一種具有降尿酸作用的桉葉提取物、制備方法及其用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種桉葉提取物作為活性成分在制備治療高尿酸血癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了該桉葉提取物的制備方法，其主要活性成分為月見草素B6～12%，特里馬素Ⅰ1～2%，槲皮素-3-O-葡萄糖苷酸1～1.5%，鞣花酸0.8～1.2%，特里馬素Ⅱ0.2～0.5%，1,2,3,4,6五沒食子酰葡萄糖0.1～0.15%，總酚含量在25～50%。通過藥理試驗證明，本發(fā)明所述的桉葉提取物不僅對黃嘌呤氧化酶有抑制作用，并且在體內(nèi)具有較強的降尿酸和保護高尿酸血癥所引起的腎損傷等作用。
【專利說明】一種具有降尿酸作用的桉葉提取物、制備方法及其用途
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種桉葉提取物、制備方法及其在治療高尿酸血癥藥物中的應(yīng)用。
[0002]【背景技術(shù)】
高尿酸血癥(hyperuricemia),是由痛風(gout)引起的臨床癥狀,是一組嘌呤代謝紊亂所致的疾病，其臨床特點為導(dǎo)致血尿酸濃度過高及由此而引起的痛風性急性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風石沉積痛風石性慢性關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)畸形，常累及腎臟引起慢性間質(zhì)性腎炎和尿酸腎結(jié)石，并且可能導(dǎo)致代謝綜合征和相關(guān)的心血管疾病，已被聯(lián)合國列為21世紀20大頑
癥之一。
[0003]防治高尿酸血癥類藥物主要分為尿酸生成抑制藥(如別嘌醇、非布索坦等)和促尿酸排泄藥(如丙磺舒、苯溴馬隆等)兩種。黃嘌呤氧化酶是人體內(nèi)催化尿酸生成過程中最重要的酶，因此抑制其活性能達到防止尿酸產(chǎn)生的作用，雖然其抑制藥物別嘌醇一直延用至今，但日前國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布第57期《藥品不良反應(yīng)信息通報》，提示別嘌醇引起重癥藥疹的安全問題，應(yīng)用后病人可有發(fā)熱、過敏性皮疹，甚至有肝功能損害等副作用；而促尿酸排泄藥如丙磺舒、苯溴馬隆等常伴隨有皮疹、發(fā)熱、腎臟損害等副作用。自古以來，包括中國、印度、加拿大在內(nèi)的多個國家和地區(qū)就有用植物藥材治療痛風的傳統(tǒng)。據(jù)文獻報道，天然植物藥材來源中含有大量黃嘌呤氧化酶抑制劑和促尿酸排泄成分，并且毒性小，安全性高，不易引起過敏反應(yīng)且來源廣，有的甚至可以用于日常飲食，具有很好的研究及開發(fā)前景。
[0004]桉樹是桃金娘科梭域雇Λ Eucalyptus)植物的統(tǒng)稱,桉葉作為桉樹的副產(chǎn)物一直作為民間傳統(tǒng)中草藥，常用作清熱解毒治感冒等用途，已有研究表明桉葉提取物含有大量強抗氧化活性物質(zhì)，主要為黃酮類、有機酸類、鞣質(zhì)及多酚類等有效成分，具有明顯的抗衰老、抗腫瘤、抗糖尿病、抗炎等功效，并且研究表明桉葉中的多種功能都與其抗氧化作用有關(guān)。目前，尚未見到采用桉葉提取物治療高尿酸血癥以及痛風的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于一種具有降尿酸作用的桉葉提取物及其制備方法，該提取物不僅對黃嘌呤氧化酶有抑制作用，并且在體內(nèi)具有較強的降尿酸和保護高尿酸血癥所引起的腎損傷等作用。
[0006]本發(fā)明的提供的具有降尿酸作用的桉葉提取物，含有以下質(zhì)量百分比的活性成分:月見草素B 6~12%，特里馬素I I~2%，槲皮素-3-0-葡萄糖苷酸I~1.5%，鞣花酸
0.8~1.2%，特里馬素II 0.2~0.5%，I, 2，3，4，6五沒食子酰葡萄糖0.1~0.15%，總多酚含量25~50%。
[0007]本發(fā)明所述桉葉提取物，包括桉葉粗提取物，桉葉萃取物和桉葉大孔樹脂制備物二種提取物。
[0008]所述桉葉粗提取物的制備方法，其具體步驟包括:取桉葉避光陰干，粉碎至40-80目，放入常規(guī)提取罐中，加入40~80%乙醇水溶液，在45~55°C常壓提取I~24小時，重復(fù)提取I~3次，然后用板框過濾I次再經(jīng)0.22 μ m陶瓷膜過濾I次，重復(fù)提取一次，合并濾液后于真空濃縮裝置，于60~80°C、300± IOOpa真空度下減壓濃縮至乙醇完全去除，將剩余濾液經(jīng)噴霧干燥即得桉葉粗提取物，總多酚含量在25~30% (質(zhì)量百分比)之間。
[0009]所述桉葉萃取物的制備方法，是將上述方法制得的桉葉粗提取物用正丁醇或氯仿或乙酸乙酯或乙醇或甲醇進行超聲波萃取I~3小時，重復(fù)萃取I~3次后，萃取液置于60~80°C、300± IOOpa真空度下減壓濃縮至正丁醇完全去除，將剩余濾液經(jīng)噴霧干燥即得桉葉萃取物，總多酚含量在30~40% (質(zhì)量百分比)之間。
[0010]所述桉葉大孔樹脂制備物的制備方法，是將上述方法制得的桉葉萃取物，溶解后上已處理好的Diaion HP-20大孔樹脂柱，柱子的徑高比為1:5~8，上樣量與樹脂質(zhì)量比為1:3~10，流速為3~6BV/h，依次用水和10%，20%，30%乙醇洗脫，每種溶劑沖洗2~8倍柱體積，收集30%乙醇濃度的洗脫液，經(jīng)60~80°C、300土 IOOpa真空度下減壓濃縮至正丁醇完全去除，將剩余濾液經(jīng)噴霧干燥即得桉葉大孔樹脂制備物，總多酚含量在質(zhì)量百分比為40~50%之間。
[0011]以上三種提取物所述制備方法中加入提取溶劑提取時，第一次提取時，桉葉重量kg與提取溶劑L比為1:6~10 ;第二次提取時，桉葉重量kg與提取溶劑L比為1:5~8。
[0012] 以上三種提取物所述制備方法中噴霧干燥參數(shù)為進風溫度:150~200°C，進料速度:70~lOOrpm，霧化器頻率:25~30Hz。
[0013]以上三種提取物所述制備方法中大孔樹脂可以為離子交換大孔樹脂、非極性大孔樹脂、中極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。
[0014]本發(fā)明所述的桉葉為廣東或四川或廣西或福建產(chǎn)的廣林9號尾巨按、DH32-29尾巨桉、U6、韋塔桉、粗皮桉、朽1檬桉等桉葉提取物中的一種或一種以上的混合物。
[0015]上述桉葉提取物可以進一步制各成的劑型包括膠囊劑、片劑、散劑、口服液、軟膠囊、丸劑、合劑、糖漿劑、凝膠劑、緩釋制劑。為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時加入藥學(xué)可接受的輔料，例如:填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑等，填充劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等，崩解劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羥甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等，潤滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等，助懸劑包括:聚乙烯砒咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等，粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等，甜味劑包括:糖精鈉、阿斯巴甜、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矯味劑包括:甜味劑及各種香精，防腐劑包括:尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、醋酸氯乙定、按葉油等。
[0016]使用本發(fā)明的制備方法可獲得桉多酚含量在25~50%之間的桉葉提取物，其中主要活性成分占約9~17%，現(xiàn)代藥理學(xué)實驗證明所述提取物不僅對黃嘌呤氧化酶有抑制作用，并且在體內(nèi)具有較強的降尿酸和保護高尿酸血癥所引起的腎損傷等作用，并且桉葉資源豐富價格低廉，本發(fā)明制備方法簡單制備成本低，符合工業(yè)化生產(chǎn)要求，有開發(fā)作為藥品或者保健品的實際意義和應(yīng)用價值。
【具體實施方式】[0017]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作出進一步詳細地說明，但并不因此限制本發(fā)明。
[0018]實施例1:
新鮮采集桉葉30Kg，避光陰干，粉碎至60目，加入混合提取溶劑(濃度為70%乙醇240kg，檸檬酸4.8Kg)，在40°C下提取1.5小時，板框過濾，再次加入混合提取溶劑(濃度為70%的乙醇180Kg)，再在40°C下提取1.5小時，再次離心過濾，合并濾液，進入蒸餾釜，減壓濃縮至10L，并回收乙醇，噴霧干燥，除去溶劑后為桉葉粗提取物，總多酚含量為26.54%，可用于制備治療高尿酸血癥的藥物。
[0019]實施例2:
新鮮采集桉葉40Kg，避光陰干，粉碎至60目，加入混合提取溶劑(濃度為70%的乙醇320kg，檸檬酸6.4Kg)，在42°C下提取I小時，板框過濾，再次加入混合提取溶劑(濃度為70%的乙醇240Kg)，再次在38°C下提取2小時，離心過濾，合并濾液，進入蒸餾釜，濃縮至12L，并回收乙醇，用60L乙酸乙酯萃取，分流，在加入48L乙酸乙酯第二次萃取，分流，再次加入48L乙酸乙酯第三次萃取，合并萃取液，濃縮并回收乙酸乙酯，噴霧干燥，除去溶劑后即為桉葉乙酸乙酯萃取物，總多酚含量為33.89%，可用于制備治療高尿酸血癥的藥物。
[0020]實施例3:
新鮮采集桉葉50Kg，避光陰干，粉碎至60目，加入混合提取溶劑(濃度為70%的乙醇400kg，檸檬酸8Kg)，在39°C下提取1.5小時，板框過濾，再次加入混合提取溶劑(濃度為70%的乙醇300Kg)，在4 1 °C下再次提取1.5小時，再次離心過濾，合并濾液，進入蒸餾釜，濃縮至17L，并回收乙醇，用85L正丁醇萃取，分流，再加入68L正丁醇第二次萃取，再次加入68L正丁醇第三次萃取，合并萃取液，濃縮并回收正丁醇，萃取濃縮液上已處理好的Diaion HP-20大孔樹脂柱，柱子的徑高比為1:6，上樣量與樹脂質(zhì)量比為1:8，流速為6BV/h，依次用水和10%，20%，30%乙醇洗脫，每種溶劑沖洗2倍柱體積，收集30%乙醇濃度的洗脫液，濃縮除去溶劑后噴霧干燥即為桉葉大孔樹脂制備物，總多酚含量為44.17%，可用于制備治療高尿酸血癥的藥物。
[0021]實施例4:
高效液相色譜法測定桉葉提取物對黃嘌呤氧化酶體外抑制作用供試品溶液及各實驗試劑的配制:準確稱取供試樣品(桉葉粗提取物，桉葉正丁醇萃取物和桉葉大孔樹脂制備物)，先加少量DMSO溶解，再用50 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.8，含
0.1%0 EDTA)稀釋至所需濃度，DMSO終含量為5%，即為樣品溶液；空白對照溶液為50mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.8，含0.1%0 EDTA和5%DMS0)，陽性對照溶液為別嘌醇溶液，用空白對照溶液稀釋至所需濃度。黃嘌呤氧化酶溶于50mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.8，含0.1%0EDTA)至濃度0.08 U/ml黃嘌呤氧化酶溶液；黃嘌呤溶于50mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.8，含
0.1%0 EDTA和0.lmmol/L NaOH)至濃度1.92mmol/L的黃嘌呤底物溶液。
[0022]反應(yīng)過程:準確量取黃嘌呤底物溶液IOOuL,置1.5mL離心管中，加入供試品溶液(或別嘌醇溶液和空白對照溶液)IOOuL,混勻37°C預(yù)熱5min，加入黃嘌呤氧化酶溶液10uL，混勻，37°C反應(yīng)15min，加入4mol/L HCl溶液2uL，混勻，Imin后，過濾膜，即得供試品反應(yīng)液、陽性對照反應(yīng)液和空白對照反應(yīng)液。
[0023]液相條件:色譜柱Dikma Technologies C18 (250mmX4.6mm, 5 μ m)；以甲醇-50mmol/L K2HPO4緩沖鹽溶液(NaOH調(diào)pH至7.5)為流動相，比例為5:95 ;檢測波長290nm ;流速為lmL/min,進樣量為20uL。
[0024]抑制率按下式計算:抑制率(％) = (I 一供試品反應(yīng)液尿酸色譜峰面積/空白反應(yīng)液尿酸色譜峰面積)X 100%。
[0025]計算結(jié)果如表1、2所示，桉葉提取物及其活性成分都對黃嘌呤氧化酶有一定的抑制作用。
[0026]表1不同桉葉提取物對黃嘌呤氧化酶的抑制率(n=3).....1......1
【權(quán)利要求】
1.一種具有降尿酸作用的桉葉提取物，其特征在于，含有以下質(zhì)量百分比的活性成分:月見草素B 6~12%，特里馬素I 1~2%，槲皮素-3-0-葡萄糖苷酸1~1.5%，鞣花酸0.8~1.2%，特里馬素11 0.2~0.5%，1, 2，3，4，6五沒食子酰葡萄糖0.1~0.15%，總酚含量為25~50%。
2.一種如權(quán)利要求1所述桉葉粗提取物的制備方法，其特征在于，包括:取桉葉避光陰干，粉碎至40-80目；放入常規(guī)提取罐中，加入40~80%乙醇水溶液，在45~55°C常壓提取1~24小時，重復(fù)提取1~3次；然后用板框過濾1次再經(jīng)0.22 μ m陶瓷膜過濾1次，重復(fù)提取一次，合并濾液后于真空濃縮裝置，于60~80°C、300± 1OOpa真空度下減壓濃縮至乙醇完全去除，將剩余濾液經(jīng)噴霧干燥即得桉葉粗提取物，總多酚含量在25~30%之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述桉葉提取物的制備方法，其特征在于，將所得得桉葉粗提取物用正丁醇或氯仿或乙酸乙酯或乙醇或甲醇進行超聲波萃取1~3小時，重復(fù)萃取1~3次后，萃取液置于60~80°C、300± 1OOpa真空度下減壓濃縮至正丁醇完全去除，將剩余濾液經(jīng)噴霧干燥即得桉葉萃取物，總多酚含量在30~40%之間。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述桉葉提取物的制備方法，其特征在于，將所得桉葉萃取物溶解后上已處理好的大孔樹脂柱，柱子的徑高比為1:5~8，上樣量與樹脂質(zhì)量比為1:3~10，流速為3~6BV/h，依次用水和10%，20%，30%乙醇洗脫，每種溶劑沖洗2~8倍柱體積，收集30%乙醇濃度的洗脫液，經(jīng)60~80°C、300± 1OOpa真空度下減壓濃縮至正丁醇完全去除，將剩余濾液經(jīng)噴霧干燥即得桉葉大孔樹脂制備物，總多酚含量在質(zhì)量百分比為40~50%之間。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4所述的桉葉提取物的制備方法，其特征在于，所述桉葉為廣東或四川或廣西產(chǎn)的廣林9號、DH32-29、U6、韋塔桉、粗皮桉桉葉。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述桉葉提取物的制備方法，其特征在于，加入提取溶劑乙醇水溶液提取時，第一次提取物料比為桉葉:提取溶劑=1kg:6~10L，第二次提取物料比為桉葉:提取溶劑=1kg:5~8L。
7.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4所述的桉葉提取物的制備方法，其特征在于，噴霧干燥參數(shù)為進風溫度150-200°C，進料速度70-100rpm，霧化器頻率25_30Hz。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述桉葉提取物的制備方法，其特征在于，大孔樹脂為離子交換大孔樹脂、非極性大孔樹脂、中極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。
9.如權(quán)利要求1所述的桉葉提取物在制備高尿酸血癥藥物方面的用途。
【文檔編號】A61P13/12GK103919857SQ201410124867
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年3月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月31日
【發(fā)明者】譚榮威, 曹庸, 劉又豪, 肖蘇堯, 趙力超, 陳洪璋, 陳運嬌 申請人:曹庸