一種制作靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物干性年齡相關(guān)性黃斑變性疾病模型的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物上制作干性年齡相關(guān)性黃斑變性疾病模型方法，將碘酸鈉以頸動(dòng)脈注射的方式施于靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。本發(fā)明的操作方法簡(jiǎn)單易行，造模成功率高，可重復(fù)性好，模型穩(wěn)定；所需碘酸鈉藥物量少，避免了大劑量碘酸鈉對(duì)動(dòng)物的全身?yè)p傷，動(dòng)物長(zhǎng)期存活，為后續(xù)試驗(yàn)提供可能；可根據(jù)需要做任何一側(cè)或雙側(cè)模型；做一側(cè)造模時(shí)對(duì)對(duì)側(cè)眼沒(méi)任何損傷，保證了動(dòng)物的正常生活視力；可在一只動(dòng)物上做雙側(cè)眼的自身對(duì)照，提供了試驗(yàn)的可信度，減少了試驗(yàn)動(dòng)物的需要量；本發(fā)明為干性年齡相關(guān)性黃斑變性研究提供了一個(gè)良好的工具，對(duì)這一疾病的病理生理學(xué)研究及治療研究都具有重要意義。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種制作靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物干性年齡相關(guān)性黃斑變性疾病模型的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)療【技術(shù)領(lǐng)域】，具體的說(shuō)是一種制作靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物干性年齡相關(guān)性黃斑變性疾病模型的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]干性年齡相關(guān)性黃斑變性(age-relatedmacular degeneration, AMD)是發(fā)生于中老年人中的常見(jiàn)致盲性眼病之一。研究表明視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigmentepithelium, RPE)的正常功能對(duì)感光細(xì)胞的數(shù)量和功能具有至關(guān)重要的意義，在A(yíng)MD發(fā)生過(guò)程中，黃斑區(qū)視網(wǎng)膜色素上皮損害是疾病的原發(fā)病變，而感光細(xì)胞的丟失是繼發(fā)的。隨著年齡增長(zhǎng)，AMD發(fā)病率逐漸上升，所以其危害正隨著我國(guó)人口的老齡化而增加。干性老年性黃斑變性當(dāng)今仍然無(wú)明確有效的治療手段，其發(fā)病機(jī)理和治療方法成為研究熱點(diǎn)，但因?yàn)闆](méi)有理想的動(dòng)物疾病模型，極大的阻礙了其研究進(jìn)展。
[0003]碘酸鈉是一種抗代謝藥，能夠破壞視網(wǎng)膜色素上皮糖代謝有關(guān)的酶的活性，因而可以選擇性破壞視網(wǎng)膜色素上皮。通過(guò)靜脈注射碘酸鈉，在兔中可以制作出干性年齡相關(guān)性黃斑變性模型。靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物與人類(lèi)結(jié)構(gòu)和功能最為相似，靈長(zhǎng)類(lèi)的疾病模型對(duì)人類(lèi)疾病的研究極為重要，但在靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中，相應(yīng)劑量的碘酸鈉靜脈注射并不能取得滿(mǎn)意的干性年齡相關(guān)性黃斑變性模型，增加劑量則增加藥物的全身毒性，動(dòng)物甚至因藥物全身毒性而死亡。文獻(xiàn)《年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷难芯窟M(jìn)展》(江偉，邱春億，《國(guó)際眼科雜志》2007年第3期)以及文獻(xiàn)《 碘酸鈉誘導(dǎo)非滲出型年齡相關(guān)性黃斑變性模型的研究》(江偉，張婉玉，邱春億，《國(guó)際眼科雜志》2008年第8期)公開(kāi)了采用舌下靜脈注射的方式將劑量為30-40mg/kg碘酸鈉用于非滲出型年齡相關(guān)性黃斑變性的體內(nèi)造模。由于靜脈注射碘酸鈉造模的方法，藥物先經(jīng)靜脈回流到心臟，后再經(jīng)心臟泵出通過(guò)主動(dòng)脈，頸動(dòng)脈，眼動(dòng)脈進(jìn)入視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜循環(huán)，藥物經(jīng)過(guò)全身循環(huán)使到達(dá)眼部的藥物濃度已經(jīng)大幅度降低，而藥物對(duì)色素上皮的作用是濃度依賴(lài)性的，為了達(dá)到破壞色素上皮的目的，要加大給藥劑量，但這樣會(huì)相應(yīng)增加藥物的全身毒性，導(dǎo)致動(dòng)物血尿，腎衰甚至死亡，而相應(yīng)的視網(wǎng)膜色素上皮的病變并不明顯。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)不足，提供了一種滿(mǎn)意的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物干性年齡相關(guān)性黃斑變性的疾病模型。通過(guò)經(jīng)頸動(dòng)脈給藥，藥物經(jīng)頸動(dòng)脈到眼動(dòng)脈，進(jìn)入視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜循環(huán)，藥物沒(méi)有經(jīng)過(guò)全身循環(huán)的稀釋?zhuān)竭_(dá)眼部的藥物濃度高，從而使用少量的藥物而達(dá)到相應(yīng)目的；可進(jìn)一步通過(guò)控制頸動(dòng)脈的阻斷時(shí)間，還可以控制藥物在眼部停留的時(shí)間，延長(zhǎng)藥物對(duì)色素上皮的作用，可調(diào)控視網(wǎng)膜色素上皮損傷的范圍和程度。
[0005]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案解決的:
一種制作靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物干性年齡相關(guān)性黃斑變性疾病模型的方法，將碘酸鈉以頸動(dòng)脈注射的方式施于靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，上述碘酸鈉的劑量為15mg/kg。
[0006] 申請(qǐng)人:發(fā)現(xiàn)，在本發(fā)明所述靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物干性年齡相關(guān)性黃斑變性疾病模型的制作過(guò)程中，模型效果以及病變的程度不僅與碘酸鈉的劑量有直接關(guān)系，還與碘酸鈉藥物濃度以及推注速度有關(guān)，優(yōu)選碘酸鈉的濃度為10mg/ml，推注速度為0.lml/s。
[0007]上述方法中，頸動(dòng)脈注射可采用頸動(dòng)脈穿刺的方式給藥。在進(jìn)行注射時(shí)，一般采用平臥位，將動(dòng)物頸部墊高，頭向后仰，盡量暴露頸部，頭偏向于穿刺部位的對(duì)側(cè)，進(jìn)行常規(guī)的皮膚消毒后，用左手食指或食指、中指固定其搏動(dòng)明顯處的血管，右手食指和拇指固定準(zhǔn)針柄部位，進(jìn)針點(diǎn)為甲狀軟骨下緣以下，進(jìn)針時(shí)要注意進(jìn)針?lè)较?，其垂直角度以與頸動(dòng)脈垂直方向?yàn)闇?zhǔn)，刺入后，有搏動(dòng)性鮮血噴入針管內(nèi)，即可注入藥物。藥物注射完畢壓迫止血，可通過(guò)進(jìn)一步按壓阻斷頸總動(dòng)脈一定時(shí)間，從而進(jìn)一步延長(zhǎng)碘酸鈉在眼部聚集的時(shí)間，優(yōu)選阻斷時(shí)間為I分鐘。
[0008]或者，可以采用暴露頸動(dòng)脈的方式進(jìn)行注射:1)將動(dòng)物麻醉，固定,暴露頸部,去毛，消毒；2)喉部正中線(xiàn)皮膚切口，暴露頸總動(dòng)脈；3)阻斷頸外動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈血流；4)將碘酸鈉經(jīng)頸總動(dòng)脈注入，繼續(xù)保持頸總動(dòng)脈血流阻斷一定時(shí)間，優(yōu)選I分鐘。5)拔針后壓迫止血，縫合切口。
[0009]本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)有如下優(yōu)點(diǎn):
1)造模成功率高，可重復(fù)性好，模型穩(wěn)定；
2)所需碘酸鈉藥物量少，避免了大劑量碘酸鈉對(duì)動(dòng)物的全身?yè)p傷，動(dòng)物長(zhǎng)期存活，為后續(xù)試驗(yàn)提供可能；
3)可根據(jù)需要做任何一側(cè)或雙側(cè)模型；
4)做一側(cè)造模時(shí)對(duì)對(duì)側(cè)眼沒(méi)任何損傷，動(dòng)物有正常生活視力，保證了動(dòng)物福利；
5)可在一只動(dòng)物上做雙側(cè)眼的自身對(duì)照，提供了試驗(yàn)的可信度，減少了試驗(yàn)動(dòng)物的需要量。
[0010]本發(fā)明為干性年齡相關(guān)性黃斑變性提供了一個(gè)良好的工具，對(duì)這一疾病的病理生理學(xué)研究及治療研究都具有重要意義。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0011]圖1為食蟹猴15mg/kg組碘酸鈉造模后六周雙眼暗適應(yīng)3.0視網(wǎng)膜電圖(視桿細(xì)胞視錐細(xì)胞最大混合反應(yīng)，反應(yīng)了視桿和視錐細(xì)胞的功能，左眼為造模眼)。
[0012]圖2為食蟹猴15mg/kg組碘酸鈉造模后六周雙眼明適應(yīng)3.0視網(wǎng)膜電圖(視錐細(xì)胞反應(yīng)，反應(yīng)了黃斑區(qū)視錐細(xì)胞的功能，左眼為造模眼)。
[0013]圖3為食蟹猴不同劑量碘酸鈉造模前后雙眼暗適應(yīng)3.0視網(wǎng)膜電圖(視桿細(xì)胞視錐細(xì)胞最大混合反應(yīng))a波振幅變化曲線(xiàn)圖。
`[0014]圖4為食蟹猴不同劑量碘酸鈉造模前后雙眼明適應(yīng)3.0視網(wǎng)膜電圖(視桿細(xì)胞反應(yīng))a波振幅變化曲線(xiàn)圖。
[0015]圖5為食蟹猴15mg/kg碘酸鈉造模后六周雙眼眼底照片，左眼為造模眼。
[0016]圖6為食蟹猴15mg/kg碘酸鈉造模后六周雙眼自發(fā)熒光照片，左眼為造模眼。
[0017]圖7為食蟹猴15mg/kg碘酸鈉造模后六周雙眼OCT結(jié)果，左眼為造模眼。【具體實(shí)施方式】
[0018]以下通過(guò)實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的具體步驟，但不受實(shí)施例限制。
[0019]在本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)，除非另有說(shuō)明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。
[0020]下面結(jié)合具體實(shí)施例并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例只是為了舉例說(shuō)明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0021 ] 在以下實(shí)施例中，未詳細(xì)描述的各種過(guò)程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。
[0022]實(shí)施例1頸動(dòng)脈注射碘酸鈉建立食蟹猴干性年齡相關(guān)性黃斑變性模型。
[0023]目的:通過(guò)頸動(dòng)脈注射碘酸鈉建立食蟹猴干性年齡相關(guān)性黃斑變性模型，篩選出造模的合適劑量。
[0024]實(shí)驗(yàn)材料:主要試劑:
麻醉藥品:50mg/ml鹽酸氯胺酮,3%戍巴比妥鈉 消毒藥品:5.0g/L聚維酮碘
造模藥品:碘 酸鈉(Sigma公司，批號(hào):S4007)，在暗室環(huán)境下，用0.9%滅菌生理鹽水將碘酸鈉粉末融至10mg/ml的濃度，并用0.22 μ m濾片過(guò)濾。
[0025]眼底熒光造影劑:熒光素鈉注射液(立攝得)500毫克/5毫升/支 主要儀器:
YZ5F裂隙燈顯微鏡(杭州六六)
Espion視覺(jué)電生理儀(美國(guó)Diagnosys公司)
SPECTRALIS OCT儀(德國(guó)海德堡公司)
海德堡熒光造影機(jī)，眼底照相機(jī) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:
動(dòng)物飼養(yǎng)與管理按照SOP執(zhí)行，同時(shí)遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)和使用指南第8版(Instituteof Laboratory Animal Resources, Commission on Life Sciences, National ResearchCouncil; National Academy Press, Washington, D.C., 2010)和美國(guó)農(nóng)業(yè)部(USDA)動(dòng)物福利管理?xiàng)l例(Public Law99-198)0實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用獲得了江蘇省科技廳的批準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)=SYXK (蘇)2011-0029。
[0026]食蟹猴為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用常規(guī)動(dòng)物，生理特點(diǎn)與人相似，飼養(yǎng)方便，便于試驗(yàn)操作。
[0027]從儲(chǔ)備動(dòng)物中挑選一般體檢、血生化及眼科系統(tǒng)性檢查正常的食蟹猴6只，給藥開(kāi)始時(shí)2-5歲，體重2-5kg。動(dòng)物項(xiàng)圈上標(biāo)記動(dòng)物ID號(hào)，同時(shí)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)動(dòng)物號(hào)作為動(dòng)物的標(biāo)識(shí)。記錄ID號(hào)與動(dòng)物號(hào)的對(duì)應(yīng)關(guān)系。
[0028]碘酸鈉注射造模后一周內(nèi)采取單籠飼養(yǎng)，其余時(shí)間采取群養(yǎng)籠飼養(yǎng)方式。動(dòng)物房設(shè)定溫度為18~26°C，濕度為40~70%，光照12小時(shí)明暗交替。
[0029]1.實(shí)驗(yàn)方法:
6只食蟹猴，分為10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg三組,每組各兩只，分別對(duì)各組食蟹猴左側(cè)頸總動(dòng)脈注射進(jìn)行相應(yīng)劑量的碘酸鈉給藥，以左眼造模，自體右眼為未造模對(duì)照，給藥后每周對(duì)各劑量組進(jìn)行眼視網(wǎng)膜電圖(ElectiOretinogram，ERG)、眼底照相、眼底自發(fā)熒光、OCT檢查。
[0030]上述方法中，動(dòng)脈注射采用頸動(dòng)脈穿刺的方式給藥:在進(jìn)行注射時(shí)，采用平臥位，將動(dòng)物頸部墊高，頭向后仰，盡量暴露頸部，頭偏向于穿刺部位的對(duì)側(cè)，進(jìn)行常規(guī)的皮膚消毒后，用左手食指或食指、中指固定其搏動(dòng)明顯處的血管，右手食指和拇指固定準(zhǔn)針柄部位，進(jìn)針點(diǎn)為甲狀軟骨下緣以下，進(jìn)針時(shí)要注意進(jìn)針?lè)较颍浯怪苯嵌纫耘c頸動(dòng)脈垂直方向?yàn)闇?zhǔn)，刺入后，有搏動(dòng)性鮮血噴入針管內(nèi)，即可注入藥物(注射速度為0.lml/s)。藥物注射完畢壓迫止血，按壓阻斷頸總動(dòng)脈I分鐘，從而進(jìn)一步延長(zhǎng)碘酸鈉在眼部聚集的時(shí)間。
[0031]或者也可選用暴露頸動(dòng)脈的方式進(jìn)行注射:1)將動(dòng)物用氯胺酮(0.2ml/kg)肌注，并戊巴比妥鈉(20mg/kg)后肢靜脈注射麻醉，仰面固定在手術(shù)臺(tái)上，暴露頸部，去毛，局部用碘伏溶液消毒；2)喉部正中線(xiàn)皮膚切口，暴露頸總動(dòng)脈；3)阻斷頸外動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈血流；4)將碘酸鈉經(jīng)頸總動(dòng)脈分叉處注入(注射速度為0.lml/s)，繼續(xù)保持頸總動(dòng)脈血流阻斷I分鐘；5)拔針后壓迫止血，縫合切口。
[0032]上述兩種方法均可制得食蟹猴干性年齡相關(guān)性黃斑變性模型，無(wú)明顯差異。
[0033]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
(I)眼視網(wǎng)膜電圖(Electroretinogram, ERG)檢查結(jié)果
ERG檢查結(jié)果見(jiàn)圖1-4，圖1為食蟹猴15mg/kg組碘酸鈉造模后六周雙眼暗適應(yīng)
3.0ERG，左眼為造模眼，右眼為自體未造模對(duì)照眼(圖a和圖b為暗適應(yīng)3.0ERG,圖c和圖d為暗適應(yīng)3.0震蕩電位ERG，其中圖a和圖c為右眼，圖b和圖d為左眼)，結(jié)果顯示左眼a波振幅較右側(cè)稍下降；圖2為食蟹猴15mg/kg組碘酸鈉造模后六周雙眼明適應(yīng)3.0ERG，左眼為造模眼，右眼為自體未造模對(duì)照眼(左圖為右眼，右圖為左眼)，結(jié)果顯示左眼a波振幅約為右側(cè)的三分之一；圖3為食蟹猴不同劑量碘酸鈉造模前后雙眼暗適應(yīng)3.0ERG a波振幅變化曲線(xiàn)圖；圖4為食蟹猴不同劑量碘酸鈉造模前后雙眼明適應(yīng)3.0ERG a波振幅變化曲線(xiàn)圖。結(jié)果顯示各劑量組，暗適應(yīng)3.0，震蕩電位，明適應(yīng)3.0ERG其a波振幅都有所下降，在造模后6周內(nèi)都緩慢回升，但程度明`顯不同。
[0034]暗適應(yīng)3.0ERG是視桿視錐細(xì)胞的最大混合反應(yīng)，反應(yīng)了視桿和視錐細(xì)胞的功能；本組實(shí)驗(yàn)中，10mg/kg組暗適應(yīng)3.0ERG a波振幅6周時(shí)基本恢復(fù)至造模前水平，15mg/kg組恢復(fù)至造模前三分之二強(qiáng)水平，20mg/kg組恢復(fù)至造模前五分之一水平，說(shuō)明10mg/kg組對(duì)視桿視錐細(xì)胞損傷較小，15mg/kg組有所損傷,而20mg/kg對(duì)其損傷較大(見(jiàn)圖3)。明適應(yīng)
3.0ERG是視錐細(xì)胞反應(yīng)，反應(yīng)了視錐細(xì)胞的功能，本組實(shí)驗(yàn)中，10mg/kg組a波振幅基本恢復(fù)至造模前水平，15mg/kg和20mg/kg組恢復(fù)至術(shù)前三分之一水平(見(jiàn)圖4),說(shuō)明15mg/kg和20mg/kg組動(dòng)物視錐細(xì)胞功能都有明顯下降。結(jié)合暗適應(yīng)3.0ERG和明適應(yīng)3.0ERG的結(jié)果，我們可以看出15mg/kg組主要損傷黃斑區(qū)視錐細(xì)胞功能，而20mg/kg組損傷的不僅僅是視錐細(xì)胞的功能，連視桿細(xì)胞的功能也受到明顯損傷。
[0035](2)眼底照相檢查結(jié)果
食蟹猴15mg/kg碘酸鈉造模后六周雙眼眼底照相檢查結(jié)果如圖5所示，左眼為15mg/kg碘酸鈉造模組，自體右眼為未造模對(duì)照組。結(jié)果顯示左眼黃斑區(qū)視網(wǎng)膜色素上皮萎縮，斑駁狀萎縮，透見(jiàn)后方脈絡(luò)膜血管，周邊未見(jiàn)明顯改變。20mg/kg組整個(gè)后極部色素上皮萎縮。
[0036](3)自發(fā)突光
食蟹猴15mg/kg碘酸鈉造模后六周雙眼自發(fā)突光結(jié)果如圖6所示,左眼為15mg/kg碘酸鈉造模組，自體右眼為未造模對(duì)照組。結(jié)果顯示與對(duì)照相比，15mg/kg組左眼黃斑區(qū)失去均勻一致的自發(fā)突光而表現(xiàn)出斑駁狀高突光伴局部低突光，黃斑外突光均勻，說(shuō)明黃斑區(qū)色素上皮的損傷及功能下降。
[0037](4) OCT檢查結(jié)果
食蟹猴15mg/kg碘酸鈉造模后六周雙眼OCT檢查結(jié)果如圖7所示,左眼為15mg/kg碘酸鈉造模組，自體右眼為未造模對(duì)照組。結(jié)果顯示15mg/kg組，造模前視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜各層結(jié)構(gòu)正常，造模后黃斑區(qū)色素上皮層萎縮，視網(wǎng)膜外層結(jié)構(gòu)紊亂，IS/0S層不可見(jiàn)。
[0038]討論:ERG結(jié)果顯示10-20mg/kg的碘酸鈉頸動(dòng)脈注射可以導(dǎo)致視網(wǎng)膜色素上皮的損傷，其中20mg/kg組暗適應(yīng)3.0和明適應(yīng)3.0振幅明顯下降,六周后維持在較低水平,表明視桿和視錐細(xì)胞功能皆下降，損傷的是整個(gè)后極部視網(wǎng)膜，不符合干性老年性黃斑變性主要損傷黃斑區(qū)視錐細(xì)胞的特點(diǎn)；而15mg/kg組雖然暗適應(yīng)3.0ERG在造模后振幅緩慢上升，但明適應(yīng)3.0ERG上升不明顯，說(shuō)明視桿細(xì)胞功能損傷較輕而視錐細(xì)胞功能損傷嚴(yán)重，造成的視網(wǎng)膜損傷局限于黃斑區(qū)，符合年齡性相關(guān)黃斑變性的改變的特點(diǎn)。眼底照片顯示15mg/kg組黃斑區(qū)視網(wǎng)膜色素上皮的損傷局限與后極部黃斑區(qū)視網(wǎng)膜，接近干性年齡相關(guān)性黃斑變性的臨床改變；自發(fā)熒光及OCT在活體上顯示了黃斑區(qū)色素上皮和視網(wǎng)膜外層萎縮，與年齡相關(guān)性黃斑變性改變相似?？梢?jiàn)碘酸鈉頸動(dòng)脈注射可以導(dǎo)致視網(wǎng)膜色素上皮的病變，其中15mg/kg的碘酸鈉注射造成的黃斑區(qū)視網(wǎng)膜色素上皮損傷適中，與人年齡相關(guān)性黃斑變性 的病理改變相似，對(duì)動(dòng)物全身沒(méi)有明顯損傷，是一個(gè)合適的造模劑量。
【權(quán)利要求】
1.一種制作靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物干性年齡相關(guān)性黃斑變性疾病模型的方法，其特征在于將碘酸鈉以頸動(dòng)脈注射的方式施于靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于碘酸鈉的劑量為15mg/kg。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于碘酸鈉的濃度為10mg/ml，推注速度為0.1ml/So
【文檔編號(hào)】A61K33/18GK103720524SQ201410012503
【公開(kāi)日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2014年1月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月10日
【發(fā)明者】袁松濤, 計(jì)江東, 劉慶淮 申請(qǐng)人:南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院