Hgh-xten融合蛋白及其在治療生長激素缺乏中的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及針對GHD療法的改善的治療方案。具體而言，本發(fā)明涉及以團(tuán)劑施用人生長激素-XTEN(hGH-XTEN)融合蛋白的方法。
【專利說明】HGH-XTEN融合蛋白及其在治療生長激素缺乏中的用途
[0001] 本申請要求2012年6月5日提交的美國臨時申請?zhí)?1/689, 390、2012年6月 22日提交的美國臨時申請?zhí)?1/663,475以及2013年2月12日提交的美國臨時申請?zhí)?61/763, 753的權(quán)益，其內(nèi)容通過引用整體并入本文。 序列表
[0002] 本申請包含已經(jīng)以ASCII格式通過EFS-Web提交的序列表，該序列表通過引用 以其整體并入于此。所述ASCII副本，創(chuàng)建于2013年3月13日，命名為32808-738. 201_ SL. txt，并且大小為255, 823個字節(jié)。

【背景技術(shù)】
[0003] 人生長激素（hGH)作為通常發(fā)生在睡眠期間、持續(xù)數(shù)分鐘到數(shù)小時的間歇脈沖而 從人垂體前葉自然分泌。hGH分泌的速率和程度隨著年齡的增長而下降，并且在正常健康且 營養(yǎng)良好的兒童的青春期達(dá)到最大值。hGH與hGH受體結(jié)合，從而啟動涉及STAT (信號轉(zhuǎn) 導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白）、MPK(促分裂原活化蛋白激酶）和PI3K(磷酸肌醇-3激酶）途徑的 信號傳導(dǎo)過程。hGH受體信號傳導(dǎo)激活胰島素樣生長因子-I (IGF-I)基因表達(dá)，從而導(dǎo)致 IGF-I分泌到循環(huán)中。IGF-I與胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3(IGFBP-3)和酸不穩(wěn)定性亞 單位（ALS)形成復(fù)合物。IGFBP-3和ALS表達(dá)也均通過hGH受體活化進(jìn)行調(diào)控。
[0004] 在患有由于缺乏hGH表達(dá)或分泌而導(dǎo)致，而并非由hGH受體的缺陷所引起的生長 激素缺乏（GHD)的兒童中，通常開出包含每日注射rhGH的替代療法的處方以促進(jìn)接近正常 的生長和發(fā)育。響應(yīng)于hGH和IGF-I，新骨在骨骺處形成，從而引起線性生長，直到青春期后 生長板融合。每日rhGH的施用并不模擬在非GHD兒童中hGH的正常內(nèi)源性脈沖，而是導(dǎo)致 生長的顯著增加，在治療的第一年的典型生長速率為Ilcm/年。使用泵連續(xù)輸注rhGH的臨 床研究顯示了與通過每日rhGH注射實現(xiàn)的生長速度和IGF-I水平相當(dāng)?shù)纳L速度和IGF-I 水平（J0rgensen等人.j. ciin Endocrinol Metab. 7〇(6)，1616_23(1 99〇) ;Laursen T 等 人.J Clin Endocrinol Metab. 80(8)，2410-8(1995) ;Tauber M等人.J Clin Endocrinol Metab. 76(5)，1135-9(1993))。因此，rhGH的連續(xù)的以及脈沖式給藥是有效的。
[0005] 在成年期，hGH分泌減少，但對于維持適當(dāng)?shù)募に仄胶馊匀皇侵匾?，并且已被證 明有利于降低脂肪量和心血管危險因素，以及提高瘦體重、骨礦物質(zhì)密度和生活質(zhì)量結(jié)果。 成人GHD可能由于腦創(chuàng)傷或在垂體或靠近垂體處手術(shù)切除腫瘤而發(fā)生。在兒童期表現(xiàn)出 GHD的患者在成年期可能還需要繼續(xù)hGH替代療法。在一些成年GHD患者中，可能存在異常 低的IGF-I水平。由于IGF-I水平隨著年齡和性別而變化，因此每個成年患者必須通過根 據(jù)他們各自的年齡和性別調(diào)整的IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（IGF-I SDS)來表征。
[0006] hGH每日療法的目的通常在于使用rhGH劑量滴定成年GHD患者，直到患者達(dá)到 接近范圍中央的 IGF-I SDS (例如，IGF-I SDS 為 0 (Cook 等人，2009Update. Endocrine Pract. 15 (增刊2)，1-29 (2009)))。在成年GHD患者（每組7名）中將連續(xù)輸注rhGH與每日 rhGH療法比較了6個月（Laursen等人，J Clin Endocrinol Metab. 86(3)，1222-8(2001))。 該研究表明，在使用連續(xù)輸注rhGH或每日rhGH療法治療的患者之間，安全性曲線和對 IGF-I響應(yīng)的效果并沒有顯著性差異。
[0007] 已在GHD兒童和成人中對每日rhGH療法的安全性進(jìn)行了研究。在一些超重或肥 胖患者中，已觀察到有朝向空腹和餐后胰島素水平增加的趨勢。盡管通常耐受性良好，但每 日rhGH療法可能導(dǎo)致輕度至中度的頭痛、關(guān)節(jié)痛、惡心、嘔吐和注射反應(yīng)。
[0008] 其他人已報道了各種不同的持續(xù)釋放GH制劑（Cook DM等人.2002. J Clin Endocrinol Metab 87(10) :4508-4514 ;Biller BM 等人.2011. J Clin Endocrinol Metab 96(6):1718-1726;Peter F.等人，2012.J Clin Endocrinol Metab 97(2):400-407; Fares F.等人，2010. Endocrinologyl51 (9) :4410-4417 ;Sondergaard E 等人.2011. J Clin Endocrinol Metab96(3) :681-688 ;de Schepper J等人.2011. European Journal of Endocrinology 165(3) :401-409 ;Bidlingmaier M 等人.2006. J Clin Endocrinol Metab 91(8) :2926-2930)。然而，仍然需要可替代的GH療法、劑量和治療方案。
[0009] VRS-317是一種開發(fā)中的用于患有GHD的成人（包括在兒童時經(jīng)歷生長激素相關(guān) 病癥的成人）的長期替代療法的試驗性長效rhGH。設(shè)計VRS-317以達(dá)到每月一次給藥，并 預(yù)期給藥頻率的降低（每年12次，相對于高達(dá)365次注射）將增加治療依從性，并因此改 善整體治療結(jié)果。VRS-317是一種新的rhGH融合蛋白，其被設(shè)計為通過受體結(jié)合的降低來 最小化由受體介導(dǎo)的清除，這種受體結(jié)合的降低是通過在遺傳學(xué)上將延伸重組多肽（XTEN) 氨基酸序列融合至天然hGH序列的N-端和C-端而沒有對rhGH的突變來實現(xiàn)的（Cleland 等人.2012, Journal of Pharmaceutical Sciences. 101 (8) :2744-2754,電子版，2012 年 6月7日）。在功能上，XTEN結(jié)構(gòu)域增加了流體力學(xué)半徑并降低了在體外對GH受體（GHR) 的結(jié)合親和力。盡管結(jié)合親和力降低，但在體內(nèi)觀察到持久的藥效學(xué)響應(yīng)，這可能與受體 介導(dǎo)的VRS-317清除的速率降低有關(guān)（Cleland等人.2012,同上）。在為期60天、雙盲、 隨機(jī)、以安慰劑（PBO)為對照的、VRS-317/kg的單次給藥遞增研究（ClinicalTrials.gov NCT01359488)中，針對50名患有GHD的成人評估了 VRS-317的安全性、耐受性和功效。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明涉及一種針對生長激素缺乏（"GHD"）療法的改善的治療方案。具體而言， 本發(fā)明涉及以團(tuán)劑（bolus dose)施用融合蛋白的組合物的方法,該融合蛋白包含與一個或 多個延伸重組多肽（XTEN)融合的人生長激素（該融合蛋白在下文稱為"hGH-XTEN"）。因 此，在一個方面，本發(fā)明涉及一種用hGH-XTEN融合蛋白治療人GHD的方法。
[0011] 在一個方面，本發(fā)明提供了一種用hGH-XTEN融合蛋白作為團(tuán)劑治療人類患者 的人生長激素缺乏（GHD)的方法。在一個實施方案中，該方法包括向人類GHD患者施用 hGH-XTEN融合蛋白，該hGH-XTEN融合蛋白包含（i)與SEQ ID N0:1具有至少約90%序列同 一性的氨基酸序列；或（ii)SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。在另一個實施方案中，該hGH-XTEN 融合蛋白作為治療有效的、根據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑來施用。在另一個實施方案中，該團(tuán)劑為 (i)約 0· 05mg/kg 至約 3. 0mg/kg ; (ii)約 0· 05mg/kg 至約 0· 8mg/kg ;或（iii)約 0· 8mg/kg 至約I. 2mg/kg。在其他實施方案中，該團(tuán)劑施用一次、每周、每兩周、每三周或每月施用。在 一個實施方案中，該團(tuán)劑的施用每月進(jìn)行。在另一個實施方案中，皮下施用該團(tuán)劑。在另一 個實施方案中，人類患者在施用后具有約-2. 0至約2. 0的血清IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（SDS)。 在一個另外的實施方案中，該IGF-I SDS選自大于約-2. 0、大于約-1. 5、大于約-1. 0、大于 約-〇. 5、大于約0、大于約0. 5、大于約I. O和大于約I. 5。在一個另外的實施方案中，人類 患者在施用該團(tuán)劑后表現(xiàn)出所述血清IGF-I SDS，其中該施用為一次、每周、每兩周、每三周 或每月施用。在一個實施方案中，該團(tuán)劑的施用導(dǎo)致人類患者的IGF-I SDS歸一化至少約7 天、至少約10天、至少約14天、至少約16天或至少約21天。在一個另外的實施方案中，該 團(tuán)劑選自約 〇· 〇5mg/kg、約 0· lmg/kg、約 0· 2mg/kg、約 0· 4mg/kg、約 0· 8mg/kg、約 I. Omg/kg、 約 I. 2mg/kg、約 I. 4mg/kg、約 I. 6mg/kg、約 I. 8mg/kg、約 2. Omg/kg、約 2. 2mg/kg、約 2. 4mg/ kg、約 2. 6mg/kg、約 2. 7mg/kg、約 2. 8mg/kg 和約 3. Omg/kg。
[0012] 在另一方面，本發(fā)明提供了一種用hGH-XTEN融合蛋白作為團(tuán)劑治療人類患者的 人生長激素缺乏（GHD)的方法，該團(tuán)劑等同于小于hGH/kg/天劑量。在一個實施方案中，該 方法包括向人類GHD患者施用hGH-XTEN融合蛋白，該hGH-XTEN融合蛋白包含（i)與SEQ ID N0:1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列；或（ii)SEQ ID N0:1的氨基酸序列。在 另一個實施方案中，該團(tuán)劑為該hGH-XTEN融合蛋白的治療有效的、根據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑。 在一個另外的實施方案中，該團(tuán)劑等同于小于約2yg hGH/kg/天至約20yg hGH/kg/天的 hGH/kg/天劑量。在一個另外的實施方案中，該團(tuán)劑施用一次、每周、每兩周、每三周或每月 施用。在一個實施方案中，該團(tuán)劑的施用每月進(jìn)行。在另一個實施方案中，皮下施用該團(tuán) 齊LU在其他實施方案中，該團(tuán)劑等同于小于選自約2μ g hGH/kg/天、約4μ g hGH/kg/天、 約 6 μ g hGH/kg/ 天、約 8 μ g hGH/kg/ 天、約 10 μ g hGH/kg/ 天、約 12 μ g hGH/kg/ 天、約 14 μ g hGH/kg/ 天、約 16 μ g hGH/kg/ 天、約 18 μ g hGH/kg/天、約 18. 6 μ g hGH/kg/ 天和約 20 μ g hGH/kg/天的hGH/kg/天劑量。在一個另外的實施方案中，該hGH/kg/天劑量在約 30天中。在另一個實施方案中，人類患者在施用后具有約-2. 0至約2. 0的血清IGF-I標(biāo)準(zhǔn) 差評分（SDS)。在一個另外的實施方案中，該IGF-I SDS選自大于約-2.0、大于約-1.5、大 于約-1. 0、大于約-〇. 5、大于約0、大于約0. 5、大于約I. 0和大于約1. 5。在一個另外的實 施方案中，人類患者在施用該團(tuán)劑后表現(xiàn)出所述血清IGF-I SDS，其中該施用為一次、每周、 每兩周、每三周或每月施用。
[0013] 在一個另外的方面，本發(fā)明提供了一種用hGH-XTEN融合蛋白作為團(tuán)劑治療人類 患者的人生長激素缺乏（GHD)的方法，該團(tuán)劑對于維持該患者的IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（SDS) 是有效的。在一個實施方案中，該方法包括向人類GHD患者施用hGH-XTEN融合蛋白，該 hGH-XTEN融合蛋白包含（i)與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列；或 (ii)SEQ ID N0:1的氨基酸序列。在另一個實施方案中，該hGH-XTEN融合蛋白作為治療有 效的、根據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑來施用。在一個另外的實施方案中，該團(tuán)劑對于在施用該團(tuán)劑后 將患者的血清IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（SDS)維持在約-2. 0至約2. 0至少7天是有效的。在其 他實施方案中，該團(tuán)劑為（i)約〇· 05mg/kg至約0· 8mg/kg ; (ii)約0· 8mg/kg至約I. 2mg/ kg;或（iii)約0.05mg/kg至約3.0mg/kg。在另一個實施方案中，該團(tuán)劑對于在施用該團(tuán) 劑后將患者的血清IGF-I SDS維持在約-2. 0至約2. 0至少20天是有效的。在一個實施方 案中，皮下施用該團(tuán)劑。在另一個實施方案中，人類患者在施用該團(tuán)劑后具有至少一個參數(shù) 的臨床上顯著的降低，該參數(shù)選自血清膽固醇、血清甘油三酯和血清低密度脂蛋白（LDL)， 其中該施用選自一次、每周、每兩周、每三周和每月。
[0014] 在另一方面，本發(fā)明提供了一種用hGH-XTEN融合蛋白作為團(tuán)劑治療人類患者的 人生長激素缺乏（GHD)的方法，該團(tuán)劑對于維持該患者中所述融合蛋白的血漿濃度是有效 的。在一個實施方案中，該方法包括向人類GHD患者施用hGH-XTEN融合蛋白，該hGH-XTEN 融合蛋白包含（i)與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列；或（ii) SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。在另一個實施方案中，該hGH-XTEN融合蛋白作為治療有效的、根據(jù) 體重調(diào)整的團(tuán)劑來施用。在一個另外的實施方案中，該團(tuán)劑對于在施用該團(tuán)劑后將該患者 中所述融合蛋白的血漿濃度維持在高于約10ng/mL至少10天的一段時間是有效的。在另 一個實施方案中，該團(tuán)劑為（i)約〇· 〇5mg/kg至約0· 8mg/kg ; (ii)約0· 8mg/kg至約I. 2mg/ kg;或（iii)約0.05mg/kg至約3.0mg/kg。在一個另外的實施方案中，該團(tuán)劑對于在施用 該團(tuán)劑后將該患者中所述融合蛋白的血楽濃度維持在高于約l〇ng/mL至少約14天、至少20 天、至少約28天或至少約30天的一段時間是有效的。在其他實施方案中，該團(tuán)劑對于在施 用該團(tuán)劑后將該患者中所述融合蛋白的血漿濃度維持在高于約l〇ng/mL至少20天或至少 約30天的一段時間是有效的。在另一個實施方案中，該團(tuán)劑對于在施用該團(tuán)劑后將該患者 中所述融合蛋白的血漿濃度維持在高于約lOOng/mL至少10天的一段時間是有效的。在一 個實施方案中，皮下施用該團(tuán)劑。在另一個實施方案中，人類患者在施用該團(tuán)劑后具有至少 一個參數(shù)的臨床上顯著的降低，該參數(shù)選自血清膽固醇、血清甘油三酯和血清低密度脂蛋 白（LDL)，其中該施用選自一次、每周、每兩周、每二周和每月。
[0015] 在一個另外的方面，本發(fā)明提供了一種用hGH-XTEN融合蛋白作為團(tuán)劑治療人類 患者的人生長激素缺乏（GHD)的方法，該團(tuán)劑在提高該患者的IGF-I SDS而不存在臨床 上顯著水平的副作用方面是有效的。在一個實施方案中，該方法包括向人類GHD患者施用 hGH-XTEN融合蛋白，該hGH-XTEN融合蛋白包含（i)與SEQ ID N0:1具有至少約90%序列同 一性的氨基酸序列；或（ii)SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。在另一個實施方案中，該hGH-XTEN 融合蛋白作為治療有效的、根據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑來施用。在一個另外的實施方案中，該團(tuán)劑 對于在施用后將患者的IGF-I SDS在受試者的基線IGF-I SDS之上提高至少0. 5或至少1. 0 是有效的。在一個另外的實施方案中，IGF-SDS的提高不存在臨床上顯著水平的副作用。在 一個實施方案中，該副作用選自頭痛、關(guān)節(jié)痛、肌痛、水腫、惡心和肌肉疲勞。在一個實施方 案中，皮下施用該團(tuán)劑。在另一個實施方案中，人類患者在施用該團(tuán)劑后具有至少一個參數(shù) 的臨床上顯著的降低，該參數(shù)選自血清膽固醇、血清甘油三酯和血清低密度脂蛋白（LDL)， 其中該施用選自一次、每周、每兩周、每三周和每月。
[0016] 在一個另外的方面，本發(fā)明提供了 hGH-XTEN融合蛋白的團(tuán)劑。在一個實施方案 中，該hGH-XTEN融合蛋白包含（i)與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸 序列；或（ii) SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。在另一個實施方案中，該團(tuán)劑是治療有效的、根 據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑。在另一個實施方案中，該團(tuán)劑包含（i)約0. 05mg/kg至約0. 8mg/kg; (ii)約 〇· 8mg/kg 至約 I. 2mg/kg ;或（iii)約 0· 05mg/kg 至約 3. 0mg/kg 的 hGH-XTEN 融合 蛋白。在一個另外的實施方案中，該團(tuán)劑用于治療有需要的受試者（例如，人類患者）中的 人GHD。在一個另外的實施方案中，該團(tuán)劑被配制用于皮下施用。
[0017] 在另一方面，本發(fā)明提供了一種hGH-XTEN融合蛋白，其用于治療人類患者的人 GHD的方法中，其中該方法包括向該患者施用該hGH-XTEN融合蛋白的團(tuán)劑。在一個另外的 方面，本發(fā)明提供hGH-XTEN融合蛋白在制備用于治療人類患者的GHD的藥物中的用途，其 中該hGH-XTEN融合蛋白作為團(tuán)劑施用于患者。在一個實施方案中，該hGH-XTEN融合蛋白包 含⑴與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列；或（ii) SEQ ID NO: 1的 氨基酸序列。在另一個實施方案中，該團(tuán)劑為治療有效的、根據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑。在一個另 外的實施方案中，該團(tuán)劑包含約0. 〇5mg/kg至約3. Omg/kg。在一個另外的實施方案中，該團(tuán) 劑每周、每兩周、每三周或每月施用。在一個實施方案中，皮下施用該團(tuán)劑。在其他實施方案 中，人類患者在施用該團(tuán)劑后具有約-2. 0至約2. 0的血清IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（SDS)。在另 一個實施方案中，該IGF-I SDS選自大于約-2. 0、大于約-1. 5、大于約-1. 0、大于約5、大 于約0、大于約0. 5、大于約I. 0和大于約1. 5。在進(jìn)一步的實施方案中，該團(tuán)劑的施用為施 用一次、每周、每兩周、每三周或每月施用。在一個實施方案中，人類患者在施用該團(tuán)劑后具 有至少一個參數(shù)的臨床上顯著的降低，該參數(shù)選自血清膽固醇、血清甘油三酯和血清LDL， 其中該施用為一次、每周、每兩周、每三周或每月施用。
[0018] 在一個另外的方面，本發(fā)明提供了一種提高人生長激素（hGH)療法在人類患者 中的功效的方法，其中該hGH療法包括hGH-XTEN融合蛋白的施用。在一個實施方案中， hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白包含（i)與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列；或 (ii)SEQ ID N0:1的氨基酸序列。在一個另外的實施方案中，該方法包括在施用初始劑量 的人生長激素-XTEN(hGH-XTEN)融合蛋白的初始劑量期中測量或監(jiān)測從患者獲得的血漿 或血清樣品中的IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（SDS)的步驟。在另一個實施方案中，該方法進(jìn)一步包 括基于在初始劑量期中觀察到的IGF-I SDS來確定在后續(xù)劑量期施用的hGH-ΧΤΕΝ融合蛋 白的后續(xù)劑量的步驟。在其他實施方案中，該確定步驟包括基于在初始劑量期中觀察到的 IGF-I SDS來確定后續(xù)劑量期。在一個另外的實施方案中，后續(xù)劑量和/或后續(xù)給藥期改善 了該治療在后續(xù)劑量期中的功效。
[0019] 在另一方面，本發(fā)明提供了一種試劑盒，其包含藥物組合物，該藥物組合物包含用 于治療人GHD的hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白。在一個實施方案中，該hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白包含（i) 與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列；或（ii) SEQ ID NO: 1的氨基 酸序列。在另一個實施方案中，該試劑盒包含容納藥物組合物的容器，該藥物組合物包含 hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白。在一個另外的實施方案中，該試劑盒進(jìn)一步包含與所述容器相關(guān)聯(lián)的 包裝插頁。在其他實施方案中，該包裝插頁指示所述組合物是通過施用hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白 的初始劑量和hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白的多個后續(xù)劑量而用于治療生長激素缺乏。在另一個實 施方案中，該初始劑量和多個后續(xù)團(tuán)劑各自包含團(tuán)劑。在一個另外的實施方案中，該團(tuán)劑為 治療有效的、根據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑。在一個實施方案中，該hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白的初始劑量 為約0. 05mg/kg至約3. Omg/kg。在另一個實施方案中，該hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白的所述多個 后續(xù)劑量為約〇. 〇5mg/kg至約3. 0mg/kg。在一個實施方案中，該劑量施用一次、每周、每兩 周、每三周或每月施用。 榜引并入
[0020] 在本說明書中提及的所有出版物、專利和專利申請均在此通過引用的方式并入， 其程度如同明確且單獨(dú)地指明每個單獨(dú)的出版物、專利或?qū)＠暾埻ㄟ^引用而并入。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021] 圖1提供了 hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白的氨基酸序列（hGH序列以下劃線和粗體示出） (SEQ ID N0:1)。
[0022] 圖2匯總了 VRS-317I期研究的研究階段。
[0023] 圖3匯總了患者處置。
[0024] 圖4示出了各種單次給藥的VRS-317的人藥代動力學(xué)（PK)曲線。
[0025] 圖5示出了劑量響應(yīng)：對于mg VRS-317/kg劑量的平均IGF-I SDS的變化。
[0026] 圖6示出了對單次給藥VRS-317的持續(xù)的IGF-I響應(yīng)。
[0027] 圖7匯總了施用各種單次給藥的VRS-317后報告的不良事件。

【具體實施方式】
[0028] 在描述本發(fā)明實施方案之前，應(yīng)當(dāng)理解，這些實施方案僅作為實例提供，并且可以 采用本文描述的本發(fā)明實施方案的各種替代方案來實施本發(fā)明。在不背離本發(fā)明的情況 下，本領(lǐng)技術(shù)人員現(xiàn)在將會想到許多改變、變化和替代。
[0029] 除非另外定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù) 人員所通常理解的相同的含義。下面描述了合適的方法和材料，但是與本文描述的方法和 材料類似或等同的方法和材料也可用于實施或測試本發(fā)明。如有沖突，以包括定義在內(nèi)的 本專利說明書為準(zhǔn)。此外，材料、方法和實例僅是示例說明性的而并非旨在限制。在不背離 本發(fā)明的情況下，本領(lǐng)技術(shù)人員現(xiàn)在將會想到許多改變、變化和替代。 定義
[0030] 除非另有指定，如本文所使用的，以下術(shù)語具有屬于它們的含義。
[0031] 除非上下文另外清楚地指明，說明書和權(quán)利要求中使用的單數(shù)形式"一個"、"一 種"和"該"包括復(fù)數(shù)指代物。例如，術(shù)語"一個細(xì)胞"包括多個細(xì)胞，包括其混合物。
[0032] 術(shù)語"多肽"、"肽"和"蛋白質(zhì)"在本文中可以互換使用，是指任何長度的氨基酸的 聚合物。該聚合物可以是直鏈的或支鏈的，其可以包含修飾的氨基酸，并且可以被非氨基酸 隔斷。這些術(shù)語還包括經(jīng)修飾的氨基酸聚合物（例如通過二硫鍵形成、糖基化、酯化、乙酰 化、磷酸化或任何其他操作，例如與標(biāo)記組分綴合）。
[0033] 本文使用的術(shù)語"氨基酸"是指天然和/或非天然的或合成的氨基酸，包括但不限 于甘氨酸和D或L旋光異構(gòu)體二者，以及氨基酸類似物和肽模擬物。使用標(biāo)準(zhǔn)的單字母或 三字母密碼命名氨基酸。
[0034] 術(shù)語"天然L-氨基酸"意指以下氨基酸的L旋光異構(gòu)體形式：甘氨酸（G)、脯氨酸 (P)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)、亮氨酸（L)、異亮氨酸（I)、甲硫氨酸（M)、半胱氨酸（C)、苯丙 氨酸（F)、酪氨酸（Y)、色氨酸（W)、組氨酸（H)、賴氨酸（K)、精氨酸（R)、谷氨酰胺（Q)、天冬 酰胺（N)、谷氨酸（E)、天冬氨酸（D)、絲氨酸（S)和蘇氨酸（T)。
[0035] 應(yīng)用于序列并在本文中使用的術(shù)語"非天然存在的"是指這樣的多肽或多核苷酸 序列：其沒有在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)的野生型或天然存在的序列的對應(yīng)物，與哺乳動物中發(fā)現(xiàn) 的野生型或天然存在的序列不互補(bǔ)，或者與哺乳動物中發(fā)現(xiàn)的野生型或天然存在的序列不 具有高度的同源性。例如，當(dāng)適當(dāng)?shù)乇葘r，非天然存在的多肽或片段可以與天然序列共有 不超過99%、98%、95%、90%、80%、70%、60%、50%或甚至更低的氨基酸序列同一性。
[0036] 術(shù)語"親水性"和"疏水性"是指物質(zhì)具有的與水的親和力程度。親水性物質(zhì)對 水具有強(qiáng)親和力，傾向于溶解于水、與水混合或被水潤濕，而疏水性物質(zhì)基本缺乏對水的 親和力，傾向于排斥水并不吸收水，并且傾向于不溶解于水或與水混合或被水潤濕。氨基 酸可以根據(jù)其疏水性來表征。已經(jīng)開發(fā)了許多量表（scale)。一個實例是由Levitt，M 等人，J Mol Biol (1976) 104:59 開發(fā)的量表，其在 Hopp, TP 等人，Proc Natl Acad Sci USA (1981) 78:3824中列出。"親水性氨基酸"的實例是精氨酸、賴氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、天冬 酰胺和谷氨酰胺。特別有意義的是親水性氨基酸天冬氨酸、谷氨酸和絲氨酸和甘氨酸。"疏 水性氨基酸"的實例是色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸。 [0037] "片段"是保留至少一部分治療活性和/或生物活性的天然生物活性蛋白質(zhì)的截 短形式。"變體"是與天然生物活性蛋白質(zhì)具有序列同源性的蛋白質(zhì)，其保留了生物活性蛋 白質(zhì)的至少一部分治療活性和/或生物活性。例如，變體蛋白質(zhì)可以與參考生物活性蛋白 質(zhì)共有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的氨基酸序列同一 性。本文使用的術(shù)語"生物活性蛋白質(zhì)部分"包括有意修飾（例如通過定點(diǎn)誘變、插入）的 蛋白質(zhì)或通過突變而意外修飾的蛋白質(zhì)。
[0038] "宿主細(xì)胞"包括可以是或已經(jīng)是主題載體的接受者的單獨(dú)細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物。宿 主細(xì)胞包括單個宿主細(xì)胞的后代。由于天然、意外或有意的突變，后代不一定與原始親代細(xì) 胞完全相同（形態(tài)方面或者總DNA互補(bǔ)體的基因組方面）。宿主細(xì)胞包括用本發(fā)明的載體 在體內(nèi)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
[0039] 當(dāng)用于描述本文公開的各種多肽時，"分離的"是指已經(jīng)從其天然環(huán)境的組分中鑒 別和分離和/或回收的多肽。其天然環(huán)境的摻雜組分是通常會干擾所述多肽的診斷或治療 用途的材料，并且可以包括酶、激素和其他蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶質(zhì)。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯 而易見的是，非天然存在的多核苷酸、肽、多肽、蛋白質(zhì)、抗體或其片段不需要"分離"以使之 與其天然存在的對應(yīng)物區(qū)別開來。此外，"濃縮的"、"分離的"或"稀釋的"多核苷酸、肽、多 肽、蛋白質(zhì)、抗體或其片段可與其天然存在的對應(yīng)物相區(qū)別，因為濃度或每體積的分子數(shù)目 一般大于其天然存在的對應(yīng)物。通常，通過重組手段制備并在宿主細(xì)胞中表達(dá)的多肽被認(rèn) 為是"分離的"。
[0040] 編碼"分離的"多核苷酸或多肽的核酸或其他編碼多肽的核酸是從該編碼多肽的 核酸的天然來源中通常與之相關(guān)聯(lián)的至少一種摻雜的核酸分子中鑒別和分離出來的核酸 分子。分離的編碼多肽的核酸處于不同于其天然存在的形式或設(shè)置。因此，分離的編碼多 肽的核酸分子與天然細(xì)胞中存在的特定編碼多肽的核酸分子有區(qū)別。然而，分離的編碼多 肽的核酸分子包括通常表達(dá)該多肽的細(xì)胞中含有的編碼多肽的核酸分子，此時，例如，該核 酸分子處于不同于天然細(xì)胞核酸分子的染色體內(nèi)或者染色體外位置。
[0041] "嵌合"蛋白含有至少一個融合多肽，該融合多肽在與天然存在的位置不同的序列 位置中包含區(qū)域。該區(qū)域可以正常存在于單獨(dú)的蛋白質(zhì)中而在融合多肽中被聚在一起；或 者它們可以正常存在于相同的蛋白質(zhì)中但在融合多肽中被置于新的排列中。例如，可以通 過化學(xué)合成，或者通過產(chǎn)生并翻譯其中肽區(qū)域以期望的關(guān)系被編碼的多核苷酸來產(chǎn)生嵌合 蛋白。
[0042] "綴合的"、"連接的"、"融合的"和"融合"在本文中可互換使用。這些術(shù)語是指通 過任何方式（包括化學(xué)綴合或重組方式）使兩個或更多個化學(xué)元素或組分連接在一起。例 如，如果啟動子或增強(qiáng)子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，則所述啟動子或增強(qiáng)子與所述序列是有效 連接的。一般而言，"有效連接"表示被連接的DNA序列是連續(xù)的，并且在閱讀相內(nèi)或框內(nèi)。 "框內(nèi)融合"是指兩個或多個開放閱讀框（ORF)以保持原始ORF正確閱讀框的方式連接以形 成連續(xù)更長的0RF。因此，得到的重組融合蛋白是含有對應(yīng)于由原始ORF編碼的多肽的兩個 或更多個區(qū)段的單個蛋白質(zhì)（所述區(qū)段在自然中通常不會如此連接）。
[0043] 在多肽的情境中，"線性序列"或"序列"是多肽中從氨基端至羧基端方向的氨基酸 順序，序列中彼此鄰接的殘基在多肽一級結(jié)構(gòu)中是連續(xù)的。"部分序列"是已知在一個或兩 個方向上包含額外殘基的多肽的一部分的線性序列。
[0044] "異源的"意指衍生自與進(jìn)行比較的實體的其余部分在基因型上不同的實體。例 如，從其天然編碼序列中取出并有效連接至不同于天然序列的編碼序列的富含甘氨酸的序 列是異源的富含甘氨酸序列。術(shù)語"異源的"當(dāng)應(yīng)用于多核苷酸、多肽時，是指該多核苷酸 或多肽衍生自與進(jìn)行比較的實體的其余部分在基因型上不同的實體。
[0045] 術(shù)語"多核苷酸"、"核酸"、"核苷酸"和"寡核苷酸"可互換使用。它們是指任何長 度的核苷酸的聚合體形式，該核苷酸是脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或其類似物。多核苷 酸可以具有任何三維結(jié)構(gòu)，并且可以發(fā)揮已知或未知的任何功能。以下是多核苷酸的非限 制性實例：基因或基因片段的編碼區(qū)或非編碼區(qū)、通過連鎖分析確定的基因座（多個基因 座）、外顯子、內(nèi)含子、信使RNA(mRNA)、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA、核糖體RNA、核酶、cDNA、重組多核苷酸、分 支多核苷酸、質(zhì)粒、載體、任何序列的分離的DNA、任何序列的分離的RNA、核酸探針和引物。 多核苷酸可以包括修飾的核苷酸，例如甲基化的核苷酸和核苷酸類似物。如果存在，對核 苷酸結(jié)構(gòu)的修飾可以在聚合物組裝之前或之后進(jìn)行。核苷酸序列中可以被非核苷酸組分隔 斷。多核苷酸可以在聚合之后進(jìn)一步修飾，例如通過與標(biāo)記組分綴合。
[0046] 術(shù)語"多核苷酸的互補(bǔ)體"表示與參考序列相比具有互補(bǔ)堿基序列和相反方向的 多核苷酸分子，使得互補(bǔ)體可以與參考序列完全翔實地雜交。
[0047] "重組的"當(dāng)應(yīng)用于多核苷酸時意指該多核苷酸是體外克隆、限制性消化和/或連 接步驟以及產(chǎn)生可能潛在地在宿主細(xì)胞中表達(dá)的構(gòu)建體的其他程序的各種組合的產(chǎn)物。 [0048] 術(shù)語"基因"或"基因片段"在本文中可互換使用。它們是指含有能夠在被轉(zhuǎn)錄和 翻譯之后編碼特定蛋白質(zhì)的至少一個開放閱讀框的多核苷酸。基因或基因片段可以是基因 組或cDNA，只要該多核苷酸含有至少一個開放閱讀框，該開放閱讀框可以涵蓋整個編碼區(qū) 或其區(qū)段。"融合基因"是由至少兩個連接在一起的異源多核苷酸構(gòu)成的基因。
[0049] "同源性"或"同源的"是指兩個或更多個多核苷酸序列或兩個或更多個多肽序列 之間的序列相似性或可互換性。當(dāng)使用程序（例如BestFit)來確定兩個不同氨基酸序列 之間的序列同一性、相似性或同源性時，可以使用缺省設(shè)置，或者可以選擇適當(dāng)?shù)脑u分矩陣 例如blosum45或blosum80來優(yōu)化同一'丨生、相似性或同源性評分。優(yōu)選地，同源的多核苷 酸是在本文定義的嚴(yán)格條件下雜交的那些序列，并且與那些序列具有至少70%、優(yōu)選至少 80 %、更優(yōu)選至少90 %、更優(yōu)選95 %、更優(yōu)選97 %、更優(yōu)選98 %和甚至更優(yōu)選99 %的序列同 一性。
[0050] "連接"是指在兩個核酸片段或基因之間形成磷酸二酯鍵而使它們連接在一起的 過程。為了使DNA片段或基因連接在一起，DNA末端必須彼此相容。在一些情況下，末端在 核酸內(nèi)切酶消化之后將是直接相容的。然而，可能必須首先將通常在核酸內(nèi)切酶消化后產(chǎn) 生的交錯末端轉(zhuǎn)化成平端以使它們適合連接。
[0051] 術(shù)語"嚴(yán)格的條件"或"嚴(yán)格的雜交條件"包括提及多核苷酸將以比其他序列可檢 測地更大程度（例如，超過背景至少2倍）與其靶序列雜交的條件。一般而言，雜交的嚴(yán)格 性部分地以提及進(jìn)行洗滌步驟的溫度和鹽濃度來表示。通常，嚴(yán)格條件是如下條件：其中 pH 7. O至8. 3下的鹽濃度小于約I. 5M Na離子、通常約0. Ol至I. OM Na離子濃度（或其他 鹽），并且溫度對于短的多核苷酸（例如，10至50個核苷酸）是至少約30°C并且對于長的 多核苷酸（例如，大于50個核苷酸）是至少約60°C-例如，"嚴(yán)格的條件"可以包括在37°C 下在50%甲酰胺、IM NaCl、l%SDS中雜交，以及在0. 1XSSC/1% SDS中于60°C至65°C下洗 滌三次，每次15分鐘。或者，可以使用約65°C、60°C、55°C或42°C的溫度。SSC濃度可以從 約0. 1至2XSSC不等，其中SDS以約0. 1 %存在。這樣的洗滌溫度通常被選擇為比特定序 列在確定的離子強(qiáng)度和pH下的熱解鏈點(diǎn)低約5°C至20°C。Tm是50%的靶序列與完美匹配 的探針雜交時的溫度（在確定的離子強(qiáng)度和PH下）。計算Tm的方程式和核酸雜交條件是 熟知的并且可以參見Sambrook, J.等人（1989)Molecular Cloning:A Laboratory Manual, 第 2 版，1-3 卷，Cold Spring Harbor Press, Plainview Ν· Υ·;具體參見第 2 卷第 9 章。通 常，使用阻斷試劑來阻斷非特異性雜交。這樣的阻斷試劑包括，例如，約100-200yg/ml的 經(jīng)剪切和變性的鮭精DNA。在特定情況下，例如對于RNA = DNA雜交，還可以使用有機(jī)溶劑，例 如濃度約35-50% v/v的甲酰胺。對這些洗滌條件的有用改變對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而 言是顯而易見的。
[0052] 術(shù)語"百分比同一性"和" ％同一性"在應(yīng)用于多核苷酸序列時，是指使用標(biāo)準(zhǔn)化 算法比對的至少兩個多核苷酸序列之間的殘基匹配百分比。這樣的算法可以以標(biāo)準(zhǔn)化且可 重復(fù)的方式在所比較的序列中插入空位以優(yōu)化兩個序列之間的比對，并因此實現(xiàn)兩個序列 的更有意義的比較?？梢栽谡麄€確定的多核苷酸序列的長度上測量百分比同一性，或者可 以在較短的長度上，例如在獲自較大的、確定的多核苷酸序列的片段長度上測量百分比同 一性，所述片段例如是至少45、至少60、至少90、至少120、至少150、至少210或至少450個 連續(xù)殘基的片段。這些長度僅是示例性的，并且應(yīng)當(dāng)理解，本文在表格、附圖或序列表中示 出的序列所支持的任何片段長度可以用來描述可在其上測量百分比同一性的長度。
[0053] 相對于本文鑒定的多肽序列的"百分（％)氨基酸序列同一性"被定義為：在對 序列進(jìn)行比對并在必要時引入空位以實現(xiàn)最大百分比序列同一性并且不將任何保守置換 視為序列同一性的一部分后，詢問序列中與第二個參考多肽序列或其部分的氨基酸殘基 相同的氨基酸殘基的百分比。旨在測定百分氨基酸序列同一性的比對可以本領(lǐng)域技術(shù) 中的各種方式實現(xiàn)，例如使用可公開獲得的計算機(jī)軟件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或 Megalign(DNASTAR)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定用于測量比對的適當(dāng)參數(shù)，包括在所比 較的序列的全長上實現(xiàn)最大比對所需的任何算法。百分比同一性可以在整個確定的多肽序 列的長度上進(jìn)行測量，或者可以在較短的長度上，例如在獲自較大的、確定的多肽序列的片 段長度上進(jìn)行測量，所述片段例如是至少15、至少20、至少30、至少40、至少50、至少70或 至少150個連續(xù)殘基的片段。這些長度僅是示例性的，并且應(yīng)當(dāng)理解，本文在表格、附圖或 序列表中示出的序列所支持的任何片段長度可以用來描述可在其上測量百分比同一性的 長度。
[0054] 本文在多肽的情況下使用的術(shù)語"非重復(fù)性"是指在肽或多肽序列中缺乏或具有 有限程度的內(nèi)部同源性。術(shù)語"基本上非重復(fù)的"可以意味著，例如，沒有或幾乎沒有序列中 的四個連續(xù)氨基酸是相同的氨基酸類型的情況，或者多肽具有10或更小的子序列評分（下 文定義），或者沒有構(gòu)成多肽序列的序列基序從N-端至C-端的順序的模式。本文在多肽的 情況下使用的術(shù)語"重復(fù)性"是指肽或多肽序列中的內(nèi)部同源性的程度。相反，"重復(fù)的"序 列可以含有短氨基酸序列的多個相同拷貝。例如，目標(biāo)多肽序列可以被分成n-mer序列，并 且可以對相同序列的數(shù)目進(jìn)行計數(shù)。高度重復(fù)的序列含有大比例的相同序列，而非重復(fù)的 序列含有很少的相同序列。在多肽的情況下，序列可以含有確定的或可變長度的較短序列 的多個拷貝，或基序，其中基序本身具有非重復(fù)序列，使得全長多肽是基本上非重復(fù)的。測 量其內(nèi)的非重復(fù)性的多肽長度可以從3個氨基酸到約200個氨基酸、從約6個到約50個氨 基酸或從約9個到約14個氨基酸不等。在多核苷酸序列的情況下使用的"重復(fù)性"是指序 列中的內(nèi)部同源性的程度，例如給定長度的相同核苷酸序列的頻率。例如，重復(fù)性可以通過 分析相同序列的頻率來測量。
[0055] "載體"是核酸分子（優(yōu)選在適當(dāng)宿主中自我復(fù)制），其將插入的核酸分子轉(zhuǎn)移到 宿主細(xì)胞中和/或在宿主細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移。該術(shù)語包括主要功能是將DNA或RNA插入細(xì)胞的 載體，主要功能是復(fù)制DNA或RNA的復(fù)制載體，以及功能是轉(zhuǎn)錄和/或翻譯DNA或RNA的表 達(dá)載體。還包括提供超過一種上述功能的載體。"表達(dá)載體"是被引入適當(dāng)宿主細(xì)胞時可以 轉(zhuǎn)錄并翻譯成多肽的多核苷酸。"表達(dá)系統(tǒng)"通常表示包含可以用來產(chǎn)生所需表達(dá)產(chǎn)物的表 達(dá)載體的適合的宿主細(xì)胞。
[0056] "血清降解抗性"在應(yīng)用于多肽時是指多肽在血液或其組分中抵抗降解的能力，該 降解通常與血清或血漿中的蛋白酶有關(guān)。血清降解抗性可以通過將蛋白質(zhì)與人（或視情況 為小鼠、大鼠、猴）血清或血漿通常在約37°C下混合通常一定天數(shù)（例如0.25、0.5、1、2、 4、8、16天）來測量?？蓪@些時間點(diǎn)的樣品進(jìn)行Western印跡分析，并使用抗體檢測蛋白 質(zhì)?？贵w可以針對蛋白質(zhì)中的標(biāo)簽。如果蛋白質(zhì)在Western印跡上顯示單一條帶，其中蛋白 質(zhì)的大小與注入的蛋白質(zhì)的大小相同，則沒有發(fā)生降解。在該示例性方法中，通過Western 印跡法或等效技術(shù)判斷，50%的蛋白質(zhì)得到降解的時間點(diǎn)是該蛋白質(zhì)的血清降解半衰期或 "血清半衰期"。
[0057] 在本文中使用的術(shù)語"t1/2"意指計算為ln(2)/M勺終末半衰期。K el是通過對 log濃度-時間曲線的終末線性部分的線性回歸而計算的終末消除速率常數(shù)。半衰期通常 指活生物體中儲存的施用物質(zhì)的量的一半將被正常生物過程代謝或消除所需的時間。術(shù)語 "t 1/2"、"終末半衰期"、"消除半衰期"和"循環(huán)半衰期"在此可互換使用。
[0058] "表觀分子量因子"或"表觀分子量"是相關(guān)術(shù)語，是指特定氨基酸序列所表現(xiàn)出的 表觀分子量的相對增加或降低的量度。表觀分子量使用尺寸排阻色譜法（SEC)和類似方法 通過與球狀蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品相比較來確定，并且以"表觀kD"單位來度量。表觀分子量因子是 表觀分子量和實際分子量之間的比例；后者通過基于氨基酸組成而加合該組成中每種類型 氨基酸的計算分子量來預(yù)測。
[0059] 術(shù)語"流體動力學(xué)半徑"或"Stokes半徑"是分子在溶液中的有效半徑（Rh,以nm 為單位），通過假設(shè)它是穿過溶液移動并受溶液的粘性所抵抗的主體來測量。在本發(fā)明的實 施方案中，XTEN融合蛋白的流體動力學(xué)半徑測量與'表觀分子量因子'相關(guān)聯(lián)，表觀分子量 因子是更直觀的量度。蛋白質(zhì)的"流體動力學(xué)半徑"影響其在水溶液中的擴(kuò)散速率以及其 在大分子凝膠中遷移的能力。蛋白質(zhì)的流體動力學(xué)半徑由其分子量以及其結(jié)構(gòu)（包括形狀 和致密度）決定。測定流體動力學(xué)半徑的方法是本領(lǐng)域熟知的，例如通過使用尺寸排阻色 譜法（SEC)，如美國專利號6, 406, 632和7, 294, 513所述。大多數(shù)蛋白質(zhì)具有球形結(jié)構(gòu)，這 是蛋白質(zhì)在最小流體動力學(xué)半徑下可以具有的最致密的三維結(jié)構(gòu)。一些蛋白質(zhì)采取隨機(jī)和 開放的非結(jié)構(gòu)化或'線性'構(gòu)象，因此與類似分子量的典型球形蛋白質(zhì)相比具有大得多的流 體動力學(xué)半徑。
[0060] "生理條件"是指活宿主中的一組條件以及模擬活受試者的那些條件的體外條件， 包括溫度、鹽濃度、pH。已經(jīng)確立了用于體外分析的許多生理相關(guān)條件。一般而言，生理緩 沖液包含生理濃度的鹽并且被調(diào)節(jié)至中性pH，范圍從約6. 5至約7. 8,優(yōu)選約7. 0至約7. 5。 多種生理緩沖液在Sambrook等人（1989)中列出。生理相關(guān)溫度為約25°C至約38°C，優(yōu)選 約35°C至約37°C。
[0061] "反應(yīng)性基團(tuán)"是能夠與第二反應(yīng)性基團(tuán)偶聯(lián)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。反應(yīng)性基團(tuán)的實例是氨 基、羧基、巰基、羥基、醛基、疊氮基。一些反應(yīng)性基團(tuán)可以被活化以促進(jìn)與第二反應(yīng)性基團(tuán) 的偶聯(lián)?；罨姆窍拗菩詫嵗囚然c碳二亞胺的反應(yīng)，羧基向活化酯的轉(zhuǎn)化，或者羧基向 疊氮官能團(tuán)的轉(zhuǎn)化。
[0062] "控釋劑"、"緩釋劑"、"貯庫（depot)制劑"或"持續(xù)釋放劑"可互換使用，是指相對 于多肽在缺乏這些物質(zhì)的情況下施用時的釋放持續(xù)時間能夠延長本發(fā)明多肽的釋放持續(xù) 時間的物質(zhì)。本發(fā)明的不同實施方案可以具有不同的釋放速率，導(dǎo)致不同的治療量。
[0063] 術(shù)語"抗原"、"靶抗原"或"免疫原"在本文中可互換使用，是指抗體片段或基于抗 體片段的治療劑與之結(jié)合或?qū)ζ渚哂刑禺愋缘慕Y(jié)構(gòu)或結(jié)合決定簇。
[0064] 本文使用的術(shù)語"有效負(fù)載"是指具有生物活性或治療活性的蛋白質(zhì)或肽序列；小 分子的藥效團(tuán)的對應(yīng)物。有效負(fù)載的實例包括但不限于細(xì)胞因子、酶、激素及血液和生長因 子。有效負(fù)載還可以包含遺傳融合或化學(xué)綴合的部分，例如化療劑、抗病毒化合物、毒素或 造影劑。這些綴合部分可以通過連接體連接至多肽的其余部分，該連接體可以是可裂解的 或不可裂解的。
[0065] 本文使用的術(shù)語"拮抗劑"包括部分或完全阻斷、抑制或中和本文公開的天然多肽 的生物活性的任何分子。用于鑒定多肽的拮抗劑的方法可以包括使天然多肽與候選拮抗劑 分子接觸并測量通常與天然多肽相關(guān)的一種或多種生物活性的可檢測的變化。在本發(fā)明的 上下文中，拮抗劑可以包括降低生物活性蛋白質(zhì)的效應(yīng)的蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物、抗體 或任何其他分子。
[0066] 術(shù)語"激動劑"以最廣泛的含義使用并且包括模擬本文公開的天然多肽的生物活 性的任何分子。合適的激動劑分子具體包括激動劑抗體或抗體片段、天然多肽的片段或氨 基酸序列變體、肽、有機(jī)小分子等。用于鑒定天然多肽的激動劑的方法可以包括使天然多肽 與候選激動劑分子接觸并測量通常與天然多肽相關(guān)的一種或多種生物活性的可檢測的變 化。
[0067] "活性"對于此處而言是指融合蛋白的組分的作用或效應(yīng)，其與相應(yīng)的天然生物活 性蛋白質(zhì)的作用或效應(yīng)一致，其中"生物活性"是指體外或體內(nèi)生物功能或效應(yīng)，包括但不 限于受體結(jié)合、拮抗劑活性、激動劑活性或者細(xì)胞或生理學(xué)反應(yīng)。
[0068] 本文使用的"治療"或"減輕"或"緩解"在本文中可互換使用。這些術(shù)語是指用于 獲得有益或期望結(jié)果（包括但不限于治療益處和/或預(yù)防益處）的方法。所謂治療益處意 指所治療的根本病癥的根除或緩解。而且，隨著與根本病癥相關(guān)的一種或多種生理癥狀的 根除或緩解使得在受試者中觀察到改善而實現(xiàn)治療益處，盡管受試者可能依然罹患所述根 本病癥。對于預(yù)防益處，可以將組合物施用給處于發(fā)展特定疾病的風(fēng)險中的受試者，或者報 告了疾病的一種或多種生理癥狀的受試者，即使可能還未作出該疾病的診斷。
[0069] 本文使用的"治療效果"是指生理學(xué)效應(yīng)，包括但不限于人或其他動物中疾病的 治愈、減輕、緩解或預(yù)防，或者指在其他方面增強(qiáng)人或動物的身體或精神健康狀態(tài)，這是由 本發(fā)明的融合多肽而非誘導(dǎo)生成針對生物活性蛋白質(zhì)具有的抗原表位的抗體的能力引起 的。治療有效量的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)，特別是根據(jù)本文提供的詳細(xì)公開 內(nèi)容。
[0070] 本文使用的術(shù)語"治療有效量"和"治療有效劑量"是指單獨(dú)的或作為融合蛋白組 合物的一部分的生物活性蛋白質(zhì)的量，當(dāng)以一個或重復(fù)的劑量施用給受試者時，所述量能 夠?qū)膊顟B(tài)或狀況的任何癥狀、方面、測量參數(shù)或特征具有任何可檢測的有益影響。這種 影響不一定絕對是有益的。
[0071] "藥學(xué)上可接受的載體"是指藥物組合物中除活性成分以外的成分，它對受試者是 無毒的。藥學(xué)上可接受的載體包括但不限于緩沖液、賦形劑、穩(wěn)定劑或防腐劑。
[0072] 本文使用的術(shù)語"治療有效的劑量方案"是指單獨(dú)的或作為融合蛋白組合物的一 部分的生物活性蛋白質(zhì)的連續(xù)施用劑量的計劃表，其中所述劑量以治療有效量給予，以對 疾病狀態(tài)或狀況的任何癥狀、方面、測量參數(shù)或特征產(chǎn)生持續(xù)的有益效果。 I) . 一般技術(shù)
[0073] 除非另有說明，本發(fā)明的實踐采用免疫學(xué)、生物化學(xué)、化學(xué)、分子生物學(xué)、微生物 學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因組學(xué)和重組DNA的常規(guī)技術(shù)，這些技術(shù)在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。參見 Sambrook, J.等人，"Molecular Cloning:A Laboratory Manual,，'第 3 版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001 "'Current protocols in molecular biology，'，F(xiàn). M. Ausubel 等人編，1987;"Methods in Enzymology" 系列，Academic Press, San Diego, CA. ;"PCR 2:a practical approach，'，M.J· MacPherson，B.D. Hames 和 G.R. Taylor 編,Oxford University Press, 1995 ;"Antibodies, a laboratory manual"Harlow,E. 和 Lane, D.編,Cold Spring Harbor Laboratory, 1988 ;"Goodman&Gilman, s The Pharmacological Basis of Therapeutics, "第 11 版，McGraw-Hill, 2005 ;和 Freshney, R. I. , "Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique," 第 4 版,John Wiley&Sons, Somerset, NJ, 2000,它們的內(nèi)容均通過引用整體并入本文。 II) .生長激素
[0074] 本發(fā)明涉及一種針對GHD療法的改善的治療方案。具體而言，本發(fā)明涉及向GHD患 者以團(tuán)劑施用hGH-XTEN融合蛋白的方法。因此，在一個方面，本發(fā)明涉及一種用hGH-XTEN 融合蛋白治療人生長激素缺乏（GHD)的方法。 (a)生長激素蛋白質(zhì)
[0075] "生長激素"或"GH"意指生長激素蛋白質(zhì)及其種類和序列變體，并且包括但不限 于人GH的191單鏈氨基酸序列。GH可以是天然的全長蛋白質(zhì)或者可以是保留天然蛋白質(zhì) 的至少一部分生物活性的截短片段或序列變體。有兩種已知類型的源自垂體的人GH(下文 稱"hGH"）：一種具有約22, 129道爾頓的分子量（22kD hGH)，另一種具有約20, 000道爾頓 的分子量（20kD hGH)。20kD HGH具有對應(yīng)于由191個氨基酸組成的22kD hGH的氨基酸序 列，除了 22kD hGH的第32位至第46位的15個氨基酸殘基缺失以外。一些報道已顯示， 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)20kD hGH表現(xiàn)出比22kD hGH更低的風(fēng)險和更高的活性。本發(fā)明考慮使用22kD、 20kD hGH以及其種類和序列變體和截短片段，因為其適合作為本文公開的XTEN的融合配 偶體用于hGH-XTEN組合物。hGH的克隆基因已經(jīng)在大腸桿菌中以分泌形式表達(dá)（美國專利 號4,898,830;〇1 &叩，（：.1等人，661^ 55:189[1987])并且已經(jīng)報道了其0嫩和氨基酸序 列（Goeddel 等人，Nature, 281:544[1979] ;Gray 等人，Gene 39:247[1985])。
[0076] 本發(fā)明考慮在hGH-ΧΤΕΝ組合物中包含與GH序列具有同源性的序列，天然的序列 片段（例如來自人），以及保留了 GH的至少一部分生物活性或生物學(xué)功能和/或可用于預(yù) 防、治療、介導(dǎo)或緩解GH相關(guān)疾病、缺陷、病癥或狀況的非天然序列變體。此外，與人GH同 源的天然序列可以通過標(biāo)準(zhǔn)同源性檢索技術(shù)（如NCBI BLAST)來發(fā)現(xiàn)。
[0077] GH對身體組織的效應(yīng)一般可被描述為合成代謝的。像大多數(shù)其他蛋白質(zhì)激素一 樣，天然GH通過與被稱為生長激素受體的特異性血漿膜受體相互作用而發(fā)揮作用。GH作 用于肝和其他組織以刺激IGF-I的生成，IGF-I負(fù)責(zé)GH的生長促進(jìn)效應(yīng)并且還反映生成的 量。IGF-I轉(zhuǎn)而對成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞活性具有刺激效應(yīng)以促進(jìn)骨生長。在一個實施方案 中，本發(fā)明提供了表現(xiàn)出本文以上描述的天然GH的至少一種性質(zhì)的hGH-XTEN。
[0078] 在一個實施方案中，引入本發(fā)明組合物中的GH是具有對應(yīng)于自然中發(fā)現(xiàn)的蛋白 質(zhì)的序列的重組多肽。在另一實施方案中，該GH是天然序列的序列變體、片段、同源物或模 擬物，其保留了相應(yīng)的天然GH的至少一部分生物活性。在一個另外的實施方案中，該GH是 包含以下氨基酸序列的人GH : FPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKS NLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFD TNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF(SEQ ID N0:2)。通過在家族之間改組 個體突變而構(gòu)建的、保留了天然GH的至少一部分生物活性的任何人GH序列或同源衍生物 可用于本發(fā)明的融合蛋白?？梢雋GH-ΧΤΕΝ融合蛋白中的GH可以包括表現(xiàn)出與SEQ ID N0:2 具有至少約 80%序列同一性或備選地 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、 89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 序列同一性的蛋白 質(zhì)。 ΠI).用于治療GHD的人生長激素-XTEN融合蛋白組合物
[0079] 本發(fā)明涉及一種針對生長激素缺乏（GHD)療法的改善的治療方案。具體而 言，本發(fā)明涉及向GHD患者以團(tuán)劑施用hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白的方法。在一個方面，適合 于本發(fā)明使用的hGH融合蛋白包含人生長激素多肽和一個或多個如本文所述的以及如 Schellenberger等人的W010/144502A2和W010/091122所公開的XTEN序列，以上文件通過 引用整體并入本文。
[0080] 在一個另外的方面，該hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白是分離的GH的單體融合蛋白，其包含與 一個或多個延伸重組多肽（"XTEN"或"XTENs"）共價連接的GH的全長序列或序列變體。 在一個實施方案中，該hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白包含圖1所示的氨基酸序列（SEQ ID NO: 1)或其 藥理學(xué)活性變體。在另一個實施方案中，該hGH-ΧΤΕΝ融合蛋白包含選自表1的氨基酸序列。
[0081] 融合蛋白VRS-317由重組人生長激素（rhGH)和兩個被稱為XTEN的重組多肽組 成，如 Schellenberger 等人（2009).Nat Biotechnol 27, 1186-90、Schellenberger 等人的 W010/144502A2和W010/091122所述，以上文件各自通過引用整體并入本文。XTEN域，氨基 酸的兩個非結(jié)構(gòu)化的親水鏈，提供了 rhGH的半衰期延長。VRS-317的分子量為118. 9kDa， 其中rhGH貢獻(xiàn)了 22. lkDa，而其余的質(zhì)量由XTEN構(gòu)建體貢獻(xiàn)。因此，rhGH與VRS-317的質(zhì) 量比為1:5. 37。VRS-317融合蛋白的氨基酸序列在圖1中提供。 表1 -示例件的hGH-XTEN融合蛋白

【權(quán)利要求】
1. 一種治療人生長激素缺乏（GHD)的方法，其包括作為約0. 05mg/kg至約3. Omg/kg 的治療有效的、根據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑，向人類GHD患者施用包含與SEQ ID NO: 1具有至少約 90%序列同一性的氨基酸序列的人生長激素-XTEN(hGH-XTEN)融合蛋白。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述團(tuán)劑每周、每兩周、每三周或每月施用。
3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述團(tuán)劑的施用每月進(jìn)行。
4. 如權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其中hGH-XTEN融合蛋白的所述團(tuán)劑為約 0· 05mg/kg 至約 0· 8mg/kg 或約 0· 8mg/kg 至約 I. 2mg/kg。
5. 如權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其中皮下施用所述團(tuán)劑。
6. 如權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述人類患者在施用后具有約-2. 0至約 2. 0的血清IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（SDS)。
7. 如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述IGF-I SDS選自大于約-2. 0、大于約-1. 5、大于 約-1. 0、大于約-〇. 5、大于約0、大于約0. 5、大于約I. 0和大于約1. 5。
8. 如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述人類患者在施用所述團(tuán)劑后表現(xiàn)出所述血清 IGF-I SDS，其中該施用每周、每兩周、每三周或每月進(jìn)行。
9. 如權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述團(tuán)劑的施用導(dǎo)致人類患者中的 IGF-I SDS歸一化至少約7天、至少約10天、至少約14天、至少約16天或至少約21天。
10. 如權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述團(tuán)劑選自約0. 05mg/kg、約0. Img/ kg、約 0· 2mg/kg、約 0· 4mg/kg、約 0· 8mg/kg、約 I. Omg/kg、約 I. 2mg/kg、約 I. 4mg/kg、約 I. 6mg/kg、約 I. 8mg/kg、約 2. Omg/kg、約 2. 2mg/kg、約 2. 4mg/kg、約 2. 6mg/kg、約 2. 7mg/kg、 約 2. 8mg/kg 和約 3. Omg/kg。
11. 如權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述hGH-XTEN融合蛋白包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。
12. -種治療人生長激素缺乏（GHD)的方法，其包括向人類GHD患者施用包含與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列的人生長激素-XTEN(hGH-XTEN)融合蛋白， 作為該hGH-XTEN融合蛋白的治療有效的、根據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑施用，該團(tuán)劑等同于小于約 2 μ ghGH/kg/ 天至約 20 μ g hGH/kg/ 天的 hGH/kg/ 天劑量。
13. 如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述團(tuán)劑每周、每兩周、每三周或每月施用。
14. 如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述團(tuán)劑的施用每月進(jìn)行。
15. 如權(quán)利要求12-14中任一項所述的方法，其中所述hGH/kg/天劑量在約30天中。
16. 如權(quán)利要求12-14中任一項所述的方法，其中皮下施用所述團(tuán)劑。
17. 如權(quán)利要求12-14中任一項所述的方法，其中所述人類患者在施用后具有約-2. 0 至約2. 0的血清IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（SDS)。
18. 如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述IGF-I SDS選自大于約-2. 0、大于約-1. 5、大 于約-1. 0、大于約-〇. 5、大于約0、大于約0. 5、大于約1. 0和大于約1. 5。
19. 如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述人類患者在施用所述團(tuán)劑后表現(xiàn)出所述血清 IGF-I SDS，其中該施用每周、每兩周、每三周或每月進(jìn)行。
20. 如權(quán)利要求12-14中任一項所述的方法，其中所述團(tuán)劑等同于小于選自約2yg hGH/kg/ 天、約 4 μ g hGH/kg/ 天、約 6 μ g hGH/kg/ 天、約 8 μ g hGH/kg/ 天、約 10 μ g hGH/ kg/ 天、約 12 μ g hGH/kg/ 天、約 14 μ ghGH/kg/ 天、約 16 μ g hGH/kg/ 天、約 18 μ g hGH/kg/ 天、約 18. 6 μ g hGH/kg/ 天和約 20 μ g hGH/kg/ 天的 hGH/kg/ 天劑量。
21. 如權(quán)利要求12-14中任一項所述的方法，其中所述hGH-XTEN融合蛋白包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。
22. -種治療人類患者中的人生長激素缺乏（GHD)的方法，其包括作為治療有效的、根 據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑，向GHD患者施用包含與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨 基酸序列的人生長激素-XTEN(hGH-XTEN)融合蛋白，該團(tuán)劑對于在施用該團(tuán)劑后將患者的 血清IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（SDS)維持在約-2. 0至約2. 0至少7天是有效的。
23. 如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述團(tuán)劑為約0. 05mg/kg至約0. 8mg/kg、約 0· 8mg/kg 至約 I. 2mg/kg 或約 0· 05mg/kg 至約 3. Omg/kg。
24. 如權(quán)利要求22或23所述的方法，其中所述團(tuán)劑對于在施用該團(tuán)劑后將患者的血清 IGF-I SDS維持在約-2. 0至約2. 0至少20天是有效的。
25. -種治療人類患者中的人生長激素缺乏（GHD)的方法，其包括作為治療有效的、根 據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑，向GHD患者施用包含與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨 基酸序列的人生長激素-XTEN(hGH-XTEN)融合蛋白，該團(tuán)劑對于在施用該團(tuán)劑后將患者中 所述融合蛋白的血漿濃度維持在高于約10ng/mL至少10天的一段時間是有效的。
26. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述團(tuán)劑為約0. 05mg/kg至約0. 8mg/kg、約 0· 8mg/kg 至約 I. 2mg/kg 或約 0· 05mg/kg 至約 3. 0mg/kg。
27. 如權(quán)利要求25或26所述的方法，其中所述團(tuán)劑對于在施用該團(tuán)劑后將患者中所述 融合蛋白的血楽濃度維持在高于約10ng/mL至少約14天、至少20天、至少約28天或至少 約30天的一段時間是有效的。
28. 如權(quán)利要求25或26所述的方法，其中所述團(tuán)劑對于在施用該團(tuán)劑后將患者中所 述融合蛋白的血楽濃度維持在高于約10ng/mL至少20天或至少約30天的一段時間是有效 的。
29. 如權(quán)利要求25或26所述的方法，其中所述團(tuán)劑對于在施用該團(tuán)劑后將患者中所述 融合蛋白的血漿濃度維持在高于約lOOng/mL至少10天的一段時間是有效的。
30. -種治療人類患者中的人生長激素缺乏（GHD)的方法，其包括作為治療有效的、根 據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑，向GHD患者施用包含與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨 基酸序列的人生長激素-XTEN(hGH-XTEN)融合蛋白，該團(tuán)劑對于在施用該團(tuán)劑后將患者的 IGF-I SDS在受試者的基線IGF-I SDS之上提高至少0. 5或至少1. 0而不存在臨床顯著水 平的選自頭痛、關(guān)節(jié)痛、肌痛、水腫、惡心和肌肉疲勞的副作用是有效的。
31. 如權(quán)利要求22、25和30中任一項所述的方法，其中皮下施用所述團(tuán)劑。
32. 如權(quán)利要求22、25和30中任一項所述的方法，其中所述hGH-XTEN融合蛋白包含 SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。
33. 如權(quán)利要求22、25和30中任一項所述的方法，其中所述人類患者在施用所述團(tuán)劑 后具有至少一個參數(shù)的臨床上顯著的降低，該參數(shù)選自血清膽固醇、血清甘油三酯和血清 低密度脂蛋白（LDL)，其中所述施用選自每周、每兩周、每三周和每月施用。
34. 包含與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列的hGH-XTEN融合蛋 白的團(tuán)劑，其中該團(tuán)劑是治療有效的、根據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑，包含約〇. 〇5mg/kg至約3. Omg/ kg的hGH-XTEN融合蛋白。
35. 如權(quán)利要求34所述的團(tuán)劑，其用于治療有需要的受試者中的人生長激素缺乏 (GHD)〇
36. 如權(quán)利要求34或35所述的團(tuán)劑，其中所述hGH-XTEN融合蛋白包含SEQ ID NO: 1 的氨基酸序列。
37. 如權(quán)利要求34或35所述的團(tuán)劑，其被配制用于皮下施用。
38. 包含與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列的hGH-XTEN融合 蛋白，其用于在治療人類患者的人生長激素缺乏（GHD)的方法中使用，其中該方法包括以 約0. 05mg/kg至約3. Omg/kg的劑量施用hGH-XTEN融合蛋白的治療有效的、根據(jù)體重調(diào)整 的團(tuán)劑。
39. 包含與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列的hGH-XTEN融合 蛋白在制備用于治療GHD的藥物中的用途，其中該hGH-XTEN融合蛋白以約0. 05mg/kg至約 3. Omg/kg的劑量作為該hGH-XTEN融合蛋白的治療有效的、根據(jù)體重調(diào)整的團(tuán)劑施用于人 類患者。
40. 如權(quán)利要求38所述的hGH-XTEN融合蛋白或如權(quán)利要求39所述的用途，其中所述 團(tuán)劑每周、每兩周、每三周或每月施用。
41. 如權(quán)利要求38所述的hGH-XTEN融合蛋白或如權(quán)利要求39所述的用途，其中所述 hGH-XTEN融合蛋白包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。
42. 如權(quán)利要求38所述的hGH-XTEN融合蛋白或如權(quán)利要求39所述的用途，其中皮下 施用所述團(tuán)劑。
43. 如權(quán)利要求38所述的hGH-XTEN融合蛋白或如權(quán)利要求39所述的用途，其中所述 人類患者在施用所述團(tuán)劑后具有約-2. 0至約2. 0的血清IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（SDS)。
44. 如權(quán)利要求43所述的hGH-XTEN融合蛋白或用途，其中所述IGF-I SDS選自大于 約-2. 0、大于約-1. 5、大于約-1. 0、大于約5、大于約0、大于約0. 5、大于約1. 0和大于 約 1. 5。
45. 如權(quán)利要求43所述的hGH-XTEN融合蛋白或用途，其中所述施用為每周、每兩周、每 三周或每月施用。
46. 如權(quán)利要求38所述的hGH-XTEN融合蛋白或如權(quán)利要求39所述的用途，其中所述 人類患者在施用所述團(tuán)劑后具有至少一個參數(shù)的臨床上顯著的降低，該參數(shù)選自血清膽固 醇、血清甘油三酯和血清LDL，其中所述施用為每周、每兩周、每三周或每月施用。
47. -種提高人生長激素（hGH)療法在人類患者中的功效的方法，其包括： (a) 在施用初始劑量的包含與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列 的人生長激素-XTEN(hGH-XTEN)融合蛋白的初始劑量期中，監(jiān)測從該患者獲得的血漿或血 清樣品中的IGF-I標(biāo)準(zhǔn)差評分（SDS);和 (b) 基于在所述初始劑量期中觀察到的IGF-I SDS來確定在后續(xù)劑量期中施用的 hGH-XTEN融合蛋白的后續(xù)劑量，其中該后續(xù)劑量改善了所述治療在后續(xù)劑量期中的功效。
48. -種試劑盒，其包含： (i) 容器，其容納包含人生長激素-XTEN(hGH-XTEN)融合蛋白的藥物組合物，該 hGH-XTEN融合蛋白包含與SEQ ID NO: 1具有至少約90%序列同一性的氨基酸序列，和 (ii) 與所述容器相關(guān)聯(lián)的包裝插頁，其中該包裝插頁指示所述組合物是通過施用約 0· 05mg/kg至約3. Omg/kg的hGH-XTEN融合蛋白的初始劑量和約0· 05mg/kg至約3. Omg/kg 的hGH-XTEN融合蛋白的多個后續(xù)劑量而用于治療生長激素缺乏，其中所述劑量每周、每兩 周、每三周或每月施用。
【文檔編號】A61K47/42GK104519903SQ201380041556
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年3月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月5日
【發(fā)明者】J·L·克萊蘭, 喬治·M·布萊特, 埃里克·漢弗里斯, V·謝爾恩伯杰, J·西爾弗曼, W·P·施泰姆爾, 王家威, N·吉西格, B·斯平克 申請人:阿穆尼克斯運(yùn)營公司