%。
27. 根據(jù)權(quán)利要求24-26中任意一項所述的劑型，其中，所述劑型提供每兩周不多于一 次、每周不多于一次、每半周不多于一次、每兩天不多于一次或者每天不多于一次的劑量。
28. 根據(jù)權(quán)利要求24-26中任意一項所述的劑型，其中，所述劑型足夠維持所述患者的 全血凝固時間為少于15分鐘。
29. 根據(jù)權(quán)利要求24-26中任意一項所述的劑型，其中，所述劑型足夠維持所述患者的 全血凝固時間為少于12分鐘。
30. 根據(jù)權(quán)利要求24-29中任意一項所述的劑型，其中，所述凝血因子選自由因子 Vila、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子Xa、因子XI、因子XIII、因子V、馮維勒布蘭 德因子和蛋白C組成的組中。
31. 根據(jù)權(quán)利要求24-30中任意一項所述的劑型，其中，所述改性為聚乙二醇化。
32. 根據(jù)權(quán)利要求24-31中任意一項所述的劑型，其中，所述劑型具有的(：_為靜脈給 藥的同等參考劑型的至少10%且不多于90%。
33. 根據(jù)權(quán)利要求32中所述的劑型，其中，所述劑型具有的C_為靜脈給藥的同等參考 劑型的10% -20%。
34. 根據(jù)權(quán)利要求33中所述的劑型，其中，所述藥劑為因子VIII。
35. 根據(jù)權(quán)利要求32中所述的劑型，其中，所述劑型具有的C_為靜脈給藥的同等參考 劑型的40% -60%。
36. 根據(jù)權(quán)利要求35中所述的劑型，其中，所述藥劑為因子IX。
37. 根據(jù)權(quán)利要求32中所述的劑型，其中，所述劑型具有的C_為靜脈給藥的同等參考 劑型的75% -80%。
38. 根據(jù)權(quán)利要求32中所述的劑型，其中，所述劑型具有的C_為靜脈給藥的同等參考 劑型的75%。
39. 根據(jù)權(quán)利要求37或38中所述的劑型，其中，所述藥劑為因子VII。
40. 根據(jù)權(quán)利要求24-39中任意一項所述的劑型，其中，劑量為l-1000IU/kg。
41. 根據(jù)權(quán)利要求24-39中任意一項所述的劑型，其中，劑量為5-500IU/kg。
42. 根據(jù)權(quán)利要求24-39中任意一項所述的劑型，其中，劑量為100-250IU/kg。
43. 根據(jù)權(quán)利要求24-39中任意一項所述的劑型，其中，劑量為50-200IU/kg。
44. 根據(jù)權(quán)利要求24-39中任意一項所述的劑型，其中，劑量為25-50IU/kg。
45. 根據(jù)權(quán)利要求24-39中任意一項所述的劑型，其中，所述劑型給藥每天至少一次、 每天至少兩次、每周約一次、每周約兩次、每兩周約一次或者每月約一次。
46. -種治療藥劑的劑型，其中，所述劑型用于皮下給藥，并且其中改性所述治療藥劑 以改變該藥劑的親水性，其中，親水程度與生物利用度成比例。
47. -種治療患者的疾病的方法，該方法包括皮下給藥根據(jù)權(quán)利要求24所述的改性治 療藥劑的劑型。
48. -種治療患者的凝血疾病或者創(chuàng)傷的方法，該方法包括對所需患者皮下給藥根據(jù) 權(quán)利要求24-46中任意一項所述的凝血因子的劑型。
49. 根據(jù)權(quán)利要求47或48中所述的治療方法，其中，所述劑型給藥每天至少一次、每天 至少兩次、每周至少約兩次、每周至少約一次、每兩周至少一次或者每月至少約一次。
50. 根據(jù)權(quán)利要求47或48中所述的治療方法，其中，所述劑型給藥每天至少一次。
51. 根據(jù)權(quán)利要求50所述的治療方法，其中，所述劑型給藥每天兩次，其中，所述患者 在第一次給藥中接收第一劑型和在第二次給藥中接收第二劑型。
52. 根據(jù)權(quán)利要求51所述的治療方法，其中，所述第二劑型與所述第一劑型為分別地、 同時地或者連續(xù)地給藥。
53. -種包括根據(jù)權(quán)利要求24-46中任意一項所述的皮下劑型和給藥載體的試劑盒。
【文檔編號】A61K47/48GK104411335SQ201380027958
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2013年4月16日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月16日
【發(fā)明者】W·亨利, R·沃爾夫-加羅韋, J·C·梅奧, M·J·厄爾 申請人:劍橋生物制藥專利有限公司