一種抗菌肽的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種抗菌肽，該抗菌肽的序列為L(zhǎng)ys-Trp-Arg-Arg-Lys-Trp-Lys-Arg-Arg-Cys(SEQ?ID?NO：1)。本發(fā)明所述的抗菌肽適宜制成水溶液的殺菌劑，該殺菌劑具有廣譜殺菌作用，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌(金葡菌)或綠膿桿菌均有較強(qiáng)的殺滅作用。
【專利說明】一種抗菌肽
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及含有5~11個(gè)氨基酸的直鏈肽，該肽為一種細(xì)菌抗菌肽。
【背景技術(shù)】
[0002]人們對(duì)于健康的追求程度隨著人們生活質(zhì)量的改善而提高。但是目前工業(yè)化生產(chǎn)和社會(huì)發(fā)展所導(dǎo)致的環(huán)境污染已經(jīng)嚴(yán)重影響到人們的健康生活，其中細(xì)菌滋生是一個(gè)重要的原因。這些細(xì)菌一方面本身可以對(duì)人體產(chǎn)生極大的危害，導(dǎo)致感染和疾??；另一方面會(huì)成為載體，傳播病毒。同時(shí)，細(xì)菌也無處不在，特別是在室內(nèi)、車內(nèi)這些環(huán)境相對(duì)封閉、以及公共場(chǎng)所這些環(huán)境相對(duì)較為復(fù)雜的地方，細(xì)菌更易傳播并導(dǎo)致疾病。傳統(tǒng)的殺菌劑具有一定的局限性，如乙醇對(duì)皮膚刺激性大；而廣泛應(yīng)用的抗生素則會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌的抗藥性，產(chǎn)生超級(jí)細(xì)菌，是人類面臨困境。因此，研發(fā)并生產(chǎn)新型殺菌物質(zhì)對(duì)人們健康水平和生活質(zhì)量的提高具有重要意義。
[0003]抗菌肽的是科學(xué)家首先在昆蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一類具有抗菌活性的肽物質(zhì)，由氨基酸聚合而成。其因具有高抗菌活性、低毒性、抗菌/抗病毒/抗寄生蟲、耐藥性發(fā)生概率小、代謝產(chǎn)物安全無害等特點(diǎn)，而受到研究者們的關(guān)注。但是由于其成本高，且抗菌性不易調(diào)控，而在一定程度上應(yīng)用受到了限制。
[0004]近年來，一些小分子抗菌肽受到了研究者們的關(guān)注，如Lys-Arg-Trp-Trp-Lys-Trp-Trp-Arg-Arg，Lys-Trp-Lys-Trp-Trp-Lys-Trp-Lys-Lys-Cys, Arg-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-Arg-Ar g-Cys 等(Hilpert K et al.Chemistry&Biology.2009 ; 16:58-69)。據(jù)上述文獻(xiàn)報(bào)道，這些小分子抗菌肽在具有一定抗菌性的同時(shí)，由于其分子量小，還具有合成成本低，不存在免疫反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)。但是，上述的小分子肽的PH穩(wěn)定性差，殺菌效果不
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種抗菌肽，該抗菌肽具有pH穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)。
[0006]一種抗菌肽,該抗菌肽的序列為 Lys-Trp-Arg-Arg-Lys-Trp-Lys-Arg-Arg-Cys (SEQ ID NO: I)ο
[0007]上述抗菌肽可按SEQ ID NO:1所示序列采用多肽合成儀合成得到。
[0008]由于本發(fā)明所述的抗菌肽的pH穩(wěn)定性好，因此適宜制成水溶液的殺菌劑，該殺菌劑每升含有SEQ ID NO:1所示序列的抗菌肽3~7 μ mol。
[0009]本發(fā)明所述的殺菌劑每升還含有乙醇80~120mL和甘油10mL。其中，所述的乙醇既有消毒作用又可增加作用在皮膚上清涼感覺；所述的甘油可對(duì)皮膚進(jìn)行滋潤(rùn)。
[0010]上述殺菌劑由以下方法制備成:
[0011]取SEQ ID NO:1所示序列的抗菌肽溶于500mL去離子水中后，加入乙醇和甘油攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5分鐘，即得殺菌劑。[0012]本發(fā)明所述的抗菌肽具有廣譜殺菌作用，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌(金葡菌)或綠膿桿菌均有較強(qiáng)的殺滅作用。本發(fā)明所述的抗菌肽還具有安全無刺激的優(yōu)點(diǎn)，相比于乙醇，本發(fā)明所述抗菌肽所制成的殺菌劑對(duì)細(xì)胞的刺激性小。
【具體實(shí)施方式】
[0013]下述實(shí)施例1~4所用抗菌肽委托上海吉爾多肽有限公司按SEQ ID NO:1~4所示序列合成。
[0014]實(shí)施例1
[0015]1、殺菌劑樣品的制備
[0016]取3μΜ SEQ ID NO:1所示序列的抗菌肽溶于500mL去離子水中后，加入乙醇120mL和甘油IOmL攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5分鐘即得。
[0017]2、殺菌劑對(duì)照品及其制備
[0018]對(duì)照品1:取 3 μ M序列為 Lys-Arg-Trp-Trp-Lys-Trp-Trp-Arg-Arg (SEQ ID NO:2)的抗菌肽溶于500mL去離子水中后，加入乙醇120mL和甘油IOmL攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5分鐘即得。
[0019]對(duì)照品2:取 3μΜ 序列為 Lys-Trp-Lys-Trp-Trp-Lys-Trp-Lys-Lys-Cys (SEQ IDNO:3)抗菌肽溶于500mL去離子水中后，加入乙醇IOOmL和甘油IOmL攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5 分鐘即得。
[0020]對(duì)照品3:取 3 μ M 序列為 Arg-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-Arg-Arg-Cys (SEQ IDNO:4)抗菌肽溶于500mL去離子水中后，加入乙醇120mL和甘油IOmL攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5分鐘即得。
[0021 ] 對(duì)照品4:體積濃度為75 %的醫(yī)用乙醇。
[0022]3、細(xì)菌滅活率檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
[0023]取ImL樣品和對(duì)照品I~4分別加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至3后，每一種殺菌劑中分別加入大腸桿菌、金黃色葡萄球菌(金葡菌)及綠膿桿菌懸液，配成細(xì)菌濃度為109cfu/mL的菌液。在5s和Imin后，取出菌液，梯度稀釋后涂瓊脂板計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)中以ImL去離子水溶液為空白組，進(jìn)行相同處理，并依照其中的細(xì)菌存活數(shù)計(jì)算各組的細(xì)菌滅活率。結(jié)果如下表1和2所示。
[0024]表1 5s內(nèi)的細(xì)菌滅活率)
[0025]

I對(duì)照品I I對(duì)照品2 I對(duì)照品3 I對(duì)照品4~
大腸桿菌 35.31 28.12 17.12 20.23 30.12
金葡菌~ 38.12 30.13 15.25 16.13 28.43
綠膿桿菌 38.84 27.12 13.22 16.09 34.52
[0026]表2 Imin內(nèi)的細(xì)菌滅活率
[0027]
【權(quán)利要求】
1.一種抗菌肽，該抗菌肽的序列為 Lys-Trp-Arg-Arg-Lys-Trp-Lys-Arg-Arg-Cys (SEQID NO:1)。
2.一種殺菌劑，該殺菌劑為水溶液，該水溶液中每升含有權(quán)利要求1所述的抗菌肽3~7 μ mol ο
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種殺菌劑，其特征在于，所述的殺菌劑每升還含有乙醇80~120mL和甘油IOmL0
4.一種制備權(quán)利要求3所述的殺菌劑的方法，該方法由以下步驟組成:取序列為L(zhǎng)ys-Trp-Arg-Arg-Lys-Trp-Lys-Arg-Arg-Cys (SEQ ID NO:1)的抗菌肽溶于 500mL 去離子水中后，加入乙醇和甘油攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5分鐘，即得殺菌劑。
【文檔編號(hào)】A61K38/08GK103951732SQ201410193905
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年5月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月8日
【發(fā)明者】胡云睿, 王琳, 張明燈, 林成燊, 張偉 申請(qǐng)人:南方醫(yī)科大學(xué)