用于遞送生物活性化合物的功能化脂質(zhì)體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及軛合物，其中使用可溶于水的聚合物通過醚鍵將甾醇功能化，導(dǎo)向配體與該可溶于水的聚合物結(jié)合。這些軛合物改善了攜帶它們的囊泡的物理化學(xué)性質(zhì)和遞送性質(zhì)，使這些囊泡更穩(wěn)定、均勻和有效。還描述了它們的制備方法、包含所述脂質(zhì)體的藥物組合物以及它們的治療用途。
【專利說明】用于遞送生物活性化合物的功能化脂質(zhì)體
[0001] 本發(fā)明涉及用于選擇性遞送活性劑的新的功能化脂質(zhì)體。由于這些脂質(zhì)體具有多 種導(dǎo)向配體的功能化，它們可在化妝品和治療中具有潛在應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 脂質(zhì)體是包含與細(xì)胞的脂質(zhì)雙層類似的脂質(zhì)雙層的囊泡。在它們的內(nèi)部有水溶 液，其中可發(fā)現(xiàn)諸如天然產(chǎn)物、合成藥物或核酸的不同分子。這些囊泡目前被用作具有許多 不同應(yīng)用的載體和分子遞送系統(tǒng)。典型的應(yīng)用包括在治療或化妝品中遞送生物活性化合 物。
[0003] 脂質(zhì)體不斷演變，并且已經(jīng)部分解決一些與它們在第一代中的使用相關(guān)的問題， 例如短的血楽半衰期或非特異性結(jié)合（TorchilinV."Recentadvanceswithliposomes aspharmaceuticalcarriers(脂質(zhì)體作為藥物裁體的最新講展NatureRev.Drug 2005,vol. 4,pp. 145-160)。為了降低脂質(zhì)體在循環(huán)中的快速消除，已經(jīng)將它們涂覆有 可溶的、惰性和生物相容的聚合物，例如聚乙二醇（PEG)，其形成了能減慢被調(diào)理素識別的 保護(hù)層，由此增加它們的生物利用度。對于可導(dǎo)致它們的內(nèi)容物的錯誤遞送的非特異性結(jié) 合，已經(jīng)測試了脂質(zhì)體表面上的越來越多數(shù)量的功能化配體，試圖將它們轉(zhuǎn)化為特異性遞 送體系。這些靶向分子的范圍可為諸如葉酸或生物素的小分子至肽或甚至抗體。
[0004] 還描述了同時(shí)被涂層聚合物和導(dǎo)向配體功能化的脂質(zhì)體，目標(biāo)是嘗試獲得較長 半衰期并且同時(shí)它的內(nèi)容物的更有效和選擇性遞送。因此，例如，已經(jīng)描述了脂質(zhì)體，其 中一種膜磷脂（二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或DSPE)已被用作聚乙二醇（PEG)鏈的共價(jià)結(jié) 合的錨點(diǎn)，其反過來已用于共價(jià)固定導(dǎo)向配體，在該情況下，環(huán)R⑶肽OubeyP.等人， "LiposomesmodifiedwithcyclicRGDpeptidefortumortargeting(用于腫瘤革巴向 的使用環(huán)R⑶肽修飾的脂質(zhì)體）" ?T.DrugTarg. 2004,vol. 12,pp. 257-264)。在現(xiàn)有技術(shù) 中，發(fā)現(xiàn)公開具有磷脂-PEG-[導(dǎo)向配體]類型的軛合物的脂質(zhì)體的其他參考文獻(xiàn)。例如， 已經(jīng)描述了具有DSPE-PEG-AG73類型的軛合物的脂質(zhì)體（NegishiY.等人，"Preparation andcharacterizationoflaminin-derivedpeptideAG73_coatedliposomesas aselectivegenedeliverytool(作為選擇性基因遞送工具的層粘連蛋白衍生的肽 AG73 涂覆的脂質(zhì)體的制備和表征）" ?Biol.Pharm.Bull. 2010,vol. 33,pp. 1766-1769) 〇 AG73是衍生自層粘連蛋白的a1鏈的球形結(jié)構(gòu)域的肽，已知其結(jié)合至多配體蛋白聚 糖-2(syndecan_2)，在一些癌癥中過度表達(dá)的受體。
[0005] 盡管磷脂質(zhì)已被用作錨點(diǎn)，但已經(jīng)開發(fā)了脂質(zhì)體的其他成分，特別是膽固 醇。因此，例如，發(fā)現(xiàn)描述膽固醇-PEG-[導(dǎo)向配體]類型的軛合物的參考文獻(xiàn)。已經(jīng) 描述了膽固醇-PEG-西妥昔單抗的軛合物用于在過度表達(dá)西妥昔單抗受體，EGFR的 癌細(xì)胞上遞送硼化合物（PanX.等人，"Synthesisofcetuximab-immunoliposomes viaacholesterol-basedmembraneanchorfortargetingofEGFR(通過用于 EGFR祀向的基于膽固醇的膜銷的西妥昔單抗-免疫脂質(zhì)體的合成）".BioconjuRate Chem. 2007,vol. 18,pp. 101-108)。現(xiàn)有技術(shù)的另一實(shí)例是在過度表達(dá)整合素av 0 3的細(xì) 胞上在基因療法中用于選擇性遞送編碼DNA的膽固醇-PEG-RGD類型的軛合物（Thomson B.，等人，"Neutralpostgraftedcolloidalparticlesforgenedelivery(用于基因遞 送的中性移植后膠體顆粒）"?Bioconi.Chem.2005,vol.16,pp.608-614)〇
[0006] 應(yīng)當(dāng)注意，通過酯-類型鍵或氨基甲酸酯-類型鍵實(shí)現(xiàn)在所有這些參考文獻(xiàn)中脂 質(zhì)體膜的膽固醇和串聯(lián)PEG-[導(dǎo)向配體]之間的共價(jià)結(jié)合。
[0007] 另一方面，已描述了已使用其他基團(tuán)功能化的脂質(zhì)體。特別地，已描述了具有 軛合物的功能化脂質(zhì)體，其中膽固醇通過乙稀基醚結(jié)合至PEG(稱為CVEP)(BoomerJ.， 等人，"Cytoplasmicdeliveryofliposomalcontentsmediatedbyanacid-labile cholesterol-vinylether-PEGconjugate(通過酸不穩(wěn)定的膽固醇-乙稀基醚-PEG軛合 物介導(dǎo)的脂質(zhì)體內(nèi)容物的細(xì)胞質(zhì)遞送）"Bioconi.Chem. 2009,vol. 20, 47_69)。乙烯基醚基 團(tuán)在酸性介質(zhì)中斷裂，導(dǎo)致PEG涂層的損失。這些脂質(zhì)體另外包含將它們引導(dǎo)至過度表達(dá) 葉酸受體的細(xì)胞的DSPE-PEG-葉酸的第二軛合物。
[0008] 盡管已經(jīng)部分解決與使用脂質(zhì)體相關(guān)的一些技術(shù)問題，但仍需要給予攜帶脂質(zhì)體 更好的物理化學(xué)性質(zhì)和藥理學(xué)性質(zhì)的軛合物。
[0009] 發(fā)明描述
[0010] 本發(fā)明涉及攜帶軛合物的脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體基于將存在于它的具有聚乙二醇鏈 的脂質(zhì)雙層中的留醇功能化，其反過來被導(dǎo)向配體功能化。膽固醇分子和PEG之間的結(jié)合 由烷基醚基團(tuán)制成，不同于使用諸如氨基甲酸酯的其他化學(xué)基團(tuán)的現(xiàn)有技術(shù)的那些。該新 共價(jià)結(jié)合給予攜帶軛合物的脂質(zhì)體改進(jìn)的物理化學(xué)性質(zhì)和遞送性質(zhì)。特別地，發(fā)明人已發(fā) 現(xiàn)攜帶具有醚鍵的軛合物的脂質(zhì)體顯示比攜帶具有氨基甲酸酯鍵的軛合物的脂質(zhì)體優(yōu)異 的懸浮穩(wěn)定性。即，具有醚鍵的軛合物具有比其中膽固醇和PEG鏈通過氨基甲酸酯結(jié)合的 那些軛合物更慢的沉降速率。這使得具有本發(fā)明軛合物的脂質(zhì)體比現(xiàn)有技術(shù)描述的那些在 懸浮中更穩(wěn)定。應(yīng)當(dāng)注意，現(xiàn)有技術(shù)沒有參考文獻(xiàn)表明該醚類型共價(jià)結(jié)合可給予所述懸浮 穩(wěn)定性。
[0011] 另一方面，發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，與由膽固醇-(氨基甲酸酯）-PEG-[導(dǎo)向配體] 類型的軛合物給予的相比，膽固醇_(醚）-PEG-[導(dǎo)向配體]類型的軛合物給予脂質(zhì)體更均 勻的粒度。膽固醇_(氨基甲酸酯）-PEG-[導(dǎo)向配體]類型的軛合物表明雙模態(tài)粒度分布， 而本發(fā)明的那些軛合物具有更均勻的，單模態(tài)分布。
[0012] 攜帶本發(fā)明軛合物的脂質(zhì)體的均勻性和沉降速率的物理化學(xué)性質(zhì)在用治療劑功 能化的脂質(zhì)體的生產(chǎn)、處理和使用中是有利的。
[0013] 此外，還出乎意料地發(fā)現(xiàn)攜帶本發(fā)明軛合物的脂質(zhì)體在遞送它們的內(nèi)容物方面具 有改進(jìn)的性質(zhì)。因此，攜帶具有連接膽固醇和PEG的醚鍵的軛合物的脂質(zhì)體比攜帶具有連 接膽固醇和PEG的氨基甲酸酯鍵的軛合物的脂質(zhì)體具有優(yōu)異的它們的內(nèi)容物至靶標(biāo)細(xì)胞 的遞送。
[0014] 因此，本發(fā)明的第一方面提供軛合物，其包含：i)甾醇；ii)具有近端和遠(yuǎn)端的聚 乙二醇鏈，其中所述聚乙二醇鏈通過它的近端經(jīng)由烷基醚類型的鍵與i)共價(jià)結(jié)合；iii)導(dǎo) 向配體，其能夠與靶標(biāo)細(xì)胞中存在的一個(gè)或幾個(gè)受體選擇性結(jié)合，所述導(dǎo)向配體與ii)的 遠(yuǎn)端共價(jià)結(jié)合。
[0015] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的軛合物是其中留醇為膽固醇的軛合物。
[0016] 在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，軛合物是其中聚乙二醇鏈具有1至30個(gè)重復(fù) (repetitions)的軛合物。在另一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，聚乙二醇鏈具有2至10個(gè)重復(fù)。[0017] 在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，軛合物是其中導(dǎo)向配體為肽的軛合物。在另一更優(yōu)選 的實(shí)施方案中，導(dǎo)向配體包含RGD序列。在另一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，導(dǎo)向配體是具有序列SEQIDNO:1 :RGDFK的肽，其中R⑶和K殘基是L-氨基酸且F殘基是D-氨基酸。
[0018] RGD肽是本領(lǐng)域通常描述的肽，該肽能夠與各種細(xì)胞系的膜中存在的整合素相互 作用，并且是用于研宄細(xì)胞之間和細(xì)胞與不同組織或基底膜之間的細(xì)胞粘附特別感興趣 的。在為本發(fā)明一部分的軛合物（醚鍵）以及最接近的現(xiàn)有技術(shù)的軛合物（氨基甲酸酯 鍵）中，所述實(shí)例中使用的RGD肽是具有RGDfK序列的肽，其中苯丙氨酸是唯一的D-氨基 酸（這就是為什么在序列中使用小寫字母區(qū)別它的原因），并且其中已經(jīng)進(jìn)行與聚乙二醇 的共價(jià)鍵合，從而使賴氨酸側(cè)鏈功能化。
[0019] 本發(fā)明的第二方面是包含如上定義的軛合物的脂質(zhì)體。
[0020] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，如上定義的脂質(zhì)體具有單模態(tài)粒度分布。
[0021] 在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，如上定義的脂質(zhì)體具有25納米直至500納米的平均粒 度，并且以絕對值計(jì)的平均Z電勢為20mV直至90mV。
[0022] 在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，如上定義的脂質(zhì)體還包含治療劑。在更優(yōu)選的實(shí)施方 案中，治療劑為a-半乳糖苷酶（或簡稱為GLA)。
[0023] 本發(fā)明的第三方面是如上定義的脂質(zhì)體作為治療劑的遞送系統(tǒng)的用途。
[0024] 本發(fā)明的第四方面涉及用作藥物的如上定義的脂質(zhì)體。
[0025] 本發(fā)明的第五方面涉及包含治療劑a_半乳糖苷酶的脂質(zhì)體在制備用于預(yù)防和/ 或治療法布里病（Fabrydisease)的藥物中的用途。
[0026] 該優(yōu)選的實(shí)施方案可再闡述為用于治療和/或預(yù)防法布里病的包含治療劑a _半 乳糖苷酶的脂質(zhì)體。
[0027] 還認(rèn)為本發(fā)明的一部分是用于治療和/或預(yù)防法布里病的方法，所述方法包括在 需要這種治療的包括人在內(nèi)的個(gè)體中給予治療有效量的如上定義的脂質(zhì)體，連同藥物可接 受的賦形劑或載體。
[0028] 本發(fā)明的第六方面是包含治療有效量的上述定義的脂質(zhì)體連同藥物可接受的賦 形劑和/或載體的藥物組合物。
[0029] 本發(fā)明的第七方面提供用于制備如上定義的軛合物的方法，其包括下列步驟：a) 在堿和溶劑的存在下使留醇與磺?；u化物反應(yīng)以提供相應(yīng)的磺?；ィ籦)在溶劑的存 在下使在步驟a)中獲得的化合物與具有2至10個(gè)重復(fù)的聚乙二醇反應(yīng)；c)使用二琥珀酰 亞胺基碳酸酯活化在步驟b)中獲得的化合物；d)在堿和溶劑的存在下使由步驟c)得到的 化合物與包含RGD序列的肽反應(yīng)。優(yōu)選地，磺?；榧谆撬狨?、苯磺酸酯（besylate)或 甲苯磺酸酯。
[0030] 本發(fā)明的第八方面提供用于制備如上定義的脂質(zhì)體的方法，其包括下列步驟：
[0031]a)制備可任選包含表面活性劑的水溶液；
[0032] b)制備包含溶解于有機(jī)溶劑中的如上定義的軛合物、膽固醇和任選的磷脂的溶 液，其中使用壓縮流體膨脹有機(jī)溶液；
[0033]c)任選地，將治療劑加入至步驟a)的溶液中，或者在膨脹步驟b)的溶液之前將治 療劑加入至步驟b)的溶液中；和
[0034] d)在步驟a)的所得溶液上將由步驟b)獲得的溶液減壓。
[0035]優(yōu)選地，表面活性劑是在飽和雜環(huán)和不飽和雜環(huán)中的叔胺的鹽、季銨鹽和烷基銨 的鹽。此外，優(yōu)選地，壓縮流體為二氧化碳（C02)、乙烷、丙烷、氫氯氟烴（例如，CFC-22)和 氫氟烴（例如，HFC-134A)。
[0036]在整個(gè)說明書和權(quán)利要求書中，詞語"包括/包含（comprises) "及其變型不意圖 排除其他技術(shù)特征、添加劑、組分或步驟。此外，詞語"包括/包含（comprise)"包括"由… 組成（consistingof)"的情況。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員，本發(fā)明的其他目的、優(yōu)點(diǎn)和特征將 部分從說明書并且部分從本發(fā)明的實(shí)踐中顯現(xiàn)出來。通過圖示提供下列實(shí)施例和附圖，并 且不意圖限制本發(fā)明。此外，本發(fā)明包括本文指出的特定和優(yōu)選的實(shí)施方案的所有可能組 合。
[0037] 定義
[0038]本文使用的術(shù)語"脂質(zhì)體"和"囊泡"可相互交換。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員，通常理 解稱為脂質(zhì)體的囊泡具有在它的膜中存在的一些磷脂，而當(dāng)脂質(zhì)體沒有磷脂時(shí)也使用術(shù)語 囊泡。在任何情況下，作為本發(fā)明一部分的軛合物可包含在含有或不含磷脂的囊泡中。
[0039]本文使用的術(shù)語"a_半乳糖苷酶"（簡稱為GLA)是指從糖脂和糖蛋白中水解末 端a-半乳糖基部分的糖苷水解酶。它由GLA基因編碼。它主要水解神經(jīng)酰胺三己糖苷， 并且它可催化蜜二糖水解為半乳糖和葡萄糖。如在這里理解的，GLA可意指在原核生物 (procariotes)和真核生物二者中克隆和表達(dá)的a-半乳糖苷酶，截短型GLA酶，或仍保持 它的原始催化活性的GLA衍生物。
[0040]本文使用的術(shù)語"治療劑"是指待給藥的以具有有利效果的任何種類的物質(zhì)、分子 或物質(zhì)或分子的混合物，并且其被封裝、捕獲或復(fù)合在脂質(zhì)體中。
[0041] 本文使用的術(shù)語"治療有效量"是指當(dāng)給藥時(shí)其足以阻止疾病或疾病狀態(tài)的一種 或多種癥狀的發(fā)展或在一定程度上減輕疾病或疾病狀態(tài)的一種或多種癥狀的化合物的量。 根據(jù)本發(fā)明給予的化合物的特定劑量將明顯由與每種實(shí)例相關(guān)的情況設(shè)定，包括所給予的 化合物、給藥途徑、治療的疾病和類似的考慮因素。
[0042] 術(shù)語"藥物組合物"是指本文公開的囊泡與諸如溶劑的其他化學(xué)組分的混合物。藥 物組合物促進(jìn)將治療劑攜帶至生物體的囊泡的給藥。
[0043] 術(shù)語"藥物可接受的賦形劑"是指藥物可接受的物質(zhì)、組合物或媒介物，例如液體 或固體填充劑、賦形劑、溶劑或封裝材料。從與藥物組合物的其他成分相容的意義而言，各 個(gè)組分必需為藥物可接受的。它必須適用于與人和動物的組織或器官接觸使用而沒有過多 毒性、刺激性或過敏反應(yīng)、致免疫性或其他問題或并發(fā)癥，具有合理風(fēng)險(xiǎn)/效益比。
[0044]本文使用的術(shù)語"治療"是指減輕或根除疾病或疾病狀態(tài)，減輕或根除與疾病或疾 病狀態(tài)相關(guān)的一種或多種癥狀，或減輕或根除疾病或疾病狀態(tài)的病因。
[0045] 附圖簡述
[0046] 圖1.例示本發(fā)明囊泡的制備方法的裝配（縮寫：R:高壓容器；V:閥；P:泵；F:流 量計(jì)；H:熱交換器；ST:攪拌器；FL:過濾器；TI:溫度指示器；PIC:壓力指示器和控制器； C:集電器；RD:破裂片）。
[0047] 圖2?包含本發(fā)明軛合物（具有醚鍵，虛線）的囊泡和包含具有氨基甲酸酯鍵（實(shí) 線）的軛合物的囊泡的粒度分布。在該圖中，示出前者具有單模態(tài)分布，而后者顯示雙模 態(tài)、較不均勻的分布。
[0048] 圖3?顯示不具有軛合物，具有DPPC:Col:Col-PEG-R⑶（醚）和具有 DPPC:C〇l:C〇l-PEG-RGD(氨基甲酸酯）的脂質(zhì)體的內(nèi)化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的共聚焦圖像。左 手側(cè)欄、中間欄和右手側(cè)欄分別相應(yīng)于傳動裝置（細(xì)胞）、綠色通道（溶酶體）和 紅色通道（DiD)。上行、中間行和下行分別相應(yīng)于DPPC:Col:Col-PEG-R⑶（醚）、 DPPC:Col:Col-PEG-RGD(氨基甲酸酯）和DPPC:Col。
[0049] 圖4.顯示與已使DID-標(biāo)記的脂質(zhì)體內(nèi)化的細(xì)胞相關(guān)的熒光強(qiáng)度。它顯示當(dāng)使用 DPPC:Col:Col-PEG-RGD(醚）脂質(zhì)體時(shí)比當(dāng)使用DPPC:Col:Col-PEG-RGD(氨基甲酸酯）和 DPPC:Col脂質(zhì)體時(shí)該內(nèi)化顯著更高。
[0050]y軸顯示熒光強(qiáng)度（a.u.)。在x軸中：左手側(cè)值、中間值和右手側(cè)值分別相 應(yīng)于簡單（plain)脂質(zhì)體、具有DPPC:C〇l:C〇l-PEG-RGD(醚）軛合物的脂質(zhì)體和具有 DPPC:Co1:Co1-PEG-RGD(氨基甲酸酯）軛合物的脂質(zhì)體。
[0051] 圖5.在1. 5yg/ml酶濃度下，在a半乳糖苷酶-缺陷小鼠的MAEC培養(yǎng)物中的脂 質(zhì)體的a半乳糖苷酶活性。y軸描述了 ％Gb3損失（平均+/_標(biāo)準(zhǔn)偏差）。在x軸中：點(diǎn) 1相應(yīng)于a-半乳糖苷酶（沒有脂質(zhì)體封裝），點(diǎn)2相應(yīng)于功能化的脂質(zhì)體（具有氨基甲酸 酯或者醚連接的軛合物）且點(diǎn)3相應(yīng)于已經(jīng)滲濾的功能化的脂質(zhì)體。
[0052] 圖6.不同濃度下的攜帶a_半乳糖苷酶的滲濾的具有軛合物的脂質(zhì)體對a_半 乳糖苷酶缺陷內(nèi)皮細(xì)胞中Gb3的損失的影響。x軸顯示％Gb3損失而y軸顯示a-半乳糖 苷酶濃度（Ug/mL)。具有實(shí)體黑色點(diǎn)的線相應(yīng)于攜帶具有氨基甲酸酯鍵的軛合物的脂質(zhì) 體，而具有空方格的線相應(yīng)于攜帶具有醚鍵的軛合物的脂質(zhì)體。 實(shí)施例
[0053] 實(shí)施例1.軛合物的制各
[0054] 使用下面描述的步驟合成形成本發(fā)明一部分的軛合物（在膽固醇和PEG之間具有 醚鍵）以及在現(xiàn)有技術(shù)中已描述的那些（在膽固醇和PEG之間具有氨基甲酸酯鍵）。用于 實(shí)驗(yàn)概述中的首字母縮略詞為：
[0055] ACN :乙腈
[0056] CDI : 1，1' -羰基二咪唑
[0057] DCM:二氯甲烷
[0058]DIPEA:N，N-二異丙基乙胺
[0059]DMF:N，N-二甲基甲酰胺
[0060] DSC:二琥珀酰亞胺基碳酸酯
[0061] HPLC-MS:高效液相色譜-質(zhì)譜
[0062] HPLC-PDA:高效液相色譜-質(zhì)譜-光電二極管陣列檢測器
[0063] NMR:核磁共振
[0064] TMBE:甲基叔丁基醚
[0065] TFA :三氟乙酸
[0066] TIS :三異丙基硅烷
[0067] 實(shí)施例la:具有醚鍵的軛合物的制各：
[0068] 3曰固醇甲苯磺?；ˋ)的制各：

【權(quán)利要求】
1. 軛合物，其包含： i) 甾醇； ii) 具有近端和遠(yuǎn)端的聚乙二醇鏈，其中所述聚乙二醇鏈通過它的近端經(jīng)由烷基醚類 型的鍵與i)共價(jià)結(jié)合； iii) 導(dǎo)向配體，其能夠與靶標(biāo)細(xì)胞中存在的一種或數(shù)種受體選擇性結(jié)合，所述導(dǎo)向配 體與所述ii)的遠(yuǎn)端共價(jià)結(jié)合。
2. 如權(quán)利要求1所述的軛合物，其中所述留醇為膽固醇。
3. 如權(quán)利要求1至2中任一權(quán)利要求所述的軛合物，其中所述聚乙二醇鏈具有2至10 個(gè)重復(fù)。
4. 如權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的軛合物，其中所述導(dǎo)向配體為肽。
5. 如權(quán)利要求1至4中任一權(quán)利要求所述的軛合物，其中所述導(dǎo)向配體包含RGD序列。
6. 如權(quán)利要求5所述的軛合物，其中所述導(dǎo)向配體為序列SEQ ID NO :1的肽。
7. 包含權(quán)利要求1至6中任一權(quán)利要求定義的軛合物的脂質(zhì)體。
8. 如權(quán)利要求7所述的脂質(zhì)體，其具有單模態(tài)粒度分布。
9. 如權(quán)利要求8所述的脂質(zhì)體，其中所述平均粒度為25納米直至500納米，且絕對值 形式的平均Z電勢為20mV直至90mV。
10. 如權(quán)利要求7至9中任一權(quán)利要求所述的脂質(zhì)體，其還包含治療劑。
11. 如權(quán)利要求10所述的脂質(zhì)體，其中所述治療劑為a -半乳糖苷酶。
12. 權(quán)利要求7定義的脂質(zhì)體作為治療劑的遞送系統(tǒng)的用途。
13. 用作藥物的權(quán)利要求10至11中任一權(quán)利要求定義的脂質(zhì)體。
14. 用于治療和/或預(yù)防法布里病的權(quán)利要求11定義的脂質(zhì)體。
15. 包含治療有效量的權(quán)利要求10至11中任一權(quán)利要求定義的脂質(zhì)體連同藥物可接 受的賦形劑和/或載體的藥物組合物。
16. 用于制備權(quán)利要求1至6中任一權(quán)利要求定義的軛合物的方法，其包括下列步驟： a) 在堿和溶劑的存在下使留醇與磺?；u化物反應(yīng)以提供相應(yīng)的磺?；ィ? b) 在溶劑的存在下使在所述步驟a)中獲得的化合物與具有2至10個(gè)重復(fù)的聚乙二醇 反應(yīng)； c) 使用二琥珀酰亞胺基碳酸酯活化在所述步驟b)中獲得的化合物； d) 在堿和溶劑的存在下使由所述步驟c)得到的化合物與包含RGD序列的肽反應(yīng)。
17. 制備權(quán)利要求7至11和13中任一權(quán)利要求定義的脂質(zhì)體的方法，其包括下列步 驟： a) 制備可任選包含表面活性劑的水溶液； b) 制備包含溶解于有機(jī)溶劑中的權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求定義的軛合物、膽固醇 和任選的磷脂的溶液，其中使用壓縮流體膨脹所述有機(jī)溶液； c) 任選地，將治療劑加入至所述步驟a)的溶液中，或者在膨脹所述步驟b)的溶液之前 將治療劑加入至所述步驟b)的溶液中；和 d) 在所述步驟a)得到的溶液上將由所述步驟b)得到的溶液減壓。
【文檔編號】A61K47/48GK104507503SQ201380034806
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2013年6月28日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月29日
【發(fā)明者】利奧諾·本托薩魯爾, 豪梅·貝西亞納米羅, 英格里德·卡博雷拉普伊赫, 埃莉薩·埃利松多塞斯德維庫納, 瑪爾塔·梅爾加列霍迪亞茲, 米里亞姆·羅佑艾斯波西托, 費(fèi)爾南多·阿爾本瑞希歐帕羅米拉, 丹尼爾·普利多馬丁內(nèi)斯, 桑蒂亞戈·薩拉韋爾格斯, 約瑟·路易斯·科爾歇爾羅涅托, 西蒙·施瓦茲納瓦羅, 伊巴內(nèi)·阿巴索洛歐勞爾圖阿, 安東尼奧·佩德羅·韋拉韋爾德科拉萊斯 申請人:康斯喬最高科學(xué)研究公司(Csic), 巴塞羅那科技園基金會, 生物醫(yī)學(xué)網(wǎng)絡(luò)研究中心, 巴塞羅那生物醫(yī)學(xué)研究基金會(Irb Barcelona), 巴塞羅納大學(xué), 瓦爾德西布倫大學(xué)醫(yī)院基金會研究所, 巴塞羅那自治大學(xué)