一種抑制腫瘤細胞增殖的中藥組合物、制備方法及用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及中醫(yī)藥領域，公開了一種抑制腫瘤細胞增殖的中藥組合物、制備方法與用途。本發(fā)明所述中藥組合物由桃仁6.5-8.0重量份、紅天葵5.0-8.5重量份、葡萄柚5.0-10.0重量份、甜橙5.5-8.5重量份、桑椹3.5-8.0重量份、杏鮑菇3.5-5.0重量份、廣棗5.0-10.0重量份、芒果4.0-6.0重量份、毛冬瓜5.0-8.0重量份、越橘6.0-8.0重量份、銀耳5.0-6.5重量份、龍眼5.5-8.5重量份制成。體外實驗MYr法和集落形成法結果顯示本發(fā)明所述中藥制劑對多種腫瘤細胞株生長有顯著的抑制作用，提示本發(fā)明所述中藥組合物用作腫瘤治療藥物具有廣泛的臨床應用前景。
【專利說明】一種抑制腫瘤細胞增殖的中藥組合物、制備方法及用途
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥領域，具體涉及一種抑制腫瘤細胞增殖的中藥組合物、制備方法與用途。
【背景技術】
[0002]宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，原位癌高發(fā)年齡為30~35歲，浸潤癌為45~55歲，近年來其發(fā)病有年輕化的趨勢。中國是宮頸癌病例較多的國家，每年有宮頸癌新發(fā)病例，在女性特有的腫瘤當中，前十位惡性腫瘤中第二位就是宮頸癌。
[0003]目前子宮頸癌的治療主要包括手術治療、放化療、化療三種方法。手術治療手術主要用于早期宮頸癌患者，可以很大程度改善癥狀，但對身體的損害很大，且易帶來術后不育及腫瘤復發(fā)、轉移的并發(fā)癥。
[0004]臨床還通過放射介入方法治療宮頸癌，直接將動脈導管插至子宮動脈，注入永久性栓塞顆粒，阻斷子宮肌瘤血供，以達到肌瘤萎縮甚至消失。
[0005]藥物治療臨床上常用的促性腺激素釋放激素激動劑GnRH-a、孕激素拮抗劑、雄激素類藥物。GnRH-a有亮丙瑞林(抑那通)、戈舍瑞林(諾雷德)、曲普瑞林(達必佳)等。GnRH_a不宜長期持續(xù)使用，一般用3-6個月，常引起嚴重更年期癥狀；孕激素拮抗劑米非司酮近年來臨床上用以治療子宮肌瘤，可使肌瘤體積縮小，但停藥后肌瘤多再長大。雄激素類藥物常用藥物有甲睪酮(甲基睪丸素)和丙酸睪素(丙酸睪丸素)，可抑制肌瘤生長，常引起男性化。
[0006]宮頸癌目前尚無十分理想的治療藥物，近年來，從天然植物中尋找新的抗腫瘤藥物已成為新藥研究的主要發(fā)展方向之一，中醫(yī)藥在腫瘤治療中的地位和綜合優(yōu)勢愈顯重要。目前，已公開的中藥(歐美國家稱植物藥)有如專利號CN102145030B具有調節(jié)免疫抑制腫瘤作用的奇異果軟膠囊的制備方法以及專利號CN102225182B公開的一種抑制腫瘤及增強免疫力的中藥制劑及制備方法。這些中藥治療腫瘤療效欠佳，均不具備在臨床廣泛應用的前景。

【發(fā)明內容】

[0007]本發(fā)明的一個目的是針對上述不足，提供一種抑制腫瘤細胞增殖的中藥組合物。
[0008]本發(fā)明提供的一種抑制腫瘤細胞增殖的中藥組合物，由以下原料制成:桃仁
6.5-8.0重量份、紅天葵5.0-8.5重量份、葡萄柚5.0-10.0重量份、甜橙5.5-8.5重量份、桑椹3.5-8.0重量份、杏鮑菇3.5-5.0重量份、廣棗5.0-10.0重量份、芒果4.0-6.0重量份、毛冬瓜5.0-8.0重量份、越橘6.0-8.0重量份、銀耳5.0-6.5重量份、龍眼5.5-8.5重量份。
[0009]桃仁是薔薇科植物桃或山桃的種子，別名毛桃仁、扁桃仁、大桃仁，6~7月果實成熟時采摘，除去果肉及核殼的種子，有活血祛瘀、潤腸通便的功效，可用于經閉、痛經、跌撲損傷、腸燥便秘等。
[0010]紅天葵(學名:Begonia fimbristipula)又名紫背天葵、紅葉、散血子、龍虎葉、夜渡紅、紅水葵，為秋海棠科植物紫背天葵的球莖或全株。功用主治清熱涼血，活血解毒。性味甘澀，涼，無毒。
[0011]廣率為漆樹科植物南酸率Choerospondias axillaris (Roxb.) Burtt et Hill 的干燥成熟果實。主要成分:沒食子酸，原兒茶酸，多糖。功能主治；增強免疫，抗腫瘤，行氣活血化瘀，養(yǎng)心，安神，抗心肌缺血，保護心功能等作用。用于氣滯血瘀，胸痹作痛，心悸氣短，心神不安。清熱毒，治風毒起疙瘩成瘡或瘍痛。
[0012]毛冬瓜:別名白洋桃、白毛桃、白葡萄、生毛藤梨，為生毛藤梨獼猴桃科獼猴桃屬植物毛花楊桃Actinidia eriantha Benth.A.davidii Franch.,中藥化學成分:根含胡蘿
卜式(dauasierol),熊果酸(ursolicacid), β-谷舀醇(β-sitcoterol)，毛花稱猴桃酸(eriantic acid)A、B。功效與作用:抗癌，消腫解毒。根:用于置癌、乳癌、食道癌、腹股溝淋巴結炎、瘡癤、皮炎。根皮:外用治跌打損傷。葉:外用治乳腺炎。清熱利濕，活血消腫，解毒。治肺熱失音，淋濁，帶下，顏面丹毒，淋巴結炎，皮炎，癰瘡腫毒。
[0013]葡萄柚(Grapefruit, Pomelo)是蕓香科柑橘屬植物,學名為Citrus paradis,另Ij名:西柚、血橙等等?；瘜W組分:醇類一櫳牛兒醇、芫荽油醇醛類一檸檬醛萜煙一檸檬烯、松油萜。胡蘿卜素，維生素B1、維生素B2、維生素C，煙酸、鈣、磷、鐵、糖類等。藥用價值:中醫(yī)認為葡萄柚性味甘、酸、涼，具有增進食欲，利尿，美白，強化肝功能，減肥，增強記憶力等功效；用于偏頭痛，耳聾，膽結石，抗蜂窩組織炎，月經不調等癥。
[0014]甜橙、別名:黃果、橙子、新會橙廣橘、雪柑、印子柑、廣柑。英文名:fruit of SweetOrange,藥材基源:為蕓香科植物甜橙的果實。拉丁植物動物礦物名:Citrus sinensis(L.)Osbeck,中藥化學成分:維 生素C、P及有機酸，異櫻花素-7-蘆丁糖甙、柚皮素_4’ -葡萄糖甙-7-蘆丁糖甙、柚皮甙、檸檬素-3- β -P-葡萄糖甙和O-D-木糖基牡荊素。內酯中有雙內酯苦味成分朽1檬苦素即黃柏內酯及其衍生物朽1檬苦素酸單內酯。功能主治:疏肝行氣、散結能乳、解酒。主肝氣郁滯所致脅肋疼痛；脘腹脹滿；產婦乳汁不通；乳房結塊腫痛；治婦人乳結不通，紅腫結硬疼痛，惡寒發(fā)熱。對人體新陳代謝有明顯調節(jié)和抑制作用，可增強機體抵抗力。
[0015]越橘，Vaccinium angustifolium,為杜胃$花科越桔屬植物，以葉、果入藥。中藥化學成分:含熊果式(arbutin),熊果酸(ursolic acid) [I],原花青素(procyanidin)B-l, B-3, B-7,原花色素(proanthocyanidin)A、果酸、維生素C,功用:有增強心臟功能,預防癌癥和心臟病的功效，能防止腦神經衰老、增進腦力；對一般的傷風感冒，咽喉疼痛以及腹瀉也有一定改善作用，消炎，防腐。
[0016]葡萄柚、甜橙、桑椹、杏鮑菇、廣棗、芒果、毛冬瓜、越橘、銀耳、龍眼均為常用的食材。中醫(yī)認為婦科、乳腺疾病因臟腑功能失調、氣滯血瘀而成。本發(fā)明所述中藥組合物治療婦科、乳腺疾病，多以活血化瘀、消瘀散結、清熱解毒、疏肝理氣、化瘀止痛為主，能改善增生的子宮內膜的血液循環(huán)，使肌層的單純性肥大逐漸消失，增生的結締組織變軟，從而起到調經、止血、疼痛消失、恢復卵巢功能的治療作用，能有效地控制子宮頸囊腫生長，使瘤體逐漸軟化，最后消散。
[0017]本發(fā)明所述抑制腫瘤細胞增殖的中藥組合物針對宮頸癌的中醫(yī)治療，以辨證論治為原則，內服并配合宮頸局部外用，體現(xiàn)中醫(yī)藥綜合治療優(yōu)勢，能夠抗癌抑瘤，改善臨床癥狀、提高生活質量，調節(jié)免疫功能。
[0018]本發(fā)明制成的中藥組合物有效成分含量高，比傳統(tǒng)工藝提高工效，質量得到了保障、提高了安全用藥率。本發(fā)明提供的中藥組合物經分析測定，其主要成分包含金絲桃苷、植物總多酚、氨基酸、維生素A、C和B族維生素類、兒茶素成分等。金絲桃苷具有抗炎、解痙、利尿、止咳、降壓、降低膽固醇以及對心、腦血管的保護作用等多種生理活性，可活血化瘀，用于瘀血閉阻所致的血脈瘀陰癥者。經藥效學研究表明，其藥物有效成份含量明確，并得到最大程度保留，有效成份含量的檢測方法科學、準確率高，從而提高了藥物的利用度。
[0019]作為優(yōu)選，本發(fā)明所述中藥組合物由以下原料制成:桃仁7-8.0重量份、紅天葵
6..0-8.0重量份、葡萄柚6.0-9.0重量份、甜橙6.5-7.5重量份、桑椹4.5-7.0重量份、杏鮑菇4.0-5.0重量份、廣棗6.0-8.0重量份、芒果5.0-6.0重量份、毛冬瓜6.0-8.0重量份、越橘7.0-8.0重量份、銀耳5.0-6.0重量份、龍眼6.0-8.0重量份。
[0020]在本發(fā)明的一個實施例中，所述中藥組合物由以下原料制成:桃仁6.5重量份、紅天葵5.0重量份、葡萄柚5.0重量份、甜橙5.5重量份、桑椹3.5重量份、杏鮑菇3.5重量份、廣棗5.0重量份、芒果4.0重量份、毛冬瓜5.0重量份、越橘6.0重量份、銀耳5.0重量份、龍眼5.5重量份。
[0021]在本發(fā)明的一個實施例中，所述中藥組合物由以下原料制成:桃仁8.0重量份、紅天葵8.5重量份、葡 萄柚10.0重量份、甜橙8.5重量份、桑椹8.0重量份、杏鮑菇5.0重量份、廣棗10.0重量份、芒果6.0重量份、毛冬瓜8.0重量份、越橘8.0重量份、銀耳6.5重量份、龍眼8.5重量份。
[0022]本發(fā)明還提供所述中藥組合物的制備方法，包括以下步驟:
[0023]粉碎所有組分，按比例加水20.0-50.0重量份，熱回流提取，減壓濃縮成稠膏，真空干燥，粉碎成細粉備用。
[0024]作為優(yōu)選，所述熱回流提取時間為3.5小時。
[0025]更優(yōu)選的，所述減壓濃縮及真空干燥溫度為65°C ;所述粉碎為過100~200目篩。
[0026]本發(fā)明還提供所述中藥組合物為活性成分制備的中藥制劑，作為優(yōu)選，其為口服液、片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊劑或凝膠劑。
[0027]本發(fā)明的另一個目的是提供所述中藥組合物在制備治療乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或子宮頸癌的藥物中的應用。
[0028]本發(fā)明所述中藥組合物可用作外用藥直接作用于腫瘤局部，使腫瘤凝固、壞死、溶解、脫落，還可以緩解宮頸水腫，減少或控制出血，抑制局部感染，促進腫瘤潰爛而愈合。應用本發(fā)明所述中藥組合物保守治療，也可作為宮頸癌的術前準備用藥，以改善手術條件。
[0029]放射治療是治療宮頸癌主要治療手段之一，放療在殺死癌細胞的同時，對人體的正氣損害嚴重，常引起便血、嘔吐、腹里、脫肛、放射性炎癥、骨髓抑制等毒副反應。放療時應用本發(fā)明所述中藥配合治療，可以減輕毒副反應，提高治愈率和生命生存概率。
[0030]宮頸癌早期手術可提高生存率，中晚期患者和復發(fā)癌的手術效果較差，而運用該中藥制劑治療宮頸癌手術患者，內服與外治相結合，可緩解臨床癥狀，延長患者生命率。
[0031 ] 體外實驗MYr法和集落形成法結果顯示本發(fā)明所述中藥組合物對4類腫瘤細胞株T47D人乳腺癌細胞(ATCC)、Ho-8910人卵巢癌細胞株、HEC-1-A人子宮內膜癌細胞株和Hela人子宮頸癌細胞株及集落形成生長有顯著的抑制作用，其抑制率隨著藥物濃度增加而相應增高，提示本發(fā)明所述中藥組合物及中藥制劑在體外對腫瘤細胞生長具有抑制作用，具有廣泛的臨床應用前景。【專利附圖】

【附圖說明】
[0032]圖1 (a)為金絲桃苷對照品、(b)為本發(fā)明中藥組合物中藥制劑的HPLC譜圖；*為金絲桃苷。
【具體實施方式】
[0033]本發(fā)明公開了一種抑制腫瘤細胞增殖的中藥組合物、制備方法與用途，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的產品、方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內容】
、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術。
[0034]為了使本領域的技術人員更好地理解本發(fā)明的技術方案，下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
[0035]實施例1:制備本發(fā)明所述中藥組合物
[0036]稱取桃仁6.5g、紅天葵5.0g、葡萄柚5.0g、甜橙5.5g、桑椹3.5g、杏鮑菇3.5g、廣率5.0g、芒果4.0g、毛冬瓜5.0g、越橘6.0g、銀耳5.0g、龍眼5.5g。
[0037]粉碎所有組分，按比例加水20.0-50.0g,熱回流提取3.5小時，減壓濃縮成稠膏，65°C真空干燥，過10 0~200目篩粉碎成細粉備用。
[0038]實施例2:制備本發(fā)明所述中藥組合物
[0039]稱取桃仁8.0g、紅天葵8.5g、葡萄柚10.0g、甜橙8.5g、桑椹8.0g、杏鮑菇5.0g、廣率10.0g、芒果6.0g、毛冬瓜8.0g、越橘8.0g、銀耳6.5g、龍眼8.5g。
[0040]粉碎所有組分，按比例加水20.0g,熱回流提取3.5小時，減壓濃縮成稠膏，65°C真空干燥，過100~200目篩粉碎成細粉備用。
[0041]實施例3:制備本發(fā)明所述中藥制劑
[0042]桃仁7g、紅天葵8.0g、葡萄柚6.0g、甜橙7.5g、桑椹4.5g、杏鮑菇5.0g、廣棗6.0g、芒果6.0g、毛冬瓜8.0g、越橘7.0g、銀耳6.5g、龍眼8.0go
[0043]粉碎所有組分，加水50.0g,熱回流提取3.5小時，減壓濃縮成稠膏，65°C真空干燥，過100~200目篩粉碎成細粉，將細粉與等量去離子水混合得口服液。
[0044]實施例4:本發(fā)明所述中藥組合物的體外臨床實驗
[0045]本實驗將一種實施例1-3制備的中藥組合物或中藥制劑，在體外進行了抗癌活性研究，以證實所述中藥組合物或中藥制劑的療效。
[0046]I
[0047]材料與儀器
[0048]1.1
[0049]實施例1或2或3制備的抑制腫瘤細胞增殖及膠原合的中藥組合物或中藥制劑。(以下簡稱中藥組合物或中藥制劑，代表含義相同)
[0050]1.2
[0051]腫瘤細胞株:T47D人乳腺癌細胞(ATCC)、Ηο_8910人卵巢癌細胞株、購自上海雅吉細胞生物科技有限公司庫；HEC_1_A人子宮內膜癌細胞株和Hela人子宮頸癌細胞株、由中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所細胞中心惠贈。
[0052]1.3
[0053]試劑MTT (四甲基噻唑藍)為德國Sigm a公司產品；FBS (胎牛血清)由長春西諾生物科技有限公司提供；RPMI1640培養(yǎng)基為美國GIBCO公司產品；Tryp — isn(胰蛋白酶)由美國Gibco公司提供:DMSO(二甲基亞砜)由北京化學試劑公司提供；W right, s stain (瑞氏染色素)購自上海三愛思試劑有限公司；Giemsa，s stain (吉氏染色素)購自上海試劑三廠；卡那霉素,德國Sigma公司分裝；L 一谷氨酰胺，A m resco分裝。
[0054]1.4
[0055]儀器CO2培養(yǎng)箱(Therm o Form a),美國產,型號:381 ;尼康倒置顯微鏡，日本產，型號:TE2000 ;酶標儀，美國寶特產，型號=Bio-Tek ELX800 ；
[0056]96孔板，丹麥產，型號:3072 ;低速臺式離心機TD_5，上海趙迪生物科技有限公司，型號:TD6M ;層析柱:各種不同規(guī)格口徑的普通玻璃柱。
[0057]2
[0058]方法
[0059]2.1
[0060]RPM1640完全培養(yǎng)液的配置RPM 11640完全培養(yǎng)液含3 %谷氨酰胺、卡那霉素750ug / ml、10%或 15% FBS。
[0061]2.2
[0062]M T Y法測定在96孔培養(yǎng)板中每孔加入200ulxl (含有5000個/ ml腫瘤細胞)10% FBS的RPM 11640培養(yǎng)液，置37°C，10% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后(H22、S180離心處理)，棄去舊培養(yǎng)液。實驗組分別加入新的培養(yǎng)液190ul /孔，然后加入不同濃度本發(fā)明所述中藥制劑IOul /孔，使終濃度分別為1.25，2.5，5，10，20，40，80ug / ml，對照孔則加入200ul /孔新的培養(yǎng)液。每組4平行孔，置37%，10% C02培養(yǎng)液培養(yǎng)4d后，棄去上清液，加Λ 200ul /孔新鮮配置的含0.2mg/ml M T Y的無血清培養(yǎng)液，37%繼續(xù)培養(yǎng)4h。4h后棄上清液，加入200ul /孔D M S0，振蕩混勻后，用酶標儀(波長為570nm，參比波長為450nm)測定OD值，按下式計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率:腫瘤細胞生長抑制率) = (1 —實驗組平均OD值/對照組平均OD值)xlOO %。
[0063]2.3
[0064] 集落形成法取對數(shù)生長期的T47D人乳腺癌細胞(ATCC)株和Ho_8910人卵巢癌細胞株，用胰蛋白酶消化成分散細胞懸液，用10% FBSRPMI1640培養(yǎng)液配成含500個/ ml細胞懸液，取35mm培養(yǎng)皿，4個為一組，陰性對照組每皿加2ml細胞懸液。實驗組加入一種抑制腫瘤纖維細胞增殖及膠原合成的中藥制劑lOOul，加入稀釋后的細胞懸液2ml，使本發(fā)明所述中藥制劑終濃度為20ug/ml，搖勻后置37°C 10% C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)7d，棄去培養(yǎng)液，先用瑞氏染液染色5min,然后用Giemsa s溶液與Sorensen磷酸緩沖液以1:9配成洗液,染色IOmin0流水沖洗、晾干，在20x的顯微鏡下計數(shù)含50個細胞以上的集落，重復4次。其中HEC-1-A人子宮內膜癌細胞株和Hela人子宮頸癌細胞株、用半固體軟瓊脂集落培養(yǎng)法，取對數(shù)生長期的HEC-1-A和Hela腫瘤細胞株，用15%FBSR PMI1640培養(yǎng)液配成含1000個/ml細胞懸液，置37°C預溫。取35mm培養(yǎng)皿，4個為一組，每個實驗組加入終濃度為20ug /ml的一種抑制腫瘤纖維細胞增殖及膠原合成的中藥制劑lOOul，對照組加入等體積的培養(yǎng)液，取在沸水中融化的5%瓊脂液1份，加入到9份37°C含15% FBSRP-M 11640培養(yǎng)液中，搖勻后迅速加入到培養(yǎng)皿中，每個皿lml，混勻后，置室溫使瓊脂凝固。取預溫的細胞懸液按每9.4mI加5%的
[0065]瓊脂液0.6ml的比例混勻，加到已鋪底層瓊脂的培養(yǎng)皿中，每皿1ml，置室溫使瓊脂凝固。蓋上培養(yǎng)皿蓋，置37°C 10% C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)7d，在16X的顯微鏡下計數(shù)直徑大于75um(50個細胞以上)的集落。按下式計算集落抑制率:集落抑制率(％) = (1 —克隆數(shù)/對照組克隆數(shù))X 100%。
[0066]2.4
[0067]統(tǒng)計學處理以SPSS10.0統(tǒng)計軟件分析，兩組問的均數(shù)比較采用t檢驗。
[0068]3
[0069]結果
[0070]3.1
[0071]MTr法測定本發(fā)明所述中藥制劑對4種腫瘤細胞株生長的抑制作用，結果見表1~4。
[0072]表1本發(fā)明所述中藥制劑對T47D人乳腺癌腫瘤細胞(ATCC)的抑制作用(x 土 s)
【權利要求】
1.一種抑制腫瘤細胞增殖的中藥組合物，由以下原料制成:桃仁6.5-8.0重量份、紅天葵5.0-8.5重量份、葡萄柚5.0-10.0重量份、甜橙5.5-8.5重量份、桑椹3.5-8.0重量份、杏鮑菇3.5-5.0重量份、廣棗5.0-10.0重量份、芒果4.0-6.0重量份、毛冬瓜5.0-8.0重量份、越橘6.0-8.0重量份、銀耳5.0-6.5重量份、龍眼5.5-8.5重量份。
2.根據(jù)權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，由以下原料制成:桃仁7-8.0重量份、紅天葵6.0-8.0重量份、葡萄柚6.0-9.0重量份、甜橙6.5-7.5重量份、桑椹4.5-7.0重量份、杏鮑菇4.0-5.0重量份、廣棗6.0-8.0重量份、芒果5.0-6.0重量份、毛冬瓜6.0-8.0重量份、越橘7.0-8.0重量份、銀耳5.0-6.0重量份、龍眼6.0-8.0重量份。
3.根據(jù)權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，由以下原料制成:桃仁6.5重量份、紅天葵5.0重量份、葡萄柚5.0重量份、甜橙5.5重量份、桑椹3.5重量份、杏鮑菇3.5重量份、廣棗5.0重量份、芒果4.0重量份、毛冬瓜5.0重量份、越橘6.0重量份、銀耳5.0重量份、龍眼5.5重量份。
4.根據(jù)權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，由以下原料制成:桃仁8.0重量份、紅天葵8.5重量份、葡萄柚10.0重量份、甜橙8.5重量份、桑椹8.0重量份、杏鮑菇5.0重量份、廣棗10.0重量份、芒果6.0重量份、毛冬瓜8.0重量份、越橘8.0重量份、銀耳6.5重量份、龍眼8.5重量份。
5.根據(jù)權利要求1-4任一項所述中藥組合物的制備方法，包括以下步驟: 粉碎所有組分，按比例加水20.0-50.0重量份，熱回流提取，減壓濃縮成稠膏，真空干燥，過100~200目篩粉碎成細粉備用。
6.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述熱回流提取時間為3.5小時。
7.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，所述減壓濃縮及真空干燥溫度為65°C。
8.中藥制劑，以權利要求1-4任一項所述中藥組合物為活性成分。
9.根據(jù)權利要求8所述的中藥制劑，其特征在于，其為口服液、片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊劑或凝膠劑。
10.權利要求1-4任一項所述中藥組合物在制備治療乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或宮頸癌的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K36/77GK103933188SQ201410151275
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月15日 優(yōu)先權日:2014年4月15日
【發(fā)明者】王貴林 申請人:王貴林