一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)療評價、檢測【技術領域】，具體涉及一種用于篩選光動力治療視網(wǎng)膜黃斑變性藥物的動物模型。該動物模型是雄性雞的雞冠，由于雞冠的組織病理結構特點與視網(wǎng)膜黃斑變性組織病理結構特點十分相似，故可用于光動力治療視網(wǎng)膜黃斑變性藥物的篩選，具有重要的實用價值和理論研究價值。
【專利說明】一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)療評價、檢測【技術領域】，具體涉及一種用于篩選光動力治療視網(wǎng)膜黃斑變性藥物的動物模型。
【背景技術】
[0002]視網(wǎng)膜黃斑變性(Retinal Macular Degeneration)是視網(wǎng)膜色素上皮細胞變性造成的一種不可逆性視力下降或喪失的疾病(Pradeep S.Prasad at al., Maturitas,66(1):46-50，2010)。主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜色素上皮細胞對視細胞外界盤膜吞噬消化功能下降，使未被消化的盤膜殘余小體潴留于基底部細胞原槳中，并向細胞外排出，形成玻璃膜疣，因此繼發(fā)病理改變后，導致黃斑變性發(fā)生。本病大多發(fā)生于45歲以上，其患病率隨年齡增長而增高，是一種嚴重威脅老年人視功能的眼底病變(Bressler匪at al., Surv0phthalmol32(6):375-413,1988)。
[0003]視網(wǎng)膜黃斑變性是國際眼科界公認的最難治療的眼病之一。分為年齡相關性黃斑變性和少年黃斑變性兩種，尤其以滲出性年齡相關性黃斑變性最為嚴重，是當前老年人致盲的重要疾病，發(fā)生原因主要是異常的新生血管在黃斑部的視網(wǎng)膜下生長，稱為脈絡膜新生血管(Choroidal Neovascularization, CNV),引起視網(wǎng)膜出血、水腫及視網(wǎng)膜組織的破壞，最終導致癥痕形成，從而視力喪失(Ursula Schmidt-Erfurth at al., Progress inRetinal and Eye Research.28(2) =145-154,2009) ?其治療方法主要包括激光光凝術治療、光動力治療(Photodynamic Therapy，PDT)、經(jīng)瞳孔溫熱療法、藥物治療、基因治療和手術治療等。目前為止各種治療手段都存在一定的局限性，但其中PDT被認為是較安全、有效的方法(Ursula Schmidt-Erfurth and Tayyaba Hasan, Current Research, 45 (3):195-214,2000)。
[0004]目前，CNV動物模型的建立方法主要有激光誘導CNV模型、血管生長因子誘導CNV模型及利用基因方法誘導CNV模型等(Mark E.Pennesi at al., Molecular Aspects ofMedicine33:487-509, 2012)。由于這些方法存在對操作技術要求高、CNV生成率低及生長周期長、成本高等缺點，嚴重制約了光動力抗視網(wǎng)膜黃斑變性新藥的研究開發(fā)，急需一種操作簡便、周期短、成本低、重現(xiàn)性好的視網(wǎng)膜黃斑變性動物模型，來彌補這些方法的不足。
[0005] CNV 又稱視網(wǎng)膜下新生血管(Subretinal Neovaseularization, SRNV),起源于脈絡膜血管，位于視網(wǎng)膜色素上皮間隙或神經(jīng)上皮下間隙。CNV呈一膜樣結構，光鏡下新生血管主要由單層色素上皮、上面覆蓋的纖維基質(主要是纖維組織和膠原)和散在的一些血管組成。CNV膜上的細胞成分主要有色素上皮細胞、類成纖維細胞及一些血管內皮細胞(Green WR at al., Thel992Lorenz E.Zimmerman Lecture.0phthalmology,100(10):1519-1535)。雞冠在60年代末已被國外學者用作毛細血管瘤動物模型(A Orenstein aial., Lasers Surg Med, 10(4):334-343,1990)。雞冠皮膚由表皮層、真皮乳頭層、乳頭下真皮淺層和真皮深層組成。表皮層含有角質層和5~6層細胞，包括基底細胞層；真皮乳頭層含有大量擴張的毛細管網(wǎng)，管壁由單層血管內皮細胞構成，血運豐富；乳頭下真皮淺層呈網(wǎng)狀，較疏松，有粘液，間有少量微血管；真皮深層含有較粗大的膠原纖維、小動脈和小靜脈血管，及少量脂肪細胞。這些特點與CNV的組織病理結構特點十分相似，因此，在理論上具有將雞冠作為光動力治療視網(wǎng)膜黃斑變性藥物篩選模型的基礎。

【發(fā)明內容】

[0006]針對上述現(xiàn)有建立視網(wǎng)膜黃斑變性動物模型方法的不足，本發(fā)明提供了一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型，彌補了目前常用模型存在的對操作技術要求高、CNV生成率低及生長周期長、成本高等不足，可用于光動力治療視網(wǎng)膜黃斑變性藥物的篩選。
[0007]所述的一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型是:雄性雞的雞冠。
[0008]所述的雄性雞為:萊亨雞、羅曼雞。
[0009]所述的視網(wǎng)膜黃斑變性為:年齡相關性視網(wǎng)膜黃斑變性。
[0010]所述的一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型，可用于光動力治療視網(wǎng)膜黃斑變性藥物的篩選。
[0011]本發(fā)明的一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型,在使用維替泊芬(Verteporfin)(迄今為止國際上用于年齡相關性視網(wǎng)膜黃斑變性治療的唯一光敏劑新藥)后，其對雞冠的PDT效應與對傳統(tǒng)方法誘導的CNV模型的療效是相一致的。表明該模型可較好地用于篩選光動力治療視網(wǎng)膜黃斑變性的藥物，且具有天然形成、周期短、重現(xiàn)性好、成本低、對操作技術要求低等優(yōu)點。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1 Vert印orfin、ZWL3對雞冠的PDT效應對比圖
[0013]圖2 Verteporfin-PDT, ZWL3-PDT 治療 CNV 前后療效對比圖
【具體實施方式】
[0014][實施例1]
[0015]Verteporfin對雞冠的PDT效應與Verteporfin對氪激光誘導的CNV模型療效的對比
[0016]1.Verteporfin對雞冠的PDT效應的觀察
[0017]受試動物:萊亨雞，雄性，24只，隨機分為4組(空白對照組、單純Verteporfin組，單純激光組，Verteporfin-PDT組),每組6只。
[0018]受試藥物:Verteporfin
[0019]實驗方法:
[0020]空白對照組不作任何處理；
[0021]單純Verteporfin 組，Verteporfin 以劑量 0.585mg/kg (相當于人 0.25mg/kg)翅根靜脈推注，不照光。
[0022]單純激光組，以速眠新(0.2ml/kg)麻醉，標記照光區(qū)，固定雞冠，直接照光。
[0023]Verteporfin-PDT組，以速眠新(0.2ml/kg)麻醉,標記照光區(qū)，固定雞冠,避光條件下以0.585mg/kg(相當于人0.25mg/kg)翅根靜脈推注Verteporfin,注射完畢即刻照光。
[0024] 單純激光組和Verkporfin-PDT組均用630nm激光治療儀進行照射，能量密度為90J/cm2，光斑直徑為1.5cm，不照光處雙層紅黑布適當遮蓋。
[0025]效應觀察和評價:
[0026]所有實驗組于第Id、第3d、第7d、第14d，第28d進行肉眼觀察并照相，Verteporfin-PDT組根據(jù)肉眼觀察結果評定PDT效應等級。
[0027]所有實驗組于第3d在雞冠照射區(qū)域中心取材，做病理切片行HE染色。P組根據(jù)病理切片光鏡下評定PDT效應等級。
[0028]PDT效應分級標準:
[0029]大體PDT效應分級標準見表1，組織病理PDT效應分級標準見表2.[0030]表1PDT效應分級(大體)
[0031]
【權利要求】
1.一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型，其特征在于:動物模型為雄性雞的雞冠。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型，其特征在于:所述的雄性雞是萊亨雞。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型，其特征在于:所述的雄性雞是羅曼雞。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型，其特征在于:所述的視網(wǎng)膜黃斑變性是年齡相關性視網(wǎng)膜黃斑變性。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種視網(wǎng)膜黃斑變性的動物模型，其特征在于:可用于篩選光動力治療視網(wǎng)膜黃斑變性的藥物。
【文檔編號】A61K49/00GK103948925SQ201410192630
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月8日 優(yōu)先權日:2014年5月8日
【發(fā)明者】陳志龍, 張莉君, 陳聃燁, 嚴懿嘉 申請人:陳志龍