一種人參揮發(fā)油及其制備方法及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種人參揮發(fā)油及其制備方法及其應用，屬于制藥開發(fā)應用領(lǐng)域。人參揮發(fā)油是分別從人參的主根、須根、莖葉或花蕾中提取的人參主根揮發(fā)油、人參須根揮發(fā)油、人參莖葉揮發(fā)油、人參花蕾揮發(fā)油，以其為原料制得造內(nèi)熱模型工具藥及制作中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑的應用。本發(fā)明的有益效果是填補了中藥有效成分對中醫(yī)“上火”的生物學基礎(chǔ)研究的空白并擴展了其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應用范圍。
【專利說明】一種人參揮發(fā)油及其制備方法及其應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于制藥開發(fā)應用領(lǐng)域，涉及人參揮發(fā)油提取分離制備方法，以其為原料制得造內(nèi)熱模型工具藥及制作中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑的應用，及其在中醫(yī)預防和有效治療“上火”提供科學依據(jù)。
【背景技術(shù)】[0002]“上火”一詞是民間對身體出現(xiàn)較輕的異常熱象的俗稱，是一個常見的中醫(yī)學術(shù)語，意為人體陰陽失衡，內(nèi)火旺盛。通常在出現(xiàn)口干渴、口舌生瘡、牙齦腫痛、便秘等癥狀時，老百姓便稱為上火。但是檢索現(xiàn)代文獻，研究上火者寥寥無幾，在中醫(yī)古籍中亦少有明確的記載?！吧匣稹?，“上火”在日常生活中并不罕見，是一種亞健康狀態(tài)的表現(xiàn)。明確“上火”的辨證標準，研究“上火”的現(xiàn)代表征方法，揭示“上火”的生物學基礎(chǔ)，闡明清熱瀉火、滋陰降火等防治方法的作用機理，為提高中醫(yī)預防和有效治療“上火”提供科學依據(jù)。
[0003]人參為五加科Araliaceae植物Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根,性甘、微溫，味微苦，根、莖、葉、花、果全都可以入藥，藥用歷史悠久，2010版藥典收錄含有人參的方劑成藥30余個。人參中所含化學成分很多，主要活性成分是人參皂苷，還包括多糖、酚性化合物，揮發(fā)性倍半萜及聚乙炔醇類化合物、多肽及氨基酸、木脂素、生物堿、維生素、特殊氨基酸、微量元素、有機酸及其酯類、留醇類及酶等。具有抑制腫瘤，增強免疫力，益智，抗衰老，強心，降血壓和抗血栓血脂動脈硬化等藥理活性。但是人參是否具有俗稱“上火”的“熱癥”問題，始終是中醫(yī)藥界爭論的問題，也阻礙了人參的廣泛應用。人體里本身是有火的，如果沒有火那么生命也就停止了，也就是所謂的生命之火?！吧匣稹睂僦嗅t(yī)的理論范疇，“火”為外感六淫之一，火為陽邪，臨床表現(xiàn)除熱象外，口渴喜飲，咽干舌燥，大便秘結(jié)、小便短赤等津液傷耗的癥狀。因此，究竟人參是否具有“熱癥”作用，在多少服用劑量以內(nèi)是安全的，是急待解決的科學問題。但是，目前“熱癥”作用尚沒有直觀、靈敏、可靠的化學數(shù)據(jù)支持和監(jiān)測。代謝組學(metabonomics)是關(guān)于生物體系受刺激或擾動后其代謝產(chǎn)物-內(nèi)源性代謝物質(zhì)種類、數(shù)量及其變化規(guī)律的科學，它研究的是生物整體、系統(tǒng)或器官的內(nèi)源性代謝物質(zhì)的代謝途徑及其所受內(nèi)在或外在因素的影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供一種人參揮發(fā)油及其制備方法及其應用，目的是提供人參揮發(fā)油提取分離制備方法，和以人參揮發(fā)油為原料制得造內(nèi)熱模型工具藥和制作中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑的應用。
[0005]本發(fā)明采取的技術(shù)方案是，人參揮發(fā)油是分別從人參的主根、須根、莖葉或花蕾中提取的人參主根揮發(fā)油、人參須根揮發(fā)油、人參莖葉揮發(fā)油、人參花蕾揮發(fā)油。
[0006]所述的人參主根揮發(fā)油是由下列步驟得到的:
[0007](I)提取方法:將人參的主根粉碎至10~80目，加入該人參主根重量5~15倍的水，浸泡6~24h，之后進行第一次回流提取，時間為4~6h ;第二次將人參主根加入重量5~15倍的水中進行回流提取，時間為2~4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮；
[0008](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100~400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0009](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度達到2~8Pa ;制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C~-30°C、-100°C~-130°c，刮膜的轉(zhuǎn)速為180~300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0010]所述的人參須根揮發(fā)油是由下列步驟得到的:
[0011](I)提取方法:將人參的須根粉碎至10~80目，加入該人參須根重量5~15倍的水，浸泡6~24h，之后進行第一次回流提取，時間為4~6h ;第二次將人參須根加入重量5~15倍的水中進行回流提取，時間為2~4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮；
[0012](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100~400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0013](3)揮發(fā)油 進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度達到2~8Pa ;制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C~-30°C、-100°C~-130°c，刮膜的轉(zhuǎn)速為180~300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0014]所述的人參莖葉揮發(fā)油是由下列步驟得到的:
[0015](I)提取方法:將人參的莖葉粉碎至10~80目，加入該人參莖葉重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后進行第一次回流提取，時間為4~6h ;第二次將人參莖葉加入重量5~15倍的水中進行回流提取，時間為2~4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮；
[0016](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100~400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0017](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度達到2~8Pa ;制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C~-30°C、-100°C~-130°c，刮膜的轉(zhuǎn)速為180~300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0018]所述的人參花蕾揮發(fā)油是由下列步驟得到的:
[0019](I)提取方法:將人參的花蕾粉碎至10~80目，加入該人參花蕾重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后進行第一次回流提取，時間為4~6h ;第二次將人參花蕾加入重量5~15倍的水中進行回流提取，時間為2~4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮；
[0020](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100~400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0021](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度達到2~8Pa ;制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C~-30°C、-100°C~-130°c，刮膜的轉(zhuǎn)速為180~300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0022]本發(fā)明還包括人參主根揮發(fā)油、人參須根揮發(fā)油、人參莖葉揮發(fā)油或人參花蕾揮發(fā)油的制備方法。
[0023]本發(fā)明以所述人參揮發(fā)油為原料制得造內(nèi)熱模型工具藥和制作中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑的應用。
[0024]本發(fā)明以所述人參主根揮發(fā)油為原料制得造內(nèi)熱模型工具藥和制作中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑的應用。
[0025]本發(fā)明以所述人參須根揮發(fā)油為原料制得造內(nèi)熱模型工具藥和制作中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑的應用。
[0026]本發(fā)明以所述人參莖葉揮發(fā)油為原料制得造內(nèi)熱模型工具藥和制作中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑的應用。
[0027]本發(fā)明以所述人參花蕾揮發(fā)油為原料制得造內(nèi)熱模型工具藥和制作中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑的應用。
[0028]人參揮發(fā)油是分別從植物人參的主根、須根、莖葉、花蕾中提取獲得的，揮發(fā)油中各種成分之間的含量比例可以與天然植物中的含量比例一致，也可以與天然植物中的含量比例不盡一致。 [0029]本發(fā)明用代謝組學的研究方法，為最終闡明人參揮發(fā)性部分是否具有“熱癥”的作用，尋找熱證真正的機制，奠定一定的生物學基礎(chǔ)。
[0030]本發(fā)明還提供人參揮發(fā)油為中醫(yī)預防和有效治療“上火”提供了科學依據(jù)。
[0031 ] 本發(fā)明的有益效果是:以人參揮發(fā)油為原料制得造內(nèi)熱模型工具藥和制作中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑的應用。填補了中藥有效成分對中醫(yī)“上火”的生物學基礎(chǔ)研究的空白并擴展了其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應用范圍。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0032]圖1是正常對照組的大鼠外觀圖；
[0033]圖2是人參主根揮發(fā)油鼻飼組的大鼠外觀圖；
[0034]圖3是人參須根揮發(fā)油鼻飼組的大鼠外觀圖；
[0035]圖4是人參莖葉揮發(fā)油鼻飼組的大鼠外觀圖；
[0036]圖5是人參花蕾揮發(fā)油鼻飼組的大鼠外觀圖。
【具體實施方式】
[0037]實施例1:人參主根揮發(fā)油及其提取分離制備
[0038](I)提取方法:將人參的主根Ikg粉碎至10目，加入該人參主根重量5倍的水，浸泡6h，之后進行第一次回流提取，時間為4h ;第二次將人參主根加入重量5倍的水中進行回流提取，時間為2h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積IL ；
[0039](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；[0040](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度達到2Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C、-100°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為180r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0041]實施例2人參主根揮發(fā)油及其提取分離制備
[0042](I)提取方法:將人參的主根2kg粉碎至40目，加入該人參主根重量10倍的水，浸泡15h，之后進行第一次回流提取，時間為5h ;第二次將人參主根加入重量10倍的水中進行回流提取，時間為3h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積2L ；
[0043](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的200目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；[0044](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度達到5Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-20°C、_115°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為240r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0045]實施例3人參主根揮發(fā)油及其提取分離制備
[0046](I)提取方法:將人參的主根3kg粉碎至80目，加入該人參主根重量15倍的水，浸泡24h，之后進行第一次回流提取，時間為6h ;第二次將人參主根加入重量15倍的水中進行回流提取，時間為4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積3L ；
[0047](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0048](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度達到8Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-30°C、-130°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0049]氣-質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)檢測,其中Ct _人參稀、Ct _蛇麻稀、β _薇稀含量較聞，Ct _人參烯在人參主根揮發(fā)油中為6.5~6.9% ; α -蛇麻烯在人參主根揮發(fā)油中含量為3.7~
4.1% 菔烯在人參主根揮發(fā)油中含量為1.9~2.3%。
[0050]實施例4:人參須根揮發(fā)油及其提取分離制備
[0051](I)提取方法:將人參的須根Ikg粉碎至10目，加入該人參須根重量5倍的水，浸泡6h，之后進行第一次回流提取，時間為4h ;第二次將人參須根加入重量5倍的水中進行回流提取，時間為2h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積IL ；
[0052](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0053](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度達到2Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C、-100°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為180r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0054]實施例5人參須根揮發(fā)油及其提取分離制備
[0055](I)提取方法:將人參的須根2kg粉碎至40目，加入該人參須根重量10倍的水，浸泡15h，之后進行第一次回流提取，時間為5h ;第二次將人參須根加入重量10倍的水中進行回流提取，時間為3h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積2L ；
[0056](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的200目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0057](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度達到5Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-20°C、_115°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為240r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0058]實施例6人參須根揮發(fā)油及其提取分離制備
[0059](I)提取方法:將人參的須根3kg粉碎至80目，加入該人參須根重量15倍的水，浸泡24h，之后進行第一次回流提取，時間為6h ;第二次將人參須根加入重量15倍的水中進行回流提取，時間為4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積3L ；
[0060](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0061](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度達到8Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-30°C、-130°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0062]經(jīng)氣-質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)檢測，其中Ct _人參稀、ct_蛇麻稀、β_薇稀含量較聞，α -人參烯在人參須根揮發(fā)油中含量為7.5~8.1% ; α -蛇麻烯在人參須根揮發(fā)油中含量為4.0~4.5% ; β -菔烯在人參須根揮發(fā)油中含量為2.4~2.8%。
[0063]實施例7:人參莖葉揮發(fā)油及其提取分離制備
[0064](I)提取方法:將人參的莖葉Ikg粉碎至10目，加入該人參莖葉重量5倍的水，浸泡6h，之后進行第一次回流提取，時間為4h ;第二次將人參莖葉加入重量5倍的水中進行回流提取，時間為2h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積IL ；
[0065](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0066](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、11 (TC，真空泵抽真空，使真空度達到2Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C、-100°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為180r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0067]實施例8人參莖葉揮發(fā)油及其提取分離制備
[0068](I)提取方法:將人參的莖葉2kg粉碎至40目，加入該人參莖葉重量10倍的水，浸泡15h，之后進行第一次回流提取，時間為5h ;第二次將人參莖葉加入重量10倍的水中進行回流提取，時間為3h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積2L ；
[0069](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的200目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0070] (3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、11 (TC，真空泵抽真空，使真空度達到5Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-20°C、-115°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為240r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0071]實施例9人參莖葉揮發(fā)油及其提取分離制備
[0072](I)提取方法:將人參的莖葉3kg粉碎至80目，加入該人參莖葉重量15倍的水，浸泡24h，之后進行第一次回流提取，時間為6h ;第二次將人參莖葉加入重量15倍的水中進行回流提取，時間為4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積3L ；
[0073](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0074](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、11 (TC，真空泵抽真空，使真空度達到8Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-30°C、-130°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0075]經(jīng)氣-質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)檢測，其中ct _人參稀、ct_蛇麻稀、β_薇稀含量較聞，α -人參烯在人參莖葉揮發(fā)油中含量為8.8~9.3% ; α -蛇麻烯在人參莖葉揮發(fā)油中含量為4.8~5.3% ; β -菔烯在人參莖葉揮發(fā)油中含量為3.8~4.3%。
[0076]實施例10:人參花蕾揮發(fā)油及其提取分離制備
[0077](I)提取方法:將人參的花蕾Ikg粉碎至10目，加入該人參花蕾重量5倍的水，浸泡6h，之后進行第一次回流提取，時間為4h ;第二次將人參花蕾加入重量5倍的水中進行回流提取，時間為2h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積IL ；
[0078](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0079](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度達到2Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C、-100°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為180r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0080]實施例11人參花蕾揮發(fā)油及其提取分離制備
[0081](I)提取方法:將人參的花蕾2kg粉碎至40目，加入該人參花蕾重量10倍的水，浸泡15h，之后進行第一次回流提取，時間為5h ;第二次將人參花蕾加入重量10倍的水中進行回流提取，時間為3h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積2L ；
[0082](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的200目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0083](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度達到5Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-20°C、_115°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為240r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0084]實施例12人參花蕾揮發(fā)油及其提取分離制備
[0085](I)提取方法:將人參的花蕾3kg粉碎至80目，加入該人參花蕾重量15倍的水，浸泡24h，之后進行第一次回流提取，時間為6h ;第二次將人參花蕾加入重量15倍的水中進行回流提取，時間為4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮，得濃縮液體積3L ；
[0086](2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸
發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)；
[0087](3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度達到8Pa ；制冷裝置，使冷井溫度降到-30°C、-130°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
[0088]經(jīng)氣-質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)檢測，其中Ct _人參稀、ct_蛇麻稀、β_薇稀含量較聞，α -人參烯在人參花蕾揮發(fā)油中含量為8.2~8.7% ; α -蛇麻烯在人參花蕾揮發(fā)油中含量為4.0~4.6%;β -菔烯在人參花蕾揮發(fā)油中含量為3.3~3.8 %。
[0089]本發(fā)明提供的人參揮發(fā)油中3種含量較高的化合物，不論各成分之間的含量如何，只要是從植物人參中提取，并且含量在上述定義范圍內(nèi)，則該有效部位就在本發(fā)明范圍內(nèi)。
[0090]實驗例人參揮發(fā)油制作內(nèi)熱模型大鼠試驗的研究
[0091]I 材料
[0092]1.1動物Wistar大鼠，雌性，180~220g ;購自吉林大學實驗動物中心；動物等級:II級；合格證編號為SCXK-(吉)2008-0005。
[0093]1.2飼料實驗動物配合顆粒飼料，原料組成:玉米、魚粉、豆柏、碳酸氫鈣、面粉、石粉等組成。生產(chǎn)商:長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責任公司。生產(chǎn)許可證:SCXK-(吉)2003-0008。
[0094]1.3實驗環(huán)境清潔級動物室，許可證號:SYXK(吉)2010-0006，動物室溫度:19~23 °C，相對濕度45~65%。
[0095]1.4藥物人參揮發(fā)油混懸液:取Iml人參主根揮發(fā)油，加入30ml純凈水，超聲10分鐘混懸均勻，批號:20121116。同樣方法制得人參須根揮發(fā)油混懸液、人參莖葉揮發(fā)油混懸液、人參花蕾揮發(fā)油混懸液，批號分別為20121117、20121118、20121119。以上受試藥物均由
吉林省中醫(yī)藥科學院新藥中心提供。
[0096]1.5儀器JJ200型精密電子天平，T-2000型電子天平，均為常熟雙杰測試儀器廠制造。血常規(guī)儀器廠家:迪瑞CS-600B。
[0097]2方法和結(jié)果
[0098]2.1試驗方法
[0099]雌性大鼠50只，隨機分成五組，第一組給正常對照組，第二組~第五組分別為人參主根揮發(fā)油鼻飼組、人參須根揮發(fā)油鼻飼組、人參莖葉揮發(fā)油鼻飼組、人參花蕾揮發(fā)油鼻飼組。對照組大鼠灌胃給予10ml/kg蒸餾水，每天一次。第二組~第五組鼻飼大鼠分別鼻滴給予相對應的人參揮發(fā)油混懸液0.2ml/只，一天鼻滴給予10次，每次鼻滴給藥間隔時間為30分鐘。每日觀察大鼠外觀狀態(tài)、糞便等情況。連續(xù)給藥五天，末次給藥后大鼠禁食不禁水，35%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，腹主動脈采血，取血分別放入藍色血凝檢查采血管、粉色血常規(guī)檢查采血管做相關(guān)指標的檢查。同時摘取大鼠唾液腺、口腔黏膜、鼻粘膜，做病理組織學檢查。
[0100]2.2實驗結(jié)果
[0101]2.2.1對大鼠一般外觀的影響
[0102]各人參揮發(fā)油鼻飼大鼠在鼻滴給藥過程中，各組中均有8~9只大鼠鼻子出現(xiàn)了血性分泌物的情況及流鼻血現(xiàn)象。各組大鼠外觀變化，見圖1~圖5。
[0103]結(jié)論:人參揮發(fā)油能引起大鼠流鼻血，但是并未造成大鼠外觀損傷死亡，可以用其為原料制得造內(nèi)熱模型工具藥以及制作中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑。
[0104]2.2.2對大鼠血常規(guī)的影響
[0105]結(jié)果表明:揮發(fā)油鼻飼組大鼠白細胞總數(shù)(WBC)稍高于對照組，與對照組比較有明顯差異；揮發(fā)油鼻飼組大鼠紅細胞平均體積(MCV)高于對照組，與對照組比較有顯著差異；揮發(fā)油鼻飼組血紅蛋白濃度(MCHC)稍高于對照組，與對照組比較有明顯差異；揮發(fā)油鼻飼組大鼠紅細胞分布寬度變異系數(shù)(RDW-CV)高于對照組，與對照組比較有明顯差異；揮發(fā)油鼻飼組大鼠血小板平均體積(MPV)高于對照組，與對照組比較有明顯差異；揮發(fā)油鼻飼組大鼠血小板壓(PCT)、血小板大細胞比率(P-LCR)稍高于對照組，與對照組比較有明顯差異。對大鼠血常規(guī)的影響見表1_1，1_2，1_3。
[0106]表1-1人參揮發(fā)油及提取物對大鼠血常規(guī)的影響
【權(quán)利要求】
1.一種人參揮發(fā)油，其特征在于所述人參揮發(fā)油是分別從人參的主根、須根、莖葉或花蕾中提取的人參主根揮發(fā)油、人參須根揮發(fā)油、人參莖葉揮發(fā)油、人參花蕾揮發(fā)油。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參揮發(fā)油，其特征在于所述人參主根揮發(fā)油是由下列步驟得到的: (1)提取方法:將人參的主根粉碎至10~80目，加入該人參主根重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后進行第一次回流提取，時間為4~6h ;第二次將人參主根加入重量5~.15倍的水中進行回流提取，時間為2~4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮； (2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100~400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)； (3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至.50°c、60°c、70°c、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度達至Ij 2~8Pa ;制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C~-30°C、-100°C~_130°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為180~300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參揮發(fā)油，其特征在于所述的人參須根揮發(fā)油是由下列步驟得到的: (1)提取方法:將人參的須根粉碎至10~80目，加入該人參須根重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后進行第一次回流提取，時間為4~6h ;第二次將人參須根加入重量5~.15倍的水中進行回流提取，時間為2~4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮； (2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100~400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)； (3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至.50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度達至Ij 2~8Pa ;制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C~-30°C、-100°C~_130°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為180~300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參揮發(fā)油，其特征在于所述的人參莖葉揮發(fā)油是由下列步驟得到的: (1)提取方法:將人參的莖葉粉碎至10~80目，加入該人參莖葉重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后進行第一次回流提取，時間為4~6h ;第二次將人參莖葉加入重量5~.15倍的水中進行回流提取，時間為2~4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮； (2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100~400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)； (3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至.50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度達至Ij 2~8Pa ;制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C~-30°C、-100°C~_130°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為180~300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參揮發(fā)油，其特征在于所述的人參花蕾揮發(fā)油是由下列步驟得到的: (1)提取方法:將人參的花蕾粉碎至10~80目，加入該人參花蕾重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后進行第一次回流提取，時間為4~6h ;第二次將人參花蕾加入重量5~15倍的水中進行回流提取，時間為2~4h，合并提取液，濾過，濾液回收溶劑后濃縮； (2)純化:將該濃縮液裝于已預先處理好的100~400目硅膠柱中，按照石油醚與乙酸乙酯比例為15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脫，收集洗脫液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上低溫蒸循，使溶劑完全揮發(fā)； (3)揮發(fā)油進行分子蒸餾分離:將步驟(2)所得送入蒸發(fā)器中，蒸館柱內(nèi)溫度分別調(diào)至50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度達至Ij 2~8Pa ;制冷裝置，使冷井溫度降到-10°C~-30°C、-100°C~_130°C，刮膜的轉(zhuǎn)速為180~300r/min，收集餾出物及蒸出物，精制。
6.如權(quán)利要求1所述的人參揮發(fā)油的制備方法，分別包括人參主根揮發(fā)油、人參須根揮發(fā)油、人參莖葉揮發(fā)油或人參花蕾揮發(fā)油的制備方法。
7.如權(quán)利要求1所述的人參揮發(fā)油在制備造內(nèi)熱模型工具藥中的應用。
8.如權(quán)利要求1所述的人參揮發(fā)油在制備中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑中的應用。
9.如權(quán)利要求1所述的人參揮發(fā)油在制備造內(nèi)熱模型工具藥中的應用，所述人參揮發(fā)油分別包括:人參主根揮發(fā)油、人參須根揮發(fā)油、人參莖葉揮發(fā)油或人參花蕾揮發(fā)油。
10.如權(quán)利要求1所述 的人參揮發(fā)油在制備中醫(yī)內(nèi)熱模型試劑中的應用，所述人參揮發(fā)油分別包括:人參主根揮發(fā)油、人參須根揮發(fā)油、人參莖葉揮發(fā)油或人參花蕾揮發(fā)油。
【文檔編號】A61K133/00GK103893231SQ201410166364
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年4月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月20日
【發(fā)明者】王隸書, 陳昕, 趙大慶, 程東巖, 高軍, 邸琳, 王超楠 申請人:王隸書