百合花瓣的抗氧化物質(zhì)提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種百合花瓣的抗氧化物質(zhì)提取方法，其特征在于包括如下步驟：稱取百合花瓣，放入研缽，按1:5的料液比加入80％的乙醇研磨提取，然后放入搖床1h浸提，浸提后10000rpm離心10min取上清液通過本發(fā)明的方法，能夠有效的得到含抗氧化劑、自由基清除劑的百合花瓣提取物。
【專利說明】百合花瓣的抗氧化物質(zhì)提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物領(lǐng)域，具體而言，涉及一種百合花瓣的抗氧化物質(zhì)提取方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]隨著社會的發(fā)展，科學(xué)的進(jìn)步，花卉資源的開發(fā)越來越受到人們的重視，花卉的食用、藥用保健方面也倍受青睞。我國也自古有食用花卉的傳統(tǒng)，不少少數(shù)民族都有取食花卉的習(xí)慣，食用花卉種類多達(dá)200多種。食用的方式主要以:制作菜肴，入藥，制茶，調(diào)酒，加工飲料等。但針對眾多食用花卉資源的物質(zhì)深入研究，仍較少。其中對于牡丹花瓣、芍藥花瓣、巴西蕉花蕾、月季花瓣等都有許多研究，但對百合花瓣的研究較少。百合作為藥食同源最先見于《神農(nóng)本草經(jīng)》。1984年，我國衛(wèi)生部首批頒布的藥食兼用植物，百合便是其中之一，李明河等、吳漢斌等、郭戎等對百合鱗莖的藥用和營養(yǎng)成分做了研究，但至今鮮有百合花瓣抗氧化活性物質(zhì)的研究報道。目前上海相宜本草化妝品股份有限公司推出了百合系列產(chǎn)品，其部分產(chǎn)品所含保濕、抗氧化物質(zhì)就有從百合鱗片中提取。
[0003]現(xiàn)在漸漸流行把花做成各式各樣的食品，百合食品也很流行，無論是花瓣還是鱗莖。烹飪百合的方式也是多種多樣的，除了因它含有一定的營養(yǎng)價值，還因它含類黃酮、維生素C、總酚以及花青素苷等天然抗氧化物質(zhì)，它們能抑制細(xì)胞內(nèi)氧化反應(yīng)的發(fā)生，減輕自由基對脂、脂蛋白和DNA的氧化損傷，對細(xì)胞抗衰老起著很大的作用。
[0004]近年來針 對牡丹、月季、芍藥、菊花等常見觀賞花卉的營養(yǎng)品質(zhì)或抗氧化活性分析都常有研究，百合亦是常見觀賞花卉之一，目前關(guān)于百合鱗莖的營養(yǎng)成分和抗氧化活性物質(zhì)的研究有報道，鱗莖的開發(fā)利用越來越受到重視，但是鮮有針對百合花瓣抗氧化活性物質(zhì)的研究。而且百合花瓣的抗氧化活性物質(zhì)提取影響因素較多，有些因素是本領(lǐng)域技術(shù)人員尚未意識到的，如何能夠有效的提取百合花瓣的抗氧化物質(zhì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了提高百合花瓣的抗氧化物質(zhì)提取效率，本發(fā)明提供一種百合花瓣的抗氧化物質(zhì)提取方法。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，擬采用如下技術(shù)方案:
[0006]本發(fā)明涉及一種百合花瓣的抗氧化物質(zhì)提取方法，其特征在于包括如下步驟:
[0007]稱取百合花瓣，放入研缽，按1:5的料液比加入80%的乙醇研磨提取，然后放入搖床Ih浸提,浸提后1000Orpm離心10min取上清液。
[0008]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式中，所述的百合花瓣為大百合的盛花期花瓣。
[0009]在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方式中，所述的百合花瓣為‘白天使’百合的現(xiàn)蕾期、初開期、盛花期和/或謝花期的花瓣。
[0010]通過本發(fā)明的方法，能夠有效的得到含抗氧化劑、自由基清除劑的百合花瓣提取物。【具體實施方式】
[0011 ] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)一步說明。
[0012]實施例1
[0013]I材料和方法
[0014]1.1 材料
[0015]供試材料為大百合、宜昌百合、‘白天使’百合，種植于四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)場。對百合花期分階段采樣，采摘現(xiàn)蕾期(外輪花瓣2/3顯色)、初開期(外輪花瓣展開)、盛花期(全部花瓣展開I~2d)、謝花期(柱頭開始變色I(xiàn)~2d) 4個階段新鮮內(nèi)外輪花瓣，將各樣內(nèi)外輪花瓣的上部、中部、基部切塊混合備用。重復(fù)3次。
[0016]1.2 方法
[0017]1.2.1類黃酮提取與含量測定
[0018]取Ig樣品，用10ml70%乙醇研磨，研磨后放入三角瓶中于搖床浸提2h，浸提后用離心機(jī)按照1000Or.mirT1離心10min取得上清液,現(xiàn)配現(xiàn)用。取3mL提取液于Eppendorf管中，用30%乙醇補(bǔ)足至5ml，混勻，各加入0.3mlNaN02 (5%, W/V)，混勻后靜置5分鐘，加入 0.3mlAl (NO3)3(10%,ff/V)，混勻后靜置 6min,加入 5% (ff/V)NaOH4ml，再加入 0.4ml30%乙醇使總體積為10ml，混勻后靜置lOmin，以30%乙醇溶液作為空白，在波長510nm處測吸光值，計算類黃酮含量，以mg/100g的蘆丁為單位(以鮮質(zhì)量計)，且以蘆丁做標(biāo)曲Y = 5.8027x-0.0031，相關(guān)系數(shù) R2 = 0.9993。
[0019]1.2.2維生素C提取及含量的測定
[0020]稱取5g樣品，放入組織搗碎機(jī)中，加IOmll%草酸，迅速搗成勻漿。稱4ml漿狀樣品，用浸提劑將樣品移入50ml容量瓶，并稀釋至刻度，搖勻過濾。若濾液有色，可按每克樣品加0.49白陶土脫色后再過濾。維生素C含量的測定采用2，6-二氯靛酚滴定法。取IOml研磨液于50ml三角瓶中，用2，6- 二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉紅色15s不褪色為止。
[0021]1.2.3花青素苷提取及含量測定
[0022]稱取百合花瓣混合樣1.5g，用0.lmol/L鹽酸乙醇溶液反復(fù)浸提4次，每次lh，直至花瓣退至近無色，過濾，并定容至25ml容量瓶中。以0.lmol/L鹽酸乙醇溶液做參比液，取適量提取液測定在530nm、620nm、650nm波長下的光密度值?；ㄇ嗨氐墓饷芏戎?D =(D530-D620)-0.1 (D650-D620)?？偦ㄇ嘬账睾?nmol.g-1) = (D/ ε ) (V/m) X IO6 (D:花青素在530nm波長下的光密度，ε:花青素摩爾消光系數(shù)4.62Χ104, V:提取液總體積(ml)，m:取樣重量g)。
[0023]1.2.4總酚的提取
[0024]從混合的花瓣中稱取lg，重復(fù)三份,放入研缽,按1:5的料液比加入80%的乙醇研磨提取，然后放入搖床Ih浸提,浸提后lOOOOrmirT1離心10min取上清液，用于總酚和抗氧化能力測定。
[0025]1.2.5總酚含量的測定
[0026]總酚物質(zhì)含量的測定按照Folin-Denis法，提取液稀釋2倍，取ImL稀釋提取液于Eppendorf管中，分別加入0.5mL福林酚，3mL2% Na2CO3溶液，室溫避光2h后，以80%乙醇為對照。用紫外分光光度計測定765nm波長處的吸光度，計算總酚含量_，以mg/100g的沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)物，以標(biāo)準(zhǔn)沒食子酸濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線:y =17.817x+0.0466，相關(guān)系數(shù) R2 = 0.9916。
[0027]1.2.6FRAP (ferricreducingantioxidantpower,鐵還原氧化能力)法測定總抗氧化能力
[0028]取20 μ L上清液，加入1.8mLTPTZ工作液(由0.3mol/L醋酸鹽緩沖液25mL，IOmmoI/LTPTZ 溶液 2.5mL, 20mmol/LFeCl3 溶液 2.5mL 組成)，混勻后 37°C反應(yīng) 30min，測定593nm波長處的吸光度。以1.0mmol/LFeS04為標(biāo)準(zhǔn)，樣品抗氧化活性(FRAP值)以達(dá)到同樣吸光度所需的FeSO4的毫摩爾數(shù)表示。以FeSO4做出標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 0.1783x+0.0030，相關(guān)系數(shù) R2 = 0.9999。
[0029]1.2.7DPPH分析法測定DPPH自由基清除率
[0030]移取3mL濃度為60 μ mo I/L的DPPH-乙醇溶液(乙醇濃度為80% )于試管中然后加入ImL質(zhì)量濃度分別為4、8、12、16、20mg/mL的提取液，使其充分混勻，室溫靜置15min，在波長517nm處測定其吸光度，記為樣品吸光度Ap以3mLDPPH溶液與lmL80%乙醇溶液混合，在波長517nm處測定其吸光度，記為空白吸光度kQO
[0031 ] 1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法
[0032]試驗數(shù)據(jù)采用SPSS20軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。
[0033]2結(jié)果與分析
[0034]2.1百合花瓣發(fā)育過程中類黃酮、維生素C、花青素苷、總酚的變化
[0035]2.1.1大百合花瓣發(fā)育過程中抗氧化物質(zhì)的變化
[0036]如表1所示，大百合花瓣在不同發(fā)育時期抗氧化物質(zhì)含量存在顯著差異。
[0037]表1大百合花瓣發(fā)育過程中抗氧化物質(zhì)質(zhì)量參數(shù)
[0038]
【權(quán)利要求】
1.一種百合花瓣的抗氧化物質(zhì)提取方法，其特征在于包括如下步驟: 稱取百合花瓣，放入研缽，按1:5的料液比加入80 %的乙醇研磨提取，然后放入搖床Ih浸提，浸提后1000Orpm離心10min取上清液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，所述的百合花瓣為大百合的盛花期花瓣。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，所述的百合花瓣為‘白天使’百合的現(xiàn)蕾期、初開期、盛花期和/或謝花期的花瓣。
【文檔編號】A61K133/00GK103961529SQ201410206593
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年5月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月16日
【發(fā)明者】鄧群仙, 呂秀蘭, 王永清, 周紅, 梁棟, 廖明安, 湯福義, 張小艾, 羅婭, 羅弦, 任婭婷, 張雅娟 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)