含18α-甘草酸的納米粒制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種含18α-甘草酸的納米粒，其中，18α-甘草酸納米粒分散于純化水中，18α-甘草酸納米粒由18α-甘草酸、脂質材料和乳化劑組成，18α-甘草酸、脂質材料、乳化劑的重量比為（1～4）∶（1～15）∶（5～50）；純化水的用量按每5～20mg乳化劑添加1ml純化水計。該納米粒通過將18α-甘草酸包封于脂質材料中，改善藥物的體內吸收，提高生物利用度，同時具有緩釋和靶向性，從而降低毒副作用，提高療效。
【專利說明】含18 α -甘草酸的納米粒制備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，涉及一種抗肝損傷藥物18 α-甘草酸的新劑型，特別涉及一種18 α -甘草酸、卵磷脂納米?？垢螕p傷藥物。
技術背景
[0002]18 α -甘草酸(18 a-Glycyrrhizic acid ; 18 a-GL)是天然甘草酸(β 體)的差相異構體，在甘草中含量極微小。早期研究發(fā)現，甘草酸的藥理作用主要有抗炎作用，抗過敏作用，膜保護作用，鎮(zhèn)咳作用，免疫調節(jié)和抗病毒作用等。臨床上主要用于解毒、抗變態(tài)反應、抗?jié)?、抗炎?zhèn)咳。現代藥理研究證明甘草酸還具有保護肝細胞，抗病毒性肝炎，抑制肝纖維化，抗腫瘤，抑制艾滋病病毒增殖等作用?，F已廣泛用于病毒性肝病治療，并且越來越多的醫(yī)生嘗試用于治療肝纖維化，其抗艾滋病治療也正在臨床試驗中。18 a-GL制劑，如甘利欣，其主藥甘草酸二銨中α體與β體甘草酸的比例約為7:2，臨床大規(guī)模應用已有二十年，是目前治療肝病的最有效藥物之一。大量文獻報道它對急性肝炎、慢性乙型病毒性肝炎、肝纖維化，甚至肝硬化均具有明顯療效，對病毒學指標亦有一定改善。
[0003]經過二十多年的臨床應用，18 a -GL的不良反應主要有高血壓、低血鉀、水腫等。甘草酸在體內水解為甘草次酸(GA)，是因甘草次酸的類醛固酮作用所致。另由于甘草酸為高極性、親水性大分子(分子量大于800)，腸道很少吸收，血藥濃度很低，而靜脈給藥雖有效，但因高極性大分子不宜與細胞膜上受體結合，需大劑量才能產生高效，這樣勢必加重不良反應。
[0004]納米藥物是十 九世紀七十年代發(fā)展起來的新型藥物制劑。隨著納米科技和制藥技術的迅速發(fā)展，納米藥物的研究日益深入、擴大。納米藥物是將藥物的微?；驅⑺幬镂桨谳d體中，制成納米尺寸范圍內的微粒，再以其為基礎制成不同種類的劑型，以達到緩釋、控釋和靶向給藥的作用。納米藥物在生物體內有著獨特的吸收過程:當靜脈、動脈或腹腔注射100-200nm的微粒系統(tǒng)，很快被網狀內皮系統(tǒng)的巨噬細胞吞噬，最終到達肝臟Kupffer細胞的溶酶體中；小于IOOnm,大于50nm的微粒能進入肝實質細胞中。由此可見，納米藥物的主要靶向器官之一是肝臟，將抗肝損傷藥物制成納米制劑，與普通藥物相比，將具有良好的緩釋控釋及靶向特性，能顯著提高藥物的生物利用度，延長藥物作用時間，增加藥物的穩(wěn)定性，減少不良反應及用藥劑量，更好地實現了控釋和緩釋效果。
[0005]18 a-GL納米粒，可使18 a-GL發(fā)揮肝靶向性治療作用，大大提高臨床療效，減少不良反應。
[0006]中國專利文獻CN1586487，涉及一種甘草酸三元復合物納米微粒的制備方法。利用離子凝膠化方法，以三聚磷酸鈉、羧甲基纖維素鈉作為聚陰離子和殼聚糖或季銨化的Ν-(2-羥基)丙基-3-三甲基氯化銨殼聚糖進行離子凝膠化反應，并通過甘草酸和殼聚糖的相互作用制備甘草酸三元復合物納米微粒。通過控制殼聚糖的分子量、殼聚糖(季銨化的N-(2-羥基)丙基-3-三甲基氯化銨)、三聚磷酸鈉和羧甲基纖維素鈉以及甘草酸的濃度和比例可以得到不同粒徑大小的納米微粒。得到的甘草酸納米微粒徑可控、尺寸均一，該納米微粒表面帶有正電荷，利于表面修飾。方法簡單易行，原料易得，制備過程重復性好，實用性強，并具有廣泛的應用性。
[0007]中國專利文獻CN1586488是一種制備殼聚糖甘草酸納米粒子的方法。甘草酸具有抗病毒性肝炎、慢性肝炎作用以及破壞血管內艾滋病毒細胞的效果，目前臨床使用的甘草酸制劑存在口服難吸收的問題。將溶于酸性水溶液的殼聚糖和溶于氨水溶液的甘草酸混合，通過在一定范圍內的殼聚糖分子量、殼聚糖脫乙酰度、酸溶液濃度、氨水濃度、投料比等，在較溫和的反應條件下合成了殼聚糖甘草酸納米粒子水分散體系，將其冷凍干燥后即得到粉末狀殼聚糖甘草酸納米粒子。該方案殼聚糖甘草酸交聯水分散體系是分散均勻、形狀接近球形的納米粒子。能在水中能夠重新分散成納米粒子，具有一定的靶向和緩釋性能。具有方法簡單、原料易得，產品口服后，與市售口服制劑相比，其腸道吸收效率和生物利用度有 明顯提高。
[0008]中國專利文獻CN102327227A涉及一種制備載體為聚乙二醇-聚(￥_氨基-8-己內酯)的甘草酸的納米粒子的方法。以雙親水性嵌段共聚物甲氧基封端的聚乙二醇-聚(￥-氨基-￡-己內酯)作為載體，在一定pH值下，氨質子化的聚合物水溶液與帶負電的親水性模型藥物甘草酸通過靜電組裝的方法獲得目標物。目標物粒徑及藥物的釋放速率均可調節(jié)。預示著聚乙二醇-聚(Y-氨基_ε-己內酯)體系有望作為一種模板，作為其它帶有負電荷的親水性藥物以及基因的載體系統(tǒng)。
[0009]這三份專利文獻，均是關于甘草酸(亦即:天然甘草酸，18 β -甘草酸)通過物理和化學的方法與聚合物結合形成納米粒子的制備方法。

【發(fā)明內容】

[0010]本發(fā)明的目的在于提供一種18 α-甘草酸(18 β -甘草酸的差向異構體)與脂質材料，通過物理包裹法制備納米粒子方法。通過將18 α -甘草酸包封于脂質材料中，改善藥物的體內吸收，提高18 a-GL生物利用度，同時具有緩釋和肝靶向性，從而降低毒副作用，提
高療效。
[0011]本發(fā)明的另一目的在于提供該納米粒在抗肝損傷中的應用。
[0012]為實現上述目的，本發(fā)明采用如下的技術方案:
[0013]一種含18 α -甘草酸納米?？垢螕p傷藥物，其中，18 α -甘草酸納米粒分散于純化水中，18 α -甘草酸納米粒由18 α -甘草酸、脂質材料和乳化劑組成，18 α -甘草酸、脂質材料、乳化劑的重量比為(I~4): (I~15): (5~50);純化水的用量按每5~20mg乳化劑添加Iml純化水計。優(yōu)化地,該納米粒的直徑在50~300nm之間,Zeta電位在-28~-45之間，其原料及各原料的質量比為:
[0014]18 α-甘草酸:1 ~4
[0015]脂質材料:1~15
[0016]表面活性劑:5~50
[0017]上述原料的質量百分比之和為100%，其余成分為純化水。
[0018]優(yōu)化地，所述脂質材料是單硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯、和硬脂酸中的一種或兩種以上任意比例組成混合物；表面活性劑是卵磷脂、泊洛沙姆188、吐溫-80、PEG400、辛癸酸甘油酯、聚氧乙烯40氫化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、span80中的一種或兩種以上任意比例混合組成的混合物，這些表面活性劑對人體低毒、安全、無刺激。
[0019]優(yōu)化地，所述的有機溶劑選自氯仿、二氯甲烷、甲醇、無水乙醇、1，2-丙二醇、叔丁醇、正丁醇、異丙醇、丙酮、正己烷中的的一種或幾種的混合物。
[0020]優(yōu)化地，所述含18 α -甘草酸納米粒的制備方法，采用高壓乳勻法制備，具體包括以下步驟:
[0021](I)將18 α-甘草酸、脂質材料，加入適量的有機溶劑中，恒溫水浴加熱，使其溶解，得到液態(tài)油相。
[0022](2)將表面活性劑，加入適量的蒸餾水，攪拌，加熱，使其溶解，得到水相。
[0023](3)將(I)制得的油相緩慢加入攪拌中的水相中，繼續(xù)加熱濃縮，得到納米初乳。
[0024](4)將(3)得到的納米初乳在攪拌下，緩慢滴加入適量冰水中，繼續(xù)攪拌。
[0025](5)將(4)制得的乳液超聲后，均質，得到18α-甘草酸納米粒。
[0026]優(yōu)選的，所述步驟(1)中，加熱溫度為50~100°C，在步驟(4)中，蒸餾水置于冰水浴中，攪拌速度為800~2000r/min，在步驟(5)中，超聲時間2~15min，均質壓力150~500bar,均質次數2~5次。
[0027]優(yōu)化地，所述含18 α -甘草酸納米粒的混懸液的制備方法，其特征在于:制得的混懸液中納米粒的粒徑為100~300nm，包封率大于75%。
[0028]一種18 α-甘草酸、卵磷脂納米?？垢螕p傷藥物，可通過口服、注射給藥，極大的提高了 18 α -甘草酸的生物利用度，減少藥物在體內的首過效應，促進18 α -甘草酸的胃腸道吸收，增強了 18 α-甘草酸的肝靶向分布，提高了治療效果。
[0029]本發(fā)明的一種18 α -甘草酸、卵磷脂納米?？垢螕p傷藥物，與現有技術相比，具有以下優(yōu)點:
[0030](I)本發(fā)明的一種18 α-甘草酸、卵磷脂納米粒的藥物粒徑在50~300nm之間，是將18 α -甘草酸中加入脂質，滴加入有表面活性劑的蒸餾水中，得到均勻、透明的納米乳體系。形成的納米粒18 α -甘草酸含量達到0.1%以上，包封率達到80%以上。
[0031](2)本發(fā)明的18 α-甘草酸、卵磷脂納米粒分布均勻，體系透明、穩(wěn)定性好，有較低的表面張力，具有良好的流動性。
[0032](3)高壓乳勻法的原理是通過高壓推動液體通過微米級的狹縫，流體在短距離內迅速加速，產生較高的剪切力和空穴力，將顆粒破碎至納米級。此方法在制備過程中可避免或減少有機溶劑的用量，提高制劑的安全性，降低環(huán)境污染，并已有相關設備滿足工業(yè)化大生產的要求。(4)本發(fā)明制成納米粒后可制成口服液直接服用、也可經膠囊包封或經凍干粉技術等處理。
【具體實施方式】
[0033] 以下通過具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此。下述各實施例中18 α-甘草酸納米粒的粒徑、電位和包封率等指標的測定采用如下方法。
[0034]( I)測定18 α-甘草酸納米粒的粒徑大小和電位
[0035]取純化水稀釋18 α -甘草酸納米粒,采用Zata_sizer Nano ZS90激光散射粒度儀測定其粒徑和Zeta電位。[0036](2)測定18 α -甘草酸納米粒的包封率
[0037]取1.0ml 18 α -甘草酸納米粒加無水乙醇適量，加熱，破乳后，冷至室溫，定容，
0.22 μ m微孔濾膜過濾，采用高效液相色譜法測定濾液中藥物濃度，計算藥物總量(W&)。
[0038]取1.0mll8a -甘草酸納米粒加純化水適量，混勻，超速離心，取上清液，經
0.22 μ m微孔濾膜過濾，采用高效液相色譜法測定濾液中藥物濃度，計算游離藥物量(Ws)
[0039]實施例1
[0040]取600mg山箭酸甘油酯,600mgl8 α -甘草酸于40ml無水乙醇中，75°C加熱溶解,作為油相；取1000mg卵磷脂溶于30ml純化水中，加熱至75°C溶解，作為水相；在攪拌速度為
[0041]1200r/min條件下，將上述油相緩慢滴加至水相中，形成初乳，繼續(xù)加熱，濃縮至15ml，在2000r/min轉速下，將初乳濃縮液緩慢滴加至置于冰水浴中的200ml純化水中，繼續(xù)攪拌2h后,超聲IOmin,均質壓力350bar,均質次數3次，即得18 α-甘草酸納米粒。
【權利要求】
1.一種含18 α -甘草酸的納米粒，其特征在于，18 α -甘草酸納米粒分散于純化水中，18 α -甘草酸納米粒由18 α -甘草酸、脂質材料和乳化劑組成，18 α -甘草酸、脂質材料、乳化劑的重量比為(1~4): 0-15): (5~50);純化水的用量按每5~20mg乳化劑添加Iml純化水計。
2.如權利要求1所述含18α -甘草酸的納米粒，其特征在于，所述脂質材料選自單硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、硬脂酸中的一種或兩種以上任意比例組成的混合物；所述的乳化劑選自卵磷脂、泊洛沙姆188、吐溫-80、PEG400、辛癸酸甘油酯、聚氧乙烯40氫化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、span80中的一種或兩種以上任意比例混合組成的混合物。
3.權利要求1或2所述含18α-甘草酸的納米粒的制備方法，其特征在于，采用熱溶-高壓乳勻法制備，具體包括以下步驟: (1)將按配方比例稱取18α-甘草酸、脂質材料，加入適量的有機溶劑中，加熱溶解，得到液態(tài)油相； (2)按配方 比例稱取表面活性劑，加入適量的蒸餾水，攪拌，加熱，得到水相； (3)將(I)制得的油相緩慢滴加到水相中，攪拌，濃縮，得到納米初乳； (4)將(3)得到的納米初乳在攪拌下，緩慢滴加入適量蒸餾水中，繼續(xù)攪拌； (5)將(4)制得的乳液超聲后，均質，得到18α -甘草酸納米粒。
4.如權利要求3所述含18α-甘草酸納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，加熱溫度為5(T100°C，在步驟(4)中，蒸餾水置于冰水浴中，攪拌速度為80(T2000r/min，在步驟(5)中，超聲時間2~15min，均質壓力15(T500bar，均質次數2~5次。
5.如權利要求1所述含18α -甘草酸納米粒的制備方法，其特征在于:制得的混懸液中納米粒的粒徑為10(T300nm，包封率大于75%。
【文檔編號】A61P1/16GK103948566SQ201410128667
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月1日 優(yōu)先權日:2014年4月1日
【發(fā)明者】田靜, 紀倩, 包劍鋒 申請人:杭州市西溪醫(yī)院