一種含蟲(chóng)草多糖生物制劑的制備方法
【專利摘要】含蟲(chóng)草多糖生物制劑的制備方法，涉及一種制劑制備方法，包括以下制備過(guò)程：蟲(chóng)草菌培養(yǎng)基制備：蟲(chóng)草菌培養(yǎng)、蟲(chóng)草多糖粗提、蟲(chóng)草多糖純化、成型：將苦瓜，苦蕎，麥冬，青錢(qián)柳，酸漿，馬齒莧切成小塊，在60℃下烘干，粉碎；以蟲(chóng)草多糖30%，酸漿25%，青錢(qián)柳15%，苦蕎10%，苦瓜10%，麥冬5%，馬齒莧5%的比例將原料充分混合，再結(jié)合藥用輔料制成制劑即可。本發(fā)明采用人工培養(yǎng)中國(guó)被毛孢菌絲體提取蟲(chóng)草多糖為主要原料，與酸漿，青錢(qián)柳，苦蕎，苦瓜，麥冬，馬齒莧多種原料配伍降糖比單一蟲(chóng)草多糖降糖效果好，全面降糖、無(wú)毒副作用、價(jià)格低廉，適合規(guī)模生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】一種含蟲(chóng)草多糖生物制劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物制劑制備方法，特別是涉及一種含蟲(chóng)草多糖生物制劑的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]糖尿病是一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌代謝綜合疾病，以糖代謝紊亂為主要特征，表現(xiàn)為高血糖，糖尿及多種并發(fā)癥，典型的臨床表現(xiàn)為“三多一少”，即多飲、多食、多尿，體重減輕
[I]。據(jù)WHO報(bào)告，糖尿病發(fā)病率逐年升高，已成為繼惡性腫瘤、心腦血管病后第3位嚴(yán)重威脅人類健康的慢性疾病[2]。
[0003]目前西醫(yī)對(duì)糖尿病的治療主要以消炎止痛或激素類藥物為主，存在費(fèi)用高、毒副作用大、療效單一、治療效果不理想等缺點(diǎn)。隨著人類對(duì)健康愈加重視，糖尿病藥物已從西藥轉(zhuǎn)向兼具食藥兩用的天然降血糖食品，其來(lái)源廣泛，無(wú)毒副作用，用法簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，易被人們接受，逐漸成為了糖尿病患者日常保健與輔助治療的最佳手段。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)冬蟲(chóng)夏草的研究取得了長(zhǎng)足進(jìn)展。
[0004]目前用于治療糖尿病的天然生物制劑主要是冬蟲(chóng)夏草膠囊、粉劑，是由冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體粉碎成粉 制成的生物制劑，作用機(jī)理是緩解胰島素抵抗，減輕β細(xì)胞的負(fù)荷，對(duì)糖尿病患者有顯著療效，但是存在以下不足:1、人工培育冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體一般工廠在技術(shù)很難達(dá)到。2、大規(guī)模生產(chǎn)價(jià)格昂貴，經(jīng)濟(jì)效益低。3、原料單一，功效單一，只針對(duì)單因素引起的高血糖癥，不能全面降糖。
[0005]作為天然保健藥物，蟲(chóng)草多糖具有極高的應(yīng)用價(jià)值。我國(guó)現(xiàn)報(bào)道有關(guān)蟲(chóng)草多糖的開(kāi)發(fā)利用多集中于其活性物質(zhì)的提取及有效成分的獲得，對(duì)蟲(chóng)草多糖的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和功效研究較少，利用蟲(chóng)草多糖與食藥兩用的天然食品配伍降血糖更鮮為人知，如何高效利用這一極具保健功能和醫(yī)療價(jià)值的資源已成為目前亟待解決的問(wèn)題。
[0006]冬蟲(chóng)夏草{Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.)屬麥角菌科蟲(chóng)草屬，寄生于蝙fe紙iHepialus armoricanus)幼蟲(chóng)上的子座和蟲(chóng)體復(fù)合體,主要分布在四川、青海、西藏、甘肅、云南等地，是我國(guó)特產(chǎn)的名貴藥材。冬蟲(chóng)夏草中含有豐富的蟲(chóng)草多糖(Polysaccharidesfrom cultured mycelium of Cordyceps sinensis , PCS )，對(duì)防治糖尿病功效尤為突出。胰島素抵抗是糖尿病發(fā)病的前奏，蟲(chóng)草多糖能緩解胰島素抵抗，降低胰島素抵抗指數(shù)，不僅可以降低血糖，而且可以減輕β細(xì)胞的負(fù)荷，阻止病情的惡化，具有潛在的胰島素增敏作
RR [3-4]
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[0007]一些果蔬具有明顯的降血糖功效?？喙?Jfomordi ca charantia L.)含多種降血糖活性成分，主要有三萜類、植物甾醇、苷類、甾體類和肽類等[5_61?？嗍w(Fagopyrumtataricum (L.) Gaertn.)具有多種生物類黃酮，能清除體內(nèi)自由基、修復(fù)受損的胰島B細(xì)胞，對(duì)糖尿病實(shí)行雙向調(diào)節(jié)m。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，給糖尿病患者服用麥冬japonicus (Thunb.) Ker-Gawl.)膠囊降糖效率為91.49%,且能穩(wěn)定血糖,改善胰島素敏感性M。青錢(qián)柳paliurus.)提取物具有降血糖、降血脂等生理活性,在防治糖尿病方面功效尤為突出[941]。酸楽L.var.franchetii (Mst.)Makino)又名錦燈籠，其果實(shí)、帶果實(shí)的宿萼水提醇沉液均具有明顯的抑制血糖升高作用[i2-H]。馬齒覓ohracea)水煎濃縮劑能減輕2型糖尿病大鼠體重,改善糖耐量和脂代謝紊亂，降低血清游離脂肪酸，減輕高胰島素血癥，提高胰島素敏感性[15_16]。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種含蟲(chóng)草多糖生物制劑的制備方法，本發(fā)明采用人工培養(yǎng)中國(guó)被毛孢菌絲體提取蟲(chóng)草多糖為主要原料，與酸漿，青錢(qián)柳，苦蕎，苦瓜，麥冬，馬齒莧多種原料配伍降糖比單一蟲(chóng)草多糖降糖效果好，全面降糖、無(wú)毒副作用、價(jià)格低廉，適合規(guī)模生產(chǎn)。
[0009]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
一種含蟲(chóng)草多糖生物制劑的制備方法，所述方法包括以下制備過(guò)程:
(1)蟲(chóng)草菌培養(yǎng)基制備:蟲(chóng)草需要在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，需用到斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基；
(2)蟲(chóng)草菌培養(yǎng):首先從經(jīng)活化的斜面菌種取菌苔塊接入種子培養(yǎng)基，培養(yǎng)種子液；其次將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基，在相同的條件下發(fā)酵得發(fā)酵的冬蟲(chóng)夏草菌絲體以及發(fā)酵液；
(3)蟲(chóng)草多糖粗提:將菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，烘干；準(zhǔn)確稱取待測(cè)冬蟲(chóng)夏草樣品放人具塞三角瓶，按料液比加人蒸餾水并混勻；置水浴浸提，趁熱離心取上清液，減壓濃縮加人乙醇溶液靜置，然后離心收集沉淀，依次加人無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀， 冷凍干燥解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲(chóng)夏草粗多糖；
(4)蟲(chóng)草多糖純化:取冬蟲(chóng)夏草粗多糖配制成溶液備用，將胰蛋白酶配制成溶液，將粗多糖與胰蛋白酶混合，對(duì)蟲(chóng)草多糖提取液酶解，將多糖提取液酶解后放入水浴鍋中滅酶，冷卻至室溫，離心棄去沉淀，取上層清液，將TCA溶液加入到上清液中，充分反應(yīng)，離心后取上清液，濃縮后加入乙醇靜置，離心得沉淀物，依次用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，抽濾，干燥后得冬蟲(chóng)夏草多糖；
(5)成型:將苦瓜，苦蕎，麥冬，青錢(qián)柳，酸漿，馬齒莧切成小塊，在60°C下烘干，粉碎；以蟲(chóng)草多糖30%，酸漿25%，青錢(qián)柳15%，苦蕎10%，苦瓜10%，麥冬5%，馬齒莧5%的比例將原料充分混合，再結(jié)合藥用輔料制成制劑即可。
[0010]所述的一種含蟲(chóng)草多糖生物制劑的制備方法，所述斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基的配方及份數(shù)為:斜面培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏IOg,蠶蛹粉 10g，蛋白胨 10g，KH2PO4 3g, MgSO4.7H20L 5g，維生素 B1 IOmg,瓊脂 2.0,水1000ml，pH7-8 ;種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，KH2PO4 3g, MgS04*7H20 1.5g,維生素 B1 IOmg,水 1000ml，pH7_8 ;發(fā)酵培養(yǎng)基馬鈴薯200 g，蔗糖 10 g，蛋白胨 10g，大豆粉 lOg，KH2PO4 3g, MgSO4.7Η20 1.5g,維生素B1 IOmg,水 1000 ml O
[0011]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與效果是:
1、本發(fā)明采用人工培養(yǎng)中國(guó)被毛孢菌絲體提取蟲(chóng)草多糖為主要原料，與酸漿，青錢(qián)柳，苦蕎，苦瓜，麥冬，馬齒莧多種原料配伍降糖比單一蟲(chóng)草多糖降糖效果好，是目前獨(dú)一無(wú)二的配方。[0012]2、本發(fā)明研制的蟲(chóng)草多糖降血糖生物制劑根據(jù)各種高血糖病因全面降糖，安全性聞。
[0013]3、本發(fā)明研制的蟲(chóng)草多糖降血糖生物制劑不是活菌制劑，因此具有有效期長(zhǎng)、與其它藥物相容性好等優(yōu)點(diǎn)。
[0014]4、本發(fā)明研制的蟲(chóng)草多糖降血糖生物制劑價(jià)格低廉，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述。
[0016]實(shí)驗(yàn)例I
(I)蟲(chóng)草菌培養(yǎng)基 制備
蟲(chóng)草需要在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)需用到斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基。三種培養(yǎng)基的具體配方分述如下:
斜面培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，KH2PO43g, MgSO4.7Η201.5g，維生素 B1 IOmg,瓊脂 2.0,水 1000ml，pH7_8。
[0017]種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，KH2PO4 3g,MgSO4.7H20 1.5g,維生素 B1 IOmg,水 1000ml，pH7_8。
[0018]發(fā)酵培養(yǎng)基馬鈴薯200 g，蔗糖10 g，蛋白胨10g，大豆粉10g，KH2PO4 3g,MgSO4.7H20 1.5g,維生素 B1 IOmg,水 1000 ml。
[0019](2)蟲(chóng)草菌培養(yǎng)
本實(shí)驗(yàn)所用的蟲(chóng)草菌為冬蟲(chóng)夏草菌-中國(guó)被毛孢sinensis)，購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，于沈陽(yáng)大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室低溫保存。
[0020]首先從經(jīng)活化的斜面菌種取5mm2大小的菌苔4塊接入種子培養(yǎng)基(裝液量為100mL三角瓶)內(nèi)，于24°C旋轉(zhuǎn)搖床(110r/min)培養(yǎng)7d (種子液)。其次按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基(裝液量為200ml三角瓶)中，在相同的條件下發(fā)酵5d，獲得發(fā)酵的冬蟲(chóng)夏草菌絲體以及發(fā)酵液。
[0021](3)蟲(chóng)草多糖粗提
將菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，60°C條件下烘干。準(zhǔn)確稱取待測(cè)冬蟲(chóng)夏草樣品50g，放人具塞三角瓶，按料液比1:30加人蒸餾水并混勻。置于85°C水浴浸提3h，趁熱離心(2500rpmX 20min)取上清液，50°C減壓濃縮至200ml，加人4倍體積95%乙醇溶液，4°C靜置12h，3000 r/min離心15min，收集沉淀，依次加人少量無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，沉淀置于_25°C冷凍干燥在35°C解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲(chóng)夏草粗多糖。
[0022](4)蟲(chóng)草多糖純化
取冬蟲(chóng)夏草粗多糖配制成濃度為10mg/ml的溶液備用。將胰蛋白酶配制成濃度為10mg/ml的溶液，保持酶解溫度為37°C，pH為7.5，將粗多糖與胰蛋白酶按12:1混合，對(duì)蟲(chóng)草多糖提取液酶解45 min，將多糖提取液酶解后放入100°C水浴鍋中滅酶5min，冷卻至室溫。3500 r/min離心5min棄去沉淀，取上層清液。將濃度為20%的TCA溶液加入到上清液中，使TCA溶液終濃度為6%。靜置12h充分反應(yīng)，3500 r/min離心5 min,取上清液，濃縮至相對(duì)密度為1.05 (20 V )，加入乙醇至體積分?jǐn)?shù)達(dá)80%，靜置12h，離心得沉淀物，依次用適量無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，抽濾，干燥后得冬蟲(chóng)夏草多糖。[0023](5)成型
將苦瓜，苦蕎，麥冬，青錢(qián)柳，酸漿，馬齒莧切成小塊，在60°C下烘干，粉碎。以蟲(chóng)草多糖30%，酸漿25%，青錢(qián)柳15%，苦蕎10%，苦瓜10%，麥冬5%，馬齒莧5%的比例將7種原料充分混合，再結(jié)合藥用輔料制成不同的制劑，如膠囊劑、片劑、口服液等。
[0024]實(shí)驗(yàn)例2、
(I)蟲(chóng)草菌培養(yǎng)基制備
蟲(chóng)草需要在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)需用到斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基。三種培養(yǎng)基的具體配方分述如下:
斜面培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，KH2PO43g, MgSO4.7Η201.5g，維生素 B1 IOmg,瓊脂 2.0,水 1000ml，pH7_8。
[0025]種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，KH2PO4 3g,MgSO4.7H20 1.5g,維生素 B1 IOmg,水 1000ml，pH7_8。
[0026]發(fā)酵培養(yǎng)基馬鈴薯200 g，蔗糖10 g，蛋白胨10g，大豆粉10g，KH2PO4 3g,MgSO4.7H20 1.5g,維生素 B1 IOmg,水 1000 ml。
[0027](2)蟲(chóng)草菌培養(yǎng)
本實(shí)驗(yàn)所用的蟲(chóng)草菌為冬蟲(chóng)夏草菌-中國(guó)被毛孢sinensis)，購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，于沈陽(yáng)大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室低溫保存。
[0028]首先從經(jīng)活化的斜面菌種取IOmm2大小的菌苔6塊接入種子培養(yǎng)基(裝液量為250ml三角瓶)內(nèi)，于24°C旋轉(zhuǎn)搖床(110r/min)培養(yǎng)7d (種子液)。其次按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基(裝液量為500ml三角瓶)中，在相同的條件下發(fā)酵5d，獲得發(fā)酵的冬蟲(chóng)夏草菌絲體以及發(fā)酵液。
[0029](3)蟲(chóng)草多糖粗提
將菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，60°C條件下烘干。準(zhǔn)確稱取待測(cè)冬蟲(chóng)夏草樣品50g，放人具塞三角瓶，按料液比1:30加人蒸餾水并混勻。置于85°C水浴浸提3h，趁熱離心(2500rpmX 20min)取上清液，50°C減壓濃縮至200ml，加人4倍體積95%乙醇溶液，4°C靜置12h，3000 r/min離心15min，收集沉淀，依次加人少量無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，沉淀置于_25°C冷凍干燥在35°C解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲(chóng)夏草粗多糖。
[0030](4)蟲(chóng)草多糖純化
取冬蟲(chóng)夏草粗多糖配制成濃度為10mg/ml的溶液備用。將胰蛋白酶配制成濃度為10mg/ml的溶液，保持酶解溫度為37°C，pH為7.5，將粗多糖與胰蛋白酶按12:1混合，對(duì)蟲(chóng)草多糖提取液酶解45 min，將多糖提取液酶解后放入100°C水浴鍋中滅酶5min，冷卻至室溫。3500 r/min離心5min棄去沉淀，取上層清液。將濃度為20%的TCA溶液加入到上清液中，使TCA溶液終濃度為6%。靜置12h充分反應(yīng)，3500 r/min離心5 min，取上清液，濃縮至相對(duì)密度為1.05 (250C )，加入乙醇至體積分?jǐn)?shù)達(dá)80%，靜置12h，離心得沉淀物，依次用適量無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，抽濾，干燥后得冬蟲(chóng)夏草多糖。
[0031](5)成型
將苦瓜，苦蕎，麥冬，青錢(qián)柳，酸漿，馬齒莧切成小塊，在60°C下烘干，粉碎。以蟲(chóng)草多糖30%，酸漿25%，青錢(qián)柳15%，苦蕎10%，苦瓜10%，麥冬5%，馬齒莧5%的比例將7種原料充分混合，再結(jié)合藥用輔料制成不同的制劑，如膠囊劑、片劑、口服液等。[0032]實(shí)例3
(I)蟲(chóng)草菌培養(yǎng)基制備
蟲(chóng)草需要在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)需用到斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基。三種培養(yǎng)基的具體配方分述如下:
斜面培 養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，KH2PO43g, MgSO4.7Η201.5g，維生素 B1 IOmg,瓊脂 2.0,水 1000ml，pH7_8。
[0033]種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，KH2PO4 3g，MgSO4.7H20 1.5g,維生素 B1 IOmg,水 1000ml，pH7_8。
[0034]發(fā)酵培養(yǎng)基馬鈴薯200 g，蔗糖10 g，蛋白胨10g，大豆粉10g，KH2PO4 3g,MgSO4.7H20 1.5g,維生素 B1 IOmg,水 1000 ml。
[0035](2)蟲(chóng)草菌培養(yǎng)
本實(shí)驗(yàn)所用的蟲(chóng)草菌為冬蟲(chóng)夏草菌-中國(guó)被毛孢sinensis)，購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，于沈陽(yáng)大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室低溫保存。
[0036]首先從經(jīng)活化的斜面菌種取6mm2大小的菌苔5塊接入種子培養(yǎng)基(裝液量為250ml三角瓶)內(nèi)，于24°C旋轉(zhuǎn)搖床(110r/min)培養(yǎng)7d (種子液)。其次按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基(裝液量為500ml三角瓶)中，在相同的條件下發(fā)酵5d，獲得發(fā)酵的冬蟲(chóng)夏草菌絲體以及發(fā)酵液。
[0037](3)蟲(chóng)草多糖粗提
將菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，60°C條件下烘干。準(zhǔn)確稱取待測(cè)冬蟲(chóng)夏草樣品50g，放人具塞三角瓶，按料液比1:30加人蒸餾水并混勻。置于85°C水浴浸提3h，趁熱離心(2500rpmX 20min)取上清液，50°C減壓濃縮至200ml，加人4倍體積95%乙醇溶液，4°C靜置12h，3000 r/min離心15min，收集沉淀，依次加人少量無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，沉淀置于_25°C冷凍干燥在35°C解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲(chóng)夏草粗多糖。
[0038](4)蟲(chóng)草多糖純化
取冬蟲(chóng)夏草粗多糖配制成濃度為10mg/ml的溶液備用。將胰蛋白酶配制成濃度為10mg/ml的溶液，保持酶解溫度為37°C，pH為7.5，將粗多糖與胰蛋白酶按12:1混合，對(duì)蟲(chóng)草多糖提取液酶解45 min，將多糖提取液酶解后放入100°C水浴鍋中滅酶5min，冷卻至室溫。3500 r/min離心5min棄去沉淀，取上層清液。將濃度為20%的TCA溶液加入到上清液中，使TCA溶液終濃度為6%。靜置12h充分反應(yīng)，3500 r/min離心5 min，取上清液，濃縮至相對(duì)密度為1.05 (200C )，加入乙醇至體積分?jǐn)?shù)達(dá)80%，靜置12h，離心得沉淀物，依次用適量無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，抽濾，干燥后得冬蟲(chóng)夏草多糖。
[0039](5)成型
將苦瓜，苦蕎，麥冬，青錢(qián)柳，酸漿，馬齒莧切成小塊，在60°C下烘干，粉碎。以蟲(chóng)草多糖30%，酸漿25%，青錢(qián)柳15%，苦蕎10%，苦瓜10%，麥冬5%，馬齒莧5%的比例將7種原料充分混合，再結(jié)合藥用輔料制成不同的制劑，如膠囊劑、片劑、口服液等。
[0040]下面通過(guò)一個(gè)典型實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)明含蟲(chóng)草多糖的降血糖藥物在降血糖方面有益。
[0041](I)實(shí)驗(yàn)方法:
2014年1-4月期間選用40只體重均在25g的雄性昆明小鼠，注射鏈脲佐菌素，造糖尿病小鼠模型。之后將40只小鼠平均分為A、B、C、D、E、F、G、H組，以下述重量(干物料)配比的原料制成的制劑灌胃小鼠:蟲(chóng)草多糖30%，酸漿25%，青錢(qián)柳15%，苦蕎10%，苦瓜10%，麥冬5%,馬齒莧5%。
[0042] (2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
有8組小鼠原平均血糖值為13.6mmol/L,服用該配方一個(gè)月之后，平均血糖降至6.5mmol/L ;有4組小鼠的平均血糖值由原13.2mmol/L降至5.3mmol/L;有I組的效果不是特別明顯，但也有所下降，即平均血糖值由原12.7mmol/L降至8.6mmol/L。
[0043]通過(guò)實(shí)驗(yàn)顯示，小白鼠服用30天后其血糖有明顯下降，效率為100%。并且這種配方服用后不會(huì)傷及腸胃，具有一定的保健功效。
【權(quán)利要求】
1.一種含蟲(chóng)草多糖生物制劑的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下制備過(guò)程: (1)蟲(chóng)草菌培養(yǎng)基制備:蟲(chóng)草需要在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，需用到斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基； (2)蟲(chóng)草菌培養(yǎng):首先從經(jīng)活化的斜面菌種取菌苔塊接入種子培養(yǎng)基，培養(yǎng)種子液；其次將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基，在相同的條件下發(fā)酵得發(fā)酵的冬蟲(chóng)夏草菌絲體以及發(fā)酵液； (3)蟲(chóng)草多糖粗提:將菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，烘干；準(zhǔn)確稱取待測(cè)冬蟲(chóng)夏草樣品放人具塞三角瓶，按料液比加人蒸餾水并混勻；置水浴浸提，趁熱離心取上清液，減壓濃縮加人乙醇溶液靜置，然后離心收集沉淀，依次加人無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，冷凍干燥解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲(chóng)夏草粗多糖； (4)蟲(chóng)草多糖純化:取冬蟲(chóng)夏草粗多糖配制成溶液備用，將胰蛋白酶配制成溶液，將粗多糖與胰蛋白酶混合，對(duì)蟲(chóng)草多糖提取液酶解，將多糖提取液酶解后放入水浴鍋中滅酶，冷卻至室溫，離心棄去沉淀，取上層清液，將TCA溶液加入到上清液中，充分反應(yīng)，離心后取上清液，濃縮后加入乙醇靜置，離心得沉淀物，依次用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，抽濾，干燥后得冬蟲(chóng)夏草多糖； (5)成型:將苦瓜，苦蕎，麥冬，青錢(qián)柳，酸漿，馬齒莧切成小塊，在60°C下烘干，粉碎；以蟲(chóng)草多糖30%，酸漿25%，青錢(qián)柳15%，苦蕎10%，苦瓜10%，麥冬5%，馬齒莧5%的比例將原料充分混合，再結(jié)合藥用輔料制成制劑即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含蟲(chóng)草多糖生物制劑的制備方法，其特征在于，所述斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基的配方及份數(shù)為:斜面培養(yǎng)基馬鈴薯200g,葡萄糖 20g，牛肉膏 10g，蠶蛹粉 10g，蛋白胨 10g，KH2PO4 3g, MgSO4.7Η201.5g，維生素B1 IOmg,瓊脂2.0，水1000ml，pH7-8 ;種子培養(yǎng)基馬鈴薯200g,葡萄糖20g,牛肉膏 IOg,蛋白胨 lOg，KH2PO4 3g, MgSO4.7Η20 1.5g,維生素 B1 IOmg,水 1000ml，pH7-8;發(fā)酵培養(yǎng)基馬鈴薯200 g，蔗糖10 g，蛋白胨10g，大豆粉10g，KH2PO4 3g,MgSO4.7H20 1.5g,維生素 B1 IOmg,水 1000 ml。
【文檔編號(hào)】A61P3/10GK103961534SQ201410203836
【公開(kāi)日】2014年8月6日 申請(qǐng)日期:2014年5月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月15日
【發(fā)明者】楊紹斌, 趙瑩, 金昊 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)大學(xué)