毛冬青皂苷Ilexsaponin A1在制備抗腫瘤藥物中的用途
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了從海南冬青等植物中獲得的單體成分毛冬青皂苷Ilexsaponin?A1在抗腫瘤方面的醫(yī)藥新用途，即毛冬青皂苷Ilexsaponin?A1在制備治療和預(yù)防腫瘤的藥物或保健食品中的用途。同時(shí)，也公開(kāi)了以毛冬青皂苷Ilexsaponin?A1為原料制備成膠囊劑、片劑、滴丸劑、注射劑等藥物劑型。體外實(shí)驗(yàn)表明，在一定濃度范圍內(nèi)，毛冬青皂苷Ilexsaponin?A1對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株具有很強(qiáng)的抑制作用。因此，可以用于制備成抗腫瘤藥物以及預(yù)防腫瘤發(fā)生的藥物或保健食品。
【專利說(shuō)明】毛冬青烏苷Mexsaponin Al在制備抗腫瘤藥物中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】,尤其涉及毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的抗腫瘤活性以及毛冬青阜苷Ilexsaponin Al在制備抗腫瘤藥物中的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002]毛冬青為冬青科冬青屬植物毛冬青的根或葉,毛冬青阜苷Ilexsaponin Al是從毛冬青中提取的一種五環(huán)三萜皂苷(熊友香，等.中藥材，2002，25 (5):371-374 ;昌艷艷，等.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2002，11 (21):2198-2199)。過(guò)去報(bào)道其具有一定的心血管藥理作用，小鼠耳廓微循環(huán)實(shí)驗(yàn)表明毛冬青皂苷Ilexsaponin Al能顯著延長(zhǎng)小鼠出血以及凝血時(shí)間，大鼠FeCl3誘導(dǎo)血栓實(shí)驗(yàn)表明Ilexsaponin Al可減少大鼠腹主動(dòng)脈血栓生成質(zhì)量(周園，等.中藥材，2011，34 (5):765-767)。我們研究發(fā)現(xiàn)毛冬青皂苷Ilexsaponin Al具有良好的抗腫瘤作用，特別是對(duì)人肝癌及胃癌等，在一定濃度范圍內(nèi)，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用而不影響正常T細(xì)胞的活力及功能。此外，尚未見(jiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道將毛冬青皂苷IlexsaponinAl制備成抗腫瘤藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的之一提供了毛冬青皂苷Ilexsaponin Al的抗腫瘤新用途；本發(fā)明目的之二提供了毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的藥物劑型。
[0004]本發(fā)明提供了毛冬青阜苷Ilexsaponin Al在制備治療和預(yù)防腫瘤的藥物或保健食品中的用途。
[0005]本發(fā)明所指的腫瘤肝癌、胃癌等多種腫瘤。毛冬青皂苷Ilexsaponin Al可劑量依賴性地抑制肝癌、胃癌細(xì)胞活性但不影響正常T細(xì)胞分化，因此毛冬青皂苷IlexsaponinAl具有聞效抗腫瘤且低毒等特點(diǎn)。
[0006]本發(fā)明的藥物制劑含有1%~99%的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和99%~1%的藥用賦形劑(包括其他可組方的藥物)，優(yōu)選含30%~80%的毛冬青阜苷IlexsaponinAl和70%~20%的藥用賦形劑(包括其他可組方的藥物)，最好含有60%~70%的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和40%~30%的藥用賦形劑(包括其他可組方的藥物)。
[0007]按藥劑學(xué)方法,可以將本發(fā)明的毛冬青阜苷Ilexsaponin Al制備成多個(gè)臨床藥物劑型用于抗腫瘤，包括口服制劑和非腸道給藥的劑型。所指的口服制劑選自于膠囊劑、片劑、滴丸劑、口服液體制劑中的任意一種，所指的非腸道給藥劑型為注射劑。
[0008]本發(fā)明的抗腫瘤藥物中的輔料是指常規(guī)的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑等。本發(fā)明抗腫瘤藥物中的其他配伍用的藥物，指的是有效劑量的毛冬青阜苷Ilexsaponin Al為一定的藥物原料,再配伍其他已允許合用的中藥或化學(xué)藥品。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009]圖1是毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的化學(xué)結(jié)構(gòu)式[0010]圖2是毛冬青阜苷Ilexsaponin Al作用于人肝癌細(xì)胞株HepG2 (A)以及SMMC77210~72h (B)的抑制率圖。[0011]圖3是毛冬青皂苷Ilexsaponin Al作用于人胃癌細(xì)胞株SGC79010~72h的抑制率圖。
[0012]圖4是毛冬青阜苷Ilexsaponin Al對(duì)小鼠正常T細(xì)胞分化的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0013]下面通過(guò)具體實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但這些實(shí)施例只是為了說(shuō)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0014]毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的分子式C36H56O11,化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1。
[0015](本發(fā)明用的毛冬青阜苷IlexsaponinAl為中國(guó)藥科大學(xué)生藥教研室王強(qiáng)教授提供；對(duì)照品四川標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心可以購(gòu)買)
[0016]實(shí)施例一:采用MTT比色法檢測(cè)毛冬青阜苷Ilexsaponin Al對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2的活力影響:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌細(xì)胞株H印G2，0.25%胰蛋白酶消化，收集消化狀態(tài)下的細(xì)胞，計(jì)數(shù)細(xì)胞，用DMEM培養(yǎng)基稀釋成IO3-1O4個(gè)/100 μ I濃度的單細(xì)胞懸液，每孔ΙΟΟμ 1，接種到96孔板上，置37°C，5%C02，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12h后?？瞻讓?duì)照組加入緩沖液PBS，陰性對(duì)照組用等體積DMEM培養(yǎng)液，陽(yáng)性對(duì)照組加入不同濃度的順鉬溶液，實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的毛冬青阜苷Ilexsaponin Al (20、40、80、160 μ g/ml),每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，每孔20 μ I。96孔板置37°C、5%C02、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)4h后，加入5mg/mlMTT，每孔10 μ 1，培養(yǎng)4h，每孔加入150 μ I DMSO,搖床振蕩IOmin,酶標(biāo)儀上測(cè)定其吸光度(A值)，吸收波長(zhǎng)為570nm。分別測(cè)定24、48、72h的OD值，并計(jì)算相對(duì)抑制率，公式如下:抑制率(%) = (1-A實(shí)驗(yàn)組/A對(duì)照組)X 100%ο結(jié)果見(jiàn)圖2A。
[0017]結(jié)論:如圖2A所示，毛冬青阜苷Ilexsaponin Al與HepG2細(xì)胞作用后，隨這毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的增加，其抑制率上升，在20 μ g/ml>40 μ g/ml>80 μ g/ml和160 μ g/ml濃度時(shí)對(duì)HepG2細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(Ρ〈0.05)，呈劑量依賴關(guān)系；同時(shí)，隨著時(shí)間推移，毛冬青皂苷Ilexsaponin Al對(duì)H印G2細(xì)胞抑制率逐步增加，呈時(shí)間依賴關(guān)系。
[0018]實(shí)施例二，采用MTT比色法檢測(cè)毛冬青阜苷Ilexsaponin Al對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC7721的活力影響:方法學(xué)部分參照實(shí)施例一，結(jié)果見(jiàn)圖2Β。
[0019]結(jié)論:如圖2Α所示，毛冬青皂苷Ilexsaponin Al與SMMC7721細(xì)胞作用后，隨這毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的增加，其抑制率上升，在20 μ g/ml>40 μ g/ml>80 μ g/ml和160 μ g/ml濃度時(shí)對(duì)SMMC7721細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(Ρ〈0.05)，呈劑量依賴關(guān)系；同時(shí)，隨著時(shí)間推移，毛冬青皂苷Ilexsaponin Al對(duì)SMMC7721細(xì)胞抑制率逐步增加，呈時(shí)間依賴關(guān)系。
[0020]實(shí)施例三，采用采用MTT比色法檢測(cè)毛冬青皂苷Ilexsaponin Al對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC7901的活力影響:方法學(xué)部分參照實(shí)施例一，結(jié)果見(jiàn)圖3。
[0021]結(jié)論:如圖3所示，毛冬青阜苷Ilexsaponin Al與SGC7901細(xì)胞作用后，隨這毛冬青阜苷Ilexsaponin Al的增加，其抑制率上升，在20 μ g/ml>40 μ g/ml>80 μ g/ml和160 μ g/ml濃度時(shí)對(duì)SGC7901細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(Ρ〈0.05)，呈劑量依賴關(guān)系；同時(shí)，隨著時(shí)間推移，毛冬青皂苷Ilexsaponin Al對(duì)SGC7901細(xì)胞抑制率逐步增加，呈時(shí)間依賴關(guān)系。
[0022]4.實(shí)施例四，體外毛冬青阜苷Ilexsaponin Al對(duì)T細(xì)胞分化的影響
[0023]按常規(guī)方法磁珠陰性選擇法分離獲得CD4+T細(xì)胞，分選的初始CD4+T細(xì)胞以109/L密度接種于96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)培養(yǎng)條件設(shè)復(fù)孔，用含L-谷氨酰胺、胎牛血清的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)板預(yù)先用含10 μ g/ml⑶3單抗的PBS4°C包被過(guò)夜，再加入2.0 μ g/ml⑶28可溶性單抗培養(yǎng)使初始T細(xì)胞活化，加入TGF(5ng/ml)和不同濃度(O、10、30、100、300 μ g/ml)的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al，共同孵育72h，固定、穿膜，緩沖液處理，加PE-⑶25、Percp5.5-CD4 和 Foxp3_APC,進(jìn)行 FACS 檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖 4。
[0024]結(jié)論:在O~300 μ g/ml濃度范圍內(nèi)，毛冬青皂苷Ilexsaponin Al對(duì)正常T細(xì)胞分化沒(méi)有影響。
[0025]實(shí)施例5.膠囊的制備毛冬青阜苷Ilexsaponin A1250g,淀粉2500g,將干燥好的淀粉與毛冬青皂苷Ilexsaponin Al充分混合，過(guò)120目篩，充分混勻后制備膠囊1000粒，每粒含毛冬青阜苷Ilexsaponin A1250mg。
[0026]實(shí)施例6.滴丸的制備600g聚乙二醇水浴溶化，加入毛冬青阜苷IlexsaponinA1200g，充分?jǐn)嚢韬笾糜诒毓苤校蟛捎靡后w石蠟包裹，吸干石蠟油后加入少量滑石粉混勻，制備滴丸1000丸
[0027]實(shí)施例7.片劑的制備毛冬青阜苷Ilexsaponin AllOOg,淀粉1000g,糖粉200g,適
量乙醇制粒后，經(jīng)整粒機(jī)處理后，壓片分裝。
[0028]實(shí)施例7.注射 劑的制備毛冬青阜苷Ilexsaponin AllOg,丙二醇20ml,聚乙二醇40ml,注射用水200ml,混合后水浴加熱0.5h,注射用水加至500ml,超聲處理IOmin,水浴加熱0.5h，調(diào)節(jié)PH5.5~6.5，過(guò)濾澄明，灌封滅菌即得。
【權(quán)利要求】
1.毛冬青皂苷IlexsaponinAl在制備治療和預(yù)防腫瘤藥物或保健食品中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述抗腫瘤肝癌和胃癌。
3.一種藥物制劑，其特征在于含有有效治療劑量的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和一種或多種藥學(xué)上可接受的藥用賦形劑，或可與毛冬青阜苷Ilexsaponin Al組方的其他藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物制劑，其特征在于含有1%~99%的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和99%~1%的藥用賦形劑或其他可組方的藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物制劑，其特征在于含有30%~80%的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和70%~20%的藥用賦形劑或其他可組方的藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物制劑，其特征在于含有60%~70%的毛冬青皂苷Ilexsaponin Al和40%~30%的藥用賦形劑或其他可組方的藥物。
7.根據(jù)權(quán)利3所述的藥物制劑，其特征在于所說(shuō)的藥物劑型選自于膠囊劑、片劑、滴丸劑、口服液體制劑、注射劑當(dāng)中的任何一種。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103735557SQ201410007437
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月8日
【發(fā)明者】孫云, 劉暢, 葛玲甜, 王娟 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)