一種鱷魚(yú)膽素的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種鱷魚(yú)膽素的提取方法，包括以下步驟：步驟1：將鱷魚(yú)膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物100重量份；步驟2:在所述的膽汁混合物中加入無(wú)水乙醇200～500重量份，低溫?cái)嚢?；步驟3：將步驟2中得到的混合物進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液；將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行真空濃縮，濃縮時(shí)間為2～4小時(shí)；步驟4：將步驟3中得到的濃縮后的混合物中加入60～100重量份蒸餾水，用乙醚進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去乙醚；步驟5：用二氯甲烷進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去二氯甲烷，得到鱷魚(yú)膽素。本發(fā)明旨在提供一種雜質(zhì)少，溶劑殘留少的鱷魚(yú)膽素的提取方法。
【專利說(shuō)明】一種鱷魚(yú)膽素的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及鱷魚(yú)制品領(lǐng)域，特別是一種鱷魚(yú)膽素的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鱷魚(yú)是一種古老的爬行動(dòng)物，《本草綱目》等古代醫(yī)學(xué)典籍中均有關(guān)于鱷魚(yú)藥用價(jià)值的記載。早在南北朝時(shí)期的《本草經(jīng)集注》就有對(duì)鱷魚(yú)甲的記載:“味辛，微溫。主心腹癥瘕、伏堅(jiān)、積聚、寒熱?！薄侗静菔斑z》稱鼉甲“主惡瘡，腹內(nèi)癥瘕”。明代李時(shí)珍的《本草綱目》“鱗部”第四十三卷則詳細(xì)記載了:“鼉(即鱷)甲主治心腹癥瘕；伏堅(jiān)積聚；肉:主治少氣吸吸，足不立地；別錄濕氣邪氣、諸蠱內(nèi)癥瘕、惡皰。脂:主治摩風(fēng)及惡瘡?！痹诂F(xiàn)代醫(yī)學(xué)中，鱷魚(yú)肉、鱷魚(yú)膽已廣泛用于保健和醫(yī)療領(lǐng)域。
[0003]根據(jù)中國(guó)專利CN101856368B的《鱷膽素及其制備方法與應(yīng)用》記載，其通過(guò)萃取的方法獲取鱷膽素，并用于腫瘤病人的治療，取得了良好的療效。但是，該專利在提取的鱷膽素應(yīng)用到制品中時(shí)，存在保質(zhì)時(shí)間短、溶劑殘留高的問(wèn)題，高殘留的正丁醇對(duì)人體粘膜會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的刺激性。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供一種雜質(zhì)少，溶劑殘留少的鱷魚(yú)膽素的提取方法。
[0005]本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:一種鱷魚(yú)膽素的提取方法，包括以下步驟:
[0006]步驟1:將鱷魚(yú)膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物100重量份；
[0007]步驟2:在所述的膽汁混合物中加入無(wú)水乙醇200~500重量份，低溫?cái)嚢瑁?br> [0008]步驟3:將步驟2中得到的混合物進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液；將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行真空濃縮，濃縮時(shí)間為2~4小時(shí)；優(yōu)選地，所述的過(guò)濾采用微孔濾膜過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾，所述的微孔濾膜的孔徑為3~10微米。上述步驟2和步驟3可以選擇重復(fù)進(jìn)行多次，比如4次，可以輕微的提高收集效果。
[0009]步驟4:將步驟3中得到的濃縮后的混合物中加入60~100重量份蒸餾水，優(yōu)選90重量份，用乙醚進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去乙醚；
[0010]步驟5:用二氯甲烷進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去二氯甲烷，得到鱷魚(yú)膽素。
[0011]在上述的鱷魚(yú)膽素的提取方法中，所述的步驟2中低溫?cái)嚢钑r(shí)，混合物的溫度為5~10°C，優(yōu)選地，所述的混合物的溫度為6~TC。
[0012]在上述的鱷魚(yú)膽素的提取方法中，所述的步驟3中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的加熱溫度為50~60°C，優(yōu)選地，所述的加熱溫度為51~55°C。
[0013]在上述的鱷魚(yú)膽素的提取方法中，所述的步驟4中，所述的每一次萃取所用的乙醚的量為200~500重量份，優(yōu)選250~350重量份。
[0014]在上述的鱷魚(yú)膽素的提取方法中，所述的步驟5中，所述的每一次萃取所用的二氯甲烷的量為200~500重量份，優(yōu)選250~350重量份。[0015]在本發(fā)明中，鱷魚(yú)可以選擇為人工養(yǎng)殖的泰鱷、尼羅鱷、揚(yáng)子鱷等。
[0016]在本發(fā)明中，采用無(wú)水乙醇對(duì)膽汁進(jìn)行低溫預(yù)處理和過(guò)濾，使鱷魚(yú)膽汁中的蛋白質(zhì)和脂肪同時(shí)析出和除去，可以有效的縮短后續(xù)的萃取工序，并且降低鱷魚(yú)膽素制品中的脂肪含量。在本發(fā)明中，萃取工序的溶劑沸點(diǎn)均低于40°C，在真空濃縮的過(guò)程中，無(wú)需進(jìn)行加熱，在常溫下即可以快速的除去溶劑，成品中的溶劑殘留微乎其微。更為重要的是，乙醚的極性大于二氯甲烷的極性，溶劑極性先大后小有利于對(duì)鱷膽素的進(jìn)一步純化，有效去除制品中的殘留的蛋白質(zhì)和其他大分子物質(zhì)。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。
[0018]實(shí)施例1
[0019]取一定量的泰鱷的鱷魚(yú)膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物1000g ;在所述的膽汁混合物中加入無(wú)水乙醇2500g,在7°C的條件下攪拌；攪拌結(jié)束后對(duì)混合物進(jìn)行微孔濾膜過(guò)濾，微孔濾膜的孔徑 為10微米，收集濾液；將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行真空濃縮，濃縮時(shí)間為2~4小時(shí)，加熱油溫度為51°C ;在濃縮后的混合物中加入900g蒸餾水，用乙醚進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去乙醚，壓力為-0.095Mpa，每次萃取所用的乙醚量為3000g ；三次乙醚萃取結(jié)束后再用二氯甲烷進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去二氯甲烷，壓力為-0.095Mpa，每次萃取所用的二氯甲烷的量為3000g，得到鱷魚(yú)膽素。
[0020]實(shí)施例2
[0021]取一定量的泰鱷的鱷魚(yú)膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物1000g ;在所述的膽汁混合物中加入無(wú)水乙醇4000g，在TC的條件下攪拌；攪拌結(jié)束后對(duì)混合物進(jìn)行微孔濾膜過(guò)濾，微孔濾膜的孔徑為10微米，收集濾液；將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行真空濃縮，濃縮時(shí)間為2~4小時(shí)，加熱油溫度為53°C ;在濃縮后的混合物中加入900g蒸餾水，用乙醚進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去乙醚，壓力為-0.095Mpa ;每次萃取所用的乙醚量為2500g ；三次乙醚萃取結(jié)束后再用二氯甲烷進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去二氯甲烷，壓力為-0.095Mpa，每次萃取所用的二氯甲烷的量為2500g，得到鱷魚(yú)膽素。
[0022]對(duì)比例I
[0023]取一定量的泰鱷的鱷魚(yú)膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物1000g ;在所述的膽汁混合物中加入70%的乙醇3000g，在常溫下攪拌均勻后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行真空濃縮，濃縮時(shí)間為2~4小時(shí)；在濃縮后的混合物中加入900g蒸餾水，用沸程為50~60°C的石油醚進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去石油醚，壓力為-0.095Mpa ;每次萃取所用的石油醚量為2500g;三次石油醚萃取結(jié)束后再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去乙酸乙酯，壓力為-0.095Mpa，每次萃取所用的乙酸乙酯的量為2500g，三次乙酸乙酯萃取結(jié)束后再用正丁醇進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去正丁醇，壓力為-0.095Mpa，每次萃取所用的正丁醇的量為2500g，得到鱷魚(yú)膽素。
[0024]測(cè)試方法:
[0025]穩(wěn)定性測(cè)試
[0026]取鱷魚(yú)膽素Ig溶于1000g50%的乙醇溶液中，置于3°C的環(huán)境中，放置90天，觀察混合液表面和混合液中是否含有析出物。
[0027]溶劑殘留測(cè)試
[0028]將鱷魚(yú)膽素用無(wú)水乙醇溶液稀釋1000倍后，用移液器取2ml稀釋液并用0.45微米的微孔膜過(guò)濾后轉(zhuǎn)移至標(biāo)準(zhǔn)樣品瓶中待測(cè)；設(shè)定好氣相色譜儀的GC-MS參數(shù)后，用10微升進(jìn)樣針精確吸取I微升樣品注入儀器中進(jìn)行分析，根據(jù)出峰順序和出峰面積，計(jì)算鱷魚(yú)膽素中二氯甲烷和正丁醇的含量。
[0029]測(cè)試結(jié)果:
[0030]穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果:
[0031]實(shí)施例1和實(shí)施例2在4°C條件下放置90天后，液體內(nèi)部和液體表面均無(wú)析出物，液體透明清澈。
[0032]對(duì)比例I在放置4°C條件下90天后，容器壁上出現(xiàn)少量不溶物。
[0033]溶劑殘留測(cè)試結(jié)果:
[0034]表1
[0035]
【權(quán)利要求】
1.一種鱷魚(yú)膽素的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1:將鱷魚(yú)膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物100重量份； 步驟2:在所述的膽汁混合物中加入無(wú)水乙醇200~500重量份，低溫?cái)嚢瑁? 步驟3:將步驟2中得到的混合物進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液；將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行真空濃縮，濃縮時(shí)間為2~4小時(shí)； 步驟4:將步驟3中得到的濃縮后的混合物中加入60~100重量份蒸餾水，用乙醚進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去乙醚； 步驟5:用二氯甲烷進(jìn)行萃取三次，并通過(guò)真空濃縮除去二氯甲烷，得到鱷魚(yú)膽素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱷魚(yú)膽素的提取方法，其特征在于，所述的步驟2中低溫?cái)嚢钑r(shí)，混合物的溫度為5~10°C。
3.根據(jù) 權(quán)利要求1所述的鱷魚(yú)膽素的提取方法，其特征在于，所述的步驟3中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的加熱溫度為50~60°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱷魚(yú)膽素的提取方法，其特征在于，所述的步驟4中，所述的每一次萃取所用的乙醚的量為200~500重量份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱷魚(yú)膽素的提取方法，其特征在于，所述的步驟5中，所述的每一次萃取所用的二氯甲烷的量為200~500重量份。
【文檔編號(hào)】A61K35/56GK103933072SQ201410203494
【公開(kāi)日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年5月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月14日
【發(fā)明者】汪華東 申請(qǐng)人:汪華東