新酚嗪類抗腫瘤抗生素及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明是一種新的酚嗪類抗腫瘤抗生素，其特點(diǎn)是通過發(fā)酵培養(yǎng)保藏登記號為CCTCCNo.M2013727的一株鏈霉菌菌株（Streptomycessp.）YIMR4，再對其發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，得到分子式為C25H16N4O4，分子量為436的一種新的抗腫瘤抗生素，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的抗腫瘤抗生素對人胃癌及人宮頸癌腫瘤細(xì)胞有抑制作用。
【專利說明】新酚嗪類抗腫瘤抗生素及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種新的酚嗪類抗腫瘤抗生素及其制備方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]不斷出現(xiàn)的新疾病及病原菌對抗生素耐藥性的增強(qiáng)迫使人們必須加快新藥的研發(fā)，從微生物中發(fā)現(xiàn)高效低毒的天然源新藥先導(dǎo)化合物是近年來研究的熱點(diǎn)之一。由于目前對普通土壤環(huán)境微生物的研究已有較長歷史，從中發(fā)現(xiàn)新穎結(jié)構(gòu)活性化合物的難度越來越大，為了尋找新抗生素先導(dǎo)化合物，人們已將目光轉(zhuǎn)向棲息于特殊生境的微生物。
[0003]廣泛 存在于植物體內(nèi)的內(nèi)生菌由于長期與其宿主植物的共同進(jìn)化，擁有特殊的代謝途徑，產(chǎn)生活性新化合物的幾率較大，是一類具有較好開發(fā)潛力的新微生物資源。云南西雙版納擁有豐富的藥用植物資源，其中蘊(yùn)藏著大量的植物內(nèi)生菌，開展從中尋找活性新先導(dǎo)化合物的研究，為后續(xù)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新藥研發(fā)奠定基礎(chǔ)具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種不同于已知酚嗪類抗生素結(jié)構(gòu)的新抗腫瘤抗生素，它對人胃癌及人宮頸癌腫瘤細(xì)胞有抑制作用。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素，本抗生素的產(chǎn)生菌株已保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心；地址:中國.武漢；保藏日期:2013年12月29日；保藏登記入冊編號為CCTCCN0.M2013727 ;通過培養(yǎng)一株分離自云南西雙版納藥用植物組織內(nèi)的鏈霉菌菌株{Streptomycess\>.)YIM R4,再對其發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,得到本抗腫瘤抗生素；本抗腫
瘤抗生素是分子式為C25H16N4O4，分子量為436的化合物，該化合物具有如下結(jié)構(gòu):
【權(quán)利要求】
1.一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是該方法包括如下步驟: (1)菌種液體種子培養(yǎng): ①液體種子培養(yǎng)基的制備:取酵母膏2.0-6.0g、葡萄糖2.0-6.0g、麥芽膏3.0-7.0g、復(fù)合維生素2.5~4.5ml、加水至1000ml，pH 7.2，120° C滅菌30min ;②發(fā)酵:將菌株YIM R4接種到滅菌后的培養(yǎng)基中，28° C下于轉(zhuǎn)速為190-250轉(zhuǎn)/分鐘的搖床上搖瓶發(fā)酵2天； (2)菌種發(fā)酵培養(yǎng): ①發(fā)酵培養(yǎng)基的制備:取淀粉20.0-30.0g、牛肉膏1.0-5.0g、葡萄糖0.5^1.5g、酵母膏 3.0~7.0g、蛋白胨 1.0~5.0gXaCO3 2.0~6.0g、加水至 1000ml,pH 7.0,120。C 滅菌 30min;②發(fā)酵:將上述方法(I)中得到的菌株HMR4種子液加到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，加菌種量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的10 %，28° C下于轉(zhuǎn)速為190-250轉(zhuǎn)/分鐘的搖床上搖瓶發(fā)酵6~8天； (3)發(fā)酵液處理: ①發(fā)酵液經(jīng)2500-3500轉(zhuǎn)/分鐘離心，離心時(shí)間為15~25分鐘以等體積乙酸乙醋萃取發(fā)酵上清液3飛次，回收乙酸乙醋，菌絲體用丙酮浸泡并超聲破碎，回收丙酮，合并二部分提取物，得到具有活性部位的棕褐色膏狀物；③進(jìn)行硅膠柱層析，以三氯甲烷:甲醇40:1至1:1梯度洗脫，收集含有該化合物的組分，回收溶劑，得到粗品一種抗腫瘤抗生素；④將粗品一種抗腫瘤抗生素依次進(jìn)行甲醇凝膠及三氯甲烷:甲醇30:1硅膠柱層析，回收溶劑，得到一種抗腫瘤抗生素較純品；⑤將一種抗腫瘤抗生素較純品進(jìn)行甲醇凝膠柱層析，回收溶劑，得到一種抗腫瘤抗生素純品，所述抗腫瘤抗生素的結(jié)構(gòu)為:


2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是所述的酵母膏為4.0g、葡萄糖為4.0g、麥芽膏為5.0g、復(fù)合維生素為3.5ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是所述的淀粉為24.0g、牛肉膏為3.0g、葡萄糖為l.0g、酵母膏為5.0g、蛋白胨為3.0g、CaCO3為4.0g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是所述的搖床轉(zhuǎn)數(shù)為220轉(zhuǎn)/分鐘，所述發(fā)酵時(shí)間為7天。
【文檔編號】A61P35/00GK103993050SQ201410195152
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年5月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月9日
【發(fā)明者】李一青, 戎賀, 趙立興, 徐麗華 申請人:云南大學(xué)