一種用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑，所述組合藥物活性成分為鹽酸特比萘芬與艾葉精油的混合物；本發(fā)明提供的組合藥物較現(xiàn)有的單方抗真菌藥物抑菌效果更高，更重要的是本發(fā)明提供的組合藥物，能夠通過稀釋后直接用簡(jiǎn)單工具對(duì)大象進(jìn)行涂抹；使用非常方便。
【專利說明】一種用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種獸用外用藥物，更具體的說涉及一種用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑及其制備方法。
技術(shù)背景
[0002]亞洲象(又名大象)學(xué)名Elephas maximus,英文名:Indian Elephant,分布于中國云南省南部。國外見于南亞和東南亞地區(qū)。生活于熱帶森林、叢林或草原地帶，群居，由一只雌象率領(lǐng)，無固定棲地，日行為，視覺較差(主要是由于象的睫毛比較長(zhǎng)所以影響視力)，嗅、聽覺靈敏，炎熱時(shí)喜水浴，晨昏覓食，以野草、樹葉、竹葉、野果等為食。其為中國級(jí)保護(hù)動(dòng)物，被列入瀕危野生動(dòng)植物種國際貿(mào)易公約。在動(dòng)物園有極高的展出和觀賞價(jià)值；但是亞洲象毛少，極其容易得皮膚病。
[0003]在長(zhǎng)期的人工環(huán)境圈養(yǎng)過程中，由于飼養(yǎng)環(huán)境狹窄，一般難以滿足亞洲象泥浴和洗澡的需要。所以在人工環(huán)境圈養(yǎng)的亞洲象，很容易患皮膚病。重慶動(dòng)物園自1978年開始圈養(yǎng)亞洲象，已先后成功繁育多胎多只，有較豐富的飼養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)。但由于重慶氣候炎熱潮濕，很適合真菌的快速繁殖而引起動(dòng)物的皮膚病，近年來重慶動(dòng)物園亞洲象以先后多年連續(xù)發(fā)生以皮膚瘙癢、皮膚開裂和皮膚白斑為主要病變特征的亞洲象皮膚病。案例，一只亞成年公象(茜茜)甚至因長(zhǎng)期皮膚病等因素而影響其個(gè)體的生長(zhǎng)發(fā)育，雖然年屆11歲，但體型仍偏矮小，其他幾只亞洲象則出現(xiàn)皮膚白斑、開裂、瘙癢等，嚴(yán)重影響動(dòng)物的展出與觀賞效果。同時(shí)由于亞洲象體型龐大、生性兇猛，不易接近治療，這為診療帶來極大困難。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述亞洲象存在的皮膚病問題，本發(fā)明提供了一種用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑；具體的
【發(fā)明內(nèi)容】
是: [0005]一種用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑，所述組合藥物活性成分為鹽酸特比萘芬與艾葉精油的混合物。
[0006]所述鹽酸特比萘芬與艾葉精油的重量比為1-20:10-100。
[0007]所述組合藥物為鹽酸特比萘芬與艾葉精油的混合物的水溶液。
[0008]所述混合物的水溶液中混合物和水的重量比為1:20-200倍。
[0009]一種用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑的制備方法，包括以下步驟:
[0010]I)將鹽酸特比萘芬溶解在10倍重量的水中，得到鹽酸特比萘芬水溶液；
[0011]2)提取艾葉精油，0_4°C冷藏；
[0012]3)將艾葉精油與鹽酸特比萘芬水溶液混溶，形成混合液，得到用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑；
[0013]4)使用前根據(jù)需要稀釋使用。
[0014]本發(fā)明的有益技術(shù)效果是:本發(fā)明提供的組合藥物較現(xiàn)有的單方抗真菌藥物抑菌效果更高，更重要的是本發(fā)明提供的組合藥物，能夠通過稀釋后直接用簡(jiǎn)單工具對(duì)大象進(jìn)行涂抹；使用非常方便。
【具體實(shí)施方式】
[0015]實(shí)施例1用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑的體外模型研究
[0016]收集3頭亞洲象皮膚出現(xiàn)潰瘍、發(fā)炎、結(jié)痂并不規(guī)則的脫落的亞洲象皮膚組織，進(jìn)行分離培養(yǎng)、PCR擴(kuò)增與測(cè)序比對(duì)，發(fā)現(xiàn)其為小孢子菌屬引起的皮膚病。體外藥敏試驗(yàn)采用美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(LSI)公布的抗真菌藥敏試驗(yàn)方案M38-A對(duì)灰黃霉素、氟康唑、兩性霉素、艾葉精油、特比萘芬五種化學(xué)藥物和艾葉精油、大蒜素、青蒿素三種天然藥物的提取物進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果顯示在體外藥敏試驗(yàn)中，化學(xué)藥物的抗菌效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于天然藥物提取物，化藥中抗菌效果最好的是特比萘芬，特比萘芬對(duì)受試菌的最小抑菌濃度為
0.02ug/mL ;天然藥物中抗菌效果最好的是艾葉提取物，艾葉精油對(duì)受試菌的最小抑菌濃度可達(dá) 20ug/mL。
[0017]將上述分離出菌株參照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(LSI)的微量液基稀釋方案M38-A(菌絲相)及M27-A(酵母相)配制藥物的貯存液及倍比稀釋液，即藥物均溶解在100% DMSO中，獲得的貯存液濃度均為1600 μ g/mL，在-20%條件下儲(chǔ)存。實(shí)驗(yàn)前用RPMI1640液體培養(yǎng)基將藥物稀釋成兩倍終濃度工作液。
[0018]試驗(yàn)前所有受試菌均接種在馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)上30°C活化7d。取2mL生理鹽水加入試管內(nèi)，輕挑黑灰色絨毛樣菌落，反復(fù)吹吸后，將菌懸液吸到無菌試管中靜置20min。取上清液振蕩15S，用比濁儀調(diào)整菌懸液濃度至0.5麥?zhǔn)蠁挝?。再用血球?jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，濃度調(diào)至1-5X 106CFU/mL。再用RPMI1640液體培養(yǎng)基稀釋50倍，得到2 X IO4-1 X 105CFU/mL的2倍終濃度的接種菌懸液。
[0019]酵母相菌懸液制備試驗(yàn)前所有受試菌均接種在含5%葡萄糖的腦心浸汁培養(yǎng)基(BHI)上35°C培養(yǎng)，每7d傳 代I次，共3次，直至70%以上細(xì)胞轉(zhuǎn)化為酵母樣細(xì)胞。挑取灰白色酵母菌落適量，放置于裝有2mL生理鹽水的無菌玻璃小瓶中制成混懸液，靜置20min。取上清液振蕩15S，用比濁儀調(diào)整菌懸液濃度至0.5麥?zhǔn)蠁挝?。再用血球?jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，濃度調(diào)至1-5 X 106CFU/mL。再用RPMI1640液體培養(yǎng)基稀釋1000倍，得到1-5 X 103CFU/mL的2倍終濃度的接種菌懸液。
[0020]真菌藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)板橫向以1-12列表示，即有12孔；縱向以A-H行表示，即有8孔；第I列及第H行為單獨(dú)藥敏試驗(yàn)區(qū)，第2-11列及A-G行為聯(lián)合藥敏試驗(yàn)區(qū)。兩種藥物的儲(chǔ)存液分別用RPMI1640培養(yǎng)基進(jìn)行倍比稀釋，取50L各稀釋濃度特比萘芬藥液分別加入第1-11列各孔，取50各稀釋濃度艾葉精油藥液加入A-H行。第12列加入200培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。特比萘芬藥液濃度范圍為0.0075-8 μ g/mL，艾葉精油為0.03-16 μ g/mL，根據(jù)每株菌的結(jié)果不同可分別提高或降低2個(gè)數(shù)量級(jí)的藥物濃度。之后各孔接種制備好的菌懸液100 μ L，將藥敏板放置35°C恒溫培養(yǎng)箱，72-120h觀察結(jié)果。
[0021 ] 菌絲相和酵母相的MIC判定一致，艾葉精油和特比萘芬單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥時(shí)的MIC值均取與生長(zhǎng)對(duì)照孔相比生長(zhǎng)100%受抑制的最低藥物濃度。
[0022]FIC (分?jǐn)?shù)抑菌濃度)為聯(lián)合用藥時(shí)各藥的MIC值分別除以單獨(dú)用藥時(shí)MIC值的商的和，表示為FIC=MICa/MICajhs+MICa/MICb 相互作用解釋為:FIC ( 0.5有協(xié)同作用；FIC > 4有拮抗作用；0.5〈FIC ( 4為無關(guān)。[0023]用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)算艾葉精油和特比萘芬在單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥時(shí)MIC的幾何均數(shù)值(GM值)及FIC值,單獨(dú)和聯(lián)合用藥組間數(shù)據(jù)采用秩和檢驗(yàn)和Fisher’s exacttest, P〈0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0024]艾葉精油對(duì)菌絲相的MIC值范圍為4-32 μ g/mL，GM值為14.93 μ g/mL ;對(duì)酵母相分別為l-8g/mL和1.69g/mL,菌絲相與酵母相GM值比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。特比萘芬對(duì)菌絲相的MIC值范圍為0.06-0.25 μ g/mL, GM值為0.13mL ;對(duì)酵母相分別為
0.06-0.25 μ g/mL和0.11 μ g/mL,菌絲相與酵母相GM值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；具體見表I所示。
[0025]表1艾葉精油與特比萘芬聯(lián)合用藥對(duì)菌絲相和酵母相體外藥物相互作用
【權(quán)利要求】
1.一種用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑，其特征在于:所述組合藥物活性成分為鹽酸特比萘芬與艾葉精油的混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑，其特征在于:所述鹽酸特比萘芬與艾葉精油的重量比為1-20:10-100。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑，其特征在于:所述組合藥物為鹽酸特比萘芬與艾葉精油的混合物的水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑，其特征在于:所述混合物的水溶液中混合物和水的重量比為1:20-200倍。
5.一種用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)將鹽酸特比萘芬溶解在10倍重量的水中，得到鹽酸特比萘芬水溶液； 2)提取艾葉精油，0-4°C冷藏； 3)將艾葉精油與鹽酸特比萘芬水溶液混溶，形成混合液，得到用于治療亞洲象皮膚癬菌病復(fù)方制劑； 4)使用前根據(jù)需要稀 釋使用。
【文檔編號(hào)】A61K36/282GK103816196SQ201410102360
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年3月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月19日
【發(fā)明者】樵星芳, 楊金龍, 楊揚(yáng), 吳登虎, 楊松全, 殷素會(huì), 陳建康, 米本中 申請(qǐng)人:重慶市中藥研究院