一種治療2型糖尿病的金露梅提取物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說(shuō)是一種從金露梅(藏藥名：班那)枝葉中提取的治療2型糖尿病的潛在藥物。本發(fā)明中的提取物通過(guò)如下步驟制成：以金露梅枝葉為原料，經(jīng)粉碎后過(guò)20目篩，用5倍體積的95%乙醇回流提取3次，每次1h，抽濾，合并3次濾液，濾液真空濃縮后分散于水中，采用5倍體積的石油醚萃取分層，將所得水層用5倍體積的乙酸乙酯萃取分層，得乙酸乙酯萃取液，經(jīng)真空干燥即得治療2型糖尿病的金露梅提取物。本發(fā)明為該提取物的制備提供了一套完善的技術(shù)方案，采用該方案獲得的提取物能高效地抑制α-葡萄糖苷酶和醛糖還原酶活性，降低2型糖尿病大鼠血糖、調(diào)節(jié)血脂水平、促進(jìn)胰島素mRNA表達(dá)、抑制抵抗素mRNA表達(dá)。
【專利說(shuō)明】一種治療2型糖尿病的金露梅提取物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說(shuō)是一種從金露梅枝葉中提取的治療2型糖尿病的潛在藥物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金露梅(Potentilla fruticosa)系灌木,高達(dá)0.5-1米,多分枝。小枝紅褐色,幼時(shí)被長(zhǎng)柔毛。羽狀復(fù)葉，有5(3)小葉，長(zhǎng)圓形、倒卵狀長(zhǎng)圓形或卵狀披針形，長(zhǎng)0.7-2厘米，邊緣平或稍反卷，全緣，先端急尖或圓鈍，基部楔形?；S色，寬倒卵形。瘦果近卵圓形，熟時(shí)褐棕色，長(zhǎng)約1.5毫米。生于海拔3000-4000米山坡草地、礫石坡、灌叢等，產(chǎn)于青海、西藏、四川等地，為藏醫(yī)常用藥材，藏藥名班那?！毒е楸静荨酚涊d:班那主治消化不良和肺病，其炭能干涸黃水；現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)金露梅主要含有黃酮類、三萜類、有機(jī)酸以及酚酸類等化學(xué)成分，藥理研究證明金露梅具有抗菌、抗病毒、抗氧化、增強(qiáng)免疫力等功效。本發(fā)明首次研究發(fā)現(xiàn)，金露梅的提取物具有高效的α -葡萄糖苷酶和醛糖還原酶抑制作用，并能有效地降低2型糖尿病大鼠空腹血糖、調(diào)節(jié)血脂水平、促進(jìn)胰島素mRNA表達(dá)、抑制抵抗素mRNA表達(dá)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供了一種從金露梅枝葉中提取治療2型糖尿病的提取物的方案，其通過(guò)下述技術(shù)予以實(shí)現(xiàn):以金露梅枝葉為原料，經(jīng)粉碎后過(guò)20目篩，用5倍體積的95%乙醇回流提取3次，每次I h，抽濾，合并3次濾液，濾液真空濃縮后分散于水中，采用5倍體積的石油醚萃取分層，將所得水 層用5倍體積的乙酸乙酯萃取分層，得乙酸乙酯萃取液，經(jīng)真空干燥即得治療2型糖尿病的金露梅提取物。本發(fā)明從金露梅枝葉中提取的治療2型糖尿病的提取物與現(xiàn)有的藥物相比較具有如下有益效果:所述的治療2型糖尿病的金露梅提取物采用α-葡萄糖苷酶和醛糖還原酶體外活性測(cè)定方法，進(jìn)行酶抑制活性的測(cè)定；同時(shí)進(jìn)行體內(nèi)降糖實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在樣品濃度為1.25 mg/mL時(shí)，該提取物的α-葡萄糖苷酶的抑制率為97.56%，半數(shù)抑制濃度IC50為5.67 mg/mL ;在樣品濃度為0.625mg/ml時(shí)，該提取物醛糖還原酶的抑制率為55.56%，半數(shù)抑制濃度IC50為0.498mg/mL ;采用高脂高糖飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型，以本發(fā)明所述提取物為實(shí)驗(yàn)藥物，結(jié)果表明在劑量300mg/ (kg*d)連續(xù)給藥30 d后的降糖率為28.58%，并且可以升高血清胰島素(P < 0.01)和血清高密度脂蛋白(P < 0.05)，降低血清總膽固醇(P < 0.01)、血清甘油三酯(P < 0.01)和血清低密度脂蛋白(P < 0.01);通過(guò)分子藥理學(xué)技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)該提取物能顯著促進(jìn)2型糖尿病大鼠的胰島素mRNA表達(dá)(P < 0.01)和抑制抵抗素mRNA表達(dá)(P < 0.01)。本發(fā)明中的提取物，是從青藏高原天然植物金露梅中提取得到，提取工藝簡(jiǎn)便、安全，為制備新型的治療2型糖尿病的藥物提供依據(jù)。本發(fā)明為治療2型糖尿病提供一種潛在的藥物。其關(guān)鍵技術(shù)為提取物的制備方法、α-葡萄糖苷酶和醛糖還原酶抑制活性的測(cè)定、體內(nèi)降糖實(shí)驗(yàn)、分子藥理實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)提取物對(duì)胰島素mRNA和抵抗素mRNA表達(dá)的影響。該方法簡(jiǎn)單合理，易于操作，并可用于以治療2型糖尿病為目的的產(chǎn)品的研發(fā)，具有產(chǎn)業(yè)化意義。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0004]圖1是本發(fā)明一種治療2型糖尿病的金露梅提取物制備流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0005]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明一種治療2型糖尿病的金露梅提取物及其制備方法的技術(shù)方案作進(jìn)一步描述。如圖1所示，一種治療2型糖尿病的金露梅提取物及其制備方法，所述的提取物是從金露梅枝葉中提取制成，通過(guò)如下步驟制成:以金露梅枝葉為原料，經(jīng)粉碎后過(guò)20目篩，用5倍體積的95%乙醇回流提取3次，每次I h，抽濾，合并3次濾液，濾液真空濃 縮后分散于水中，采用5倍體積的石油醚萃取分層，將所得水層用5倍體積的乙酸乙酯萃取分層，得乙酸乙酯萃取液，經(jīng)真空干燥即得治療2型糖尿病的金露梅提取物。
[0006]所述的治療2型糖尿病的提取物采用α -葡萄糖苷酶和醛糖還原酶體外活性測(cè)定方法，進(jìn)行酶抑制活性的測(cè)定，同時(shí)進(jìn)行體內(nèi)降糖實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在樣品濃度為1.25mg/mL時(shí)，該提取物的α -葡萄糖苷酶的抑制率為97.56%，半數(shù)抑制濃度IC50為5.67 mg/mL ;在樣品濃度為0.625mg/ml時(shí)，該提取物醛糖還原酶的抑制率為55.56%，半數(shù)抑制濃度IC50為0.498mg/mL ;采用高脂高糖飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型，以本發(fā)明所述提取物為實(shí)驗(yàn)藥物，結(jié)果表明在劑量300mg/ (kg*d)連續(xù)給藥30 d后的降糖率為28.58%，并且可以升高血清胰島素(P < 0.01)和血清高密度脂蛋白(P
<0.05)，降低血清總膽固醇(P < 0.01)、血清甘油三酯(P < 0.01)和血清低密度脂蛋白(P <0.01);通過(guò)分子藥理學(xué)技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)該提取物能顯著促進(jìn)2型糖尿病大鼠的胰島素mRNA表達(dá)(P < 0.01)和抑制抵抗素mRNA表達(dá)(P < 0.01)。
[0007]實(shí)施例1
主要技術(shù)方案:原料及輔料:金露梅枝葉、蒸餾水、乙醇、石油醚、乙酸乙酯等。主要設(shè)備:粉粹機(jī)、真空泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、冷凝循環(huán)水泵等。
[0008]本發(fā)明一種治療2型糖尿病的金露梅提取物及其制備方法的方案如下:以金露梅枝葉為原料，經(jīng)粉碎后過(guò)20目篩，用5倍體積的95%乙醇回流提取3次，每次I h，抽濾，合并3次濾液，濾液真空濃縮后分散于水中，采用5倍體積的石油醚萃取分層，將所得水層用5倍體積的乙酸乙酯萃取分層，得乙酸乙酯萃取液，經(jīng)真空干燥即得治療2型糖尿病的金露梅提取物。
[0009]所述的治療2型糖尿病的提取物采用α -葡萄糖苷酶和醛糖還原酶體外活性測(cè)定方法，進(jìn)行酶抑制活性的測(cè)定，同時(shí)進(jìn)行體內(nèi)降糖實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在樣品濃度為1.25mg/mL時(shí)，該提取物的α -葡萄糖苷酶的抑制率為97.56%，半數(shù)抑制濃度IC50為5.67 mg/mL ;在樣品濃度為0.625mg/ml時(shí)，該提取物醛糖還原酶的抑制率為55.56%，半數(shù)抑制濃度IC50為0.498mg/mL ;采用高脂高糖飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型，以本發(fā)明所述提取物為實(shí)驗(yàn)藥物，結(jié)果表明在劑量300mg/ (kg*d)連續(xù)給藥30 d后的降糖率為28.58%，并且可以升高血清胰島素(P < 0.01)和血清高密度脂蛋白(P
<0.05)，降低血清總膽固醇(P < 0.01)、血清甘油三酯(P < 0.01)和血清低密度脂蛋白(P <0.01);通過(guò)分子藥理學(xué)技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)該提取物能顯著促進(jìn)2型糖尿病大鼠的胰島素mRNA表達(dá)(P < 0.01)和抑制抵抗素mRNA表達(dá)(P < 0.01)。
[0010]本發(fā)明中的提取物α -葡萄糖苷酶和醛糖還原酶的抑制率高，并能降低2型糖尿病血糖、調(diào)節(jié)血脂水平、促 進(jìn)胰島素mRNA表達(dá)、抑制抵抗素mRNA表達(dá)。該提取物從青藏高原天然植物金露梅中制備得到，制備工藝簡(jiǎn)便、安全，為制備新型的治療2型糖尿病藥物提供依據(jù)。該發(fā)明為治療2型糖尿病提供一種潛在的藥物，其關(guān)鍵技術(shù)為提取物的制備、α -葡萄糖苷酶和醛糖還原酶抑制活性的測(cè)定、體內(nèi)降糖實(shí)驗(yàn)、分子藥理實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)提取物對(duì)胰島素mRNA和抵抗素mRNA表達(dá)的影響。該方法簡(jiǎn)單合理，易于操作，并可用于以治療2型糖尿病為目的的產(chǎn)品的研發(fā)，具有產(chǎn)業(yè)化意義。
【權(quán)利要求】
1.一種治療2型糖尿病的金露梅提取物及其制備方法，其特征在于:所述的治療2型糖尿病的提取物采用α-葡萄糖苷酶和醛糖還原酶體外活性測(cè)定方法，進(jìn)行酶抑制活性的測(cè)定；同時(shí)進(jìn)行體內(nèi)降糖實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在樣品濃度為1.25 mg/mL時(shí)，該提取物的α -葡萄糖苷酶的抑制率為97.56%，半數(shù)抑制濃度IC50為5.67 mg/mL ;在樣品濃度為.0.625mg/ml時(shí)，該提取物醛糖還原酶的抑制率為55.56%，半數(shù)抑制濃度IC50為0.498mg/mL ;采用高脂高糖飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型，以本發(fā)明所述提取物為實(shí)驗(yàn)藥物，結(jié)果表明在劑量300mg/ (kg*d)連續(xù)給藥30 d后的降糖率為28.58%，并且可以升高血清胰島素(P < 0.01)和血清高密度脂蛋白(P < 0.05)，降低血清總膽固醇(P < 0.01) 、血清甘油三酯(P < 0.01)和血清低密度脂蛋白(P < 0.01)；通過(guò)分子藥理學(xué)技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)該提取物能顯著促進(jìn)2型糖尿病大鼠的胰島素mRNA表達(dá)(P<0.01)和抑制抵抗素mRNA表達(dá)(P < 0.01)。
【文檔編號(hào)】A61P3/10GK103961427SQ201410235414
【公開(kāi)日】2014年8月6日 申請(qǐng)日期:2014年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月30日
【發(fā)明者】曾陽(yáng), 唐勛, 馬秀梅, 鮑敏, 李錦萍, 馬繼雄, 張倩茹, 宋永朋, 余濤 申請(qǐng)人:青海師范大學(xué)