鉑納米簇的制備方法及在腫瘤的成像劑和凋亡劑中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了鉑納米簇的制備方法及在腫瘤的成像劑和凋亡劑中的應(yīng)用。具體步驟：把鉑的鹽溶液和抗壞血酸（VC）及還原性谷胱甘肽（GSH）混合水浴加熱，通過調(diào)節(jié)溶液pH和溫度及各組分比例來控制納鉑米簇的合成速度和粒徑。本發(fā)明制得的鉑納米簇材料粒徑小，滲透性好，具有優(yōu)良的生物相容性，穩(wěn)定的熒光特性，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤等病灶部位的高時(shí)空分辨成像并且有效地促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和腫瘤組織消融；本發(fā)明的方法應(yīng)用簡(jiǎn)便易行、毒性低、靈敏度高，可同時(shí)進(jìn)行多模態(tài)的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，具有廣闊的醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用價(jià)值和前景。
【專利說明】鉑納米簇的制備方法及在腫瘤的成像劑和凋亡劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種鉬納米簇的制備方法及在腫瘤的成像劑和凋亡劑中的應(yīng)用。該發(fā)明利用制得的相關(guān)鉬納米簇制劑作為探針精準(zhǔn)導(dǎo)向腫瘤等病變位點(diǎn)，并可進(jìn)一步結(jié)合由成像制導(dǎo)的光熱療法，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的聞靈敏診斷和治療。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，惡性腫瘤(癌癥)的死亡仍然位居世界各類死因的第一位，成為當(dāng)今奪取人們生命的一大殺手。由于癌癥早期癥狀不明顯，很難被及早發(fā)現(xiàn)，因而癌癥的早期診斷和治療仍是亟待解決的最重要的醫(yī)學(xué)問題之一，對(duì)癌癥的治愈非常關(guān)鍵。
[0003]近年來，伴隨著納米科學(xué)和技術(shù)的發(fā)展，納米材料因其自身具備的一些特殊性質(zhì)在癌癥治療的研究中備受矚目。納米材料由于其粒徑小，容易通過細(xì)胞屏障，并且由于腫瘤組織微血管通透性亢進(jìn)和不健全的淋巴引流系統(tǒng)產(chǎn)生的高通透高滯留效應(yīng)，使得其易于優(yōu)先在腫瘤部位聚集，另外金屬納米材料可以吸收光和熱產(chǎn)生自由基或者溫度升高，因而十分有利于腫瘤的成像和光熱療等作用。然而在光熱療過程中，納米材料的生物相容性始終是一個(gè)最大的挑戰(zhàn)，鉬納米簇具有優(yōu)良的生物相容性，但到目前為止仍未見使用鉬納米簇進(jìn)行腫瘤的成像和由成像制導(dǎo)的光熱療法等報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)目前現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供了一種基于還原性谷胱甘肽的快速一步合成鉬熒光納米簇的制備方法及其應(yīng)用。谷胱甘肽包裹在鉬納米簇表面極大地降低了細(xì)胞毒性，在紫外光照下可以對(duì)腫瘤部位進(jìn)行快速成像檢測(cè)，在紅外光熱作用下又可以殺死腫瘤細(xì)胞。
[0005]技術(shù)方案是:
鉬納米簇的制備方法，包括如下步驟:將還原性谷胱甘肽(GSH)水溶液與抗壞血酸(維生素C，VC)水溶液混合，再加入鉬鹽水溶液，混合均勻，反應(yīng)即得。
[0006]優(yōu)選地，所述鉬鹽是氯鉬酸、氯鉬酸鉀、氯亞鉬酸鉀、氯亞鉬酸銨、氯鉬酸銨、氯亞鉬酸鉀、硝酸鉬、二氯四氨合鉬、二亞硝基二氨鉬中的一種或者任意二種的混合。
[0007]優(yōu)選地，還原性谷胱甘肽、抗壞血酸與鉬鹽之間的摩爾比是(I~2):(1~2):1。
[0008]優(yōu)選地，還原性谷胱甘肽水溶液的濃度是0.01~0.1 mo I/L ；
優(yōu)選地，抗壞血酸水溶液的濃度是0.01~0.lmol/L ；
優(yōu)選地，鉬鹽水溶液濃度為0.01~0.lmol/L ；
優(yōu)選地，當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行至溶液變?yōu)槌壬珪r(shí)停止；
優(yōu)選地，反應(yīng)溫度是5~80°C。
[0009]另 一個(gè)方面，本發(fā)明提供了上述鉬納米簇在腫瘤細(xì)胞的成像劑中的應(yīng)用；
另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了上述鉬納米簇在腫瘤細(xì)胞的凋亡劑中的應(yīng)用。
[0010]所述的腫瘤細(xì)胞可以為肝癌、肺癌、宮頸癌、白血病、骨肉瘤等腫瘤細(xì)胞株。有益效果
1.本發(fā)明利用抗壞血酸(維生素C)與還原性谷胱甘肽的協(xié)同作用，并結(jié)合谷胱甘肽上巰基的刻蝕作用，建立了基于還原性谷胱甘肽的快速一步合成鉬熒光納米簇的制備方法，其中抗壞血酸的加入有利于還原性谷胱甘肽的還原作用。
[0011]2.本發(fā)明使用的谷胱甘肽是靶細(xì)胞內(nèi)所需成份，鉬納米簇包裹了該種谷胱甘肽可以極大地降低細(xì)胞毒性并增強(qiáng)其靶向性。
[0012]3.本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了基于鉬納米簇的腫瘤精準(zhǔn)快速成像和由成像制導(dǎo)的光熱療法，為癌癥等疾病早期發(fā)現(xiàn)和治療提供了新的方法和依據(jù)。
[0013]4.該發(fā)明可實(shí)現(xiàn)無損傷、原位、實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)腫瘤靶向治療，進(jìn)一步結(jié)合熒光、拉曼、超聲、CT和核磁等，可進(jìn)行多形態(tài)與多模態(tài)的同步診斷及準(zhǔn)確靶向定位與治療，具有廣闊的醫(yī)學(xué)應(yīng)用前景。
[0014]5.本發(fā)明發(fā)現(xiàn)和建立了基于還原性谷胱甘肽的快速一步合成鉬熒光納米簇的新方法，并運(yùn)用于腫瘤的快速成像和由成像制導(dǎo)的光熱療法，為癌癥等疾病早期發(fā)現(xiàn)和治療提供了新的方法和依據(jù)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是實(shí)施例1中鉬納米簇合成之后的熒光光譜圖；
圖2是實(shí)施例1對(duì)照例中不同用量的抗壞血酸對(duì)鉬納米簇的合成影響。
[0016]圖3a-圖3c是實(shí)施例7熒光斷層掃描照片，包括對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組，其中，圖3a是不加鉬納米簇的肝癌細(xì)胞的照片；圖3b是加鉬納米簇的肝癌細(xì)胞的照片；圖3c是加鉬納米簇的正常細(xì)胞(L02)的照片。
【具體實(shí)施方式】
[0017]本實(shí)驗(yàn)的還原性谷胱甘肽，抗壞血酸，氯鉬酸、氯鉬酸鉀、氯亞鉬酸鉀、氯亞鉬酸銨、氯鉬酸銨、氯亞鉬酸鉀等試劑購于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。本試驗(yàn)所用的腫瘤細(xì)胞為肝癌、肺癌、宮頸癌、白血病、骨肉瘤等腫瘤細(xì)胞株。
實(shí)施例1 一種基于還原性谷胱甘肽的快速一步合成鉬熒光納米簇的制備方法:
I)配制還原性谷胱甘肽(GSH)及鉬鹽水溶液(本實(shí)施例中采用氯鉬酸)。
[0018]2)將濃度為0.05 mo I/L的還原性谷胱甘肽水溶液與0.05mol/L的抗壞血酸(維生素C)水溶液混合，再加入濃度為0.05mol/L的鉬試劑水溶液，三種溶液的體積比是1:1:1，充分混合，然后水浴37°C加熱，待溶液變?yōu)槌壬珪r(shí)反應(yīng)完成。
[0019]本實(shí)施例中制備得到的鉬熒光納米簇穩(wěn)定性好粒徑均一大約1.2~2.0nm。
[0020]本實(shí)施例制備得到的鉬熒光納米簇的熒光光譜圖如圖1所示，圖中曲線I是鉬納米簇的熒光光譜曲線，曲線2是還原性谷胱甘肽(GSH)與抗壞血酸的混合溶液的熒光光譜曲線，3是氯鉬酸溶液的熒光光譜曲線，從圖中可以看出所制的鉬納米簇發(fā)射波長(zhǎng)在456nm左右，與文獻(xiàn)報(bào)道的Pt°的吸收波長(zhǎng)一致。
對(duì)照例改變組分中抗壞血酸含量的合成過程
與實(shí)施例1的區(qū)別在于:在合成的過程中，未添加或者加入不同含量的抗壞血酸溶液，具體地說如下:I)配制不同比例的還原性谷胱甘肽，抗壞血酸及鉬試劑水溶液。
[0021]2)在濃度為0.05mol/L的氯鉬酸水溶液中分別加入不同濃度的還原性谷胱甘肽及抗壞血酸水溶液，三種水溶液的體積比是1:1:1，充分混合，然后37°c水浴加熱放置；共進(jìn)行5種不同濃度比例的批次，各批次對(duì)應(yīng)圖2中的編號(hào)為I~5的曲線，濃度如下表所示:
【權(quán)利要求】
1.一種鉬納米簇的制備方法，其特征在于，包括如下步驟:將還原性谷胱甘肽水溶液與抗壞血酸水溶液混合，再加入鉬鹽水溶液，混合均勻，反應(yīng)即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鉬納米簇的制備方法，其特征在于:所述鉬鹽是氯鉬酸、氯鉬酸鉀、氯亞鉬酸鉀、氯亞鉬酸銨、氯鉬酸銨、氯亞鉬酸鉀、硝酸鉬、二氯四氨合鉬、二亞硝基二氨鉬中的一種或者任意二種的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鉬納米簇的制備方法，其特征在于:還原性谷胱甘肽水溶液的濃度是0.01~0.1 mol/Lo
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鉬納米簇的制備方法，其特征在于:抗壞血酸水溶液的濃度是0.01 ~0.lmol/Lo
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鉬納米簇的制備方法，其特征在于:鉬鹽水溶液濃度為0.01 ~0.lmol/Lo
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鉬納米簇的制備方法，其特征在于:反應(yīng)溫度是5~80°C。
7.權(quán)利要求1~6任一項(xiàng)所述的鉬納米簇在腫瘤細(xì)胞的成像劑中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的鉬納米簇在腫瘤細(xì)胞的成像劑中的應(yīng)用，其特征在于:所述的腫瘤細(xì)胞是指肝癌、肺癌、宮頸癌、白血病、骨肉瘤細(xì)胞株。
9.權(quán)利要求1~6任一項(xiàng)所述的鉬納米簇在腫瘤細(xì)胞的凋亡劑中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的鉬納米簇在腫瘤細(xì)胞的凋亡劑中的應(yīng)用，其特征在于:所述的腫瘤細(xì)胞是指肝癌、肺癌、宮頸癌、白`血病、骨肉瘤細(xì)胞株。
【文檔編號(hào)】A61K47/18GK103861124SQ201410075034
【公開日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年3月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月3日
【發(fā)明者】王雪梅, 陳東華, 革偉, 高生平 申請(qǐng)人:東南大學(xué)