一種從萊菔子中提取總硫苷部位的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種從萊菔子中提取總硫苷部位的方法，包括萊菔子的炒制與脫脂，脫脂后的萊菔子經(jīng)提取和柱分離后得總硫苷提取部位，本發(fā)明方法設(shè)計合理，簡便實(shí)用，制備出的總硫苷部位的含量純度高。
【專利說明】一種從萊菔子中提取總硫苷部位的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從萊菔子中提取總硫苷部位的方法，屬中醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]傳統(tǒng)中醫(yī)主以炮制后形成的中藥飲片組成復(fù)方應(yīng)用于臨床，這種用藥方式存在服用不便，療效不穩(wěn)定，質(zhì)量不易控制等不足。制約著中藥現(xiàn)代化發(fā)展的進(jìn)程。
[0003]中藥是一個復(fù)雜的體系，一味藥中往往是不同藥效作用成分共存一體，炮制會影響其內(nèi)在成分的量或質(zhì)。經(jīng)過對中藥生制品的系統(tǒng)研究，在認(rèn)識炮制機(jī)理的基礎(chǔ)上，利用現(xiàn)代科技手段，對不同藥效部位、組分進(jìn)行分離純化，使某一藥效部位有效富集，資源得到綜合利用?？梢栽趧┝繙p少，質(zhì)量可控前提下，提高中藥的科技含量，實(shí)現(xiàn)傳統(tǒng)中藥飲片功效的優(yōu)化，也可對分離純化的部位進(jìn)行新功效的開發(fā)，為創(chuàng)新藥物研制提供技術(shù)支撐。
萊菔子是中醫(yī)常用藥，具有“生升熟降”、“生熟異治”的藥性特點(diǎn)。申報者在完成國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30672665)中證明，萊菔子炒制的一個重要機(jī)理是防止蘿卜苷在煎煮過程中被酶解，有利于在煎出液中保存蘿卜苷。萊菔子中含有30%-40%的脂肪油，按中藥傳統(tǒng)入煎劑使用只有不足5%被煎出，其余則隨藥渣廢棄。萊菔子脂肪油中含30%以上的芥酸。芥酸長期食用對人體不利，是食用油的限制性標(biāo)準(zhǔn)之一，但它是重要的化工原料，具有很高的工業(yè)利用價值。前期研究證實(shí)，從整體上萊菔子的主要成分可分為脂肪油、總硫代葡萄糖苷(硫苷)和芥子堿三個藥效作用不同的部分?？偭蜍詹课恢械闹鞒煞质翘}卜苷，是調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)動物胃腸運(yùn)動和發(fā) 揮止咳平喘作用的主要藥效部位。提取萊菔子總硫苷部位有望使其消食除脹，降氣化痰的等功能得到優(yōu)化，并使資源得到綜合利用。
[0004]目前對萊菔子藥效部位或組分進(jìn)行分離，資源綜合利用的研究尚為空白。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種從萊菔子中提取總硫苷部位的方法。
[0006]在規(guī)范萊菔子炒制工藝的基礎(chǔ)上，通過物理脫脂獲得原料中75%左右的萊菔子脂肪油部分，可為高芥酸脂肪油的精加工提供原料，使萊菔子資源得到綜合利用。
[0007]對脫脂后的部分優(yōu)化了提取精制工藝，獲得了含量超過50%的總硫苷部位，該部位中蘿卜苷含量大于30%，發(fā)明還對總硫苷部位的質(zhì)量控制方法和藥效進(jìn)行了一定的研究。
萊菔子中總硫苷部位的制備工藝如下:
1.萊菔子的炒制與脫脂
取萊菔子，凈制；炒制時，預(yù)熱至鍋底溫度達(dá)200-250 V時投藥，快速均勻翻炒1-1.5min，至質(zhì)地鼓起，易脫皮，有爆裂聲和特有香氣時，取出，晾涼；粉碎成10目粉，90°C烘l_2h，使粉末溫度均勻達(dá)到90°C，壓油機(jī)物料室控溫95°C ±3°C，投料入壓油室，壓油機(jī)采用漸進(jìn)式加壓使脂肪油溢出后，暫停加壓，待油溢出速度顯著減慢時，再繼續(xù)加壓至油溢出，如此反復(fù)至出油率達(dá)到原料中脂肪油含量的75%±3%時，停止壓油；脂肪油另器保存，藥餅粉碎后供進(jìn)一步提?。?.脫脂炒萊菔子總硫苷部位的制備
經(jīng)物理脫脂后的炒萊菔子藥餅破碎成粗粉，加水浸泡0.5 h，加熱回流提取三次，加水量依次為藥料的8倍，6倍，6倍，提取時間分別為1.0 h，0.5 h，0.5 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮至I g/ml，加入95%乙醇，邊加邊快速攪拌，使得乙醇濃度為80%，靜置24 h，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇至無醇味，用氨水調(diào)整pH為8作為上樣溶液；
HPD722型大孔樹脂，濕法裝柱，取2倍柱體積pH8的藥液以3 BV -h^1的流速上樣，吸附4 h，用3 BV蒸餾水以4 BV.h—1的流速洗脫，合并洗脫液。于75 °C,-0.08-0.09 Mpa條件下減壓濃縮得浸膏，浸膏再以70 1:，壓力-0.09 Mpa，真空干燥至含水量不高于5.0%，得到炒萊菔子總硫苷部位。
[0008]其中，總硫苷的含量不低于:53% ;
蘿卜苷的含量不低于:30%。
[0009]本發(fā)明的有益效果如下:
1、本發(fā)明優(yōu)選出的萊 菔子炒制工藝，既能保證有效滅活萊菔子中硫苷分解酶的活性，最大限度的提高炒萊菔子水提液中蘿卜苷及其他硫代葡萄糖苷的含量，又可避免不當(dāng)?shù)某粗茰囟葘θR菔子中蘿卜苷等硫代葡萄糖苷的破壞。實(shí)驗(yàn)證明，用該條件炒制萊菔子，可使其水提液中蘿卜苷含量較生萊菔子提高8倍以上，如炒制過度，樣品出現(xiàn)焦糊，則水提液中蘿卜苷含量則損失殆盡。
[0010]2、本發(fā)明優(yōu)選出的炒萊菔子物理脫脂工藝，不使用有機(jī)溶媒。有效克服了有機(jī)溶媒脫脂易燃易爆，產(chǎn)品中存在有機(jī)溶媒殘留的難題，便于工業(yè)生產(chǎn)，又能保證脫脂過程中蘿
卜苷不被破壞。該工藝既有效獲得了炒萊菔子脂肪油部位，為精細(xì)化工業(yè)提供了高芥酸脂肪油原料，使炒萊菔子資源得到了綜合利用，提高了其附加值。又能使炒萊菔子中總硫苷部位得到有效富集，并減少了提取分離總硫苷部位的干擾。
[0011]3、本發(fā)明優(yōu)選出的脫脂炒萊菔子提取精制工藝，簡便實(shí)用，便于推廣。用最小的溶媒量保證了總硫苷和蘿卜苷的提取率和轉(zhuǎn)移率。
[0012]4、本發(fā)明優(yōu)選出的脫脂炒萊菔子提取液中總硫苷分離制備工藝，從不同樹脂類型中，優(yōu)化出了大孔吸附樹脂柱型號，上樣藥液的酸堿度、吸附時間、洗脫液種類、洗脫速度、洗脫液體積等關(guān)鍵參數(shù)，確保了總硫苷的收率和純度。使總硫苷含量高于53%，其中蘿卜苷含量高于30%。簡便實(shí)用，便于推廣。
【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0014]實(shí)施例1
1.萊菔子的炒制與脫脂
取萊菔子，凈制。炒制時，預(yù)熱至鍋底溫度達(dá)200-250 °C時投藥，快速均勻翻炒1-1.5min，至質(zhì)地鼓起，易脫皮，有爆裂聲和特有香氣時，取出，晾涼；粉碎成10目粉，90°C烘l_2h，使粉末溫度均勻達(dá)到90°C，壓油機(jī)物料室控溫95°C ±3°C，投料入壓油室，壓油機(jī)采用漸進(jìn)式加壓使脂肪油溢出后，暫停加壓，待油溢出速度顯著減慢時，再繼續(xù)加壓至油溢出，如此反復(fù)至出油率達(dá)到原料中脂肪油含量的75%±3%時，停止壓油；脂肪油另器保存，藥餅粉碎后供進(jìn)一步提??；萊菔子中蘿卜苷含量為0.93% ;炒萊菔子中蘿卜苷含量為8.10%。
[0015]脫脂前蘿卜苷含量:8.10% ;脫脂后蘿卜苷含量:11.29% ；
2.脫脂炒萊菔子總硫苷部位的制備
經(jīng)物理脫脂后的炒萊菔子藥餅破碎成粗粉，加水浸泡0.5 h，加熱回流提取三次，加水量依次為藥料的8倍，6倍，6倍，提取時間分別為1.0 h，0.5 h，0.5 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮至I g/ml，加入95%乙醇，邊加邊快速攪拌，使得乙醇濃度為80%，靜置24 h，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇至無醇味，用氨水調(diào)整pH為8作為上樣溶液。
[0016]HPD722型大孔樹脂，濕法裝柱，取2倍柱體積pH8的藥液以3 BV 的流速上樣，吸附4 h，用3 BV蒸餾水以4 BV 的流速洗脫，合并洗脫液。于75 °C，_0.08-0.09 Mpa條件下減壓濃縮得浸膏， 浸膏再以70 1:，壓力-0.09 Mpa，真空干燥至含水量不高于5.0%，得到炒萊菔子總硫苷部位。
[0017]紫外分光光度法測總硫苷含量53.55% ；
高效液相法測蘿卜苷的含量31.05%。
[0018]各指標(biāo)的含量測定方法如下:
1.所述萊菔子炒制前后蘿卜苷的測定方法如下:
照《中國藥典》2010年版附錄VI D高效液相色譜法測定。
[0019]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈一0.1%的磷酸水溶液(5:95);檢測波長:225 nm。
[0020]對照品溶液的制備取蘿卜苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水制成每I ml含0.3mg的溶液，即得。
[0021]供試品溶液的制備分別取萊菔子、炒萊菔子粉末約0.1 g，精密稱定。置50 ml燒瓶中，精密加水25 ml，稱重，浸泡30 min。回流提取1.0 h，補(bǔ)足失重，抽濾，濾液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后備用。
[0022]測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0023]注:申請者研究表明，萊菔子炒制的一個重要機(jī)理是抑制了萊菔子中硫苷分解酶的活性，防止蘿卜苷在煎煮過程中被酶解，有利于在煎出液中保存蘿卜苷。煎出液中蘿卜苷含量是反映萊菔子炒制工藝是否合理的專屬性指標(biāo)，炒制得當(dāng)，炒萊菔子水提液中蘿卜苷的含量是生品的7-8倍，如炒制過度，則蘿卜苷損失殆盡，在提取液中測不到蘿卜苷。
[0024]所述炒萊菔子脫脂品及總硫苷部位中蘿卜苷的含量測定 照《中國藥典》2010年版附錄VI D高效液相色譜法測定。
[0025]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈一0.1%的磷酸水溶液(5:95);檢測波長:225 nm。
[0026]對照品溶液的制備取蘿卜苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加純凈水制成每I ml含0.3mg的溶液，即得。
[0027]供試品溶液的制備取本品粉末約0.15g，精密稱定，加入純凈水200ml，超聲處理(功率250W，頻率50kHz) 30分鐘，放冷，純凈水定容至250 ml，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，置棕色瓶中，即得。
[0028]測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0029]所述炒萊菔子總硫苷部位中總硫苷的含量測定
照《中國藥典》2010年版附錄VA紫外分光光度法測定。
[0030]對照品溶液的制備精密稱取蘿卜苷10 mg于10 ml容量瓶中，加水溶解，定容制成I mg.ML1的溶液。
[0031]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取照品溶液50、100、150、200、250、300μ?，用純凈水定容至10 ml，搖勻。照《中國藥典》2010年版附錄VA紫外分光光度法，在225 nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為模坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程。 [0032]測定法炒萊菔子總硫苷部位約0.02 g，精密稱定，蒸餾水溶解，超聲30 min,定容至500 ml，搖勻。照標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定吸收度，代入回歸方程，求得供試品的總硫苷含量。
【權(quán)利要求】
1.一種從萊菔子中提取總硫苷部位的方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)萊菔子的炒制與脫脂 取萊菔子，凈制；炒制時，預(yù)熱至鍋底溫度達(dá)200-250 °C時投藥，快速均勻翻炒1-1.5min，至質(zhì)地鼓起，易脫皮，有爆裂聲和特有香氣時，取出，晾涼；粉碎成10目粉，90°C烘1-2h,使粉末溫度均勻達(dá)到90°C，壓油機(jī)物料室控溫95°C ±3°C，投料入壓油室，壓油機(jī)采用漸進(jìn)式加壓使脂肪油溢出后，暫停加壓，待油溢出速度顯著減慢時，再繼續(xù)加壓至油溢出，如此反復(fù)至出油率達(dá)到原料中脂肪油含量的75%±3%時，停止壓油；脂肪油另器保存，藥餅粉碎后供進(jìn)一步提??； 2)脫脂炒萊菔子總硫苷部位的制備 經(jīng)物理脫脂后的炒萊菔子藥餅破碎成粗粉，加水浸泡0.5 h，加熱回流提取三次，加水量依次為藥料的8倍，6倍，6倍，提取時間分別為1.0 h，0.5 h，0.5 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮至I g/ml，加入95%乙醇，邊加邊快速攪拌，使得乙醇濃度為80%，靜置24 h，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇至無醇味，用氨水調(diào)整pH為8作為上樣溶液； HPD722型大孔樹脂，濕法裝柱，取2倍柱體積pH8的藥液以3 BV.IT1的流速上樣，吸附4 h，用3 BV蒸餾水以4 BV 的流速洗脫，合并洗脫液；于75 °C,-0.08-0.09 Mpa條件下減壓濃縮得浸膏，浸膏再以70 1:，壓力-0.09 Mpa，真空干燥至含水量不高于5.0%，得到炒萊菔子總硫苷部位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的炒萊菔子總硫苷部位中，總硫苷的含量不低于:53%，蘿卜苷的含量不低于:30%。
【文檔編號】A61P11/10GK103768122SQ201410049676
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年2月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月13日
【發(fā)明者】呂文海, 馬山, 孟祥紅, 王群, 劉梅 申請人:山東中醫(yī)藥大學(xué)