使用抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷的組合療法
【專利摘要】本文提供的是含有抗透明質(zhì)酸劑例如聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向紫杉烷，以及任選地進(jìn)一步的化療劑例如核苷類似物的組合療法。組合療法可以用于治療癌癥特別是實體瘤癌癥的方法中。
【專利說明】使用抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷的組合療法
[0001] 相關(guān)申請
[0002] 本申請要求美國臨時申請?zhí)?1/686, 429和美國臨時申請?zhí)?1/714, 719的優(yōu)先 權(quán)利益，所述美國臨時申請61/686, 429于2012年4月4日提交，名稱為"COMBINATION THERAPYWITHAPOLYMER-CONJUGATEDHYALURONAN-DEGRADINGENZYMEANDTHERAPEUTIC AGENT"，所述美國臨時申請61/714, 719于2012年10月16日提交，名稱為"COMBINATION THERAPYWITHANANTI-HYALURONANAGENTANDTHERAPEUTICAGENT^0
[0003]本申請涉及名稱為"COMBINATIONTHERAPYWITHANANTI-HYALURONANAGENT ANDTHERAPEUTICAGENT"，與此同一天提交的美國專利申請?zhí)枺ù砣税柑?3320-03108. US02)，其要求美國臨時申請?zhí)?1/686, 429和美國臨時申請?zhí)?1/714, 719的優(yōu)先權(quán)。
[0004]本申請涉及名稱為"MODIFIEDHYALURONIDASESANDUSESINTREATING HYALUR0NAN-ASS0CIATEDDISEASESANDCONDITIONS"，于 2009 年 4 月 14 日提交的美國專 利申請?zhí)?2/386, 222,其以US20100003238公開并且要求美國臨時申請?zhí)?1/124, 278、 61/130, 357和61/195,624的優(yōu)先權(quán)。本申請還涉及于2009年4月14日提交的國際 PCT申請?zhí)朠CT/US2009/002352,其以W02009/128917公開并且還要求美國臨時申請?zhí)?61/124, 278、61/130, 357 和 61/195, 624 的優(yōu)先權(quán)。
[0005]本申請涉及名稱為"ADVERSESIDE-EFFECTSASSOCIATEDWITHADMINISTRATION OFANTI-HYALURONANAGENTSANDMETHODSFORAMELIORATINGORPREVENTING THESIDE-EFFECTS"，于2011年7月15日提交的美國專利申請?zhí)?3/135,817,其以 US20120020951公開并且要求美國臨時申請?zhí)?1/399, 993和61/455, 260的優(yōu)先權(quán)。 本申請還涉及于2011年7月15日提交的國際PCT申請?zhí)朠CT/US2011/044281，其以 W02012/012300公開并且還要求美國臨時申請?zhí)?1/399, 993和61/455, 260的優(yōu)先權(quán)。
[0006] 上述申請各自的主題整體引入作為參考。
[0007] 引入作為參考的電子提供的序列表
[0008] 隨同提交了電子版本的序列表，其內(nèi)容整體引入作為參考。電子文件于2013年3 月15日創(chuàng)建，大小891千字節(jié)，標(biāo)題為3108SEQPC1.txt。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0009] 本文提供的是含有抗透明質(zhì)酸劑例如聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向 紫杉烷，以及任選地含有進(jìn)一步的化療劑例如核苷類似物的組合療法。組合療法可以用于 治療癌癥特別是實體瘤癌癥的方法中。

【背景技術(shù)】
[0010] 抗透明質(zhì)酸劑例如透明質(zhì)酸降解酶例如PH20用于治療透明質(zhì)酸相關(guān)疾病或狀況 的方法中，所述疾病或狀況包括癌癥且特別是透明質(zhì)酸相關(guān)的癌癥或腫瘤。透明質(zhì)酸（透 明質(zhì)酸；HA)是糖胺聚糖，主要存在于哺乳動物結(jié)締組織、皮膚、軟骨和滑液中。在結(jié)締組織 中，與透明質(zhì)酸相關(guān)的結(jié)合水產(chǎn)生組織之間的水合基質(zhì)。HA在許多細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)尤其 是軟結(jié)締組織中發(fā)現(xiàn)。某些疾病包括實體瘤與透明質(zhì)酸的表達(dá)和/或產(chǎn)生相關(guān)?？雇该髻|(zhì) 酸劑是調(diào)節(jié)HA合成或降解，從而改變組織或細(xì)胞中HA水平的試劑。具體地，透明質(zhì)酸酶是 降解透明質(zhì)酸的酶。通過催化HA的分解，透明質(zhì)酸酶可以用于治療與HA或其他糖胺聚糖 累積相關(guān)的疾病或病癥，包括癌癥和腫瘤。對于癌癥且特別是實體瘤癌癥的治療，存在改善 或替代治療處理的需要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本文提供的是包含含有抗透明質(zhì)酸劑的組合物和含有腫瘤靶向紫杉烷的組合物 的組合。本文還提供的是包含含有抗透明質(zhì)酸劑的組合物、含有腫瘤靶向紫杉烷的組合物 和含有核苷類似物的組合物的組合。本文提供的組合中的任一種均可進(jìn)一步包含含有皮質(zhì) 類固醇的組合物。本文提供的是用于治療癌癥的方法，其中施用含有抗透明質(zhì)酸劑的組合 物和含有腫瘤靶向紫杉烷制劑的組合物。在一些例子中，該方法進(jìn)一步包括施用含有核苷 類似物的組合物。在一些例子中，該方法進(jìn)一步包括施用皮質(zhì)類固醇。在另外其他例子中， 該方法進(jìn)一步包括施用癌癥治療。在此類組合和方法中，所述試劑以如本文描述的治療有 效量提供。
[0012] 本文還提供的是組合療法的醫(yī)學(xué)用途。例如，本文提供的是抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤 靶向紫杉烷用于治療癌癥的用途，其中所述抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷分開或一起配 制。本文還提供的是抗透明質(zhì)酸劑用于治療癌癥的用途，其中所述治療包括同時、分開或順 次給對象施用腫瘤靶向紫杉烷。本文還提供的是用于治療癌癥的含有抗透明質(zhì)酸劑的組合 物，其中所述治療包括同時、分開或順次給對象施用腫瘤靶向紫杉烷。在本文醫(yī)學(xué)用途的例 子中，治療還可以包括與抗透明質(zhì)酸劑或腫瘤靶向紫杉烷同時、分開或順次給對象施用核 苷類似物。在其他或另外的例子中，治療可以包括與抗透明質(zhì)酸劑同時、分開或順次施用皮 質(zhì)類固醇。
[0013] 在本文提供的組合、組合物、方法和用途中，抗透明質(zhì)酸劑是透明質(zhì)酸降解酶或是 抑制透明質(zhì)酸合成的試劑。在一些例子中，抗透明質(zhì)酸劑是為透明質(zhì)酸酶的透明質(zhì)酸降解 酶。在其他例子中，抗透明質(zhì)酸劑是與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶。在一些例子中，抗透 明質(zhì)酸劑是抑制透明質(zhì)酸合成的試劑，選自針對HA合酶的有義或反義核酸分子或者是小 分子藥物。在一些例子中，抗透明質(zhì)酸劑是選自4-甲基傘形酮（MU)或其衍生物、或者來氟 米特或其衍生物的小分子藥物。在其他例子中，抗透明質(zhì)酸劑是選自6, 7-二羥基-4-甲基 香豆素或5, 7-二羥基-4-甲基香豆素的4-甲基傘形酮（MU)衍生物的小分子藥物。
[0014] 本文提供的是包含含有與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶的組合物和含有腫瘤靶 向紫杉烷的組合物的組合。本文還提供的是包含含有與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶的組 合物、含有腫瘤靶向紫杉烷的組合物和含有核苷類似物的組合物的組合。本文提供的組合 中的任何均可進(jìn)一步包含含有皮質(zhì)類固醇的組合物。本文提供的是用于治療癌癥的方法， 其中施用含有與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶的組合物和含有腫瘤靶向紫杉烷制劑的組 合物。在一些例子中，該方法進(jìn)一步包括施用含有核苷類似物的組合物。在一些例子中，該 方法進(jìn)一步包括施用皮質(zhì)類固醇。在另外其他例子中，該方法進(jìn)一步包括施用癌癥治療。
[0015] 本文提供的是包含含有透明質(zhì)酸降解酶的組合物和含有腫瘤靶向紫杉烷的組合 物的組合、方法和用途，其中所述透明質(zhì)酸降解酶與聚合物綴合。在組合的一些例子中，該 組合物配制用于直接施用，透明質(zhì)酸降解酶的濃度足以降解腫瘤相關(guān)透明質(zhì)酸，并且腫瘤 靶向紫杉烷的濃度足以實現(xiàn)腫瘤內(nèi)遞送。在一些例子中，與在不存在腫瘤內(nèi)紫杉烷制劑的 情況下的核苷脫氨酶的水平或活性相比較，腫瘤靶向紫杉烷制劑的濃度足以減少腫瘤內(nèi)核 苷脫氨酶蛋白質(zhì)水平或蛋白質(zhì)活性。在組合的一些例子中，透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向紫 杉烷共配制。在組合的其他例子中，透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向紫杉烷分開提供。
[0016] 在例子的任一個中，提供的組合進(jìn)一步包含含有核苷類似物的組合物。在特定例 子中，該組合物配制用于直接施用，并且核苷類似物的濃度足以實現(xiàn)腫瘤內(nèi)遞送。在組合的 一些例子中，核苷類似物與透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向紫杉烷分開提供。在組合的其他例 子中，核苷類似物與透明質(zhì)酸降解酶共配制或與腫瘤靶向紫杉烷共配制。在組合的另外其 他例子中，核苷類似物與透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向紫杉烷共配制。
[0017] 在本文提供的組合、方法和用途的例子的任一個中，含有透明質(zhì)酸降解酶的組合 物、含有腫瘤靶向紫杉烷的組合物和/或含有核苷類似物的組合物配制用于多重劑量施 用。在本文提供的組合的其他例子中，含有透明質(zhì)酸降解酶的組合物、含有腫瘤靶向紫杉烷 的組合物和/或含有核苷類似物的組合物配制用于單次劑量施用。
[0018] 在本文提供的組合、方法和用途的例子的任一個中，透明質(zhì)酸降解酶組合物 含有或配制為含有在下述之間或大約在下述之間的與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶 ： 0· 5μg_50mg、100μg-lmg、lmg_20mg、100μg_5mg、0. 5μg_1450ug、lug-ΙΟΟΟμg、 5μg-1250μg、10μg-750μg、50μg-500μg、0. 5μg-500μg、500μg-1450μg〇在本文 提供的組合的其他例子中，與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶具有至少或約20, 000U/mg、 25, 000U/mg、30, 000U/mg、31, 000U/mg、32, 000U/mg、33, 000U/mg、34, 000U/mg、35, 000U/mg、 36, 000U/mg、37, 000U/mg、38、000U/mg、39, 000U/mg、40, 000U/mg、45, 000U/mg、50, 000U/mg、 55, 000U/mg、60,OOOU/mg或更多的比活性。在本文提供的組合的進(jìn)一步例子中，透明質(zhì)酸降 解酶組合物含有在下述之間或大約在下述之間的與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶：150單 位（U)-60, 000U、300U-30, 000U、500U-25, 000U、500U-10, 000U、150U-15, 000U、150U-5000U、 500U-1000U、5000U-45, 000U10, 000U-50, 000U或 20, 000U-60, 000U。含有透明質(zhì)酸降解酶 的組合物體積可以在下述之間或大約在下述之間：〇. 5mL-100mL、0. 5mL-50mL、0. 5mL-10mL、 lmL-40mL、lmL-20mL、ImL-IOmL或3mL-10mL。在本文提供的組合的一些例子中，含有透明質(zhì) 酸降解酶的組合物含有組氨酸和/或NaCl。在其他例子中，含有透明質(zhì)酸降解酶的組合物 具有在6. 0-7. 4之間或大約在6. 0-7. 4之間的pH。
[0019] 在本文提供的組合、方法和用途的例子的任一個中，透明質(zhì)酸降解酶是透明質(zhì)酸 酶。例如，透明質(zhì)酸酶可以是PH20或其截短形式，所述截短形式缺乏C末端糖基磷脂酰肌 醇（GPI)附著位點或GPI附著位點的部分。在一些例子中，透明質(zhì)酸酶是為人或非人PH20 的PH20。在具體例子中，透明質(zhì)酸降解酶是截短的PH20并且截短的PH20包含含有SEQID NO:1的氨基酸36-464的氨基酸序列，或包含與含有SEQIDNO: 1的至少氨基酸36-464的氨 基酸序列具有至少85%序列相同性且保留透明質(zhì)酸酶活性的氨基酸序列。在一些例子中， 透明質(zhì)酸酶是含有與含有SEQIDNO: 1的至少氨基酸36-464的氨基酸序列具有至少86%、 87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%序列相同性且 保留透明質(zhì)酸酶活性的氨基酸序列的PH20。
[0020] 在本文提供的組合、方法和用途的例子的任一個中，PH20含有這樣的氨基酸序 列，其含有在SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列的氨基酸位置465、466、467、468、469、470、 471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、 490、491、492、493、494、495、496、497、498、499 或 500 后的C末端截短，或是其與含有在SEQIDNO: 1中所示的氨基酸序列的氨基酸位置465、466、467、468、469、470、471、472、473、 474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、 493、494、495、496、497、498、499或500后的C末端截短的氨基酸序列顯示出至少85%序 列相同性且保留透明質(zhì)酸酶活性的變體。例如PH20含有這樣的氨基酸序列，其與含有在 SEQIDNO: 1中所示的氨基酸序列的氨基酸位置465、466、467、468、469、470、471、472、473、 474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、 493、494、495、496、497、498、499或500后的C末端截短的氨基酸序列具有至少86 %、87 %、 88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性且保留 透明質(zhì)酸酶活性。
[0021] 在本文提供的組合、方法和用途的例子的任一個中，腫瘤靶向紫杉烷是紫杉醇或 多西他賽或者是其類似物、衍生物或前藥。腫瘤靶向紫杉烷可以與腫瘤靶向部分直接或間 接連接。在一些例子中，腫瘤靶向紫杉烷配制為選自膠束、納米顆粒、微球體、脂質(zhì)體或水凝 膠的遞送媒介物。遞送媒介物可以與腫瘤靶向部分直接或間接連接。在一些例子中，腫瘤 靶向部分選自大分子、蛋白質(zhì)、肽、單克隆抗體或脂肪酸脂質(zhì)。在其他例子中，腫瘤靶向部分 是選自西妥昔單抗或曲妥珠單抗的單克隆抗體。在另外其他例子中，腫瘤靶向部分是白蛋 白。在一些例子中，腫瘤靶向紫杉烷是白蛋白結(jié)合的紫杉醇或白蛋白結(jié)合的多西他賽。
[0022] 在本文提供的組合、方法和用途的例子的任一個中，腫瘤靶向紫杉烷組合物 含有或配制為含有下述之間或大約在下述之間的腫瘤靶向紫杉烷：10mg-1000mg，例 如 20mg-500mg、10mg-250mg、75mg-400mg、100mg-200mg、150mg-400mg、200mg-800mg、 50mg-200mg或50mg-150mg。在其他例子中，含有腫瘤祀向紫杉燒的組合物體積可以在下 述之間或大約在下述之間：〇· 5mL-100mL、lmL-500mL、0. 5mL-50mL、0. 5mL-10mL、lmL-40mL、 lmL_20mL、ImL-IOmL或 3mL_10mL〇
[0023] 在本文提供的組合、方法和用途的例子的任一個中，核苷類似物是嘌呤或嘧啶類 似物或其衍生物。在一些例子中，核苷類似物選自氟嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-氟-2' -脫氧胞 苷、阿糖胞苷、吉西他濱、曲沙他濱、地西他濱、氮雜胞苷、假異胞苷（pseudoisocytidine)、 Zebularine、安西他濱、法扎拉濱、6-氮雜胞苷、卡培他濱、N4-十八烷基-阿糖胞苷、反油酸 阿糖胞苷、氟達(dá)拉濱、克拉屈濱、氯法拉濱、奈拉濱、呋咯地辛（forodesine)和噴司他丁或 其衍生物。在一個例子中，核苷類似物是核苷脫氨酶的底物，所述核苷脫氨酶是腺苷脫氨酶 或胞苷脫氨酶。在一些例子中，核苷類似物選自氟達(dá)拉濱、阿糖胞苷、吉西他濱、地西他濱和 氮雜胞苷或其衍生物。
[0024] 在本文提供的組合、方法和用途的例子的任一個中，核苷類似物組合物含有或配 制為含有l(wèi)〇〇mg-5000mg、500mg-5000mg、500mg-2500mg、1000mg-2500mg、1500mg-2500mg或 2000mg-5000mg核苷類似物。在其他例子中，含有核苷類似物的組合物體積可以在下述之間 或大約在下述之間：〇. 5mL-1000mL，例如 0. 5mL-100mL、0. 5mL-10mL、lmL-500mL、lmL-10mL。
[0025] 本文提供的組合、方法和用途的任一個均可進(jìn)一步包含含有皮質(zhì)類固醇的組合 物。在一些例子中，皮質(zhì)類固醇是選自可的松、地塞米松、氫化可的松、甲潑尼龍、潑尼松 龍和潑尼松的糖皮質(zhì)激素。在一些例子中，皮質(zhì)類固醇組合物含有或配制為含有下述之 間或大約在下述之間的皮質(zhì)類固醇：〇·l_20mg、0.l_15mg、0.l_10mg、0·l_5mg、0. 2_20mg、 0· 2_15mg、0. 2_10mg、0· 2_5mg、0. 4_20mg、0· 4_15mg、0. 4_10mg、0· 4_5mg、0. 4-4mg、l_20mg、 l_15mg或I-IOmg0
[0026] 在本文提供的組合、方法和用途的例子的任一個中，該組合物配制用于經(jīng)口、靜脈 內(nèi)（IV)、皮下、肌內(nèi)、腫瘤內(nèi)、皮內(nèi)、局部、經(jīng)皮、經(jīng)直腸、鞘內(nèi)或表皮下施用。例如，該組合物 配制用于靜脈內(nèi)施用或皮下施用。
[0027] 在本文提供的組合、方法和用途的例子的任一個中，所述聚合物是聚亞烷基二醇、 右旋糖酐、普魯蘭（pullulan)或纖維素。在一個例子中，所述聚合物是選自聚乙二醇（PEG) 或甲氧基聚乙二醇（mPEG)的聚亞烷基二醇。在具體例子中，所述聚合物是PEG，并且PEG 是分支或線性PEG。在一些例子中，所述聚合物通過與下述反應(yīng)而產(chǎn)生：甲氧基-聚（乙 二醇）琥珀酰亞胺丁酸酯（mPEG-SBA) (5kDa);甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丁酸酯 (mPEG-SBA) (20kDa);甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丁酸酯（mPEG-SBA) (30kDa);甲氧 基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺α-甲基丁酸酯（mPEG-SMB) (20kDa);甲氧基-聚（乙二醇） 琥拍酰亞胺ct-甲基丁酸酯（mPEG-SMB) (30kDa);甲氧基-聚（乙二醇）-丁醒（mPEG- 丁 醛）（30kDa)，甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丙酸酯（mPEG-SPA) (20kDa);甲氧基-聚 (乙二醇）琥珀酰亞胺丙酸酯（mPEG-SPA) (30kDa);(甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀 酰亞胺酯（mPEG2-NHS) (IOkDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰亞胺酯 (mPEG2-NHS) (20kDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰亞胺酯（mPEG2-NHS) (40kDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰亞胺酯（mPEG2-NHS) (60kDa分支 的）；生物素-聚（乙二醇）-N-羥基琥珀酰亞胺酯（生物素-PEG-NHS) (5kDa生物素化的）； 聚（乙二醇）-對硝基苯基碳酸酯（PEG-對硝基苯基碳酸酯）（30kDa);或聚（乙二醇）-丙 醛（PEG-丙醛）（30kDa)。在具體例子中，所述聚合物是具有30或約30千道爾頓分子量的 PEG。
[0028] 本文提供的組合的任何均可包裝為試劑盒且任選包括使用說明書。
[0029] 本文還提供的是用于治療癌癥的方法或用途，其中施用含有透明質(zhì)酸降解酶的組 合物并且施用含有腫瘤靶向紫杉烷制劑的組合物，其中所述透明質(zhì)酸降解酶與聚合物綴 合。在該方法的例子的任一個中，還施用含有核苷類似物的組合物。
[0030] 在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，癌癥是腫瘤。在一個例子中，腫瘤 是實體瘤。在本文方法或用途的例子的任一個中，與相同組織類型的非癌性組織相比較或 與相同腫瘤類型的非轉(zhuǎn)移性腫瘤相比較，所述腫瘤具有增加的細(xì)胞和/或基質(zhì)透明質(zhì)酸表 達(dá)。在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，所述癌癥選自胰腺癌、卵巢癌、肺癌、結(jié)腸 癌、前列腺癌、子宮頸癌、頭頸癌和乳腺癌。在具體例子中，所述癌癥是胰腺癌。
[0031] 在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，所述透明質(zhì)酸降解酶是透明質(zhì)酸 酶。例如，所述透明質(zhì)酸酶是PH20或其截短形式，所述截短形式缺乏C末端糖基磷脂酰肌醇 (GPI)附著位點或GPI附著位點的部分。在具體例子中，所述透明質(zhì)酸酶是為人或非人PH20 的PH20。在特定例子中，所述透明質(zhì)酸降解酶是截短的PH20并且截短的PH20包含含有SEQ IDNO: 1的氨基酸36-464的氨基酸序列或包含與至少含有SEQIDNO: 1的氨基酸36-464 的氨基酸序列具有至少85%序列相同性且保留透明質(zhì)酸酶活性的氨基酸序列。在一些例 子中，PH20含有這樣的氨基酸序列，其與至少含有SEQIDNO: 1的氨基酸36-464的氨基酸 序列具有至少 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或99%序列相同性且保留透明質(zhì)酸酶活性。在其他例子中，PH20含有這樣的氨基酸序列， 其含有在SEQIDNO: 1中所示的氨基酸序列的氨基酸位置465、466、467、468、469、470、471、 472、 473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、 491、 492、493、494、495、496、497、498、499 或 500 后的C末端截短，或是其與含有在SEQID N0:1中所示的氨基酸序列的氨基酸位置465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、 475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、 494、495、496、497、498、499或500后的C末端截短的氨基酸序列顯示出至少85%序列相同 性且保留透明質(zhì)酸酶活性的變體。在另外其他例子中，PH20含有這樣的氨基酸序列，其與含 有在SEQIDNO: 1中所示的氨基酸序列的氨基酸位置465、466、467、468、469、470、471、472、 473、 474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、 492、 493、494、495、496、497、498、499或500后的C末端截短的氨基酸序列具有至少86%、 87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%序列相同性且 保留透明質(zhì)酸酶活性。
[0032] 在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，所述聚合物是聚亞烷基二醇、右旋 糖酐、普魯蘭或纖維素。在一個例子中，該聚合物是選自聚乙二醇（PEG)或甲氧基聚乙二醇 (mPEG)的聚亞烷基二醇。在具體例子中，該聚合物是PEG并且PEG是分支或線性PEG。在 本文提供的方法或用途的例子的任一個中，該聚合物通過與下述反應(yīng)而產(chǎn)生：甲氧基-聚 (乙二醇）琥珀酰亞胺丁酸酯（mPEG-SBA) (5kDa);甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丁酸酯 (mPEG-SBA) (20kDa);甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丁酸酯（mPEG-SBA) (30kDa);甲氧 基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺α-甲基丁酸酯（mPEG-SMB) (20kDa);甲氧基-聚（乙二醇） 琥拍酰亞胺ct-甲基丁酸酯（mPEG-SMB) (30kDa);甲氧基-聚（乙二醇）-丁醒（mPEG- 丁 醛）（30kDa)，甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丙酸酯（mPEG-SPA) (20kDa);甲氧基-聚 (乙二醇）琥珀酰亞胺丙酸酯（mPEG-SPA) (30kDa);(甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀 酰亞胺酯（mPEG2-NHS) (IOkDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰亞胺酯 (mPEG2-NHS) (20kDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰亞胺酯（mPEG2-NHS) (40kDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰亞胺酯（mPEG2-NHS) (60kDa分 支的）；生物素-聚（乙二醇）-N-羥基琥珀酰亞胺酯（生物素-PEG-NHS) (5kDa生物素化 的）；聚（乙二醇）-對硝基苯基碳酸酯（PEG-對硝基苯基碳酸酯）（30kDa);或聚（乙二 醇）-丙醛（PEG-丙醛）（30kDa)。在具體例子中，該聚合物是具有30或約30千道爾頓分子 量的PEG。
[0033] 在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，透明質(zhì)酸降解酶以在下述之間或 大約在下述之間的劑量范圍量施用或者配制用于以在下述之間或大約在下述之間的劑 量范圍量施用：〇· 01μg/kg-25mg/kg(對象）、0· 5μg/kg_25mg/kg、0. 5μg/kg-10mg/kg、 0· 02mg/kg_l· 5mg/kg、0. 01μg/kg-15μg/kg、0. 05μg/kg-10μg/kg、0. 75μg/kg-7. 5μg/ kg或I. 0μg/kg-3. 0μg/kg(對象）。在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，透 明質(zhì)酸降解酶以在下述之間或大約在下述之間的劑量范圍量施用或者配制用于以在下 述之間或大約在下述之間的劑量范圍量施用：1單位/kg-800, 000單位/kg(對象），例 如10-800,OOO單位/kg、10-750,OOO單位/kg、10-700,OOO單位/kg、10-650,OOO單位 /kg、10-600, 000單位/kg、10-550, 000單位/kg、10-500, 000單位/kg、10-450, 000單位 / kg、10-400, 000單位/kg、10-350, 000單位/kg、10-320, 000單位/kg、10-300, 000單位 /kg、10-280, 000單位/kg、10-260, 000單位/kg、10-240, 000單位/kg、10-220, 000單 位/kg、10-200, 000單位/kg、10-180, 000單位/kg、10-160, 000單位/kg、10-140, 000單 位/kg、10-120, 000單位/kg、10-100, 000單位/kg、10-80, 000單位/kg、10-70, 000單 位/kg、10-60, 000單位/kg、10-50, 000單位/kg、10-40, 000單位/kg、10-30, 000單位 / kg、10-20, 000單位/kg、10-15, 000單位/kg、10-12, 800單位/kg、10-10, 000單位/kg、 10-9, 000單位/kg、10-8, 000單位/kg、10-7, 000單位/kg、10-6, 000單位/kg、10-5, 000 單位/kg、10-4, 000單位/kg、10-3, 000單位/kg、10-2, 000單位/kg、10-1，000單位/kg、 10-900單位/kg、10-800單位/kg、10-700單位/kg、10-500單位/kg、10-400單位/kg、 10-300單位/kg、10-200單位/kg、10-100單位/kg、16-600, 000單位/kg、16-500, 000單 位/kg、16-400, 000單位/kg、16-350, 000單位/kg、16-320, 000單位/kg、16-160, 000單位 /kg、16-80, 000單位/kg、16-40, 000單位/kg、16-20, 000單位/kg、16-16, 000單位/kg、 16-12, 800單位/kg、16-10, 000單位/kg、16-5, 000單位/kg、16-4, 000單位/kg、16-3, 000 單位/kg、16-2, 000單位/kg、16-1，000單位/kg、16-900單位/kg、16-800單位/kg、16-700 單位/kg、16-500單位/kg、16-400單位/kg、16-300單位/kg、16-200單位/kg、16-100 單位/kg、160-12, 800單位/kg、160-8, 000單位/kg、160-6, 000單位/kg、160-4, 000單 位/kg、160-2, 000單位/kg、160-1，000單位/kg、160-500單位/kg、500-5000單位/kg、 1000-100, 000單位/kg或1000-10, 000單位/kg(對象）。
[0034] 在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，腫瘤靶向紫杉烷是紫杉醇或多西他 賽或者是其類似物、衍生物或前藥。腫瘤靶向紫杉烷可以與腫瘤靶向部分直接或間接連接。 在一些例子中，腫瘤靶向紫杉烷配制為選自膠束、納米顆粒、微球體、脂質(zhì)體或水凝膠的遞 送媒介物。遞送媒介物可以與腫瘤靶向部分直接或間接連接。在一些例子中，腫瘤靶向部分 選自大分子、蛋白質(zhì)、肽、單克隆抗體或脂肪酸脂質(zhì)。在其他例子中，腫瘤靶向部分是選自西 妥昔單抗或曲妥珠單抗的單克隆抗體。在另外一個例子中，腫瘤靶向部分是白蛋白。在特 定例子中，腫瘤靶向紫杉烷是白蛋白結(jié)合的紫杉醇或白蛋白結(jié)合的多西他賽。在本文提供 的方法或用途的例子的任一個中，腫瘤靶向紫杉烷以在下述之間或大約在下述之間的劑量 范圍施用或者配制用于以在下述之間或大約在下述之間的劑量范圍施用：lmg/m2-1000mg/ m2(對象的體表面積）、10mg/m2-500mg/m2、50mg/m2-400mg/m2或25mg/m2-300mg/m2。
[0035] 在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，核苷類似物是嘌呤或嘧啶類似物或 其衍生物。在例子的任一個中，核苷類似物選自氟嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-氟-2' -脫氧胞苷、 阿糖胞苷、吉西他濱、曲沙他濱、地西他濱、氮雜胞苷、假異胞苷、Zebularine、安西他濱、法 扎拉濱、6-氮雜胞苷、卡培他濱、N4-十八烷基-阿糖胞苷、反油酸阿糖胞苷、氟達(dá)拉濱、克 拉屈濱、氯法拉濱、奈拉濱、呋咯地辛和噴司他丁或其衍生物。在特定例子中，核苷類似物 是核苷脫氨酶的底物并且核苷脫氨酶是腺苷脫氨酶或胞苷脫氨酶。在例子中，核苷類似物 選自氟達(dá)拉濱、阿糖胞苷、吉西他濱、地西他濱和氮雜胞苷或其衍生物。在本文提供的方法 或用途的例子的任一個中，核苷類似物以在下述之間或大約在下述之間的劑量范圍施用或 者配制用于以在下述之間或大約在下述之間的劑量范圍施用：100mg/m2-2500mg/m2、500mg/ m2-2000mg/m2、750mg/m2-1500mg/m2、1000mg/m2-1500mg/m2 或 500mg/m2-1500mg/m2。在本文提 供的方法或用途的其他例子中，核苷類似物以這樣的量施用或配制用于以這樣的量施用， 所述量是至少或至少約200mg/m2或500mg/m2,但小于1000mg/m2或1250mg/m2。
[0036] 在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，該組合物經(jīng)口、靜脈內(nèi)（IV)、皮下、 肌內(nèi)、腫瘤內(nèi)、皮內(nèi)、局部、經(jīng)皮、經(jīng)直腸、鞘內(nèi)或表皮下施用，或者配制用于經(jīng)口、靜脈內(nèi) (IV)、皮下、肌內(nèi)、腫瘤內(nèi)、皮內(nèi)、局部、經(jīng)皮、經(jīng)直腸、鞘內(nèi)或表皮下施用。在特定例子中，該 組合物靜脈內(nèi)施用或皮下施用。在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，透明質(zhì)酸降 解酶在腫瘤靶向紫杉烷之前、同時或接近同時、順次或間歇施用或使用。
[0037] 在本文提供的方法的例子中，透明質(zhì)酸降解酶在腫瘤靶向紫杉烷施用前施用。在 一個例子中，透明質(zhì)酸降解酶在腫瘤靶向紫杉烷施用前至少或至少約或約或5分鐘、15分 鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、12小時、16小時、18小時、20小 時、22小時、24小時、30小時、36小時、40小時或48小時施用。在本文提供的方法的另一個 例子中，透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向紫杉烷同時或接近同時施用。
[0038] 在本文提供的方法的例子的任一個中，透明質(zhì)酸降解酶的施用頻率是每周兩次、 每周一次、每14天一次、每21天一次或每月一次。在其他例子中，腫瘤靶向紫杉烷的施用 頻率是每周兩次、每周一次、每14天一次、每21天一次或每月一次。在本文提供的方法或 用途的例子的任一個中，透明質(zhì)酸降解酶和/或腫瘤靶向紫杉烷在核苷類似物之前、同時 或接近同時、順次或間歇施用，或者配制用于在核苷類似物之前、同時或接近同時、順次或 間歇施用。
[0039] 在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向紫杉烷 在施用周期中施用預(yù)定周數(shù)。在一個例子中，預(yù)定周數(shù)可以是至少兩周、至少三周或至少四 周。在一些例子中，透明質(zhì)酸降解酶在核苷類似物施用前至少或至少約或約或5分鐘、15分 鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、12小時、16小時、18小時、20小 時、22小時、24小時、30小時、36小時、40小時或48小時施用。在一些例子中，腫瘤靶向紫 杉烷在核苷類似物施用前至少或至少約或約或1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小 時、12小時、16小時、18小時、20小時、22小時或24小時施用。在特定例子中，腫瘤靶向紫 杉烷與核苷類似物同時或接近同時施用。在提供的方法中，核苷類似物的施用頻率可以是 每周兩次、每周一次、每14天一次、每21天一次或每月一次。在一些例子中，核苷類似物在 施用周期中施用預(yù)定周數(shù)。例如，預(yù)定周數(shù)可以是至少兩周、至少三周或至少四周。在本文 提供的方法的另一個例子中，在核苷類似物施用預(yù)定周數(shù)后，施用中斷第一預(yù)定時間段，并 且隨后重新開始至少一周。
[0040] 在本文提供的方法或用途的特定例子中，透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向紫杉烷在核 苷類似物施用之前施用；同時或接近同時施用；并且以每周兩次或兩周一次的頻率施用預(yù) 定周數(shù)。在一些例子中，預(yù)定周數(shù)是四周。在此類例子中，核苷類似物在透明質(zhì)酸降解酶和 腫瘤靶向紫杉烷施用之后至少或至少約或約或5分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小 時、4小時、6小時、8小時、12小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、30小時、36 小時、40小時或48小時施用。
[0041] 在本文提供的方法或用途的例子的任一個中，核苷類似物每周一次施用預(yù)定周 數(shù)。在一個例子中，預(yù)定周數(shù)是三周。在此類例子中，施用可以中斷至少一周。
[0042] 在本文提供的方法或用途的任一個中，施用周期和/或施用中斷可以重復(fù)多次。 在一些例子中，在第一施用周期中的施用頻率與后續(xù)施用周期中的施用頻率相同或不同。 例如，施用頻率在第一施用周期中是每周兩次，對于后續(xù)施用周期是每周一次。
[0043] 本文提供的方法或用途的任一個均可進(jìn)一步包括施用皮質(zhì)類固醇的步驟或包括 施用皮質(zhì)類固醇的治療。在此類例子的任一個中，皮質(zhì)類固醇是可以選自可的松、地塞米 松、氫化可的松、甲潑尼龍、潑尼松龍和潑尼松的糖皮質(zhì)激素。在該方法的一些例子中，皮 質(zhì)類固醇在透明質(zhì)酸降解酶施用之前、同時、間歇或之后施用。在一個例子中，皮質(zhì)類固醇 與透明質(zhì)酸降解酶共施用。在另一個例子中，皮質(zhì)類固醇在透明質(zhì)酸降解酶施用之前至少 或約至少1小時施用。在提供的方法的另一個例子中，皮質(zhì)類固醇在透明質(zhì)酸降解酶施用 之后至少8小時-12小時施用。在一些例子中，施用或配制用于施用的皮質(zhì)類固醇量在下 述之間或大約在下述之間：〇·l_20mg、0.l_15mg、0.l_10mg、0·l_5mg、0. 2_20mg、0· 2_15mg、 0· 2_10mg、0· 2_5mg、0. 4_20mg、0· 4_15mg、0. 4_10mg、0· 4_5mg、0. 4-4mg、l-20mg、l_15mg或 l-10mg。皮質(zhì)類固醇可以經(jīng)口施用。
[0044] 本文提供的方法或用途的任一個均可進(jìn)一步包括癌癥治療的施用。在一些例子 中，癌癥治療選自手術(shù)、放射、化療劑、生物制劑、多肽、抗體、肽、小分子、基因療法載體、病 毒和DNA。本文提供的方法的任一個均可用于治療其為人的對象。
[0045] 本文還提供的是本文提供的組合物組合可以用于治療癌癥的用途。本文提供的組 合物組合中的任一均可用于治療癌癥。在一些例子中，癌癥是腫瘤。例如，癌癥是實體瘤。 在一些例子中，與相同組織類型的非癌性組織相比較或與相同腫瘤類型的非轉(zhuǎn)移性腫瘤相 比較，所述腫瘤具有增加的細(xì)胞和/或基質(zhì)透明質(zhì)酸表達(dá)。在一些例子中，癌癥選自胰腺 癌、卵巢癌、肺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、子宮頸癌、頭頸癌和乳腺癌。在特定例子中，癌癥是胰 腺癌。本文還提供的是含有與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶的組合和含有腫瘤靶向紫杉烷 的組合物用于增加核苷類似物的腫瘤內(nèi)活性的用途。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0046] 圖1描述了PEGPH20 (P)和/或nab-紫杉醇（NAB，N)對小鼠BxPC-3PDA腫瘤異種 移植物模型中的腫瘤生長的作用。
[0047] 圖2描述了施用不同劑量的吉西他濱（GEM)對小鼠BxPC-3PDA腫瘤異種移植物模 型中的腫瘤生長的作用。
[0048] 圖3描述了PEGPH20 (P)、吉西他濱（GEM)和/或nab-紫杉醇（NAB，N)對小鼠 BxPC-3PDA腫瘤異種移植物模型中的腫瘤生長的作用。
[0049] 圖4描述了在小鼠BxPC-3PDA腫瘤異種移植物模型中，用PEGPH20(P)、吉西他濱 (GEM)和/或nab-紫杉醇（NAB，N)處理的小鼠的平均存活時間。
[0050] 圖5描述了在小鼠BxPC-3PDA腫瘤異種移植物模型中，來自用PEGPH20(P)、吉西 他濱（GEM)和/或nab-紫杉醇（NAB，N)處理的小鼠的血清的CA19-9 (圖5A)和CEA標(biāo)記 (圖5B)水平。
[0051] 圖6描述了在異種移植物模型中，PEGPH20和白蛋白綴合的紫杉醇（Ab-pac)的腫 瘤生長抑制。圖6A描述了在MDA-MB-468/HAS3腫瘤模型中，用媒介物、與白蛋白綴合的紫杉 醇（Ab-pac)、PEGPH20、或Ab-pac和PEGPH20處理的小鼠中的腫瘤生長抑制。圖6B描述了 在MDA-MB-468/HAS3腫瘤模型中，用媒介物、以lmg/kg的與白蛋白綴合的紫杉醇（Ab-pac)、以 3mg/kg的Ab-pac、以lmg/kg的Ab-pac和PEGPH20、或以 10mg/kg的Ab-pac處理的小鼠 中的腫瘤生長抑制。

【具體實施方式】
[0052] _既要
[0053]A.定義
[0054] B.抗透明質(zhì)酸劑組合療法
[0055] 1.實體瘤和腫瘤靶向療法 [0056]a.腫瘤靶向紫杉烷
[0057] b.抗透明質(zhì)酸劑
[0058] 2.抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷組合療法
[0059] C.組合療法試劑
[0060] 1.抗透明質(zhì)酸劑
[0061]a.抑制透明質(zhì)酸合成的試劑
[0062] b.透明質(zhì)酸降解酶和聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶
[0063] i.透明質(zhì)酸酶
[0064] (a)哺乳動物型透明質(zhì)酸酶
[0065]PH20
[0066](b)細(xì)菌透明質(zhì)酸酶
[0067] (C)來自水蛭、其他寄生蟲和甲殼類的透明質(zhì)酸酶
[0068]ii.其他透明質(zhì)酸降解酶
[0069]iii.可溶性透明質(zhì)酸降解酶
[0070] (a)可溶性人PH2〇
[0071] (b)rHuPH20
[0072]iv.透明質(zhì)酸降解酶的糖基化
[0073]V.經(jīng)修飾的（聚合物綴合的）透明質(zhì)酸降解酶[0074] 聚乙二醇化可溶性透明質(zhì)酸降解酶
[0075] 2.紫杉烷及其制劑
[0076]a.紫杉烷
[0077]b.腫瘤或基質(zhì)靶向紫杉烷
[0078] 白蛋白結(jié)合的紫杉烷
[0079] 3.進(jìn)一步的化療劑（例如核苷類似物）
[0080] 示例性核苷類似物
[0081]i.吉西他濱
[0082]ii.阿糖胞苷
[0083]ii.地西他濱
[0084] iv.氮雜胞苷
[0085]D.產(chǎn)生透明質(zhì)酸降解酶的核酸及編碼多肽的方法
[0086] 1.載體和細(xì)胞
[0087] 2.表達(dá)
[0088] a.原核細(xì)胞
[0089] b.酵母細(xì)胞
[0090] c.昆蟲細(xì)胞
[0091] d.哺乳動物細(xì)胞
[0092] e.植物
[0093] 3.純化技術(shù)
[0094] 4.透明質(zhì)酸降解酶多肽的聚乙二醇化
[0095] E.藥物組合物和制劑
[0096] 1.制劑
[0097] a.注射劑、溶液和乳狀液
[0098] b.凍干粉末
[0099] c.局部施用
[0100]d.用于其他施用途徑的組合物
[0101] 2.制劑量
[0102] 3.包裝和制造物品
[0103]F.評價活性、生物利用度和藥物代謝動力學(xué)的方法
[0104]1.體外測定法
[0105] a.透明質(zhì)酸降解酶的透明質(zhì)酸酶活性 [0106]b.紫杉烷活性
[0107]c.抗癌劑活性
[0108]2.體內(nèi)動物模型
[0109] 3.藥物代謝動力學(xué)和耐受性
[0110]G.組合療法的方法和用途
[0111] 1.癌癥
[0112] 用于治療的對象選擇
[0113] 2.劑量和施用
[0114] 3.給藥方案：施用頻率和周期
[0115] 4.另外的組合療法
[0116]a.皮質(zhì)類固醇
[0117]b.抗癌劑及其他治療
[0118]H.實施例
[0119]A.定義
[0120] 除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù) 人員通常理解相同的含義。除非另有說明，否則本文整體公開內(nèi)容自始至終提及的所有專 利、專利申請、公開申請和出版物、基因庫序列、數(shù)據(jù)庫、網(wǎng)站及其他公開材料整體引入作為 參考。在存在用于本文術(shù)語的多個定義的情況下，以這個部分中的定義為準(zhǔn)。當(dāng)提及URL 或其他此類標(biāo)識符或地址時，應(yīng)當(dāng)理解此類標(biāo)識符可以改變，并且在因特網(wǎng)上的特定信息 可以是不定的，但等價信息可以通過搜索因特網(wǎng)找到。對其的提及證明此類信息的可用性 和公開傳播。
[0121] 如本文使用的，"組合療法"指其中對象給予兩種或更多種治療劑例如至少兩種或 至少三種治療劑用于治療單一疾病的治療。對于本文目的，組合療法包括用聚合物綴合的 透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向紫杉烷以及任選地進(jìn)一步的抗癌劑或化療劑例如核苷類似物 的療法。
[0122] 如本文使用的，紫杉烷指抗有絲分裂劑或抗微管劑家族，其由于干擾微管聚合通 過停止有絲分裂和細(xì)胞分裂而抑制細(xì)胞生長。紫杉烷包括由紅豆杉屬（Taxus)植物（紫杉） 產(chǎn)生的天然二萜。紫杉烷還包括顯示出抗有絲分裂或抗微管活性的合成產(chǎn)生的紫杉烷。通 常，紫杉烷共享含有四個環(huán)（六元A和C環(huán)、八元B環(huán)和四元D環(huán)）的共同核心結(jié)構(gòu)。示例 性紫杉烷是紫杉醇、紫杉烷或其衍生物或類似物。
[0123] 如本文使用的，抗有絲分裂活性指抑制、減少或預(yù)防有絲分裂。由于此類活性，細(xì) 胞生長得到抑制、減少或預(yù)防。例如，如果與在不存在試劑的情況下的細(xì)胞生長相比較，細(xì) 胞生長被抑制至少或約至少或20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或更多，則該 試劑顯示出抗有絲分裂活性。
[0124] 如本文使用的，抗微管活性指例如通過降低、減少或預(yù)防微管聚合而干擾微管的 任何試劑活性。因此，抗微管活性可以指穩(wěn)定微管的任何活性，所述微管是天然不穩(wěn)定的 并經(jīng)歷動態(tài)解聚（縮短）和聚合（延長）過程。例如，抗微管活性通過試劑例如紫杉烷實 現(xiàn)，所述紫杉烷與微管末端相互作用，由此冷凍或預(yù)防解聚或裝配。評價微管聚合的測定法 是本領(lǐng)域已知的，并且示例性測定法在本文中描述。如果與在不存在所述試劑的情況下的 聚合相比較，所述試劑使微管聚合抑制至少或約至少或20%、30%、40%、50%、60%、70%、 80 %、90 %或更多，則存在抗微管活性。
[0125] 如本文使用的，"腫瘤靶向紫杉烷"指這樣的紫杉烷，其與部分直接或間接連接并 且與未連接至腫瘤部分的紫杉烷相比較，顯示出對于腫瘤表面上的一種或多種分子增加的 特異性。例如，所述部分可以是大分子、肽、蛋白質(zhì)、抗體（例如單克隆抗體）或脂質(zhì)，其與 腫瘤表面上存在的分子例如腫瘤表面上存在的糖、脂質(zhì)、糖胺聚糖或蛋白質(zhì)相互作用或結(jié) 合（例如特異性結(jié)合）。一般地，腫瘤表面上存在的分子存在的水平或程度是異常的或不同 于非腫瘤組織或正常組織或細(xì)胞。
[0126] 如本文使用的，短語"足以實現(xiàn)腫瘤內(nèi)遞送"意指紫杉烷顯示出對腫瘤細(xì)胞比對非 腫瘤細(xì)胞增加或更大的靶向，并且因此顯示出在其中增加或更大的細(xì)胞內(nèi)定位。評價腫瘤 內(nèi)遞送的測定法可以包括體外或體內(nèi)測定法，例如結(jié)合測定法或亞細(xì)胞定位測定法，由此 在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間比較藥物例如紫杉烷的結(jié)合或細(xì)胞內(nèi)水平或量。此類測定法包 括但不限于免疫測定法，包括放射性免疫測定法或ELISA(例如基于裂解產(chǎn)物的ELISA或紅 夕卜ELISA;還參見Svojanovsky等人（1999)JournalofPharmaceuticalandBiomedical Analysis，20:549-555);基于微管蛋白的生物測定法（參見例如Suye等人（1997)Anal. Chem. ,69:3633-3635);組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)（Hong等人（2007)Μ〇1·Cancer.Ther.， 6:3239);HPLC;基于熒光的測定法包括流式細(xì)胞術(shù)及其他方法（參見例如Sheikh等人 (2001)Biosensors&Bioelectronics，16:647-652)，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他相似 測定法。用于此類方法中的針對紫杉烷的抗體是可獲得的（參見例如Grothaus等人（1995) JNat.Prod.，58:1003-14;Leu等人（1993)CancerRes.，53:1388-1391 ;目錄號ab26953，Abeam)。還可以使用生物傳感器技術(shù)（參見例如Braunhut等人（2005)AssayandDrug Dev.Tech. ,3:77-88)。測定法還可以包括間接測定法，由此評價紫杉烷對細(xì)胞機(jī)制的活性， 包括對腫瘤細(xì)胞凋亡和腫瘤生長包括腫瘤大小或體積的作用。
[0127] 如本文使用的，抗透明質(zhì)酸劑指調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸（HA)合成或降解、從而改變組織或 細(xì)胞中透明質(zhì)酸水平的任何試劑。為了本文目的，與不存在所述試劑的情況下相比較，抗透 明質(zhì)酸劑減少組織或細(xì)胞中的透明質(zhì)酸水平。此類試劑包括這樣的化合物，其調(diào)節(jié)編碼HA 合酶（HAS)以及涉及透明質(zhì)酸代謝的其他酶或受體的遺傳材料的表達(dá)，或者調(diào)節(jié)合成或降 解透明質(zhì)酸包括HAS功能或活性的蛋白質(zhì)。所述試劑包括小分子、核酸、肽、蛋白質(zhì)或其他 化合物。例如，抗透明質(zhì)酸劑包括但不限于反義或有義分子、抗體、酶、小分子抑制劑和HAS 底物類似物。
[0128] 如本文使用的，"綴合物"指與一種或多種其他多肽或化學(xué)部分直接或間接連接的 多肽。此類綴合物包括融合蛋白，通過化學(xué)綴合產(chǎn)生的那些和通過任何其他方法產(chǎn)生的那 些。例如，綴合物指與一種或多種其他多肽或化學(xué)部分直接或間接連接的透明質(zhì)酸降解酶， 例如透明質(zhì)酸酶或可溶性PH20多肽，由此至少一種可溶性PH20多肽與另一種多肽或化學(xué) 部分直接或間接連接，只要綴合物保留透明質(zhì)酸酶活性即可。
[0129] 如本文使用的，"聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶"指與聚合物直接或間接連接的透 明質(zhì)酸降解酶。連接可以是任何類型的連接，包括但不限于離子鍵和共價鍵，以及任何其他 足夠穩(wěn)定結(jié)合的相互作用。提及聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶意指綴合物顯示出透明質(zhì) 酸酶活性。通常，與未綴合至聚合物的透明質(zhì)酸降解酶相比較，聚合物綴合物顯示出至少 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多的透明質(zhì)酸酶活性。
[0130] 如本文使用的，透明質(zhì)酸降解酶指催化透明質(zhì)酸聚合物（也稱為透明質(zhì)酸或HA) 切割成更小分子量的片段的酶。示例性透明質(zhì)酸降解酶是透明質(zhì)酸酶，且特別是具有使透 明質(zhì)酸解聚的能力的軟骨素酶和裂解酶。其為透明質(zhì)酸降解酶的示例性軟骨素酶包括但不 限于軟骨素ABC裂解酶（也稱為軟骨素酶ABC)、軟骨素AC裂解酶（也稱為硫酸軟骨素裂解 酶或硫酸軟骨素消除酶（eliminase))和軟骨素C裂解酶。軟骨素ABC裂解酶包含兩種酶， 硫酸軟骨素ABC內(nèi)切裂解酶（EC4. 2. 2. 20)和硫酸軟骨素ABC外切裂解酶（EC4. 2. 2. 21)。 示例性硫酸軟骨素ABC內(nèi)切裂解酶和硫酸軟骨素ABC外切裂解酶包括但不限于來自普通 變形桿菌（Proteusvulgaris)和肝素黃桿菌（Flavobacteriumheparinum)的那些（普 通變形桿菌硫酸軟骨素ABC內(nèi)切裂解酶在SEQIDN0:98中顯示；Sato等人（1994)Appl. Microbiol.Biotechnol. 41 (1) : 39-46)。來自細(xì)菌的示例性軟骨素酶AC酶包括但不限于 來自肝素黃桿菌（SEQIDN0:99 中所示）、Victivallisvadensis(SEQIDN0:100 中所 不）和金黃色節(jié)桿菌（Arthrobacteraurescens)的那些（Tkalec等人（2000)Applied andEnvironmentalMicrobiology66 (I) : 29-35;Ernst等人（1995)CriticalReviews inBiochemistryandMolecularBiology30(5) :387-444)。來自細(xì)菌的不例性軟骨素酶 C酶包括但不限于來自鏈球菌屬（Streptococcus)和黃桿菌屬（Flavobacterium)的那些 (Hibi等人（1989)FEMS-Microbiol-Lett. 48 (2) :121-4;Michelacci等人（1976)J.Biol. Chem. 251:1154-8Jsuda等人（1999)Eur.J.Biochem. 262:127-133)。
[0131] 如本文使用的，透明質(zhì)酸酶指一類透明質(zhì)酸降解酶。透明質(zhì)酸酶包括細(xì)菌透 明質(zhì)酸酶（EC4.2.2. 1或EC4.2.99. 1)，來自水蛭、其他寄生蟲和甲殼類的透明質(zhì)酸 酶（EC3. 2. 1.36)，和哺乳動物型透明質(zhì)酸酶（EC3. 2. 1.35)。透明質(zhì)酸酶包括非人起 源的、包括但不限于鼠、犬、貓、兔、禽類、牛、綿羊、豬、馬、魚、蛙、細(xì)菌的任何酶以及來自 水蛭、其他寄生蟲和甲殼類的任何酶。示例性非人透明質(zhì)酸酶包括來自下述的透明質(zhì) 酸酶：牛（SEQIDN0:10、ll、64 和BH55(美國專利號 5,747,027 和 5,827,721))、黃蜂 (SEQIDNO:12和13)、蜜蜂（SEQIDNO:14)、白臉大黃蜂（SEQIDNO:15)、胡蜂（SEQID N0:16)、小鼠（SEQIDN0:17-19、32)、豬（SEQIDN0:20-21)、大鼠（SEQIDN0:22-24、 31)、兔（SEQIDNO:25)、綿羊（SEQIDNO:26、27、63 和 65)、黑猩猩（SEQIDNO:185)、 恒河猴（SEQIDNO: 102)、猩猩（SEQIDNO:28)、食蟹猴（SEQIDNO:29)、豚鼠（SEQID N0:30)、節(jié)桿菌屬物種（Arthrobactersp.)(菌株FB24)(SEQIDN0:67)、噬菌輕弧菌 (Bdellovibriobacteriovorus)(SEQIDN0:68)、痤瘡丙酸桿菌（Propionibacterium acnes)(SEQIDN0:69)、無乳鏈球菌（Streptococcusagalactiae)((SEQIDN0:70); 18RS21(SEQIDN0:71);血清型Ia(SEQIDN0:72);和血清型III(SEQIDN0:73))、金 黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus)(菌株C0L(SEQIDN0:74);菌株MRSA252(SEQ IDN0:75 和 76);菌株MSSA476(SEQIDN0:77);菌株NCTC8325(SEQIDN0:78);菌株牛 RF122(SEQIDN0:79和80);和菌株USA300(SEQIDN0:81))、肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae)((SEQIDN0:82);菌株ATCCBAA-255/R6(SEQIDN0:83);血清型2、菌株D39/ NCTC7466(SEQIDN0:84))、化胺性鏈球菌（Streptococcuspyogenes)(血清型Ml(SEQ IDN0:85);血清型M2、菌株MGAS10270(SEQIDN0:86);血清型M4、菌株MGAS10750(SEQ IDN0:87);血清型M6(SEQIDN0:88);血清型M12、菌株MGAS2096(SEQIDN0:89和 90);血清型M12、菌株MGAS9429(SEQIDN0:91);和血清型M28(SEQIDN0:92));豬鏈球 菌（Streptococcussuis)(SEQIDN0:93_95);費氏弧菌（Vibriofischeri)(菌株ATCC 700601/ES114(SEQIDN0:96))，和Streptomyceshyaluronolyticus透明質(zhì)酸酶，其對 于透明質(zhì)酸是特異性的并且不切割軟骨素或硫酸軟骨素（〇hya，T.和Kaneko,Y. (1970) Biochim.Biophys.Acta198:607)。透明質(zhì)酸酶還包括人起源的那些。示例性人透明質(zhì)酸酶 包括HYALl(SEQIDNO: 36)、HYAL2(SEQIDNO: 37)、HYAL3(SEQIDNO: 38)、HYAL4(SEQID N0:39)和PH20(SEQIDN0:1)。在透明質(zhì)酸酶中還包括的是可溶性透明質(zhì)酸酶，包括綿羊 和牛PH20、可溶性人PH20和可溶性rHuPH20。商購可得的?；蚓d羊可溶性透明質(zhì)酸酶的例 子包括Vitrase? (綿羊透明質(zhì)酸酶）、Amphadase?i(牛透明質(zhì)酸酶）和Hydase? (牛透 明質(zhì)酸酶）。
[0132] 如本文使用的，"純化的牛睪丸透明質(zhì)酸酶"指由牛睪丸提取物純化的牛透明 質(zhì)酸酶（參見美國專利號 2, 488, 564、2, 488, 565、2, 806, 815、2, 808, 362、2, 676, 139、 2, 795, 529、5, 747, 027和5, 827, 721)。商購可得的純化的牛睪丸透明質(zhì)酸酶的例子包 括Amphadase?和Hydase?，以及牛透明質(zhì)酸酶包括但不限于可得自SigmaAldrich、 Abnova、EMDChemicals、GenWayBiotech，Inc.、Raybiotech，Inc.和Calzyme的那些。還 包括的是重組產(chǎn)生的牛透明質(zhì)酸酶，例如但不限于通過表達(dá)SEQIDNO: 190-192中任一所 示的核酸分子生成的那些。
[0133] 如本文使用的，"純化的綿羊睪丸透明質(zhì)酸酶"指由綿羊睪丸提取物純化的綿羊 透明質(zhì)酸酶（參見美國專利號2, 488, 564,2, 488, 565和2, 806, 815以及國際PCT申請?zhí)?W02005/118799)。商購可得的純化的綿羊睪丸透明質(zhì)酸酶的例子包括Vitrase?，以及綿羊 透明質(zhì)酸酶包括但不限于可得自SigmaAldrich、CellSciences、EMDChemicals、GenWay Biotech，Inc.、Mybiosource.com和Raybiotech，Inc的那些。還包括的是重組產(chǎn)生的綿羊 透明質(zhì)酸酶，例如但不限于通過表達(dá)SEQIDN0:66和193-194中任一所不的核酸分子生成 的那些。
[0134] 如本文使用的，"PH20"指在精子中出現(xiàn)并且是中性活性的一類透明質(zhì)酸酶。PH20 在精子表面上和在溶酶體衍生的頂體中出現(xiàn)，在其中它與頂體內(nèi)膜結(jié)合。PH20包括任何 起源包括但不限于人、黑猩猩、食蟹猴、恒河猴、鼠、牛、綿羊、豚鼠、兔和大鼠起源的那些。 示例性PH20多肽包括來自人（SEQIDN0:1)、黑猩猩（SEQIDN0:101)、恒河猴（SEQID N0:102)、食蟹猴（SEQIDN0:29)、牛（例如SEQIDN0:11和64)、小鼠（SEQIDN0:32)、 大鼠（SEQIDN0:31)、兔（SEQIDN0:25)、綿羊（SEQIDN0:27、63和65)和豚鼠（SEQID NO:30)的那些。
[0135] 提及透明質(zhì)酸降解酶包括前體透明質(zhì)酸降解酶多肽和成熟透明質(zhì)酸降解酶多肽 (例如其中信號序列已去除的那些）、其具有活性的截短形式，并且包括等位基因變體和種 變體、由剪接變體編碼的變體、及其他變體，包括與SEQIDN0:1和10-48、63-65、67-102中 所示的前體多肽具有至少 40%、45%、50%、55%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、 96%、97%、98%、99%或更多序列相同性的多肽，或其成熟形式。例如，提及透明質(zhì)酸降解 酶還包括SEQIDN0:50-51中所示的人PH20前體多肽變體。透明質(zhì)酸降解酶還包括含有 化學(xué)或翻譯后修飾的那些以及不含化學(xué)或翻譯后修飾的那些。此類修飾包括但不限于聚乙 二醇化、白蛋白化、糖基化、法尼基化、羧化、羥基化、磷酸化及本領(lǐng)域已知的其他多肽修飾。 截短的PH20透明質(zhì)酸酶是其任何C末端縮短形式，特別是截短的并且當(dāng)N-糖基化時是中 性活性的形式。
[0136] 如本文使用的，"可溶性PH20"指在生理條件下可溶的任何形式的PH20?？扇苄?PH20可以例如通過其在37°C下分配到Triton?X-114溶液的水相內(nèi)進(jìn)行鑒定（Bordier等 人，（1981)J.Biol.Chem.，256:1604-7)。膜錨定PH20例如脂質(zhì)錨定的PH20包括GPI錨定 的PH20將分配到富含去污劑的相內(nèi)，但在用磷脂酶-C處理后將分配到去污劑很少的相或 水相內(nèi)。在可溶性PH20中包括的是其中與PH20錨定至膜相關(guān)的一個或多個區(qū)域已被去除 或修飾的膜錨定的PH20,其中可溶形式保留透明質(zhì)酸酶活性?？扇苄訮H20還包括重組可溶 性PH20和在天然來源中含有或由天然來源純化的那些，例如來自綿羊或牛的睪丸提取物。 示例性此類可溶性PH20是可溶性人PH20。
[0137] 如本文使用的，可溶性人PH20或sHuPH20包括缺乏在C末端處的糖基磷脂酰肌醇 (GPI)錨序列的全部或部分的PH20多肽，從而使得在表達(dá)后，多肽在生理條件下是可溶的。 可溶性可以通過證實在生理條件下的可溶性的任何合適方法進(jìn)行評價。示例性此類方法是 Triton?X-114測定法，其評價進(jìn)入水相內(nèi)的分配并且在上文和實施例中描述。另外，如果 在CHO細(xì)胞例如CHO-S細(xì)胞中產(chǎn)生，則可溶性人PH20多肽是被表達(dá)且被分泌到細(xì)胞培養(yǎng)基 內(nèi)的多肽。然而，可溶性人PH20多肽并不限于在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生的那些，而是可以在任何 細(xì)胞中或通過任何方法包括重組表達(dá)和多肽合成產(chǎn)生。提及通過CHO細(xì)胞分泌是明確的。 因此，如果多肽可以通過CHO細(xì)胞表達(dá)并分泌并且是可溶的，即當(dāng)用Triton?X-114提取時 分配到水相內(nèi)，則無論它是否如此產(chǎn)生，它都是可溶性PH20多肽。sHuPH20多肽的前體多肽 可以包括信號序列，例如異源或非異源（即天然）信號序列。示例性前體是包括信號序列 例如在氨基酸位置1-35 (參見例如SEQIDNO: 1的氨基酸1-35)處的天然35氨基酸信號 序列的那些。
[0138] 如本文使用的，"延長的可溶性PH20"或"esPH20"包括可溶性PH20多肽，其含有 直到GPI錨附著信號序列的殘基和來自GPI錨附著信號序列的一個或多個連續(xù)殘基，從而 使得esPH20在生理條件下是可溶的。在生理條件下的可溶性可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已 知的任何方法進(jìn)行測定。例如，它可以通過上文和實施例中所述的Triton?X-114測定法 進(jìn)行評價。另外，如上所述，如果在CHO細(xì)胞例如CHO-S細(xì)胞中產(chǎn)生，則可溶性PH20是被表 達(dá)且被分泌到細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)的多肽。然而，可溶性人PH20多肽并不限于在CHO細(xì)胞中產(chǎn) 生的那些，而是可以在任何細(xì)胞中或通過任何方法包括重組表達(dá)和多肽合成產(chǎn)生。提及通 過CHO細(xì)胞分泌是明確的。因此，如果多肽可以通過CHO細(xì)胞表達(dá)并分泌并且是可溶的，即 當(dāng)用Triton?X-114提取時分配到水相內(nèi)，則無論它是否如此產(chǎn)生，它都是可溶性PH20多 肽。除殘基36-490之外，人可溶性esPH20多肽還包括自SEQIDNO: 1的氨基酸殘基位置 491的一個或多個連續(xù)氨基酸（包括端點），從而使得所得到的多肽是可溶的。示例性人 esPH20可溶性多肽是具有對應(yīng)于SEQIDN0:1的氨基酸36-491、36-492、36-493、36-494、 36-495、36-496和36-497的氨基酸殘基的那些。示例性多肽是具有SEQIDNO: 151-154和 185-187中任一所示的氨基酸序列的那些。還包括的是等位基因變體及其他變體，例如與 SEQIDNO: 151-154 和 185-187 的對應(yīng)多肽具有 40%、45%、50%、55%、65%、70%、75%、 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或更多序列相同性的 任一，其保留中性活性且是可溶的。提及序列相同性指具有氨基酸取代的變體。
[0139] 如本文使用的，提及"esPH20"包括前體esPH20多肽和成熟esPH20多肽（例如其 中信號序列已去除的那些），其具有酶促活性（保留至少1 %、10%、20 %、30%、40 %、50% 或更多的全長形式）且是可溶的截短形式，并且包括等位基因變體和種變體、由剪接變體 編碼的變體、及其他變體，包括與SEQIDNO: 1和3中所示的前體多肽具有至少40%、45%、 50 %,55 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %,90 %,91 %,92 %,93 %,94 %,95 %,96 %,97 %, 98%、99%或更多序列相同性的多肽，或其成熟形式。
[0140] 如本文使用的，提及"esPH20"還包括含有化學(xué)或翻譯后修飾的那些以及不含化學(xué) 或翻譯后修飾的那些。此類修飾包括但不限于聚乙二醇化、白蛋白化、糖基化、法尼基化、羧 化、羥基化、磷酸化及本領(lǐng)域已知的其他多肽修飾。
[0141] 如本文使用的，"可溶性重組人PH20(rHuPH20) "指含有如在中國倉鼠卵巢（CHO) 細(xì)胞中重組表達(dá)并分泌的可溶形式的人PH20的組合物。可溶性rHuPH20由核酸分子編碼， 所述核酸分子包括信號序列并且顯示于SEQIDNO:49中。編碼可溶性rHuPH20的核酸在 分泌成熟多肽的CHO細(xì)胞中表達(dá)。當(dāng)在培養(yǎng)基中產(chǎn)生時，在C末端處存在異質(zhì)性，從而使得 產(chǎn)物包括種的混合物，所述種可以包括不同豐度的SEQIDNO:4至SEQIDNO:9中的任何 一個或多個。
[0142] 類似地，對于其他形式的PH20,例如esPH20,重組表達(dá)的多肽及其組合物可以包 括其C末端顯示出異質(zhì)性的多個種類。例如，通過表達(dá)SEQIDN0:151(其編碼具有36-497 氨基酸的esPH20)多肽產(chǎn)生的重組表達(dá)esPH20的組合物可以包括具有更少氨基酸例如 36-496 或 36-495 的形式。
[0143] 如本文使用的，"N聯(lián)部分"指多肽的天冬酰胺（N)氨基酸殘基，其能夠通過多肽的 翻譯后修飾被糖基化。人PH20的示例性N聯(lián)部分包括SEQIDNO: 1中所示的人PH20的氨 基酸N82、N166、N235、N254、N368 和N393。
[0144] 如本文使用的，"N糖基化多肽"指含有至少三個N聯(lián)氨基酸殘基的寡糖連接例如 對應(yīng)于SEQIDNO: 1的氨基酸殘基N235、N368和N393的N聯(lián)部分的PH20多肽或其截短形 式。N糖基化多肽可以包括其中三個、四個、五個和直至所有N聯(lián)部分與寡糖連接的多肽。N 聯(lián)寡糖可以包括寡聚甘露糖、復(fù)合物、雜交物或硫酸化寡糖、或其他寡糖和單糖。
[0145] 如本文使用的，"N部分糖基化多肽"指最低限度含有與至少三個N聯(lián)部分連接的 N-乙酰葡糖胺聚糖的多肽。部分糖基化多肽可以包括多種聚糖形式，包括單糖、寡糖和分支 糖形式，包括通過用EndoH、EndoFl、EndoF2和/或EndoF3處理多肽形成的那些。
[0146] 如本文使用的，"去糖基化PH20多肽"指其中少于所有可能的糖基化位點是糖基化 的PH20多肽。去糖基化可以例如通過去除糖基化，通過預(yù)防糖基化，或通過修飾多肽以消 除糖基化位點來實現(xiàn)。特定N糖基化位點不是活性所需的，而其他的則是。
[0147] 如本文使用的，"聚合物"指由重復(fù)單位構(gòu)成的任何高分子量天然或合成部分。聚 合物包括但不限于聚乙二醇部分、右旋糖酐、纖維素和唾液酸。這些及其他示例性聚合物在 本文中描述，并且許多是本領(lǐng)域已知的。為了本文目的，聚合物可以與多肽綴合，即直接或 經(jīng)由接頭間接地與多肽穩(wěn)定連接。此類聚合物綴合物通常增加血清半衰期，并且包括但不 限于唾液酸部分、聚乙二醇化部分、右旋糖酐、以及糖和其他部分例如糖基化。例如，透明質(zhì) 酸酶例如可溶性PH20或rHuPH20可以與聚合物綴合。
[0148] 如本文使用的，"聚乙二醇化"指聚合分子例如聚乙二醇（聚乙二醇化部分PEG)與 蛋白質(zhì)的共價或其他穩(wěn)定附著，所述蛋白質(zhì)包括透明質(zhì)酸降解酶，例如透明質(zhì)酸酶，通常用 于增加透明質(zhì)酸降解酶的半衰期。
[0149] 如本文使用的，抗癌劑或化療劑指能夠殺死快速分裂的細(xì)胞例如癌細(xì)胞的試劑。 本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉抗癌劑，包括化療劑。示例性試劑在本文中描述。
[0150] 如本文使用的，核苷類似物（或相似體）指在DNA復(fù)制過程中替換或模擬核酸構(gòu) 件塊之一例如嘌呤或嘧啶核苷的試劑。該過程可以停滯腫瘤生長，因為另外的核苷不能附 著。示例性核苷類似物是吉西他濱，其是脫氧胞苷類似物，并且在代謝活化后，形成模擬或 替換核苷胞苷的三磷酸鹽以摻入DNA內(nèi)并競爭性抑制DNA合成。
[0151] 如本文使用的，核苷脫氨酶指實現(xiàn)核苷脫氨基的酶。例如，胞苷脫氨酶（CDA)使胞 苷和脫氧胞苷分別脫氨基為尿苷和脫氧尿苷。腺苷脫氨酶（ADA)使腺苷脫氨基，通過以氨 基取代羥基，將其轉(zhuǎn)換為相關(guān)核苷肌苷。
[0152] 如本文使用的，核苷脫氨酶的底物是這樣的分子，在核苷脫氨酶存在下，其可以脫 氨基為無活性代謝產(chǎn)物，并且因此失活。評價脫氨基的測定法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的， 并且包括但不限于用于代謝產(chǎn)物和脫氨基代謝產(chǎn)物的高效液相色譜法（HPLC)或質(zhì)譜法， 脫氨基測定法例如使用過量尿嘧啶-DNA轉(zhuǎn)葡糖基酶基于UDG的脫氨基測定法（參見例如 Morgan等人（2004)J.Biol.Chem. ,279:52353-52360)或通過評價已知表達(dá)核苷脫氨酶的 細(xì)胞中的細(xì)胞毒性。
[0153] 如本文使用的，短語"足以減少核苷脫氨酶蛋白質(zhì)水平或蛋白質(zhì)活性"指為了抑制 核苷脫氨酶活性所需的紫杉烷的量。例如，抑制可以通過使用如上所述用于脫氨基的測定 法評價脫氨酶（例如胞苷脫氨酶）的脫氨基活性進(jìn)行評價。抑制還可以通過測定細(xì)胞內(nèi)脫 氨酶蛋白質(zhì)水平進(jìn)行評價。評價亞細(xì)胞蛋白質(zhì)的測定法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，并 且包括例如基于細(xì)胞的ELISA、流式細(xì)胞術(shù)或蛋白質(zhì)檢測方法例如蛋白質(zhì)印跡。一般地，此 類測定法可以對細(xì)胞裂解產(chǎn)物或滲透化細(xì)胞進(jìn)行。例如，用于胞苷脫氨酶的蛋白質(zhì)印跡可 以通過下述進(jìn)行：使總細(xì)胞裂解產(chǎn)物溶解,分離蛋白質(zhì),并且使用針對CDA的抗體（例如目 錄號ab82346,Abeam)就脫氨酶免疫印跡，隨后與次級辣根過氧化物酶抗體一起溫育，并檢 測。一般地，如果蛋白質(zhì)水平或活性減少至少或至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、 70 %、80 %、90 %或更多，則量足以減少核苷脫氨酶蛋白質(zhì)水平或蛋白質(zhì)活性。
[0154] 如本文使用的，前藥是在生物轉(zhuǎn)化后顯示出藥理學(xué)活性的化合物。例如，核苷類 似物例如吉西他濱是前藥，由此活性由于通過脫氧胞苷激酶細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)換為兩種活性代謝產(chǎn) 物，吉西他濱二磷酸鹽和吉西他濱三磷酸鹽而發(fā)生。三磷酸鹽（二氟脫氧胞苷三磷酸）與 內(nèi)源脫氧核苷三磷酸競爭摻入DNA內(nèi)。
[0155] 如本文使用的，衍生物指這樣的藥物形式，與參考藥物或試劑相比較，其已經(jīng)歷來 自參考藥物或試劑的變化或修飾，但仍保留活性（例如顯示出增加或降低的活性）。通常， 化合物的衍生物形式意指化合物的側(cè)鏈已被修飾或改變。
[0156] 如本文使用的，藥物或試劑的相似體或類似物是與參考藥物相關(guān)，但其化學(xué)和生 物活性可以不同的藥物或試劑。通常，相似體顯示出與參考藥物或試劑相似的活性，但活性 可以是增加的或降低的或在其他方面改善的。通常，化合物或藥物的相似體形式意指與參 考藥物相比較，結(jié)構(gòu)的主鏈核心是修飾的或改變的。
[0157] 如本文使用的，"活性"指與全長（完全）蛋白質(zhì)相關(guān)的多肽或其部分的一種或多 種功能活性。例如，多肽的活性片段可以顯示出全長蛋白質(zhì)的活性。功能活性包括但不限 于生物學(xué)活性、催化或酶促活性、抗原性（與多肽結(jié)合或競爭結(jié)合抗多肽抗體的能力）、免 疫原性、形成多聚體的能力、和與多肽的受體或配體特異性結(jié)合的能力。
[0158] 如本文使用的，"透明質(zhì)酸酶活性"指酶促催化透明質(zhì)酸切割的能力。用于透明質(zhì) 酸酶的美國藥典（USP)XXII測定法通過測量在允許該酶在37°C下與HA反應(yīng)30分鐘后剩余 的高分子量透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸（HA)底物的量，間接測定透明質(zhì)酸酶活性（USPXXII-NF XVII(1990) 644-645美國藥典公約，Inc，RockviIIe，MD)。參考標(biāo)準(zhǔn)溶液可以在測定法中用 于確定以單位表示的任何透明質(zhì)酸酶的相對活性。測定透明質(zhì)酸酶例如PH20包括可溶性 PH20和esPH20的透明質(zhì)酸酶活性的體外測定法是本領(lǐng)域已知且在本文中描述的。示例性 測定法包括微濁度測定法和生物素化的透明質(zhì)酸測定法，所述微濁度測定法通過檢測在未 切割的透明質(zhì)酸與血清白蛋白結(jié)合時形成的不溶性沉淀物，間接測量通過透明質(zhì)酸酶的透 明質(zhì)酸切割，所述生物素化的透明質(zhì)酸測定法通過用鏈霉抗生物素蛋白-辣根過氧化物酶 綴合物和生色底物檢測與微量滴定板孔非共價結(jié)合的剩余生物素化的透明質(zhì)酸，間接測量 透明質(zhì)酸的切割。參考標(biāo)準(zhǔn)可以例如用于生成標(biāo)準(zhǔn)曲線，以測定以單位表示的待測試的透 明質(zhì)酸酶活性。
[0159] 如本文使用的，比活性指活性單位/mg蛋白質(zhì)。透明質(zhì)酸酶的毫克通過溶液在 280nm下的吸收進(jìn)行限定，假定大約1. 7的摩爾消光系數(shù)，以M^cnT1為單位。
[0160] 如本文使用的，"中性活性"指PH20多肽在中性pH下（例如在pH7. 0下或約pH 7.0)酶促催化透明質(zhì)酸切割的能力。
[0161] 如本文使用的，"GPI錨附著信號序列"是指導(dǎo)將預(yù)形成的GPI錨添加至ER腔內(nèi)多 肽的C末端氨基酸序列。GPI錨附著信號序列存在于GPI錨定多肽的前體多肽例如GPI錨 定的PH20多肽內(nèi)。C末端GPI錨附著信號序列通常含有8-20個氨基酸的主要疏水區(qū)，在 8-12個氨基酸的親水間隔區(qū)后，ω-位點或GPI錨附著位點立即下游。GPI錨附著信號序列 可以使用本領(lǐng)域眾所周知的方法進(jìn)行鑒定。這些包括但不限于計算機(jī)芯片（inSilico)方 法和算法（參見例如Udenfriend等人（1995)MethodsEnzymol. 250:571_582，Eisenhaber 等人，（1999)J.Biol.Chem. 292:741-758，F(xiàn)ankhauser等人，（2005)Bioinformatics 21:1846-1852，Omaetxebarria等人，（2007)Proteomics7:1951_1960，Pierleoni等人， (2008)BMCBioinformatics9:392)，包括在生物信息學(xué)網(wǎng)站例如ExPASyProteomics工具 網(wǎng)站（例如萬維網(wǎng)網(wǎng)站expasy.ch/tools/)上可容易獲得的那些。
[0162] 如本文使用的，"核酸"包括DNA、RNA及其類似物，包括肽核酸（PNA)及其混合物。 核酸可以是單鏈或雙鏈的。當(dāng)提及例如由可檢測標(biāo)記例如熒光或放射性標(biāo)記任選標(biāo)記的探 針或引物時，考慮單鏈分子。此類分子一般具有這樣的長度，從而使得它們的靶是統(tǒng)計上獨 特的或具有低拷貝數(shù)（一般小于5,一般小于3)用于探測或引發(fā)文庫。一般地，探針或引物 含有與目的基因互補(bǔ)或相同的至少14、16或30個連續(xù)核苷酸的序列。探針和引物可以長 10、20、30、50、100或更多個核酸。
[0163] 如本文使用的，肽指長度大于或等于2個氨基酸并且長度小于或等于40個氨基酸 的多肽。
[0164] 如本文使用的，在本文提供的多種氨基酸序列中出現(xiàn)的氨基酸根據(jù)其已知的三字 母或單字母縮寫進(jìn)行鑒定（表1)。在多種核酸片段中出現(xiàn)的核苷酸用本領(lǐng)域常規(guī)使用的標(biāo) 準(zhǔn)單字母命名進(jìn)行指定。
[0165] 如本文使用的，"氨基酸"是含有氨基和羧酸基團(tuán)的有機(jī)化合物。多肽含有兩個或 更多個氨基酸。為了本文目的，氨基酸包括二十種天然存在的氨基酸、非天然氨基酸和氨基 酸類似物（即，其中α-碳具有側(cè)鏈的氨基酸）。
[0166] 如本文使用的，"氨基酸殘基"指多肽在其肽鍵處的化學(xué)消化（水解）后形成的氨 基酸。本文描述的氨基酸殘基假定為"L"異構(gòu)形式。如此指定的以"D"異構(gòu)形式的殘基 可以置換任何L-氨基酸殘基，只要所需功能性質(zhì)由多肽保留。ΝΗ2指在多肽的氨基末端處 存在的游離氨基。C00H指在多肽的羧基末端處存在的游離羧基。與J.Biol.Chem.，243 : 3557-3559(1968)中所述且采用37C.F.R. § § 1.821-1.822的標(biāo)準(zhǔn)多肽命名法一致，關(guān)于 氨基酸殘基的縮寫顯示于表1中：
[0167] 表I-對應(yīng)表
[0168]

【權(quán)利要求】
1. 一種組合，其包含： 含有抗透明質(zhì)酸劑的組合物；和 含有腫瘤靶向紫杉烷的組合物。
2. 權(quán)利要求1的組合，其中： 所述組合物配制用于直接施用； 所述抗透明質(zhì)酸劑的濃度足以降解腫瘤相關(guān)透明質(zhì)酸；和 所述腫瘤靶向紫杉烷的濃度足以實現(xiàn)腫瘤內(nèi)遞送。
3. 權(quán)利要求1或2的組合，其中與在不存在所述腫瘤內(nèi)紫杉烷制劑的情況下的核苷脫 氨酶的水平或活性相比較，所述腫瘤靶向紫杉烷制劑的濃度足以減少腫瘤內(nèi)核苷脫氨酶蛋 白質(zhì)水平或蛋白質(zhì)活性。
4. 權(quán)利要求1-3中任一項的組合，其中所述抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷共配制或 分開提供。
5. 權(quán)利要求1-4中任一項的組合，其進(jìn)一步包含含有核苷類似物的組合物。
6. 權(quán)利要求5的組合，其中： 所述組合物配制用于直接施用；和 所述核苷類似物的濃度足以實現(xiàn)腫瘤內(nèi)遞送。
7. 權(quán)利要求5或6的組合，其中所述核苷類似物與所述抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉 燒分開提供。
8. 權(quán)利要求5或6的組合，其中所述核苷類似物與所述抗透明質(zhì)酸劑共配制或與所述 腫瘤靶向紫杉烷共配制。
9. 權(quán)利要求5或6的組合，其中所述核苷類似物與所述抗透明質(zhì)酸劑和所述腫瘤靶向 紫杉烷共配制。
10. 權(quán)利要求1-9中任一項的組合，其中所述組合物配制用于多重劑量施用。
11. 權(quán)利要求1-9中任一項的組合，其中所述組合物配制用于單次劑量施用。
12. 權(quán)利要求1-11中任一項的組合，其中所述抗透明質(zhì)酸劑是透明質(zhì)酸降解酶或是抑 制透明質(zhì)酸合成的試劑。
13. 權(quán)利要求1-12中任一項的組合，其中所述抗透明質(zhì)酸劑是透明質(zhì)酸降解酶。
14. 權(quán)利要求13的組合，其中所述透明質(zhì)酸降解酶與聚合物綴合。
15. 權(quán)利要求13-14中任一項的組合，其中所述透明質(zhì)酸降解酶組合物含有在 0. 5 y g-50mg之間或大約在0. 5 y g-50mg之間的與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶。
16. 權(quán)利要求15的組合，其中所述與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶具有至少或約 20,000U/mg的比活性。
17. 權(quán)利要求13-16中任一項的組合，其中所述透明質(zhì)酸降解酶組合物含有在150單 位（U)-60, 000U之間或大約在150單位（U)-60, 000U之間的與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解 酶。
18. 權(quán)利要求13-17中任一項的組合，其中含有所述透明質(zhì)酸降解酶的所述組合物的 體積在〇. 5mL-100mL之間或大約在0. 5mL-100mL之間。
19. 權(quán)利要求13-18中任一項的組合，其中含有透明質(zhì)酸降解酶的所述組合物包含組 氨酸和/或NaCl。
20. 權(quán)利要求19的組合，其中含有透明質(zhì)酸降解酶的所述組合物具有在6. 0-7. 4之間 或大約在6. 0-7. 4之間的pH。
21. 權(quán)利要求13-20中任一項的組合，其中所述透明質(zhì)酸降解酶是透明質(zhì)酸酶。
22. 權(quán)利要求21的組合，其中所述透明質(zhì)酸酶是PH20或其截短形式，所述截短形式缺 乏C末端糖基磷脂酰肌醇（GPI)附著位點或所述GPI附著位點的部分。
23. 權(quán)利要求21或22的組合，其中所述透明質(zhì)酸酶是PH20,其為人或非人PH20。
24. 權(quán)利要求13-23中任一項的組合，其中： 所述透明質(zhì)酸降解酶是截短的PH20 ; 所述透明質(zhì)酸降解酶是中性活性和可溶的；和 所述截短的PH20包含含有SEQ ID NO: 1的氨基酸36-464的氨基酸序列，或包含與至 少含有SEQ ID NO: 1的氨基酸36-464的氨基酸序列具有至少85%序列相同性且保留透明 質(zhì)酸酶活性的氨基酸序列。
25. 權(quán)利要求24的組合，其中所述PH20包含這樣的氨基酸序列，其與至少含有SEQ ID NO: 1的氨基酸36-464的氨基酸序列具有至少86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性且保留透明質(zhì)酸酶活性。
26. 權(quán)利要求24或25的組合，其中所述PH20包含SEQ ID N0:4-9、47、48、150-170、 183-189中任一所示的氨基酸序列，或包含與SEQ ID N0:4-9、47、48、150-170、183-189中任 一所示的氨基酸序列顯示出至少85%序列相同性且保留透明質(zhì)酸酶活性的氨基酸序列。
27. 權(quán)利要求26的組合，其中所述PH20包含與SEQ ID N0:4-9、47、48、150-170、 183-189中任一所示的氨基酸序列具有至少86%、87%、88%、89%、90%、91 %、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性且保留透明質(zhì)酸酶活性的氨基酸序 列。
28. 權(quán)利要求1-12中任一項的組合，其中所述抗透明質(zhì)酸劑是抑制透明質(zhì)酸合成的試 劑且選自針對HA合酶的有義或反義核酸分子或者是小分子藥物。
29. 權(quán)利要求28的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑是選自4-甲基傘形酮（MU)或其衍生 物、或者來氟米特或其衍生物的小分子藥物。
30. 權(quán)利要求29的方法，其中所述小分子藥物是選自6, 7-二羥基-4-甲基香豆素或 5, 7-二羥基-4-甲基香豆素的4-甲基傘形酮（MU)衍生物。
31. 權(quán)利要求1-30中任一項的組合，其中所述腫瘤靶向紫杉烷包含紫杉醇或多西他賽 或者是它們的類似物、衍生物或前藥。
32. 權(quán)利要求1-31中任一項的組合，其中所述腫瘤靶向紫杉烷與腫瘤靶向部分直接或 間接連接。
33. 權(quán)利要求1-32中任一項的組合，其中所述腫瘤靶向紫杉烷配制為選自膠束、納米 顆粒、微球體、脂質(zhì)體或水凝膠的遞送媒介物。
34. 權(quán)利要求33的組合，其中所述遞送媒介物與腫瘤靶向部分直接或間接連接。
35. 權(quán)利要求32-34中任一項的組合，其中所述腫瘤靶向部分選自大分子、蛋白質(zhì)、肽、 單克隆抗體或脂肪酸脂質(zhì)。
36. 權(quán)利要求32-35中任一項的組合，其中所述腫瘤靶向部分是選自西妥昔單抗或曲 妥珠單抗的單克隆抗體。
37. 權(quán)利要求32-35中任一項的組合，其中所述腫瘤靶向部分是白蛋白。
38. 權(quán)利要求37的組合，其中所述腫瘤靶向紫杉烷是白蛋白結(jié)合的紫杉醇或白蛋白結(jié) 合的多西他賽。
39. 權(quán)利要求1-38中任一項的組合，其中所述腫瘤靶向紫杉烷組合物含有在 10mg-1000mg之間或大約在10mg-1000mg之間的腫瘤祀向紫杉燒。
40. 權(quán)利要求1-39中任一項的組合，其中包含腫瘤靶向紫杉烷的所述組合物的體積在 0. 5mL-100mL之間或大約在0. 5mL-100mL之間。
41. 權(quán)利要求5-40中任一項的組合，其中所述核苷類似物是嘌呤或嘧啶類似物或它們 的衍生物。
42. 權(quán)利要求5-41中任一項的組合，其中所述核苷類似物選自氟嘧啶、5-氟尿嘧 啶、5-氟-2'-脫氧胞苷、阿糖胞苷、吉西他濱、曲沙他濱、地西他濱、氮雜胞苷、假異胞苷、 Zebularine、安西他濱、法扎拉濱、6-氮雜胞苷、卡培他濱、N4-十八烷基-阿糖胞苷、反油酸 阿糖胞苷、氟達(dá)拉濱、克拉屈濱、氯法拉濱、奈拉濱、呋咯地辛和噴司他丁，或它們的衍生物。
43. 權(quán)利要求5-42中任一項的組合，其中所述核苷類似物是核苷脫氨酶的底物。
44. 權(quán)利要求43的組合，其中所述核苷脫氨酶是腺苷脫氨酶或胞苷脫氨酶。
45. 權(quán)利要求5-44中任一項的組合，其中所述核苷類似物選自氟達(dá)拉濱、阿糖胞苷、吉 西他濱、地西他濱和氮雜胞苷或它們的衍生物。
46. 權(quán)利要求5-45中任一項的組合，其中所述核苷類似物組合物包含100mg-5000mg、 500mg-5000mg、500mg-2500mg、1000mg-2500mg、1500mg-2500mg 或 2000mg-5000mg 核苷類似 物。
47. 權(quán)利要求5-46中任一項的組合，其中包含核苷類似物的所述組合物的體積在 0? 5mL-1000mL 之間或大約在 0? 5mL-1000mL 之間。
48. 權(quán)利要求1-47中任一項的組合，其進(jìn)一步包含含有皮質(zhì)類固醇的組合物。
49. 權(quán)利要求48的組合，其中所述皮質(zhì)類固醇是糖皮質(zhì)激素。
50. 權(quán)利要求49的組合，其中所述糖皮質(zhì)激素選自可的松、地塞米松、氫化可的松、甲 潑尼龍、潑尼松龍和潑尼松。
51. 權(quán)利要求48-50中任一項的組合，其中所述皮質(zhì)類固醇組合物包含0. l-20mg或約 0? l-20mg皮質(zhì)類固醇。
52. 權(quán)利要求1-51中任一項的組合，其中所述組合物配制用于經(jīng)口、靜脈內(nèi)（IV)、皮 下、肌內(nèi)、腫瘤內(nèi)、皮內(nèi)、表面、經(jīng)皮、經(jīng)直腸、鞘內(nèi)或表皮下施用。
53. 權(quán)利要求1-52中任一項的組合，其中所述組合物配制用于靜脈內(nèi)施用或皮下施 用。
54. 權(quán)利要求14的組合，其中所述聚合物是聚亞烷基二醇、右旋糖酐、普魯蘭或纖維 素。
55. 權(quán)利要求54的組合，其中所述聚亞烷基二醇選自聚乙二醇（PEG)或甲氧基聚乙二 醇（mPEG)。
56. 權(quán)利要求54-55中任一項的組合，其中所述聚合物是PEG，并且所述PEG是分支或 線性PEG。
57. 權(quán)利要求54-55中任一項的組合，其中所述聚合物通過和下述反應(yīng)而產(chǎn)生：甲氧 基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丁酸酯（mPEG-SBA) (5kDa);甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺 丁酸酯（mPEG-SBA) (20kDa);甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丁酸酯（mPEG-SBA) (30kDa); 甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺a -甲基丁酸酯（mPEG-SMB) (20kDa);甲氧基-聚（乙 二醇）琥珀酰亞胺a-甲基丁酸酯（mPEG-SMB) (30kDa);甲氧基-聚（乙二醇）_ 丁醛 (mPEG-丁醛）（30kDa)，甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丙酸酯（mPEG-SPA) (20kDa);甲氧 基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丙酸酯（mPEG-SPA) (30kDa);(甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥 基琥珀酰亞胺酯（mPEG2-NHS) (lOkDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰 亞胺酯（mPEG2-NHS) (20kDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰亞胺酯 (mPEG2-NHS) (40kDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰亞胺酯（mPEG2-NHS) (60kDa分支的）；生物素-聚（乙二醇）-N-羥基琥珀酰亞胺酯（生物素-PEG-NHS) (5kDa 生物素化的）；聚（乙二醇）_對硝基苯基碳酸酯（PEG-對硝基苯基碳酸酯）（30kDa);或聚 (乙二醇）-丙醛（PEG-丙醛）（30kDa)。
58. 權(quán)利要求54-57中任一項的組合，其中所述聚合物是具有30或約30千道爾頓分子 量的PEG。
59. 權(quán)利要求1-58中任一項的組合，其包裝為試劑盒且任選包括使用說明書。
60. -種用于治療癌癥的方法，其包括： 施用包含抗透明質(zhì)酸劑的組合物；和 施用包含腫瘤靶向紫杉烷制劑的組合物。
61. 權(quán)利要求60的方法，其進(jìn)一步包括施用包含核苷類似物的組合物。
62. 權(quán)利要求61的方法，其中所述癌癥是腫瘤。
63. 權(quán)利要求62的方法，其中所述腫瘤是實體瘤。
64. 權(quán)利要求62或63的方法，其中與相同組織類型的非癌性組織相比較或與相同腫瘤 類型的非轉(zhuǎn)移性腫瘤相比較，所述腫瘤具有增加的細(xì)胞和/或基質(zhì)透明質(zhì)酸表達(dá)。
65. 權(quán)利要求60-64中任一項的方法，其中所述癌癥選自胰腺癌、卵巢癌、肺癌、結(jié)腸 癌、前列腺癌、子宮頸癌、頭頸癌和乳腺癌。
66. 權(quán)利要求60-65中任一項的方法，其中所述癌癥是胰腺癌。
67. 權(quán)利要求60-66中任一項的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑是透明質(zhì)酸降解酶。
68. 權(quán)利要求67的方法，其中所述透明質(zhì)酸降解酶與聚合物綴合。
69. 權(quán)利要求67-68中任一項的方法，其中所述透明質(zhì)酸降解酶是透明質(zhì)酸酶。
70. 權(quán)利要求69的方法，其中所述透明質(zhì)酸酶是PH20或其截短形式，所述截短形式缺 乏C末端糖基磷脂酰肌醇（GPI)附著位點或所述GPI附著位點的部分。
71. 權(quán)利要求69或70的方法，其中所述透明質(zhì)酸酶是PH20,其為人或非人PH20。
72. 權(quán)利要求67-71中任一項的方法，其中： 所述透明質(zhì)酸降解酶是截短的PH20 ;和 所述截短的PH20包含含有SEQ ID NO: 1的氨基酸36-464的氨基酸序列，或包含與至 少含有SEQ ID NO: 1的氨基酸36-464的氨基酸序列具有至少85%序列相同性且保留透明 質(zhì)酸酶活性的氨基酸序列。
73. 權(quán)利要求72的方法，其中所述PH20包含這樣的氨基酸序列，其與至少含有SEQ ID NO: 1的氨基酸36-464的氨基酸序列具有至少86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性且保留透明質(zhì)酸酶活性。
74. 權(quán)利要求72或73的方法，其中所述PH20包含SEQ ID N0:4-9、47、48、150-170、 183-189中任一所示的氨基酸序列，或包含與SEQ ID N0:4-9、47、48、150-170、183-189中任 一所示的氨基酸序列顯示出至少85%序列相同性且保留透明質(zhì)酸酶活性的氨基酸序列。
75. 權(quán)利要求74的方法，其中所述PH20包含與SEQ ID N0:4-9、47、48、150-170、 183-189中任一所示的氨基酸序列具有至少86%、87%、88%、89%、90%、91 %、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性且保留透明質(zhì)酸酶活性的氨基酸序 列。
76. 權(quán)利要求68-75中任一項的方法，其中所述聚合物是聚亞烷基二醇、右旋糖酐、普 魯蘭或纖維素。
77. 權(quán)利要求76的方法，其中所述聚亞烷基二醇選自聚乙二醇（PEG)或甲氧基聚乙二 醇（mPEG)。
78. 權(quán)利要求76或77的方法，其中所述聚合物是PEG，并且所述PEG是分支或線性PEG。
79. 權(quán)利要求76-78中任一項的方法，其中所述聚合物通過和下述反應(yīng)而產(chǎn)生：甲氧 基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丁酸酯（mPEG-SBA) (5kDa);甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺 丁酸酯（mPEG-SBA) (20kDa);甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丁酸酯（mPEG-SBA) (30kDa); 甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺a -甲基丁酸酯（mPEG-SMB) (20kDa);甲氧基-聚（乙 二醇）琥珀酰亞胺a -甲基丁酸酯（mPEG-SMB) (30kDa);甲氧基-聚（乙二醇）_ 丁醛 (mPEG-丁醛）（30kDa)，甲氧基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丙酸酯（mPEG-SPA) (20kDa);甲氧 基-聚（乙二醇）琥珀酰亞胺丙酸酯（mPEG-SPA) (30kDa);(甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥 基琥珀酰亞胺酯（mPEG2-NHS) (10kDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰 亞胺酯（mPEG2-NHS) (20kDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰亞胺酯 (mPEG2-NHS) (40kDa分支的）；（甲氧基-聚（乙二醇））2-N-羥基琥珀酰亞胺酯（mPEG2-NHS) (60kDa分支的）；生物素-聚（乙二醇）-N-羥基琥珀酰亞胺酯（生物素-PEG-NHS) (5kDa 生物素化的）；聚（乙二醇）_對硝基苯基碳酸酯（PEG-對硝基苯基碳酸酯）（30kDa);或聚 (乙二醇）-丙醛（PEG-丙醛）（30kDa)。
80. 權(quán)利要求76-79中任一項的方法，其中所述聚合物是具有30或約30千道爾頓分子 量的PEG。
81. 權(quán)利要求67-80中任一項的方法，其中： 所述透明質(zhì)酸降解酶以在〇? 01 U g/kg-15 y g/kg之間或大約在0? 01 y g/kg-15 y g/kg 之間的劑量范圍量施用；或 所述透明質(zhì)酸降解酶以在10-10, 〇〇〇單位/kg(對象）之間或大約在10-10, 000單位 /kg(對象）之間的劑量范圍量施用。
82. 權(quán)利要求60-66中任一項的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑是抑制透明質(zhì)酸合成的 試劑。
83. 權(quán)利要求82的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑是抑制透明質(zhì)酸合成的試劑且選自針 對HA合酶的有義或反義核酸分子或者是小分子藥物。
84. 權(quán)利要求83的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑是選自4-甲基傘形酮（MU)或其衍生 物、或者來氟米特或其衍生物的小分子藥物。
85. 權(quán)利要求84的方法，其中所述小分子藥物是選自6, 7-二羥基-4-甲基香豆素或 5, 7-二羥基-4-甲基香豆素的4-甲基傘形酮（MU)衍生物。
86. 權(quán)利要求60-85中任一項的方法，其中所述腫瘤靶向紫杉烷包含紫杉醇或多西他 賽或者是它們的類似物、衍生物或前藥。
87. 權(quán)利要求60-86中任一項的方法，其中所述腫瘤靶向紫杉烷與腫瘤靶向部分直接 或間接連接。
88. 權(quán)利要求60-87中任一項的方法，其中所述腫瘤靶向紫杉烷配制為選自膠束、納米 顆粒、微球體、脂質(zhì)體或水凝膠的遞送媒介物。
89. 權(quán)利要求88的方法，其中所述遞送媒介物與腫瘤靶向部分直接或間接連接。
90. 權(quán)利要求87-89中任一項的方法，其中所述腫瘤靶向部分選自大分子、蛋白質(zhì)、肽、 單克隆抗體或脂肪酸脂質(zhì)。
91. 權(quán)利要求87-89中任一項的方法，其中所述腫瘤靶向部分是選自西妥昔單抗或曲 妥珠單抗的單克隆抗體。
92. 權(quán)利要求87-89中任一項的方法，其中所述腫瘤靶向部分是白蛋白。
93. 權(quán)利要求92的方法，其中所述腫瘤靶向紫杉烷是白蛋白結(jié)合的紫杉醇或白蛋白結(jié) 合的多西他賽。
94. 權(quán)利要求60-93中任一項的方法，其中所述腫瘤靶向紫杉烷以在lmg/m2-1000mg/ m2 (對象的體表面積）之間或大約在lmg/m2-1000mg/m2 (對象的體表面積）之間的劑量范圍 施用。
95. 權(quán)利要求61-94中任一項的方法，其中所述核苷類似物是嘌呤或嘧啶類似物或它 們的衍生物。
96. 權(quán)利要求61-95中任一項的方法，其中所述核苷類似物選自氟嘧啶、5-氟尿嘧 啶、5-氟-2'-脫氧胞苷、阿糖胞苷、吉西他濱、曲沙他濱、地西他濱、氮雜胞苷、假異胞苷、 Zebularine、安西他濱、法扎拉濱、6-氮雜胞苷、卡培他濱、N4-十八烷基-阿糖胞苷、反油酸 阿糖胞苷、氟達(dá)拉濱、克拉屈濱、氯法拉濱、奈拉濱、呋咯地辛和噴司他丁，或它們的衍生物。
97. 權(quán)利要求61-96中任一項的方法，其中所述核苷類似物是核苷脫氨酶的底物。
98. 權(quán)利要求97的方法，其中所述核苷脫氨酶是腺苷脫氨酶或胞苷脫氨酶。
99. 權(quán)利要求61-98中任一項的方法，其中所述核苷類似物選自氟達(dá)拉濱、阿糖胞苷、 吉西他濱、地西他濱和氮雜胞苷或它們的衍生物。
100. 權(quán)利要求61-99中任一項的方法，其中所述核苷類似物是吉西他濱或其衍生物。
101. 權(quán)利要求61-100中任一項的方法，其中所述核苷類似物以在100mg/m2-2500mg/m2之間或大約在l〇〇mg/m2-2500mg/m2之間的劑量范圍量施用。
102. 權(quán)利要求61-100中任一項的方法，其中所述核苷類似物施用的量是至少或至少 約 200mg/m2 或 500mg/m2,但小于 1000mg/m2 或 1250mg/m2。
103. 權(quán)利要求61-102中任一項的方法，其中所述組合物經(jīng)口、靜脈內(nèi)（IV)、皮下、肌 內(nèi)、腫瘤內(nèi)、皮內(nèi)、表面、經(jīng)皮、經(jīng)直腸、鞘內(nèi)或表皮下施用。
104. 權(quán)利要求61-103中任一項的方法，其中所述組合物靜脈內(nèi)施用或皮下施用。
105. 權(quán)利要求60-104中任一項的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑在所述腫瘤靶向紫杉 烷之前、同時或接近同時、順次或間歇施用。
106. 權(quán)利要求105的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑在所述腫瘤靶向紫杉烷施用前施 用。
107. 權(quán)利要求105或106的方法，其中在所述腫瘤靶向紫杉烷施用前至少或至少約或 約或5分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、12小時、16小 時、18小時、20小時、22小時、24小時、30小時、36小時、40小時或48小時，施用所述抗透明 質(zhì)酸劑。
108. 權(quán)利要求105的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷同時或接近同時 施用。
109. 權(quán)利要求60-108中任一項的方法，其中： 所述抗透明質(zhì)酸劑的施用頻率是每周兩次、每周一次、每14天一次、每21天一次或每 月一次；和/或 所述腫瘤靶向紫杉烷的施用頻率是每周兩次、每周一次、每14天一次、每21天一次或 每月一次。
110. 權(quán)利要求61-109中任一項的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑和/或腫瘤靶向紫杉烷 在所述核苷類似物之前、同時或接近同時、順次或間歇施用。
111. 權(quán)利要求60-110中任一項的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷在 施用周期中施用預(yù)定周數(shù)。
112. 權(quán)利要求111的方法，其中所述預(yù)定周數(shù)是至少兩周、至少三周或至少四周。
113. 權(quán)利要求61-112中任一項的方法，其中在所述核苷類似物施用前至少或至少約 或約或5分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、12小時、16 小時、18小時、20小時、22小時、24小時、30小時、36小時、40小時或48小時，施用所述抗透 明質(zhì)酸劑。
114. 權(quán)利要求61-113中任一項的方法，其中在所述核苷類似物施用前至少或至少約 或約或1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、12小時、16小時、18小時、20小時、22 小時或24小時，施用所述腫瘤靶向紫杉烷。
115. 權(quán)利要求61-114中任一項的方法，其中所述腫瘤靶向紫杉烷與所述核苷類似物 同時或接近同時施用。
116. 權(quán)利要求61-115中任一項的方法，其中所述核苷類似物的施用頻率是每周兩次、 每周一次、每14天一次、每21天一次或每月一次。
117. 權(quán)利要求61-116中任一項的方法，其中所述核苷類似物在施用周期中施用預(yù)定 周數(shù)。
118. 權(quán)利要求117的方法，其中所述預(yù)定周數(shù)是至少兩周、至少三周或至少四周。
119. 權(quán)利要求117或118的方法，其中在預(yù)定周數(shù)后，施用中斷第一預(yù)定時間段，并且 隨后重新開始至少一周。
120. 權(quán)利要求60-119中任一項的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷同 時或接近同時施用，并且以每周兩次或每周一次的施用頻率施用預(yù)定周數(shù)。
121. 權(quán)利要求61-120中任一項的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷： 在所述核苷類似物施用之前施用； 同時或接近同時施用；和 以每周兩次或每周一次的施用頻率施用預(yù)定周數(shù)。
122. 權(quán)利要求120或121的方法，其中所述預(yù)定周數(shù)是四周。
123. 權(quán)利要求121或122的方法，其中在所述透明質(zhì)酸降解酶和腫瘤靶向紫杉烷施用 后至少或至少約或約或5分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小 時、12小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、30小時、36小時、40小時或48小 時，施用所述核苷類似物。
124. 權(quán)利要求116的方法，其中所述核苷類似物每周一次施用預(yù)定周數(shù)。
125. 權(quán)利要求124的方法，其中所述預(yù)定周數(shù)是三周。
126. 權(quán)利要求125的方法，其中施用中斷至少一周。
127. 權(quán)利要求111-126中任一項的方法，其中所述施用周期和/或施用中斷重復(fù)多次。
128. 權(quán)利要求127的方法，其中在所述第一施用周期中的施用頻率與后續(xù)施用周期中 的施用頻率相同或不同。
129. 權(quán)利要求127的方法，其中所述施用頻率在所述第一施用周期中是每周兩次，并 且對于后續(xù)施用周期是每周一次。
130. 權(quán)利要求60-129中任一項的方法，其進(jìn)一步包括施用皮質(zhì)類固醇。
131. 權(quán)利要求130的方法，其中所述所述皮質(zhì)類固醇是糖皮質(zhì)激素。
132. 權(quán)利要求131的方法，其中所述糖皮質(zhì)激素選自可的松、地塞米松、氫化可的松、 甲潑尼龍、潑尼松龍和潑尼松。
133. 權(quán)利要求130-132中任一項的方法，其中所述皮質(zhì)類固醇在所述抗透明質(zhì)酸劑施 用之前、同時、間歇或之后施用。
134. 權(quán)利要求130-132中任一項的方法，其中所述皮質(zhì)類固醇在所述抗透明質(zhì)酸劑施 用之前和在所述抗透明質(zhì)酸劑施用之后施用。
135. 權(quán)利要求133的方法，其中所述皮質(zhì)類固醇與所述抗透明質(zhì)酸劑共施用。
136. 權(quán)利要求133或134的方法，其中所述皮質(zhì)類固醇在所述抗透明質(zhì)酸劑施用之前 至少或約至少1小時施用。
137. 權(quán)利要求133或134的方法，其中所述皮質(zhì)類固醇在所述抗透明質(zhì)酸劑施用之后 至少8小時-12小時施用。
138. 權(quán)利要求130-137中任一項的方法，其中施用的皮質(zhì)類固醇量在下述之間或大 約在下述之間：〇? l_20mg、0. l_15mg、0. l_10mg、0. l_5mg、0. 2_20mg、0. 2_15mg、0. 2-lOmg、 0.2_511^、0.4-2011^、0.4-1511^、0.4-1011^、0.4-511^、0.4-411^、1-2011^、1-1511^和1-1011^。
139. 權(quán)利要求130-138中任一項的方法，其中所述皮質(zhì)類固醇經(jīng)口施用。
140. 權(quán)利要求60-139中任一項的方法，其包括： 施用包含抗透明質(zhì)酸劑的組合物； 施用包含腫瘤靶向紫杉烷制劑的組合物，其中所述腫瘤靶向紫杉烷與所述抗透明質(zhì)酸 劑同時或接近同時施用； 任選地，在施用所述抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷之后，施用核苷類似物；和 在所述抗透明質(zhì)酸劑施用之前、同時、間歇或之后施用皮質(zhì)類固醇。
141. 權(quán)利要求140的方法，其中： 所述抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷以每周兩次或每周一次的施用頻率施用預(yù)定周 數(shù)；和 所述核苷類似物每周一次施用預(yù)定周數(shù)。
142. 權(quán)利要求141的方法，其中所述抗透明質(zhì)酸劑每周施用兩次，并且所述腫瘤靶向 紫杉烷每周施用一次。
143. 權(quán)利要求140-142中任一項的方法，其中所述核苷類似物在所述抗透明質(zhì)酸劑和 所述腫瘤靶向紫杉烷施用之后一周施用。
144. 權(quán)利要求140-142中任一項的方法，其中所述預(yù)定周數(shù)是4周。
145. 權(quán)利要求60-144中任一項的方法，其進(jìn)一步包括癌癥治療的施用。
146. 權(quán)利要求145的方法，其中所述癌癥治療選自手術(shù)、放射、化療劑、生物制劑、多 肽、抗體、肽、小分子、基因療法載體、病毒和DNA。
147. 權(quán)利要求60-146中任一項的方法，其中所述對象是人。
148. 權(quán)利要求1-59中任一項的組合物組合用于治療癌癥的用途。
149. 用于治療癌癥的權(quán)利要求1-59中任一項的組合物組合。
150. 抗透明質(zhì)酸劑和腫瘤靶向紫杉烷用于治療癌癥的用途，其中所述抗透明質(zhì)酸劑和 腫瘤靶向紫杉烷分開或一起配制。
151. 抗透明質(zhì)酸劑在制備用于治療癌癥的藥劑中的用途，其中所述治療包括同時、接 近同時、分開或順次給對象施用腫瘤靶向紫杉烷。
152. -種用于治療癌癥的包含抗透明質(zhì)酸劑的組合物，其中所述治療包括同時、接近 同時、分開或順次給對象施用腫瘤靶向紫杉烷。
153. 權(quán)利要求151的用途或權(quán)利要求152的組合物，其中所述治療包括接近同時施用 腫瘤靶向紫杉烷。
154. 權(quán)利要求148-153中任一項的用途或組合，其中所述癌癥是腫瘤。
155. 權(quán)利要求148-154中任一項的用途或組合，其中所述腫瘤是實體瘤。
156. 權(quán)利要求154或155的用途或組合，其中與相同組織類型的非癌性組織相比較或 與相同腫瘤類型的非轉(zhuǎn)移性腫瘤相比較，所述腫瘤具有增加的細(xì)胞和/或基質(zhì)透明質(zhì)酸表 達(dá)。
157. 權(quán)利要求148-156中任一項的用途或組合，其中所述癌癥選自胰腺癌、卵巢癌、肺 癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、子宮頸癌、頭頸癌和乳腺癌。
158. 權(quán)利要求148-157中任一項的用途或組合，其中所述癌癥是膜腺癌。
159. 權(quán)利要求151-158中任一項的用途或組合，其中所述治療進(jìn)一步包括與所述抗透 明質(zhì)酸劑或腫瘤靶向紫杉烷同時、接近同時、分開或順次施用核苷類似物。
160. 包含與聚合物綴合的透明質(zhì)酸降解酶的組合和包含腫瘤靶向紫杉烷的組合物用 于增加核苷類似物的腫瘤內(nèi)活性的用途。
161. 包含抗透明質(zhì)酸劑的組合和包含腫瘤靶向紫杉烷的組合物用于增加核苷類似物 的腫瘤內(nèi)活性的用途。
【文檔編號】A61K9/127GK104411324SQ201380029337
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月4日
【發(fā)明者】D·C·馬內(nèi)瓦爾, H·M·謝潑德, C·B·湯普森 申請人:哈洛齊梅公司