一種止血交聯(lián)組合物、其制備方法和用途，以及由其所得的止血防粘連材料的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種止血交聯(lián)組合物，其原料包括明膠以及含酰基或羧基的多糖。本發(fā)明還提供了所述止血交聯(lián)組合物的制備方法和用途。此外，本發(fā)明還提供了包含所述止血交聯(lián)組合物的止血防粘連材料。本發(fā)明提供的止血交聯(lián)組合物兼具明膠止血制品和多糖止血制品的特點，與現(xiàn)有的止血制品相比，在吸收性能、止血和凝血性能、降解性能等多個方面都有明顯的提高。本發(fā)明提供的止血防粘連材料具有止血效率局、體內(nèi)降解時間可控等優(yōu)點，能夠滿足止血材料、尤其是醫(yī)用領(lǐng)域止血防粘連材料的要求，具有廣闊的市場應(yīng)用前景。
【專利說明】一種止血交聯(lián)組合物、其制備方法和用途，以及由其所得的 止血防粘連材料

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及一種止血交聯(lián)組合物、其制備方法和用途，以 及由其所得的止血防粘連材料。

【背景技術(shù)】
[0002] 因外傷或手術(shù)等引發(fā)的大出血可能在幾分鐘內(nèi)就會因失血過多，來不及救治而危 及生命，是導致日常意外事故死亡的重要原因，其中尤以頸部、腋下、腹股溝等四肢與軀干 交界處的止血最為困難。這些部位血管豐富，且常規(guī)的止血帶等壓迫包扎止血方式不能起 到良好的止血效果。此外，外科手術(shù)中的出血問題也是導致手術(shù)失敗的一個重要原因，特別 是對于腦、肝、脾、肺、腎等實質(zhì)性臟器及腫瘤病變等組織的手術(shù)，單純依靠傳統(tǒng)的機械性物 理止血是遠遠不夠的，且實質(zhì)性臟器脆性大，血流量大，機械性止血易造成軟組織損傷，嚴 重的可能影響器官的功能。同時，手術(shù)中的大創(chuàng)面滲血還可能遮擋醫(yī)生手術(shù)視野，延長手術(shù) 時間，延誤最佳手術(shù)時機，從而加大了手術(shù)風險。因此，應(yīng)用于入院前緊急外傷和手術(shù)安全 領(lǐng)域的止血劑是目前研究的熱點。及時、有效、安全的止血材料對挽救傷員生命、穩(wěn)定傷情、 手術(shù)成功等有著十分重要的作用。
[0003] 目前市場上的止血產(chǎn)品包括如下幾類：明膠海綿、可吸收止血紗布、殼聚糖止血 粉、纖維蛋白膠、淀粉多糖止血材料等。這些產(chǎn)品雖然在一定程度上滿足了臨床需要，但是 療效均不理想。明膠海綿由動物膠原變性而成，具有良好的生物相容性和生物可降解性，具 有溶膠-凝膠可逆轉(zhuǎn)性和極好的成膜性，因此目前被廣泛地應(yīng)用于臨床止血。但是明膠制 品仍然存在著一些無法克服的缺陷，如明膠自身的吸水性差。這個特點決定了其并非是一 種理想的止血材料；此外，明膠制品親水性差，吸水速率較慢；明膠制品（如明膠海綿）的 體內(nèi)降解時間較長，通常可在人體內(nèi)滯留數(shù)月之久，遠遠超過組織修復的時間，容易造成傷 口難以愈合及引發(fā)慢性炎癥反應(yīng)；而且，縫合步驟也會給病人造成了額外的痛苦和經(jīng)濟負 擔，增加手術(shù)操作步驟，延長手術(shù)時間。
[0004] 多糖如淀粉是自然界最豐富的天然聚合物之一，其與人體組織具有良好的生物相 容性，無毒，無致敏反應(yīng)。淀粉海綿曾在上世紀60年代應(yīng)用于臨床，但其質(zhì)地硬脆，在較軟 的腦組織上使用時不能施壓，故不適用于腦部止血。由于淀粉海綿自身存在上述缺點，現(xiàn)在 已在臨床中淘汰。
[0005] 含?；螋然淖冃缘矸劬哂形蛎浡蔬m中，吸水速度快，吸水倍率高，粘性 大，降解速度可調(diào)節(jié)等優(yōu)點。目前以變性淀粉為原料的止血材料，臨床效果較好。但是變性 淀粉成膜（或海綿）性不佳，機械性能和柔韌性較差，因此在臨床上應(yīng)用也受到了一定的限 制。
[0006] 總之，目前市面上的止血、防粘連材料均不能達到理想的止血防粘連效果，所以亟 需開發(fā)出一種既能高效止血防粘連，又能有效提高其機械性能、降解時間可控，能廣泛應(yīng)用 于臨床的止血防粘連材料。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為克服現(xiàn)有止血、防粘連材料性能上的缺陷，本發(fā)明的目的之一是提供一種可用 于止血、防粘連材料的止血交聯(lián)組合物。
[0008] 本發(fā)明的目的之二是提供所述止血交聯(lián)組合物的制備方法。
[0009] 本發(fā)明的目的之三是提供所述止血交聯(lián)組合物的用途。
[0010] 本發(fā)明的目的之四是提供一種新的止血防粘連材料。
[0011] 本發(fā)明提供的止血交聯(lián)組合物，其原料包括明膠以及含?；螋然亩嗵?。
[0012] 其中，所述含?；螋然亩嗵沁x自含?；螋然淖冃缘矸?、氧化纖維素、羧甲 基纖維素、羧基化羥乙基或羥丙基纖維素、透明質(zhì)酸鈉、真菌多糖、羧甲基瓜耳膠、褐藻膠、 黃原膠或阿拉伯膠中的一種或多種。
[0013] 所述止血交聯(lián)組合物中，其原料按重量份包括以下成分：
[0014] 明膠： 5?95份； 含?；螋然亩嗵牵?5?95份； 增塑劑： 0?15份； 發(fā)泡劑： 0?10份。
[0015] 其中，所述增塑劑選自丙三醇或聚乙二醇。
[0016] 其中，所述發(fā)泡劑選自陰離子表面活性劑或無機發(fā)泡劑。
[0017] 所述止血交聯(lián)組合物的原料還可包括凝血因子、生長因子、抗生素、銀離子或銀離 子絡(luò)合物中的一種或多種。
[0018] 其中，所述凝血因子選自凝血酶、纖維蛋白酶、凝血因子XIII、凝血因子VII、凝血 因子VIII、抑肽酶、纖連蛋白及其組合物中的一種或多種。
[0019] 其中，所述生長因子選自血小板衍化生長因子、成纖維細胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因 子-β、表皮生長因子、胰島素樣生長因子、神經(jīng)生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、促進骨生長 因子ΒΜΡ-2、ΒΜΡ-7中的一種或多種。
[0020] 本發(fā)明提供的所述止血交聯(lián)組合物的制備方法為：將含?；螋然亩嗵?、明膠 以及交聯(lián)劑和活化劑溶于水中形成混合溶液，所述含?；螋然亩嗵呛退雒髂z于其中 交聯(lián)得到所述交聯(lián)組合物的原漿，干燥即得所述交聯(lián)組合物。
[0021] 其中，所述制備方法還包括混合交聯(lián)之后進行透析，得到所述交聯(lián)組合物的原漿。
[0022] 其中，所述制備方法還包括調(diào)節(jié)所述混合溶液的pH值為3?8,優(yōu)選為4?5。
[0023] 其中，所述制備方法還包括在所述原漿中加入增塑劑和/或發(fā)泡劑。
[0024] 其中，所述制備方法還包括在所述原漿中加入凝血因子、生長因子、抗生素、銀離 子或銀離子絡(luò)合物中的一種或多種。
[0025] 其中，所述交聯(lián)劑選自1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基）碳二亞胺鹽酸鹽、1-二甲基 氨丙基乙基碳二亞胺、環(huán)己基甲基嗎啉乙基碳二亞胺β - 丁烯硫酸化物、亞苯基乙基碳二 亞胺或1. 6-環(huán)六亞甲基二（碳二亞胺）。
[0026] 其中，所述活化劑選自Ν-羥基琥珀酰亞胺或Ν-羥基硫代琥珀酰亞胺。
[0027] 其中，所述活化劑與交聯(lián)劑的摩爾比為1:5?5:1。
[0028] 其中，所述含酰基或羧基的多糖與所述交聯(lián)劑的摩爾比為1:500?1:50。
[0029] 本發(fā)明提供了以上技術(shù)方案任一項所述止血交聯(lián)組合物在制備以下任一種材料 中的用途：止血防粘連材料、組織損傷修復膜或支架、血管封堵或栓塞劑、藥物緩釋載體、體 內(nèi)積液的吸收和封堵材料、潰爛傷口護創(chuàng)敷料。
[0030] 其中，所述止血防粘連材料為止血粉、止血顆粒、止血微球、止血膜、止血海綿、止 血泡沫、止血凝膠膜劑或止血噴霧。
[0031] 本發(fā)明提供的止血防粘連材料，其包含以上技術(shù)方案任一項所述的止血交聯(lián)組合 物。
[0032] 其中，所述止血防粘連材料為止血粉、止血顆粒、止血微球、止血膜、止血海綿、止 血泡沫、止血凝膠膜劑或止血噴霧。
[0033] 本發(fā)明提供的止血交聯(lián)組合物中，明膠在交聯(lián)劑和活化劑的作用下胺基化，與多 糖的?；螋然l(fā)生反應(yīng)得到交聯(lián)物，所得交聯(lián)物兼具明膠止血制品和多糖止血制品的特 點，克服了單一明膠止血制品體內(nèi)降解時間長、單一多糖類止血產(chǎn)品機械性能差等缺點，同 時具有良好的機械性能和降解性能，而且還具有無毒、無刺激性、植入反應(yīng)輕微、無致敏性、 無免疫原性和良好的生物相容性。與現(xiàn)有的止血制品相比，在吸收性能、止血和凝血性能、 降解性能等多個方面都有明顯的提高。
[0034] 本發(fā)明提供的止血防粘連材料由于采用了性能優(yōu)異的止血交聯(lián)組合物，具有止血 效率高、機械性能好和體內(nèi)降解時間可控等優(yōu)點，能夠滿足止血產(chǎn)品、尤其是醫(yī)用領(lǐng)域止血 防粘連產(chǎn)品的要求。本發(fā)明提供的止血防粘連材料可制成多種類型，能有效用于組織損傷 修復，血管封堵或栓塞、藥物緩釋、體內(nèi)積液的吸收和封堵，潰爛傷口的護創(chuàng)和其他組織工 程修復等多個方面，具有廣闊的市場應(yīng)用前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0035] 圖1為實驗例1的親水性對比結(jié)果圖，其中，圖A、B分別代表市售明膠海綿與S1# 止血海綿；
[0036] 圖2為實驗例2的吸水速率對比結(jié)果圖；
[0037] 圖3為實驗例3的凝血性能對比結(jié)果圖；
[0038] 圖4為實驗例4的止血速度對比結(jié)果圖。

【具體實施方式】
[0039] 本發(fā)明的一個方面提供了一種止血交聯(lián)組合物，其原料包括明膠以及含?；螋?基的多糖。
[0040] 其中，明膠可以為現(xiàn)有的任意種類、規(guī)格的明膠，還包括其改性的衍生物。在根據(jù) 本發(fā)明的止血交聯(lián)組合物的一個實施方式中，明膠動力可以為180Bloom?270Bloom。
[0041] 其中，含?；螋然亩嗵强梢詾楝F(xiàn)有的任意種類，還包括其改性的衍生物。在根 據(jù)本發(fā)明的止血交聯(lián)組合物的一個實施方式中，含酰基或羧基的多糖包括但不限于含?；?或羧基的變性淀粉、氧化纖維素、羧甲基纖維素、羧基化羥乙基或羥丙基纖維素、透明質(zhì)酸 鈉、真菌多糖、羧甲基瓜耳膠、褐藻膠、黃原膠、阿拉伯膠等等。
[0042] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式中，含?；螋然亩嗵沁x自含?；螋然淖?性淀粉，尤其是羧甲基淀粉鈉。變性淀粉的?；螋然〈瓤梢詾椹? 01?1，可優(yōu)選為 0. 2 ?0. 6。
[0043] 含?；螋然亩嗵呛兔髂z可以為任意的重量比，在根據(jù)本發(fā)明的止血交聯(lián)組 合物的一個實施方式中，含?；螋然亩嗵呛兔髂z的重量比可以為5?95:95?5 ; 在本發(fā)明優(yōu)選的實施方式中，含酰基或羧基的多糖和明膠的重量比例可以為以下比值： 95:5、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、50:50、45:55、40:60、35:65、30:70、 25:75、20:80、15:85 或 5:95。
[0044] 在根據(jù)本發(fā)明的止血交聯(lián)組合物的一個實施方式中，其原料還可以包括一種或多 種的添加劑，如增塑劑、發(fā)泡劑等。
[0045] 在根據(jù)本發(fā)明的止血交聯(lián)組合物的一個實施方式中，其原料按重量份包括：5? 95份的明膠、5?95份的含?；螋然亩嗵恰??15份的增塑劑以及0?10份的發(fā)泡 劑。
[0046] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式中，止血交聯(lián)組合物的原料按重量份包括：15?75 份的明膠、10?80份的含?；螋然亩嗵恰??15份的增塑劑以及0?10份的發(fā)泡劑。
[0047] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式中，止血交聯(lián)組合物的原料按重量份包括：20?60 份的明膠、15?70份的含?；螋然亩嗵?、0?10份的增塑劑以及0?5份的發(fā)泡劑。
[0048] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式中，止血交聯(lián)組合物的原料按重量份包括：25?50 份的明膠、20?60份的含酰基或羧基的多糖、0?10份的增塑劑以及0?5份的發(fā)泡劑。
[0049] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式中，止血交聯(lián)組合物的原料按重量份包括：30?45 份的明膠、25?50份的含?；螋然亩嗵?、0?5份的增塑劑以及0?5份的發(fā)泡劑。
[0050] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式中，止血交聯(lián)組合物的原料按重量份包括：35?45 份的明膠、25?45份的含?；螋然亩嗵?、0?5份的增塑劑以及0?5份的發(fā)泡劑。 [0051 ] 在根據(jù)本發(fā)明的止血交聯(lián)組合物的一個實施方式中，增塑劑可以為止血材料領(lǐng)域 任意種類的增塑劑，包括但不限于丙三醇、聚乙二醇等。
[0052] 在根據(jù)本發(fā)明的止血交聯(lián)組合物的一個實施方式中，發(fā)泡劑可以為陰離子表面活 性劑、無機發(fā)泡劑等等，其中，陰離子表面活性劑包括但不限于脂肪酸鈉、烷基苯磺酸鈉、吐 溫、泊洛沙姆、司盤、甘油脂肪酸酯、山梨醇脂肪酸酯等；無機發(fā)泡劑包括但不限于碳酸氫鈉 等。
[0053] 在根據(jù)本發(fā)明的止血交聯(lián)組合物的一個實施方式中，其原料還可以包括具有促進 血液凝固、傷口愈合、組織修復、抗菌消炎等作用的物質(zhì)，包括但不限于凝血因子、生長因 子、抗生素、銀離子、銀離子絡(luò)合物等。這些物質(zhì)的添加量、添加種類沒有特別限定，可根據(jù) 實際的治療狀況由本領(lǐng)域技術(shù)人員進行調(diào)節(jié)。
[0054] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式中，凝血因子包括但不限于凝血酶、纖維蛋白酶、凝 血因子XIII、凝血因子VII、凝血因子VIII、抑肽酶、纖連蛋白等。
[0055] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式中，生長因子包括但不限于血小板衍化生長因子 (TOGF)、成纖維細胞生長因子（FGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-β (TGF-β)、表皮生長因子（EGF)、胰 島素樣生長因子（IGF)、神經(jīng)生長因子（NGF)、血管內(nèi)皮生長因子（VGEF)、促進骨生長因子 BMP-2、BMP-7 等。
[0056] 本發(fā)明的另一個方面提供了前述止血交聯(lián)組合物的制備方法，該方法為：將含酰 基或羧基的多糖、明膠以及交聯(lián)劑和活化劑溶于水中形成混合溶液，含?；螋然亩嗵?和明膠于混合溶液中交聯(lián)得到本發(fā)明所述交聯(lián)組合物的原漿，干燥后即得本發(fā)明的交聯(lián)組 合物。
[0057] 在根據(jù)本發(fā)明的制備方法的一個實施方式中，多糖、明膠等原料可分別溶于水中 形成水溶液后再進行混合交聯(lián)，也可以不限順序地加入到水中形成溶液進行交聯(lián)。在本發(fā) 明一個優(yōu)選的實施方式中，將含?；螋然亩嗵?、明膠、交聯(lián)劑和活化劑分別溶于水中形 成溶液，然后將所得水溶液混合進行交聯(lián)，配制水溶液時的溫度可以為10?40°C，每種原 料溶于水后進行充分攪拌以形成均一的水溶液，否則可能影響交聯(lián)的效果，攪拌時間可以 為0. 1?5小時。
[0058] 在根據(jù)本發(fā)明的制備方法的一個實施方式中，原料混合交聯(lián)時的溫度可以為 10?40°C，交聯(lián)的時間可以為0. 5?24小時，具體視反應(yīng)情況確定。原料混合交聯(lián)時還可 用酸性溶液或緩沖液調(diào)節(jié)水溶液的pH值為3?8,優(yōu)選的pH值可以為4?5,更優(yōu)選的pH 值可以為4. 3?4. 8。
[0059] 在根據(jù)本發(fā)明的制備方法的一個實施方式中，混合交聯(lián)完畢后，可采用離心、透析 等分離方式除去交聯(lián)劑等小分子物質(zhì)，得到交聯(lián)組合物原漿。
[0060] 在根據(jù)本發(fā)明的制備方法的一個優(yōu)選實施方式中，交聯(lián)組合物的制備過程包括以 下步驟：
[0061] (1)將含?；螋然亩嗵羌尤胨校瑪嚢璧觅|(zhì)量百分比濃度約為1?10%多糖 溶液，調(diào)節(jié)溶液的pH值至3?8,添加活化劑、交聯(lián)劑并攪拌均勻；
[0062] (2)將明膠加入水中，攪拌得質(zhì)量百分比濃度約為1?10%明膠溶液；
[0063] (3)將步驟⑵所得溶液加入步驟⑴的溶液中，調(diào)節(jié)所得混合溶液的pH值至3? 8,攪拌交聯(lián)，得交聯(lián)組合物料液；
[0064] (4)將步驟（4)所得交聯(lián)組合物料液透析10?48小時，得交聯(lián)組合物原漿，干燥 后即得交聯(lián)組合物。
[0065] 其中，上述過程中的步驟（1)、（2)順序不限，可互換順序，亦可同時進行。
[0066] 在根據(jù)本發(fā)明的制備方法的一個實施方式中，還包括得到交聯(lián)組合物的原漿后， 在原漿中加入增塑劑和/或發(fā)泡劑。其中，增塑劑可以為止血材料領(lǐng)域任意種類的增塑劑， 包括但不限于丙三醇、聚乙二醇等；發(fā)泡劑可以為陰離子表面活性劑、無機發(fā)泡劑等等，其 中，陰離子表面活性劑包括但不限于脂肪酸鈉、烷基苯磺酸鈉、吐溫、泊洛沙姆、司盤、甘油 脂肪酸酯、山梨醇脂肪酸酯等；無機發(fā)泡劑包括但不限于碳酸氫鈉等。
[0067] 在根據(jù)本發(fā)明的制備方法的一個實施方式中，還包括得到交聯(lián)組合物的原漿后， 在所述原漿中加入凝血因子、生長因子、抗生素、銀離子或銀離子絡(luò)合物中的一種或多種。 其中，凝血因子包括但不限于凝血酶、纖維蛋白酶、凝血因子XIII、凝血因子VII、凝血因子 VIII、抑肽酶、纖連蛋白等；生長因子包括但不限于血小板衍化生長因子、成纖維細胞生長 因子、轉(zhuǎn)化生長因子-β、表皮生長因子、胰島素樣生長因子IGF、神經(jīng)生長因子、血管內(nèi)皮 生長因子、促進骨生長因子BMP-2、BMP-7等。
[0068] 在根據(jù)本發(fā)明的制備方法的一個實施方式中，交聯(lián)劑可以為碳二亞胺類交聯(lián)劑， 包括但不限于1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDC)、1-二甲基氨丙基乙 基碳二亞胺（ETC)、環(huán)己基甲基嗎啉乙基碳二亞胺β-丁烯硫酸化物（CMC)、亞苯基乙基碳 二亞胺、1.6-環(huán)六亞甲基二（碳二亞胺）等等。
[0069] 在根據(jù)本發(fā)明的制備方法的一個實施方式中，活化劑包括但不限于N-羥基琥珀 酰亞胺（NHS)、N-羥基硫代琥珀酰亞胺等等。
[0070] 在根據(jù)本發(fā)明的制備方法的一個實施方式中，活化劑與交聯(lián)劑的摩爾比可以為 1:5 ?5:1 〇
[0071] 在根據(jù)本發(fā)明的制備方法的一個實施方式中，含?；螋然亩嗵桥c交聯(lián)劑的摩 爾比可以為1:500?1:50。
[0072] 本發(fā)明的第三個方面提供了前述止血交聯(lián)組合物的用途，可用于制備止血防粘連 材料、組織損傷修復膜或支架、血管封堵或栓塞劑、藥物緩釋載體、體內(nèi)積液的吸收和封堵 材料、潰爛傷口護創(chuàng)敷料、以及其他組織工程修復支架等等。
[0073] 在根據(jù)本發(fā)明的用途的一個實施方式中，止血防粘連材料為醫(yī)用可吸收止血防粘 連材料，包括但不限于止血粉、止血顆粒、止血微球、止血膜、止血海綿、止血泡沫、止血凝膠 膜劑、止血噴霧等等。
[0074] 本發(fā)明的第四個方面提供了一種止血防粘連材料，其包括本發(fā)明所述的止血交聯(lián) 組合物。
[0075] 在根據(jù)本發(fā)明的止血防粘連材料的一個實施方式中，止血防粘連材料為醫(yī)用可吸 收止血防粘連材料，包括但不限于止血粉、止血顆粒、止血微球、止血膜、止血海綿、止血泡 沫、止血凝膠膜劑、止血噴霧等等。
[0076] 在根據(jù)本發(fā)明的止血防粘連材料的一個實施方式中，止血防粘連材料可以通過現(xiàn) 有的止血材料劑型制備。
[0077] 為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將進一步描述本發(fā)明的示例 性實施例的技術(shù)方案。
[0078] 以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。其中，明膠 (180-270Bloom)、多糖、EDC、NHS均為市售產(chǎn)品，其它試劑、材料等如未特別說明均為市售產(chǎn) 品。
[0079] 實施例1止血交聯(lián)組合物原漿的制備
[0080] 將200mg羧甲基淀粉鈉置于50ml的潔凈燒杯中，溶于6ml去離子水，用0. IN HC1 調(diào)節(jié)溶液pH為4?5之間。將100mg明膠溶于5ml去離子水中，在40°C下攪拌2小時制得 均勻的明膠溶液。攪拌下向羧甲基淀粉溶液中滴加交聯(lián)劑/活化劑的混合水溶液〇. 6ml，該 混合溶液中含40mg的碳二亞胺（EDC)和20mg的N-羥基琥珀酰亞胺（NHS)。攪拌上述溶液 5min后，加入已制好的明膠溶液，控制所得混合溶液的pH為4?5之間，在40°C水浴中攪 拌1小時，使溶液中的多糖和明膠發(fā)生充分交聯(lián)。通過透析的方法洗滌，去除交聯(lián)中的交聯(lián) 劑等小分子物質(zhì)，得到原漿產(chǎn)品1#。
[0081] 利用相同的方法，調(diào)節(jié)羧甲基淀粉鈉和明膠的量，分別在含200mg(溶于6ml水 中）羧甲基淀粉鈉中加入明膠水溶液（200mg、500mg、1000mg、2000mg分別溶于10ml、25ml、 50ml、100ml水中）；交聯(lián)劑和活化劑加入量保持不變，分別制得交聯(lián)原漿2#，3#，4#，5#。
[0082] 實施例2止血交聯(lián)組合物原漿的制備
[0083] 將0. 5g羧甲基纖維素鈉溶于50ml蒸餾水配制成溶液。將lg明膠溶于50ml蒸餾 水中配成明膠溶液。室溫攪拌下向羧甲基纖維素溶液中滴加交聯(lián)劑/活化劑的混合水溶液 3ml，該混合溶液中含lOOmg的碳二亞胺（EDC)和50mg的N-羥基琥珀酰亞胺（NHS)。攪拌 上述溶液5min后，加入已制好的明膠溶液，在40°C水浴中攪拌1小時，使溶液中的多糖和 明膠發(fā)生充分交聯(lián)。通過透析的方法洗滌，去除交聯(lián)中的交聯(lián)劑等小分子物質(zhì)，得到交聯(lián)原 漿。
[0084] 實施例3止血交聯(lián)組合物原漿的制備
[0085] 將lg羧甲基殼聚糖用50ml稀醋酸（pH = 4?5)配成溶液，將0. lg明膠溶于2. 5ml 蒸餾水配成明膠溶液。室溫攪拌下向羧甲基殼聚糖溶液中滴加交聯(lián)劑/活化劑的混合水溶 液6ml，該混合溶液中含200mg的碳二亞胺（EDC)和lOOmg的N-羥基琥珀酰亞胺（NHS)。攪 拌上述溶液5min后，加入已制好的明膠溶液，在40°C水浴中攪拌1小時，使溶液中的多糖和 明膠發(fā)生充分交聯(lián)。通過透析的方法洗滌，去除交聯(lián)中的交聯(lián)劑等小分子物質(zhì)，得到交聯(lián)原 漿。
[0086] 實施例4止血粉的制備
[0087] 將290g羧甲基淀粉鈉溶于5L水中，攪拌下充分溶脹，并滴入0. 1N的鹽酸水溶液 調(diào)節(jié)溶液的pH值至4. 9。持續(xù)攪拌中，向其中加入0· 8mol EDC和0· 8mol NHS的混合交聯(lián) 劑/活化劑（以水溶液形式）。然后添加29g/L明膠溶液2. 5L。保持反應(yīng)溫度40°C，控制 所得混合溶液的pH值為4. 9。反應(yīng)2小時后，通過透析的方法去除交聯(lián)過程中的交聯(lián)劑等 小分子物質(zhì)，得到原漿。將原漿投入噴霧干燥機的物料斗中，設(shè)置進風溫度為130°C ±2°C， 出風溫度90°C ±2°C，霧化頻率為700rpm，橫流泵轉(zhuǎn)速為12rpm。待進出口溫度基本穩(wěn)定后， 收集干燥好的物料得羧甲基淀粉鈉-明膠止血粉。
[0088] 實施例5止血膜的制備
[0089] 分別配置羧甲基淀粉鈉（580mg溶解于20ml水中）溶液、碳二亞胺EDC/NHS溶液 2ml (含EDC、NHS各為1. 6mmol)，和明膠溶液（145mg溶于5ml蒸餾水）混合，在實施例1所 述交聯(lián)條件下交聯(lián)反應(yīng)2小時。反應(yīng)后經(jīng)過透析，得到交聯(lián)組合物原漿。取出原漿，用勻質(zhì) 器達成均勻漿液，澆入模具中，_30°C冷凍，然后在真空條件下冷凍干燥48小時得到海綿狀 固體，壓片制膜得到止血膜。
[0090] 實施例6止血海綿的制備
[0091] 應(yīng)用實施例1中制備3#的羧甲基淀粉鈉、明膠和交聯(lián)劑/活化劑的配方，交聯(lián)時 間分別為〇. 511、111、211、411、241 1，制備交聯(lián)組合物原漿。將透析清洗后的原漿用攪拌器打成 均勻漿液，倒入一長方形模具中，在_20°C下低溫保存箱中預冷24小時，再放入冷凍干燥機 中，在-50°C、真空小于10帕下冷凍干燥48小時，分別得到止血防粘連海綿S1#、S2#、S3#、 S4#、S5#。
[0092] 實施例7含抗菌劑止血海綿的制備
[0093] 應(yīng)用實施例1中制備3#的羧甲基淀粉鈉、明膠和交聯(lián)劑/活化劑的配方，交聯(lián)時 間分別為lh，制備交聯(lián)組合物原漿。將透析清洗后的原漿用攪拌器打成均勻漿液，每100g 漿液中加入5ug?100ug抗菌劑，充分攪拌，倒入一長方形模具中，在_20°C下低溫保存箱中 預冷24小時，再放入冷凍干燥機中，在-50°C、真空小于10帕下冷凍干燥24-48小時，得到 含抗菌劑的止血防粘連海綿。
[0094] 實施例8含生長因子止血海綿的制備
[0095] 應(yīng)用實施例1中制備2#的羧甲基淀粉鈉、明膠和交聯(lián)劑/活化劑的配方，交聯(lián)時 間分別為lh，制備交聯(lián)組合物原漿。將透析清洗后的原漿用攪拌器打成均勻漿液，每100g 漿液中加入5ug?50ug生長因子，倒入一長方形模具中，在-20°C下低溫保存箱中預冷24 小時，再放入冷凍干燥機中，在_50°C、真空小于10帕下冷凍干燥24-48小時，得到含生長因 子的止血防粘連海綿。
[0096] 實施例9含發(fā)泡劑和塑化劑止血海綿的制備
[0097] 將50mg甘油脂肪酸酯加入純化水浸泡1個小時后置于攪拌器內(nèi)攪拌均勻，然后 向攪拌器內(nèi)的溶液中加入50mg聚乙二醇400,以300r/min的中速攪拌均勻，然后邊攪拌邊 向攪拌器內(nèi)的溶液中加入實施例1的3#交聯(lián)原漿，再使不銹鋼攪拌器以600r/min的高速 攪拌，待發(fā)泡液的體積膨大至原來的4-5倍時，將發(fā)泡液注入硅膠模具盤里，盡快放入速凍 箱，使其快速預凍2小時；將預凍完全的泡液脫模，得海綿半成品，將其在真空條件下依次 進行第一次升華及保溫、升華及保溫操作結(jié)束后，則得到疏松多孔的醫(yī)用止血防粘連海綿。
[0098] 實施例10止血凝膠膜劑的制備
[0099] 應(yīng)用實施例1中的反應(yīng)步驟和條件，制成并清洗實施例1中制備的5#交聯(lián)組合物 原漿，向其中加入120mg甘油和25mg吐溫-80,在20-50°C下充分攪拌，倒入模具中，將該模 具放入真空干燥箱中干燥48h，制成復合凝膠膜材料。
[0100] 實施例11止血噴霧劑的制備
[0101] 由實施例1方法制備的原漿液透析清洗后得到的交聯(lián)組合物和溶劑水配制而成。 止血噴霧劑中原料組分及含量為：交聯(lián)羧甲基淀粉鈉-明膠6-20g，水加至100g。稱取交聯(lián) 羧甲基淀粉鈉-明膠6-20g，自動過濾器上加蒸餾水至100g，攪拌均勻，檢驗合格后灌入帶 有閥門的噴霧瓶。
[0102] 實驗例1止血海綿的親水性測定實驗
[0103] 止血海綿的親水性測定實驗所用的樣品為實施例6的止血海綿S1#和市售明膠海 綿（江西省祥恩醫(yī)療科技發(fā)展有限公司）。所用的儀器為接觸角測量儀（GBX公司MCAT接 觸角測量儀）。
[0104] 具體的實驗步驟如下：首先調(diào)整水平（水準泡居中），上移工作臺以工作臺的上邊 緣線為基準，旋轉(zhuǎn)攝像系統(tǒng)，使攝像窗口的上或下邊與之平行。再把試樣置于工作臺上放平 壓緊，利用微量進樣器調(diào)整液滴的量，使在針頭形成液滴，轉(zhuǎn)動旋鈕使工作臺上移，讓試樣 表面與液滴接觸，再下移工作臺，試樣上即可留下液滴，此時開始記時。通過工作臺和攝像 系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，使液滴顯示清晰后，點擊"凍結(jié)"按鈕，即可進行接觸角的測量。接觸角測量結(jié) 果如圖1所示。在相同的時間內(nèi)（3秒），S1#止血海綿的接觸角約為63°，市售明膠海綿 的接觸角約為138°，達到S1#止血海綿接觸角的兩倍。
[0105] 以上結(jié)果說明S1#止血海綿的親水性明顯優(yōu)于市售明膠海綿的親水性，此性質(zhì)決 定了止血海綿的吸水速度大大快于明膠海綿的吸水速度，更加適用于做止血護創(chuàng)材料。
[0106] 實驗例2止血海綿的體外吸水速率實驗
[0107] 體外吸水速率實驗采用毛細管實驗方法測定。毛細管實驗法即在酸式滴定管 (25ml)內(nèi)注水，使酸式滴定管零刻度液面與砂心漏斗濾板下端平齊。將濾紙放入砂心漏斗， 與濾板完全接觸。
[0108] 調(diào)整酸式滴定管至零刻度，各稱取0. 05g止血海綿（由實施例6的方法制備S1# 樣品）和市售明膠止血海綿（江西省祥恩醫(yī)療科技發(fā)展有限公司），在濾紙上均勻鋪開，放 入砂心漏斗，打開滴定管活塞，從液面開始下降起每隔20s也就是2〇S、4〇S、6〇S等等分別計 時，觀察液面下降距離，計算樣品吸水速度。結(jié)果參見圖2,圖2結(jié)果表明S1#淀粉-明膠止 血海綿的吸水速率明顯高于市場上購買的明膠海綿止血產(chǎn)品。
[0109] 實驗例3止血海綿的體外凝血實驗
[0110] 無菌脫纖維羊全血由北京冬歌生物技術(shù)有限公司提供，實驗方法如下：切取海綿 樣品1. 5cmX lcmXO. 5cm，所用的止血海綿樣品為實施例6的S1#樣品，對照樣品為可吸收 明膠海綿（江西省祥恩醫(yī)療科技發(fā)展有限公司）。將準確切取的樣品分別放入玻璃試管中， 每支試管中加入lml無菌脫纖維羊全血，放入37°C水浴中加熱，每隔5s鐘將試管傾斜，觀察 血液是否凝固。結(jié)果如圖3所示。
[0111] 圖3的結(jié)果表明，本發(fā)明提供的止血海綿的凝血性能明顯優(yōu)于對照樣品明膠海 綿。
[0112] 實驗例4止血海綿的兔耳靜脈止血實驗
[0113] 新西蘭大白兔10只，雄性，體重約2500?3000g。將供試家兔耳部脫毛、消毒，無 菌條件下于家兔左右耳緣末1/3處，用消毒手術(shù)刀切開lcm長的創(chuàng)口，其中包括耳中央一 主靜脈被切開，但耳朵并不切透，防止血液從內(nèi)測流出，待血液充滿創(chuàng)面后進行后續(xù)凝血測 試。所用的止血海綿樣品為實施例6的S1#樣品，陽性對照樣品為可吸收明膠海綿（江西 省祥恩醫(yī)療科技發(fā)展有限公司）和可吸收止血紗布（云南德華生物藥業(yè)有限公司），所用的 陰性對照樣品為普通紗布。將止血材料樣品剪成2cmX2cm小塊，稱量后備用。壓迫止血， 每5s觀察1次,直至完全止血，記錄時間。結(jié)果如圖4所示。
[0114] 圖4的結(jié)果表明，本發(fā)明提供的止血海綿在止血速度上明顯快于現(xiàn)有的止血材 料。
[0115] 實驗例5止血海綿的體外降解實驗
[0116] 應(yīng)用實施例6中得到的止血防粘連海綿51#、52#、53#、54#、55#，分別切割止血海 綿樣品為2cmX 2cm規(guī)格,稱重后，放入PBS緩沖溶液（pH值為7. 4)中7天后，用水清洗，干 燥并恒重后稱重。計算樣品的降解速率。止血海綿樣品的質(zhì)量減輕比率分別為49%、46%、 30%、21 %和13%。說明其具有良好的降解性能。
[0117] 以上實驗例的結(jié)果表明，本發(fā)明提供的止血防粘連材料在吸水性能、止血性能、降 解性能等多個方面都明顯優(yōu)于現(xiàn)有的止血產(chǎn)品，可作為一種性能更加優(yōu)異的止血防粘連產(chǎn) 品使用。同時，本發(fā)明提供的止血防粘連材料由于其性能優(yōu)異，還有望在制備組織損傷修復 膜或支架、血管封堵或栓塞劑、藥物緩釋載體、體內(nèi)積液的吸收和封堵材料、潰爛傷口護創(chuàng) 敷料以及其他組織修復工程材料中得到大范圍的應(yīng)用。
[0118] 雖然為了說明本發(fā)明，已經(jīng)公開了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人 員應(yīng)當理解，在不脫離權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明構(gòu)思和范圍的情況下，可以對本發(fā)明做 出各種修改、添加和替換。
【權(quán)利要求】
1. 一種止血交聯(lián)組合物，其特征在于，其原料包括明膠以及含?；螋然亩嗵恰?br> 2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的交聯(lián)組合物，其中，所述含?；螋然亩嗵沁x自含?；?羧基的變性淀粉、氧化纖維素、羧甲基纖維素、羧基化羥乙基或羥丙基纖維素、透明質(zhì)酸鈉、 真菌多糖、羧甲基瓜耳膠、褐藻膠、黃原膠或阿拉伯膠中的一種或多種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的交聯(lián)組合物，其原料按重量份包括以下成分： 明膠： 5?95份； 含酰基或羧基的多糖： 5?95份； 增塑劑： 0?15份； 發(fā)泡劑： 0?10份。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的交聯(lián)組合物，其中，所述增塑劑選自丙三醇或聚乙二醇。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的交聯(lián)組合物，其中，所述發(fā)泡劑選自陰離子表面活性劑或無 機發(fā)泡劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的交聯(lián)組合物，其中，所述止血交聯(lián)組合物的原料還包括凝血 因子、生長因子、抗生素、銀離子或銀離子絡(luò)合物中的一種或多種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的交聯(lián)組合物，其中，所述凝血因子選自凝血酶、纖維蛋白酶、 凝血因子XIII、凝血因子VII、凝血因子VIII、抑肽酶、纖連蛋白中的一種或多種。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的交聯(lián)組合物，其中，所述生長因子選自血小板衍化生長因子、 成纖維細胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-β、表皮生長因子、胰島素樣生長因子、神經(jīng)生長因 子、血管內(nèi)皮生長因子、促進骨生長因子ΒΜΡ-2、ΒΜΡ-7中的一種或多種。
9. 權(quán)利要求1-8任一項所述止血交聯(lián)組合物的制備方法，所述制備方法為：將含?；?或羧基的多糖、明膠以及交聯(lián)劑和活化劑溶于水中形成混合溶液，所述含?；螋然亩?糖和所述明膠于其中交聯(lián)得到所述交聯(lián)組合物的原漿，干燥即得所述交聯(lián)組合物。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其中，所述制備方法還包括交聯(lián)之后進行透析， 得到所述交聯(lián)組合物的原漿。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其中，所述制備方法還包括調(diào)節(jié)所述混合溶液的 pH值為3?8,優(yōu)選為4?5。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其中，所述制備方法還包括在所述原漿中加入以 下物質(zhì)中的一種或多種：增塑劑、發(fā)泡劑、凝血因子、生長因子、抗生素、銀離子或銀離子絡(luò) 合物。
13. 根據(jù)權(quán)利要求9-12任一項所述的制備方法，其中，所述交聯(lián)劑選自1-乙 基-3-(3-二甲基氨丙基）碳二亞胺鹽酸鹽、1-二甲基氨丙基乙基碳二亞胺、環(huán)己基甲基嗎 啉乙基碳二亞胺β-丁烯硫酸化物、亞苯基乙基碳二亞胺或1.6-環(huán)六亞甲基二（碳二亞 胺）。
14. 根據(jù)權(quán)利要求9-12任一項所述的制備方法，其中，所述活化劑選自Ν-羥基琥珀酰 亞胺或Ν-羥基硫代琥珀酰亞胺。
15. 根據(jù)權(quán)利要求9-12任一項所述的制備方法，其中，所述活化劑與交聯(lián)劑的摩爾比 為 1:5 ?5:1。
16. 根據(jù)權(quán)利要求9-12任一項所述的制備方法，其中，所述含?；螋然亩嗵桥c所 述交聯(lián)劑的摩爾比為1:500?1:50。
17. 權(quán)利要求1-8任一項所述止血交聯(lián)組合物在制備以下任一種材料中的用途：止血 防粘連材料、組織損傷修復膜或支架、血管封堵或栓塞劑、藥物緩釋載體、體內(nèi)積液的吸收 和封堵材料、潰爛傷口護創(chuàng)敷料。
18. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的用途，其中，所述止血防粘連材料為止血粉、止血顆粒、止 血微球、止血膜、止血海綿、止血泡沫、止血凝膠膜劑或止血噴霧。
19. 一種止血防粘連材料，其包含權(quán)利要求1-8任一項所述的止血交聯(lián)組合物。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的止血防粘連材料，其中，所述止血防粘連材料為止血粉、止 血顆粒、止血微球、止血膜、止血海綿、止血泡沫、止血凝膠膜劑或止血噴霧。
【文檔編號】A61L15/28GK104208742SQ201410216904
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年5月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月31日
【發(fā)明者】范冬梅, 王凝, 董驤, 劉慧琴, 鄭誠功 申請人:北京納通科技集團有限公司