一種包含羅氟司特和噻托溴銨的藥物組合產(chǎn)品的制作方法【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及吸入/口服羅氟司特或其藥學(xué)上可接受的鹽聯(lián)合吸入噻托溴銨或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合產(chǎn)品，該藥物組合產(chǎn)品用于同時(shí)、順序或分別給藥，用于呼吸道疾病或其癥狀的治療或預(yù)防治療，尤其是那些伴隨阻塞或炎癥的疾病如慢性阻塞性肺病（COPD）或哮喘的治療?！緦?zhuān)利說(shuō)明】一種包含羅氟司特和噻托溴銨的藥物組合產(chǎn)品發(fā)明領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及吸入/口服羅氟司特或其藥學(xué)上可接受的鹽聯(lián)合吸入噻托溴銨或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合產(chǎn)品，該藥物組合產(chǎn)品用于同時(shí)、順序或分別給藥，用于呼吸道疾病或其癥狀的治療或預(yù)防治療，尤其是那些伴隨阻塞或炎癥的疾病如慢性阻塞性肺病(COPD)或哮喘的治療。[0002]發(fā)明背景[0003]支氣管哮喘，在工業(yè)化國(guó)家中影響多達(dá)10%的個(gè)體，其特征在于支氣管收縮，慢性支氣管炎，氣道反應(yīng)過(guò)度，和粘膜水腫。氣道改造和改變的非膽堿能、非腎上腺素能神經(jīng)傳遞可以引起不可逆的氣道阻塞和肺功能減退。在過(guò)去20年中支氣管炎哮喘作為全世界的主要公眾健康問(wèn)題出現(xiàn)。盡管數(shù)據(jù)表明目前的哮喘治療導(dǎo)致死亡率有限的降低，但其持續(xù)作為重要的健康護(hù)理問(wèn)題，其仍然是全世界可預(yù)防的住院治療的主導(dǎo)原因之一。隨著哮喘發(fā)明率的提高，與該疾病相關(guān)的成本也顯著提高。[0004]慢性阻塞性肺病(COPD)也是非常常見(jiàn)的。該疾病的特征在于伴隨炎癥反應(yīng)的漸進(jìn)性氣流受限。從全世界的數(shù)據(jù)調(diào)查來(lái)看，煙草并不是導(dǎo)致CCffD的唯一原因。全世界上升中的年齡也是特定的風(fēng)險(xiǎn)因素。COPD的發(fā)病率存在變化，在3%至10%之間，具有穩(wěn)定上升的趨勢(shì)。盡管COPD是呼吸道疾病死亡的主導(dǎo)原因，并使人們漸漸認(rèn)識(shí)到其是公眾健康問(wèn)題的核心所在，CCffD上升的死亡率和大部分心血管疾病死亡率的下降成為公眾最為關(guān)心的問(wèn)題(Hurd，Chest2000;117(增補(bǔ)2):1S_4S)。此外，CCffD給公眾和社會(huì)增添了顯著的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。[0005]目前，患者存在氣道炎癥是誘發(fā)哮喘的主要原因之一。哮喘的病理生理學(xué)涉及分子和細(xì)胞相互作用的復(fù)雜機(jī)理，盡管每個(gè)單位因素的影響在患者與患者之間很可能是不同的，其取決于環(huán)境和刺激效果。哮喘表型發(fā)展中的主要參與者包括引發(fā)刺激物如過(guò)敏原本身，細(xì)胞如T細(xì)胞，上皮細(xì)胞和肥大細(xì)胞，這些細(xì)胞產(chǎn)生包括IL-5，GM-CSF,IL_3，IL-4和IL-13的多種細(xì)胞因子和趨化因子如嗜酸細(xì)胞活化趨化因子，粘附分子等。哮喘炎癥和免疫機(jī)理方面的研究進(jìn)展已表明許多潛在的治療手段可以防止或逆轉(zhuǎn)哮喘中基礎(chǔ)性的異常反應(yīng)。[0006]總而言之，關(guān)于COPD的發(fā)病機(jī)理相較哮喘要少一些。最近研究表明已極大擴(kuò)展對(duì)COPD潛在發(fā)病機(jī)理的了解，認(rèn)可COPD也是一種炎性疾病。從目前發(fā)病機(jī)理觀點(diǎn)來(lái)看，嗜中性粒細(xì)胞，CD8+淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞及其介質(zhì)可能在COPD的發(fā)病機(jī)理中起著決定性作用。[0007]目前的治療和預(yù)防方法均聚焦于COF1D患者肺功能的改善。藥物治療仍是治療哮喘的主要手段?；颊呖衫枚绦Ш烷L(zhǎng)效吸入β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑。目前短效β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑基于按需使用來(lái)用于癥狀的快速緩解。近些年來(lái)，長(zhǎng)效的吸入β2_腎上腺素能受體激動(dòng)劑在哮喘控制中具有日益提高的作用，尤其是針對(duì)中重度的哮喘患者。[0008]其次，便是停止吸煙，減少或停止吸煙可以使一些呼吸參數(shù)得到改善。支氣管擴(kuò)張藥(β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑和抗膽堿能藥)目前是其癥狀治療的主要手段。但尚未解決COPD的抗炎治療。在過(guò)去20年中已經(jīng)可觀地增加了對(duì)COPD的全身和吸入糖皮質(zhì)激素的使用。他們已經(jīng)得到測(cè)試，前提是對(duì)coro中炎癥的干預(yù)應(yīng)當(dāng)改變疾病的進(jìn)程。盡管吸入的皮質(zhì)類(lèi)固醇在哮喘控制中確具益處，但是直至最近，他們?cè)诜窍缘呐c吸煙相關(guān)的COPD中的效用是沒(méi)有證據(jù)基礎(chǔ)的(Bonay等，DrugSaf2002:25:57-71)。吸入的糖皮質(zhì)激素對(duì)表征COPD的炎癥過(guò)程具有相對(duì)小的影響(Adcock和Chung,CurrOpinInvestingDrugs2002；3:58-60)。因此，他們適用于存在顯著的支氣管擴(kuò)張藥反應(yīng)或患者具有伴隨頻繁加重的更嚴(yán)重疾病(Alsaeedi等，AmJMed2002;113:59_65)。[0009]氣流阻塞和氣道炎癥是哮喘以及COPD的特征。盡管哮喘和COPD中的氣道炎癥各自涉及不同的細(xì)胞類(lèi)型，但都是與細(xì)胞侵潤(rùn)和激活相關(guān)的慢性炎癥性質(zhì)的疾病。盡管支氣管哮喘的主要特征在于嗜酸性粒細(xì)胞和CD4淋巴細(xì)胞，嗜中性粒細(xì)胞、CD8淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在COPD的發(fā)病機(jī)理中起主要作用。因此，涉及平滑肌松弛并且也在嗜酸性粒細(xì)胞以及嗜中性粒細(xì)胞和其他炎性和免疫活性細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的PDE可能構(gòu)成兩種疾病進(jìn)展中的基礎(chǔ)元素。這些疾病發(fā)病機(jī)理中涉及的許多事件和機(jī)理受到環(huán)核苷酸信號(hào)途徑激活的抑制。因此，胞內(nèi)cAMP的增加干擾了淋巴細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞激活，并且阻斷了細(xì)胞因子產(chǎn)生、細(xì)胞復(fù)制和細(xì)胞趨向炎癥部位。此外，氣道平滑肌細(xì)胞中cAMP信號(hào)途徑的激活促進(jìn)了松弛并阻斷了平滑肌細(xì)胞的復(fù)制(Tomlinson等，BiochemPharmacoll995;49:1809-19),由此防止了疾病慢性階段中觀察到的氣道改造。[0010]全球大約有4200萬(wàn)哮喘患者和2800萬(wàn)COPD(慢性阻塞性肺病)患者。近十年來(lái)，隨著全球范圍內(nèi)的空氣污染和環(huán)境惡化，哮喘癥的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)，每年有超過(guò)18萬(wàn)人死于哮喘。另有分析顯示，到2020年，coro將從現(xiàn)在的全球死因的第六位攀升至第三位。保守估計(jì)，到那時(shí)全球每年因COPD死亡的人數(shù)將達(dá)到350萬(wàn)以上。在國(guó)內(nèi)，由鐘南山院士主持的一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，目前中國(guó)COPD的總體患病率為8.2%，其中男性患病率為12.4%，女性患病率為5.1%。COPD患者在中國(guó)已超過(guò)4000萬(wàn)，預(yù)計(jì)在2003-2033年期間，中國(guó)將會(huì)有6500萬(wàn)人死于COPD。[0011]PDE4(磷酸二酯酶4)屬于至少11種催化cAMP和/或cGMP水解的同工酶的超家族。TOE4是免疫和炎癥細(xì)胞、氣道平滑肌和肺神經(jīng)中主要cAMP代謝酶。基于其細(xì)胞和組織分布，這種酶的選擇性抑制劑抑制了從炎癥細(xì)胞釋放介質(zhì)(Hatzelmann和Schudt,JPharmacolExpTher2001;297:267-79,Marx等，PulmPharmacolTher2002；15:7-15,Kuss等，JPharmacolExpTher2003;307:373-85)。他們?cè)贑OPD的動(dòng)物模型中顯示出廣譜的活性(Billah等，JPharmacolExpTher2002;302:127-37，Kuss等，JPharmacolExpTher2003;307:373-85)。類(lèi)別相關(guān)的副作用，主要是惡心和嘔吐，看來(lái)通過(guò)所謂的“第二代”TOE4抑制劑已經(jīng)至少部分克服了上述副反應(yīng)。目前臨床研究有說(shuō)服力地表明TOE4抑制劑在哮喘和COPD中的治療有效性(Dyke和Montana,ExpertOpinInvestigDrug2002；11:1-13,Grootendorst等，PulmPharmacolTher2003；16:341-7,Spina,Drugs2003；63:2575-94)。最小化或消除有時(shí)與H)E4抑制劑相關(guān)的上述不良事件的努力包括創(chuàng)建不透入中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制劑，和通過(guò)吸入而不是口服來(lái)給藥TOE4抑制劑。同工酶TOE4的抑制劑減輕了哮喘和COPD中的炎癥過(guò)程。因此，PDE4抑制劑的這些效果使得支氣管和哮喘或COPD患者的支氣管功能得以改善。[0012]已經(jīng)認(rèn)可抗膽堿藥物治療可以作為coro和慢性哮喘中的重要治療方式。本發(fā)明中所使用的抗膽堿能支氣管擴(kuò)張藥一毒蕈堿受體拮抗劑，是長(zhǎng)效化合物。抗毒蕈堿藥物在緩解哮喘發(fā)作中的有效性比β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑低(Rodrigo和Rodrigo,Chest2002;121:1977-87)。然而，隨著新抗膽堿能藥噻托溴銨的引入，在呼吸道疾病中極大地增加使用抗膽堿能藥。而老的抗膽堿藥，如格隆溴銨易產(chǎn)生副作用，而噻托溴銨具有更強(qiáng)的抗粘液分泌能力，從而可有效地治療和減輕患者哮喘和COPD的病癥，具有更好的療效。[0013]噻托溴銨，即6β-環(huán)氧-3α-[α-羥基-2，2-二(α-噻吩)乙酰氧基]_8，8_二甲基-12Η，5αH-莨菪烷溴化物，為特異選擇性的抗膽堿藥物，具有毒蕈堿受體亞型MI~Μ5類(lèi)似的親和力，它通過(guò)抑制平滑肌M3受體，產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張作用。在臨床前的活體外和活體內(nèi)的研究中顯示，噻托溴銨吸入后產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張作用多半是位點(diǎn)專(zhuān)一效應(yīng)。臨床研究表明，噻托溴銨能顯著改善早、晚峰值呼氣流速(PEFR)。并且在I年的給藥期內(nèi)一直保持其支氣管擴(kuò)張作用，而無(wú)耐受現(xiàn)象發(fā)生。此外，還能顯著改善呼吸困難。噻托溴銨，一種對(duì)M3-毒蕈堿受體具有特定偏好的長(zhǎng)效抗膽堿能藥，目前已經(jīng)引入全世界。美國(guó)專(zhuān)利US5610163記載了噻托溴銨在治療慢性阻塞性肺病中的用途。[0014]羅氟司特(Roflumilast)為一種治療慢性阻塞性肺病的藥物?；瘜W(xué)名稱(chēng)為N-(3,5-二氯吡啶4-基)-3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯甲酰胺。羅氟司特的原研廠家是德國(guó)NycomedGmbH,其為T(mén)OE4抑制劑，作用極強(qiáng)，具有高度選擇性、口服給藥的特點(diǎn)。羅氟司特作為一種抗炎藥物，可有效改善中重度coro患者的肺功能，它作為支氣管炎擴(kuò)張劑的補(bǔ)給治療，用于伴隨經(jīng)常發(fā)作的慢性支氣管炎病史的COPD成人患者的維持治療，可在一定程度上改善患者的生活質(zhì)量，臨床安全有效。羅氟司特為醫(yī)生和不同患病特點(diǎn)的COPD患者提供了新的選擇，最大程度地滿足對(duì)哮喘和慢性阻塞性肺病治療的需要。[0015]申請(qǐng)?zhí)枮镃N02805346公開(kāi)了一種基于抗膽堿能藥物及TOE4抑制劑的藥物組合物，但未公開(kāi)羅氟司特與噻托溴銨的藥物聯(lián)用形式，更未公開(kāi)其聯(lián)用的藥物劑量。[0016]現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，通過(guò)羅氟司特或其藥學(xué)上可接受的鹽和噻托溴銨或其藥學(xué)上可接受的鹽進(jìn)行聯(lián)合治療，即二者的組合產(chǎn)品，可以在治療炎性或阻塞性氣道疾病時(shí)獲得出人意料的治療益處，特別是協(xié)同的治療益處。例如，與單獨(dú)使用羅氟司特或噻托溴銨進(jìn)行治療相t匕，使用該聯(lián)合療法，即二者的組合產(chǎn)品可以明顯降低達(dá)到給定治療效果所需的劑量，從而大大減少了可能的不利副作用。特別是當(dāng)羅氟司特的日劑量為500μg/天，噻托溴銨的日劑量為looμg/天時(shí)，協(xié)同效應(yīng)達(dá)到最佳，非常明顯地改善了哮喘或coro患者的疾病癥狀。【
發(fā)明內(nèi)容】[0017]一方面，本發(fā)明涉及的聯(lián)合治療包括給藥TOE4抑制劑羅氟司特或其藥學(xué)上可接受的鹽和長(zhǎng)效抗膽堿支氣管擴(kuò)張藥噻托溴銨或其藥學(xué)上可接受的鹽來(lái)防止肺疾病事件的發(fā)作或來(lái)治療現(xiàn)存的疾病和來(lái)減輕氣道炎癥?？梢砸詥蝹€(gè)劑型一起給藥，或以不同的劑型來(lái)給藥?？梢酝瑫r(shí)給藥，或者以接近或遠(yuǎn)離的時(shí)間給藥，如其中一種藥物在早上給藥，第二種藥物在晚上給藥?？梢灶A(yù)防性地或在癥狀發(fā)作后使用該藥物組合產(chǎn)品。一些情況中，該組合可用于防止肺病的進(jìn)展或來(lái)停滯功能如肺功能的衰退。[0018]本發(fā)明所述羅氟司特藥學(xué)上可接受的鹽為馬來(lái)酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、苯磺酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、枸櫞酸鹽、或琥珀酸鹽。[0019]本發(fā)明所述藥物組合產(chǎn)品，噻托溴銨和羅氟司特，通常作為氣溶膠給藥，使用或不使用推進(jìn)劑，或作為吸入的粉末給藥，例如使用Novolizer?。本發(fā)明涉及以一種傳送形式如吸入器來(lái)共同給藥兩種藥物，將兩種藥物放入相同的吸入器中。制劑是本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的(例如，含有賦形劑如乳糖單水合物)。[0020]在一些實(shí)施方案，活性組分可以一天給予1-5次，足以呈現(xiàn)所需的活性。在另一些實(shí)施方案，活性組分一天給予約1-3次；在另一些實(shí)施方案，活性組分一天給予I次。[0021]在一些實(shí)施方案，本發(fā)明所述局部應(yīng)用的藥物組合產(chǎn)品中，其中，羅氟司特的日劑量為50~8000μg/天，噻托溴銨的日劑量為30~3000μg/天。[0022]在另外一些實(shí)施方案，本發(fā)明所述局部應(yīng)用的藥物組合產(chǎn)品中，其中，羅氟司特的日劑量為100~5000μg/天，噻托溴銨的日劑量為100~1000μg/天。[0023]在另一些實(shí)施方案，本發(fā)明所述局部應(yīng)用的藥物組合產(chǎn)品中，其中，羅氟司特的日劑量為500~2000μg/天，噻托溴銨的日劑量為50~500μg/天。[0024]在另一些實(shí)施方案，本發(fā)明所述局部應(yīng)用的藥物組合產(chǎn)品中，其中，羅氟司特的日劑量為500μg/天，噻托溴銨的日劑量為100μg/天。[0025]在另一些實(shí)施方案，本發(fā)明所述局部應(yīng)用的藥物組合產(chǎn)品中，其中，羅氟司特的日劑量為1000μg/天，噻托溴銨的日劑量為50μg/天。[0026]另一方面，本發(fā)明涉及一種治療呼吸道疾病的藥物，包含局部應(yīng)用的噻托溴銨或其藥學(xué)上可接受的鹽和羅氟司特或其藥學(xué)上可接受的鹽。[0027]在一些實(shí)施方案，本發(fā)明所述藥物為含或不含推進(jìn)劑的可吸入氣溶膠。[0028]在另一些實(shí)施方案，本發(fā)明所述的藥物為可吸入的干粉。[0029]在另一些實(shí)施方案，本發(fā)明所述的藥物，其中，活性物質(zhì)羅氟司特和噻托溴銨存在于固定或自由組合中，用于與賦形劑一起再適于吸入應(yīng)用的藥物形式中同時(shí)、順次或分開(kāi)給藥。[0030]考慮同時(shí)或時(shí)間上非常接近地給藥兩種活性劑。或者，一種藥物可在早上服用，一種在這天中的晚些時(shí)候服用。或者為另一種情況，一種藥物每日服用兩次，另一種每日一次，與每日兩次給藥中的一次或同時(shí)或分開(kāi)?；蛘撸瑫r(shí)一起服用兩種藥物。[0031]本發(fā)明所述的賦形劑包括，但并不限于，離子交換劑，鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白，如人血清蛋白，緩沖物質(zhì)如磷酸鹽，甘氨酸，山梨酸，山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，如硫酸魚(yú)精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠體硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，聚丙烯酸脂，蠟，聚乙烯-聚氧丙烯-阻斷聚合體，羊毛月旨，糖，如乳糖，葡萄糖和蔗糖；淀粉如玉米淀粉和土豆淀粉；纖維素和它的衍生物如羧甲基纖維素鈉，乙基纖維素和乙酸纖維素；樹(shù)膠粉；麥芽；明膠；滑石粉；輔料如可可豆脂和栓劑蠟狀物；油如花生油，棉子油，紅花油，麻油，橄欖油，玉米油和豆油；二醇類(lèi)化合物，如丙二醇和聚乙二醇；酯類(lèi)如乙基油酸酯和乙基月桂酸酯；瓊脂；緩沖劑如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無(wú)熱原的水；等滲鹽；林格(氏)溶液；乙醇，磷酸緩沖溶液，和其他無(wú)毒的合適的潤(rùn)滑劑如月桂硫酸鈉和硬脂酸鎂，著色劑，釋放劑，包衣衣料，甜味劑，調(diào)味劑和香料，防腐劑和抗氧化劑。[0032]本發(fā)明所使用的“藥學(xué)上可接受的鹽”是指本發(fā)明的化合物的有機(jī)鹽和無(wú)機(jī)鹽。藥學(xué)上可接受的鹽在所屬領(lǐng)域是為我們所熟知的，如文獻(xiàn):S.MBergeetal.，describepharmaceuticallyacceptablesaltsindetailinJ.PharmaceuticalSciences,1977,66:1-19.所記載的。藥學(xué)上可接受的無(wú)毒的酸形成的鹽包括，但并不限于，與氨基基團(tuán)反應(yīng)形成的無(wú)機(jī)酸鹽有鹽酸鹽，氫溴酸鹽，磷酸鹽，硫酸鹽，高氯酸鹽，和有機(jī)酸鹽如乙酸鹽，草酸鹽，馬來(lái)酸鹽，酒石酸鹽，檸檬酸鹽，琥珀酸鹽，丙二酸鹽，或通過(guò)書(shū)籍文獻(xiàn)上所記載的其他方法如離子交換法來(lái)得到這些鹽。其他藥學(xué)上可接受的鹽包括己二酸鹽，藻酸鹽，抗壞血酸鹽，天冬氨酸鹽，苯磺酸鹽，苯甲酸鹽，重硫酸鹽，硼酸鹽，丁酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，環(huán)戊基丙酸鹽，二葡萄糖酸鹽，十二烷基硫酸鹽，乙磺酸鹽，甲酸鹽，反丁烯二酸鹽，葡庚糖酸鹽，甘油磷酸鹽，葡萄糖酸鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基-乙磺酸鹽，乳糖醛酸鹽，乳酸鹽，月桂酸鹽，月桂基硫酸鹽，蘋(píng)果酸鹽，丙二酸鹽，甲磺酸鹽，2-萘磺酸鹽，煙酸鹽，硝酸鹽，油酸鹽，棕櫚酸鹽,撲酸鹽,果膠酸鹽,過(guò)硫酸鹽,3-苯基丙酸鹽，苦味酸鹽，特戊酸鹽，丙酸鹽，硬脂酸鹽，硫氰酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，十一酸鹽，戊酸鹽，等等。通過(guò)適當(dāng)?shù)膲A得到的鹽包括堿金屬，堿土金屬，銨和N+((V4烷基)4的鹽。本發(fā)明也擬構(gòu)思了任何所包含N的基團(tuán)的化合物所形成的季銨鹽。水溶性或油溶性或分散產(chǎn)物可以通過(guò)季銨化作用得到。堿金屬或堿土金屬鹽包括鈉，鋰，鉀，鈣，鎂，等等。藥學(xué)上可接受的鹽進(jìn)一步包括適當(dāng)?shù)?、無(wú)毒的銨，季銨鹽和抗平衡離子形成的胺陽(yáng)離子，如鹵化物，氫氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C1^8磺酸化物和芳香磺酸化物。[0033]本發(fā)明所涉及的“藥物組合產(chǎn)品”、“組合產(chǎn)品”、“藥物組合”、“組合”、“聯(lián)合治療”、“聯(lián)合應(yīng)用”或“聯(lián)合”的含義應(yīng)被理解為各組分可以以本身已知和常用的方式同時(shí)給藥(以組合藥物的形式)、或多或少地同時(shí)給藥(由獨(dú)立的包裝單位來(lái)進(jìn)行)或相繼給藥(直接相繼給藥或者以相對(duì)較大的時(shí)間間隔相繼給藥)。例如，可以早上給一種藥，在當(dāng)天的隨后時(shí)間給一種藥。或者在另一種方案中，一種藥物可以每天給藥兩次而另一種藥物每天給藥一次，其作為一天兩次的劑量之一同時(shí)進(jìn)行或者單獨(dú)進(jìn)行。[0034]本發(fā)明中“聯(lián)合治療”或“聯(lián)合”的含義特別可以理解為兩種組分以協(xié)同方式一同起效。實(shí)施例[0035]實(shí)施例1[0036]每單次劑量50μg噻托溴銨和1000μg羅氟司特的粉末吸入[0037]將50g量的微粉化噻托溴銨和100gα乳糖單水合物混合,將混合物通過(guò)0.5mm網(wǎng)孔的篩子過(guò)篩，最后再次混合。將1000g微粉化的羅氟司特和2000ga乳糖單水合物混合，將混合物通過(guò)0.8_網(wǎng)孔的篩子過(guò)篩，最后再次混合。將收到的兩種混合物混合并補(bǔ)充α乳糖單水合物至13500g。隨后，將其再次混合并將收到的粉狀混合物裝入每單次劑量釋放24mg粉末的粉末吸入器中。每單位劑量從粉末吸入器中釋放50μg噻托溴銨和1000μg羅氟司特，并提供給患者的氣道。[0038]實(shí)施例2[0039]每單次劑量100μg噻托溴銨和500μg羅氟司特的粉末吸入[0040]將100g量的微粉化噻托溴銨和200gα乳糖單水合物混合，將混合物通過(guò)0.5mm網(wǎng)孔的篩子過(guò)篩，最后再次混合。將500g微粉化的羅氟司特和1000ga乳糖單水合物混合，將混合物通過(guò)0.8_網(wǎng)孔的篩子過(guò)篩，最后再次混合。將收到的兩種混合物混合并補(bǔ)充α乳糖單水合物至12150g。隨后，將其再次混合并將收到的粉狀混合物裝入每單次劑量釋放15mg粉末的粉末吸入器中。每單位劑量從粉末吸入器中釋放100μg噻托溴銨和500μg羅氟司特，并提供給患者的氣道。[0041]生物試驗(yàn)[0042]使用人外周血單核細(xì)胞(PBMC)研究了噻托溴銨聯(lián)合羅氟司特對(duì)TNF分泌的影響。[0043]通過(guò)密度梯度離心從健康捐獻(xiàn)者的肝素化血樣中分離PBMC。將等體積的Hanks緩沖液(LifeTechnologies,Heidelberg,Germany)加入肝素化的全血樣品中。用最大的40ml的血液/Hanks混合物覆蓋15mlHistopaque-1077(Sigma,Deisenhofen,Germany),室溫離心30分鐘(2000rpm)。將含有PBMC的可見(jiàn)條帶轉(zhuǎn)移至新鮮的管中并用Hanks緩沖液洗漆兩次。最后，將細(xì)胞接種于含有GlutamaxI(GibcoBRL,Eggenstein)和10%胎牛血清(BoehringerMannheim,Penzberg,Germany)的RPMI1640培養(yǎng)基(LifeTechnologies,Heidelberg，Germany)中。分離后，將PBMC在補(bǔ)充10%胎牛血清(FCS)的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，37°C5%C02過(guò)夜。通過(guò)粘附方法從其他細(xì)胞中分離出PBMC，通過(guò)更換培養(yǎng)基除去非附著細(xì)胞。[0044]將細(xì)胞以IO6細(xì)胞/ml重懸浮并在24-孔組織培養(yǎng)板(FalconBectonDicknsonLabware)中以500μI體積37V5%C02溫育。用測(cè)試物質(zhì)(0.5μ1/500μI培養(yǎng)基)預(yù)溫育30分鐘后，用脂多糖(LPS)(lyg/ml)刺激細(xì)胞。在所示的時(shí)間，通過(guò)離心將細(xì)胞沉淀，收集上層清液并在-80°C保持冷凍直至蛋白質(zhì)測(cè)定；通過(guò)RLT裂解緩沖液(Qiagen,Hilden,Germany)裂解細(xì)胞并在_80°C冷凍直至分析。[0045]通過(guò)夾層ELISA使用匹配的抗體對(duì)(Pharmingen,Heidelberg,Germany)來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)物上清液中的細(xì)胞因子測(cè)量，用在PH9.5，0.1M碳酸鹽緩沖液中的抗細(xì)胞因子單克隆抗體(mAb)將ELISA板(Maxisorb,Nunc)包被過(guò)夜。洗漆后，用測(cè)定稀釋液(Pharmingen,Heidelberg,Germany)將平板封閉I小時(shí)并再次洗漆。將適當(dāng)稀釋的上清液樣品和標(biāo)準(zhǔn)品一式兩份分配，并將平板在室溫溫育2小時(shí)。將平板洗滌，用工作檢測(cè)劑(生物素化的抗細(xì)胞因子抗體和抗生物素蛋白-辣根過(guò)氧化物酶綴合物)溫育I小時(shí)。洗滌后，加入底物(TMB和過(guò)氧化氫)。通過(guò)加入IMH3PO4來(lái)停止反應(yīng)。將平板在微平板閱讀器(Dynatech)中以450nm讀板。將結(jié)果表示為化合物不存在下經(jīng)刺激細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的對(duì)照水平的百分比。[0046]LPS-刺激后，從單核細(xì)胞釋放的基礎(chǔ)TNFα從250pg/ml提高至7560pg/ml。噻托溴銨單獨(dú)沒(méi)有影響LPS-誘導(dǎo)的TNFa釋放，直至lOymol/l。TOE4抑制劑羅氟司特明顯抑制了TNFa釋放。羅氟司特的IC35值等于45.3±9.3nmol/l。同時(shí)加入10μmol/1噻托溴銨令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，其顯著地將IC35降低至0.52±0.80nmol/l。[0047]這些結(jié)果表明，噻托溴銨以超加性方式顯著地和令人驚訝地增強(qiáng)了羅氟司特的抗炎活性。[0048]抗膽堿能藥噻托溴銨和吸入/口服TOE4抑制劑羅氟司特兩者均可有效地用于治療各種哺乳動(dòng)物的氣道疾病。激活的嗜中性粒細(xì)胞募集至COPD馬的肺，可以引起炎癥和肺損傷。已經(jīng)證明TOE4抑制劑可以降低COPD馬體內(nèi)的嗜中性粒細(xì)胞活化(Rickards等，JVetPharmacolTher2001;24:275_81)。[0049]最后，需要注意的是，還有其他方式用來(lái)實(shí)施本發(fā)明。相應(yīng)地，本發(fā)明的實(shí)施例是將作為例證進(jìn)行說(shuō)明，但并不限于本發(fā)明所描述的內(nèi)容，還可能是在本發(fā)明范圍內(nèi)所作的修改或在權(quán)利要求中所添加的等同內(nèi)容。本發(fā)明所引用的所有出版物或?qū)＠紝⒆鳛楸景l(fā)明的參考文獻(xiàn)?！緳?quán)利要求】1.局部應(yīng)用的羅氟司特或其藥學(xué)上可接受的鹽和噻托溴銨或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合產(chǎn)品，用于治療支氣管哮喘或慢性阻塞性肺病，其中，羅氟司特的日劑量為50~8000μg/天，噻托溴銨的日劑量為30~3000μg/天。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合產(chǎn)品，其中，羅氟司特的日劑量為100~5000yg/天，噻托溴銨的日劑量為100~1000μg/天。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合產(chǎn)品，其中，羅氟司特的日劑量為500~2000μg/天，噻托溴銨的日劑量為50~500μg/天。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合產(chǎn)品，其中，羅氟司特的日劑量為500μg/天，噻托溴銨的日劑量為IOOyg/天。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合產(chǎn)品，其中，羅氟司特的日劑量為1000μg/天，噻托溴銨的日劑量為SOyg/天。6.一種治療呼吸道疾病的藥物，包含局部應(yīng)用的噻唑溴銨或其藥學(xué)上可接受的鹽和羅氟司特或其藥學(xué)上可接受的鹽。7.根據(jù)權(quán)力要求6所述的藥物，其為含或不含推進(jìn)劑的可吸入氣溶膠。8.根據(jù)權(quán)力要求6所述的藥物，其為可吸入的干粉。9.根據(jù)權(quán)力要求6-8任一項(xiàng)所述的藥物，其中，活性物質(zhì)存在于固定或自由組合中，用于與賦形劑一起再適于吸入應(yīng)用的藥物形式中同時(shí)、順次或分開(kāi)給藥。【文檔編號(hào)】A61K31/46GK103784447SQ201410054915【公開(kāi)日】2014年5月14日申請(qǐng)日期:2014年2月18日優(yōu)先權(quán)日:2014年2月18日【發(fā)明者】代先慧,張緒偉,劉英勛,冷玲申請(qǐng)人:青島市城陽(yáng)區(qū)人民醫(yī)院