一種恩諾沙星殼聚糖微球制備的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種恩諾沙星殼聚糖微球制備方法，采用乳化交聯(lián)法，以戊二醛為交聯(lián)劑，制備恩諾沙星殼聚糖載藥微球。本發(fā)明采用乳化交聯(lián)法制備的恩諾沙星殼聚糖微球粒徑為21μm，微球表面較為光滑，球體圓滑，大小比較均勻，單分散性較好；其載藥量為4.14％，包封率為5.64％。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物制備領(lǐng)域，尤其涉及一種恩諾沙星殼聚糖微球制備方法。 一種恩諾沙星殼聚糖微球制備的方法

【背景技術(shù)】
[0002] 恩諾沙星（enrofloxacin，ERPX)作為動(dòng)物專用抗菌藥，系全合成的第三代喹諾酮 類藥物，已廣泛應(yīng)用于各種動(dòng)物感染性疾病的預(yù)防和治療。由于其具有高效、廣譜，耐藥菌 極少，副作用小等特點(diǎn)，是當(dāng)今世界動(dòng)物用最佳的感染類藥物之一。
[0003] 恩諾沙星是于1987年德國拜耳公司首創(chuàng)投放市場的，我國1992年由廣東?？但F 藥廠合成成功?；瘜W(xué)名稱為1-環(huán)丙基-6-氟-4-氧代-1，4-二氫-7-(4-乙基-1-哌嗪 基）-3-喹啉羧基；分子式為C 18H22FN303 ;分子量為359. 4。本品為微黃色或類白色結(jié)晶性粉 末，無臭，味微苦。易溶于堿性溶液中，在水、甲醇中微溶，在乙醇中不溶；遇光色漸變?yōu)槌燃t 色。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)中，殼聚糖微球的制備方法所形成的殼聚糖微球，往往在動(dòng)物體內(nèi)含有 殘留物質(zhì)，對人體造成一定的傷害。
[0005] 鑒于上述缺陷，本發(fā)明創(chuàng)作者經(jīng)過長時(shí)間的研究和實(shí)踐終于獲得了本創(chuàng)作。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種恩諾沙星殼聚糖微球制備方法，用以克服上述技術(shù)缺 陷。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種恩諾沙星殼聚糖微球制備方法，
[0008] 采用乳化交聯(lián)法，以戊二醛為交聯(lián)劑，制備恩諾沙星殼聚糖載藥微球；
[0009] 該具體過程為：
[0010] 步驟a，取殼聚糖1. 8g溶于3 %醋酸溶液12ml中，加0. 2003g恩諾沙星攪拌均勻 作為水相；
[0011] 步驟b，取含5%司盤80的液體石蠟120ml置250ml三口瓶內(nèi)，作為油相；
[0012] 步驟c，取水相加入油相中恒溫30°C攪拌15min后加入含15%的甲苯戊二醛溶液 15ml，恒溫40°C攪拌，2h后再加入15ml甲苯戊二醛溶液；
[0013] 步驟d，攪拌結(jié)束后離心3000r/minl5min，去上清夜，用無水乙醇洗漆，3000r/min 離心，去除上清液，使用石油醚離心洗滌3次，將所得產(chǎn)物真空，40°C干燥2d，得黃褐色粉 末。
[0014] 進(jìn)一步，在上述步驟c中，采用電動(dòng)攪拌棒攪拌。
[0015] 進(jìn)一步，在上述步驟a中，選用3%濃度的殼聚糖。
[0016] 進(jìn)一步，在上述步驟a和b中，油水比為4 : 1。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比較本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明采用乳化交聯(lián)法制備的恩諾沙 星殼聚糖微球粒徑為21 μ m，微球表面較為光滑，球體圓滑，大小比較均勻，單分散性較好； 其載藥量為4. 14%，包封率為5. 64%。通過對交聯(lián)劑、交聯(lián)時(shí)間的優(yōu)化，使恩諾沙星殼聚糖 微球的載藥量有所提高。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0018] 圖1為本發(fā)明恩諾沙星殼聚糖微球制備方法的流程圖；
[0019] 圖2為本發(fā)明恩諾沙星殼聚糖微球的IR示意圖；
[0020] 圖3為本發(fā)明恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0021] 以下結(jié)合附圖，對本發(fā)明上述的和另外的技術(shù)特征和優(yōu)點(diǎn)作更詳細(xì)的說明。
[0022] 本發(fā)明采用乳化交聯(lián)法，以戊二醛為交聯(lián)劑，制備恩諾沙星CS載藥微球。
[0023] 本發(fā)明恩諾沙星殼聚糖微球制備方法的具體過程為：
[0024] 步驟a，取殼聚糖1. 8g溶于3 %醋酸溶液12ml中，加0. 2003g恩諾沙星攪拌均勻 作為水相；
[0025] 步驟b，取含5%司盤80的液體石蠟120ml置250ml三口瓶內(nèi)，作為油相；
[0026] 步驟c，取水相加入油相中恒溫30°C攪拌15min后加入含15%的甲苯戊二醛溶液 15ml，恒溫40°C攪拌，2h后再加入15ml甲苯戊二醛溶液；
[0027] 步驟d，攪拌結(jié)束后離心3000r/minl5min，去上清夜，用無水乙醇洗漆，3000r/min 離心，去除上清液，使用石油醚離心洗滌3次，將所得產(chǎn)物真空，40°C干燥2d，得黃褐色粉 末。
[0028] 在上述步驟c中，采用電動(dòng)攪拌棒攪拌，交聯(lián)充分，易成球，球體圓潤，球面光滑效 果較好。
[0029] 選用3 %濃度的殼聚糖制得的微球較均勻。
[0030] 采用乳化交聯(lián)法制備殼聚糖緩釋微球時(shí)，要求有合理的油水比。油水比過小，則制 得的微球相互之間發(fā)生碰撞有可能重新結(jié)合起來，影響微球的制備；油水比過大，則增加工 藝成本，因此確定油水比在4 : 1。
[0031] 光學(xué)顯微鏡表征，
[0032] 采用XSZ-H3生物顯微鏡觀察恩諾沙星殼聚糖微球的粒徑，采用物鏡和目鏡量尺 在400倍的狀態(tài)下，以每格2. 3 μ m為單位量，在視野范圍內(nèi)順序計(jì)數(shù)30個(gè)微球，記錄其粒 徑及個(gè)數(shù)。計(jì)算微球的平均粒徑。
[0033] 掃描電鏡（SEM)表征
[0034] 將藥品放在導(dǎo)電雙面膠上，吹去多余粉末，采用噴金處理，采用JSM-6360掃描電 鏡觀察，放大倍數(shù)分別為100倍、500倍、2000倍的恩諾沙星殼聚糖微球的形態(tài)。
[0035] FT-IR 表征
[0036] 以1 : 100的比例將恩諾沙星原料藥與KBr混合，瑪瑙研缽研磨，壓片，用 VERTEX70型傅里葉變換紅外光譜儀在4000-500^1^,范圍內(nèi)掃描其吸光度。
[0037] 2. 4恩諾莎星殼聚糖微球的載藥量和包封率的測定
[0038] 2. 4. 1緩沖介質(zhì)的配制
[0039] pH = 1. 2的緩沖溶液：稱取3. 6g鹽酸溶液加蒸餾水定容在1000ml的容量瓶中靜 置。
[0040] 檢測波長的選擇
[0041] 以0· 05mol/ml的HC1溶液充分溶解恩諾沙星，在0-400nm波長范圍內(nèi)，進(jìn)行紫外 吸收波長掃描，確定恩諾沙星的最大吸收波長。與獸藥藥典[14]相符。
[0042] 恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性回歸方程的確定
[0043] 取恩諾沙星原料粉精密稱量0. 0335g，置于50ml容量瓶中，加0. Imol/lpH = 1. 2 的HC1溶液溶解并定容至刻度，分別取0. 5ml，1. 0ml，1. 5ml，2. 0ml，2. 5ml溶解于50ml容量 瓶中，加0· Imol/lHCl定容置刻度，測定277nm處吸光度A。
[0044] 恩諾莎星殼聚糖微球的載藥量和包封率的計(jì)算
[0045] 載藥量：是指微球中藥物重量占微球總量的百分率。
[0046] 包封率：是指微球中藥物重量占體系中藥物總量的百分率。
[0047] 測定方法：取微球0. 0025g充分研磨后加入pH = 1. 2的緩沖溶液50ml定容。室 溫連續(xù)振蕩24h，在277nm處測定吸光度，通過回歸方程計(jì)算該藥的量。取上清液后紫外分 光光度計(jì)277nm處值測定恩諾沙星的含量 [16]。
[0048] 載藥量=(微球中藥物量/殼聚糖微球重量）X 100%
[0049] 包封率=(微球中的藥物量/投藥量）X 100%
[0050] 結(jié)果分析：
[0051] 在視野范圍內(nèi)按順序測量30個(gè)微球所占格數(shù)分別為：30、5、11、10、7、17、8、7、6、 10、5、10、7、5、5、8、14、11、4、9、5、11、7、9、10、11、8、9、12、7。
[0052] 平均粒徑=(30+5+11+......+12+7) X 2. 3/30 = 21. 23 μ m。
[0053] 對掃描電鏡的觀察結(jié)果進(jìn)行分析，空白殼聚糖微球球體圓滑，表面較多坑洞和褶 皺，為溶解水排走后所形成的微小孔洞，球形圓整，大小比較均勻，有較小微球粘浮在大微 球上，單分散性較好。
[0054] 放大500倍和1000倍后，載藥微球分布較為均勻，大小較為均一球型圓整。如放 大2000倍，微球表面較為光滑，可能為原藥附著在空白微球褶皺中。放大2000倍單個(gè)微球， 微球有表面粘浮雜質(zhì)，說明藥物可能并未洗滌干凈。
[0055] IR結(jié)構(gòu)分析，請參閱圖2所示，A為恩諾沙星原藥；B為殼聚糖空白微球；C為恩諾 沙殼聚糖微球；D為殼聚糖原藥。
[0056] 如圖中曲線所示分別表示B為殼聚糖微球、D為殼聚糖原藥、A為恩諾沙星原藥、C 為恩諾沙星殼聚糖微球在4000?500CHT1區(qū)域的紅外光譜圖。圖中A恩諾沙星在3440CHT1 處出現(xiàn)一寬峰是羧基的0-H和N-H的伸縮振動(dòng)特征峰的重疊，在3044CHT1處出現(xiàn)一強(qiáng)的尖 峰是環(huán)丙基，苯環(huán)及哌嗪基上的C-Η的不對稱伸縮振動(dòng)的吸收峰的重疊，在2966CHT 1處出現(xiàn) C-Η的對稱伸縮振動(dòng)吸收峰的重疊，在1624CHT1處出現(xiàn)羰基特征吸收峰，此外，它和1463CHT1 都是恩諾沙星原藥中苯環(huán)的基本骨架的特征吸收峰，在1255CHT1，1184CHT1處為C-Η的面 內(nèi)彎曲振動(dòng)的吸收峰，950CHT 1，889CHT1，752CHT1為C-Η的面外彎曲振動(dòng)的吸收峰；D殼聚糖 原藥在3433CHT 1有一個(gè)很強(qiáng)、很寬的吸收峰，這是-0H的伸縮振動(dòng)，1657CHT1是酰胺鍵的吸 收峰，1381CHT 1是殼聚糖的N-H峰，在1090CHT1處的吸收峰為C3-C6羥基的C-0伸展與0-H 的面內(nèi)變形振動(dòng)吸收峰。而通過交聯(lián)后的B殼聚糖微球在1597CHT1處的吸收峰幾乎消失 了，這說明殼聚糖和戊二醛交聯(lián)后，表面的-NH2基團(tuán)消失了；B殼聚糖微球特征吸收峰在 1572CHT 1處為C = N伸縮振動(dòng)的吸收峰，這是CS被戊二醛交聯(lián)后所形成的Schiff堿的特征 峰，1070CHT1處為CS吡喃環(huán)中C-H的彎曲振動(dòng)的吸收峰；C恩諾沙星殼聚糖微球中3273CHT1 處為-NH2的吸收峰，2939CHT1處為-COOH吸收峰，1564CHT1處為苯環(huán)中C = C的吸收峰， 1572CHT1為C = N伸縮振動(dòng)，這是CS被戊二醒交聯(lián)后所形成的Schiff堿的特征峰。殼聚 糖的主要特征峰都出現(xiàn)，表明恩諾沙星與殼聚糖微球之間沒有生成新鍵，而主要是以物理 包埋的方式結(jié)合。
[0057] 恩諾沙星殼聚糖微球的載藥量和包封率的測定；
[0058] 恩諾沙星pH = 1. 2緩沖溶液中的標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性回歸方程，恩諾沙星在pH = 1. 2 緩沖介質(zhì)中最大吸收波長為277nm，不同濃度的恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液在波長為277nm時(shí)吸光 度如下，見表1所示；
[0059] 表1不同濃度的恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液在波長為277nm時(shí)吸光度
[0060]

【權(quán)利要求】
1. 一種恩諾沙星殼聚糖微球制備方法，其特征在于，采用乳化交聯(lián)法，以戊二醛為交聯(lián) 齊IJ，制備恩諾沙星殼聚糖載藥微球； 該具體過程為： 步驟a，取殼聚糖1. 8g溶于3%醋酸溶液12ml中，加0. 2003g恩諾沙星攪拌均勻作為 水相； 步驟b，取含5%司盤80的液體石蠟120ml置250ml三口瓶內(nèi)，作為油相； 步驟c，取水相加入油相中恒溫30°C攪拌15min后加入含15%的甲苯戊二醛溶液 15ml，恒溫40°C攪拌，2h后再加入15ml甲苯戊二醛溶液； 步驟d，攪拌結(jié)束后離心3000r/minl5min，去上清夜，用無水乙醇洗漆，3000r/min離 心，去除上清液，使用石油醚離心洗滌3次，將所得產(chǎn)物真空，40°C干燥2d，得黃褐色粉末。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的恩諾沙星殼聚糖微球制備方法，其特征在于，在上述步驟c 中，采用電動(dòng)攪拌棒攪拌。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的恩諾沙星殼聚糖微球制備方法，其特征在于，在上述步驟a 中，選用3 %濃度的殼聚糖。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的恩諾沙星殼聚糖微球制備方法，其特征在于，在上述步驟a和 b中，油水比為4 : 1。
【文檔編號】A61K47/36GK104095829SQ201410252199
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年8月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月2日
【發(fā)明者】沙靖全, 劉翠娟, 鐘曉華, 慎愛民 申請人:佳木斯大學(xué)