一種含蟲草多糖的組合物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種含蟲草多糖的組合物及其應(yīng)用。該組合物由蟲草多糖、葡萄籽提取物、雨生紅球藻、柚提取物、石榴提取物、櫻桃提取物，生地黃和綠茶制成。本發(fā)明的組合物為食藥兩用天然抗氧化食品，抗氧化功效突出，能夠有效激活免疫細(xì)胞，促進(jìn)SOD酶活力的作用，有效清除O2-和-OH等自由基，對延緩衰老有顯著意義。
【專利說明】一種含蟲草多糖的組合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥物組合物，具體涉及一種具有抗氧化作用的含蟲草多糖的藥物組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]越來越多的研究顯示抗氧化是預(yù)防衰老的重要步驟，因?yàn)樽杂苫蜓趸瘎⒓?xì)胞和組織分解，影響代謝功能，并會引起不同的健康問題。如果能夠消除過多的氧化自由基，對于許多由自由基引起的、與老化相關(guān)的疾病都能夠預(yù)防。例如常見的癌癥、動脈硬化、糖尿病、白內(nèi)障、心血管病、老年癡呆、關(guān)節(jié)炎等，這些疾病都被認(rèn)為與自由基相關(guān)。因此，人們應(yīng)攝取足夠的抗氧化劑，延緩身體退化速度，防止肌膚衰老，并時刻保持青春神采。而目前抗氧化劑大都為化學(xué)合成產(chǎn)品，隨著生活水平的提高，人們越來越追求純天然產(chǎn)品，因此，以天然抗氧化劑取代合成抗氧化劑是今后的發(fā)展趨勢，而多途徑地開發(fā)實(shí)用、高效，成本低廉的天然抗氧化劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員研究的方向。對抗氧化活性物質(zhì)加以研究，有利于其產(chǎn)業(yè)化及制品的高附加值化，這不僅對于藥品行業(yè)，而且對于食療，保健均有重要意義。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種含蟲草多糖的組合物。
[0004]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種含蟲草多糖的組合物在制備具有抗氧化作用的藥物中的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0006]一種含蟲草多糖的組合物，由下述原料藥按重量份配比制成:
[0007]
蟲草多糖250-350翁、葡萄籽提取物150-250粉、爾生紅球藻150-250粉、
柚提取物150-250份、石榴提取物 100-200份、櫻桃提ft物100-200份、
生地黃 M丨5(丨份、綠茶，5() I5D份β
[0008]本發(fā)明中，蟲草多糖可以采用市購產(chǎn)品，也可以采用如下方法制備來獲得:
[0009]I)將中國被毛孢在培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng):將中國被毛孢于斜面培養(yǎng)基中活化，從經(jīng)活化的斜面菌種中取菌苔接入種子培養(yǎng)基內(nèi)，于搖床培養(yǎng)7d，得種子液；按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵5d，獲得冬蟲夏草菌絲體和發(fā)酵液；
[0010]所述的斜面培養(yǎng)基為:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、牛肉膏10g、蠶蛹粉10g、蛋白胨10g、KH2P043g、MgSO4.7Η201.5g、維生素 B1 10mg、瓊脂 20g、水 1000mL, pH7_8 ；
[0011]所述的種子培養(yǎng)基為:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、牛肉膏10g、蛋白胨10g、KH2P043g、MgSO4.7Η201.5g、維生素 B1 10mg、水 1000mL, pH7_8 ；
[0012]所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為:馬鈴薯200g、蔗糖10g、蛋白胨10g、大豆粉10g、KH2P043g、MgSO4.7Η201.5g、維生素 B1 10mg，水 1000mL0
[0013]2)從培養(yǎng)基中提取冬蟲夏草粗多糖:將冬蟲夏草菌絲體和發(fā)酵液分離，分離后的冬蟲夏草菌絲體用去離子水沖洗，烘干，得冬蟲夏草樣品，按料液比1:30將冬蟲夏草樣品與蒸餾水混勻進(jìn)行提取，置于85°C水浴浸提3h，趁熱離心，取上清液，減壓濃縮得濃縮物，向濃縮物中加人4倍體積的95%乙醇溶液，4°C靜置12h，3000r/min離心15min，收集沉淀，洗滌，置于_25°C冷凍干燥，得冬蟲夏草粗多糖；
[0014]3)冬蟲夏草粗多糖脫蛋白:將冬蟲夏草粗多糖與胰蛋白酶按重量比12:1混合，保持酶解溫度為37°C，pH為7.5，酶解45min，酶解后滅酶5min，冷卻至室溫，3500r/min離心5min棄去沉淀，取上層清液，將濃度為20%的TCA溶液(三氯乙酸溶液)加入到上清液中，使TCA溶液終濃度為5-7%，靜置12h充分反應(yīng)，3500r/min離心5min，取上清液，上清液濃縮至相對密度為1.05，加入乙醇至體積份數(shù)達(dá)80%，靜置12h，離心得沉淀物，依次用適量無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，抽濾，干燥后得冬蟲夏草多糖。
[0015]本發(fā)明的含蟲草多糖的組合物在制備具有抗氧化作用的藥物中的應(yīng)用。
[0016]本發(fā)明的含蟲草多糖的組合物可以單用或與輔料混合制成臨床接受的藥物制劑。所述的藥物制劑是片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑或口服液
[0017]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0018]本發(fā)明提供的蟲草多糖的制備方法中，向發(fā)酵液和提取液中加入適量的碘化鉀溶液，有效避免了蟲草菌絲體在培養(yǎng)過程中被氧化，提高了蟲草多糖的產(chǎn)率。本發(fā)明以蟲草多糖為主要組分，與葡萄籽提取物，柚提取物，石榴提取物，櫻桃提取物，生地黃，綠茶，雨生紅球藻等多種天然產(chǎn)物配伍，為食藥兩用天然抗氧化食品，抗氧化功效突出，能夠有效激活免疫細(xì)胞，促進(jìn)SOD酶活力的作用，有效清除02_和-OH等自由基，對延緩衰老有顯著意義。
【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例1蟲草多糖的制備
[0020]冬蟲夏草菌一中國被毛孢(Hirsutella sinensis),購于中國科學(xué)院微生物研究所改成沈陽天益堂生物科技有限公司，于沈陽大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室低溫保存。
[0021]斜面培養(yǎng)基:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蠶蛹粉10g，蛋白胨10g，KH2P043g, MgSO4.7Η201.5g，維生素 B1 10mg，瓊脂 20g，水 1000mL, pH7_8。
[0022]種子培養(yǎng)基:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，KH2P043g,MgSO4.7H201.5g，維生素 B1 10mg，水 1000mL, pH7_8。
[0023]發(fā)酵培養(yǎng)基:馬鈴薯200g，蔗糖10g，蛋白胨10g，大豆粉10g，KH2P043g,MgSO4.7Η201.5g，維生素 B1 10mg，水 1000ml。
[0024]I)將中國被毛孢在培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)
[0025]中國被毛孢于斜面培養(yǎng)基中活化，從經(jīng)活化的斜面菌種中取5~IOmm2大小的菌苔4~6塊接入種子培養(yǎng)基(裝液量為100mL/250mL三角瓶)內(nèi)，于24°C旋轉(zhuǎn)搖床(I IOr/min)培養(yǎng)7d，得種子液。按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基(裝液量為200mL/500mL三角瓶)中，發(fā)酵5d，獲得冬蟲夏草菌絲體和發(fā)酵液。菌絲體的平均產(chǎn)率為21.51%。
[0026]2)從培養(yǎng)基從提取 冬蟲夏草粗多糖
[0027]將冬蟲夏草菌絲體和培養(yǎng)液分離，分離后的菌絲體用去離子水沖洗，60°C條件下烘干。稱取冬蟲夏草樣品50g，放人具塞三角瓶，按料液比1:30加人蒸餾水并混勻。置于85°C水浴浸提3h，趁熱離心(2500rpmX20min)取上清液，50°C減壓濃縮至200mL，得濃縮物，向濃縮物中加人4倍體積95%乙醇溶液，4°C靜置12h，3000r/min離心15min，收集沉淀，依次加人少量無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌沉淀，沉淀置于_25°C冷凍干燥，在35°C解析至恒質(zhì)量，即得冬蟲夏草粗多糖。
[0028]3)對冬蟲夏草粗多糖進(jìn)行脫蛋白
[0029]取冬蟲夏草粗多糖配制成濃度為10mg/mL的溶液備用。將胰蛋白酶配制成濃度為10mg/mL的溶液，保持酶解溫度為37°C，pH為7.5，將粗多糖與胰蛋白酶按重量比12:1混合，對多糖提取液酶解45min，將多糖提取液酶解后放入100°C水浴鍋中滅酶5min，冷卻至室溫。3500r/min離心5min棄去沉淀，取上層清液。將濃度為20%的TCA溶液加入到上清液中，使TCA溶液終濃度為6 %。靜置12h充分反應(yīng)，3500r/min離心5min，取上清液，濃縮至相對密度為1.05(20~25°C )，加入乙醇至體積分?jǐn)?shù)達(dá)80%，靜置12h，離心得沉淀物，依次用適量無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，抽濾，干燥后得蟲草多糖。產(chǎn)率為8.88%。
[0030]實(shí)施例2 —種具有抗氧化作用的含蟲草多糖的藥物組合物
[0031](一 )蟲草多糖的制備如實(shí)施例1所述。
[0032](二)含蟲草多糖的藥物組合物
[0033]1、配方:含蟲草多糖的藥物組合物，由下述原料藥制成:
[0034]
蟲草多糖300g、葡萄籽提取物200g、雨生紅球藻2()0g、
柚提取物20()?、石榴提取物 _、樓桃提取物150g、
牛地黃 100g, 綠茶100ge
[0035]2、制備方法:將蟲草多糖、葡萄籽提取物、雨生紅球藻、柚提取物、石榴提取物、櫻桃提取物、生地黃和綠茶按上述的配比取料，混合均勻即可。
[0036]上述提取物均按照常規(guī)提取方法制備。
[0037]3、藥效試驗(yàn)
[0038]I)實(shí)驗(yàn)方法:
[0039]取60只小鼠(15月齡雄性昆明小鼠，清潔級，體重48_58g)隨機(jī)分為6組，分別為SOD活力試食組、對照組；GSH-Px活性試食組、對照組；MDA含量試食組、對照組。試驗(yàn)前，斷尾取血20 μ L加入0.48ml蒸餾水制成4%溶血液，按試劑盒說明書測定溶血液中的MDA水平。按MDA水平將小鼠分對照組和試食組。試驗(yàn)時按實(shí)施例2中I的配方比例以1.5g/d的劑量灌胃受試小鼠。對照組給予等體積植物油，每天灌胃I次，連續(xù)30d。第31d，小鼠如上述方法采尾尖血制備4%溶血液，測定MDA，并摘眼球采血，離心，取血清，按試劑盒說明書測定血清超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力。結(jié)果如表1所
/Jn ο
[0040]表1蟲草多糖組合物對老齡小鼠SOD、GSH-Px活性、MDA含量:(S士 S)的影響
[0041]
【權(quán)利要求】
1.一種含蟲草多糖的組合物，其特征在于，該組合物由下述原料藥按重量份配比制成: 蟲草多糖250-350份、葡萄籽提取物150-250汾、丨生紅球藻150-250份、 柚提取物150.250份、石榴提取物 100.200份、櫻桃提取物100.200份、 牛地黃 50-150份、綠茶50-150份《>
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述蟲草多糖的制備方法為，I)將中國被毛孢在培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，2)從培養(yǎng)基中提取冬蟲夏草粗多糖，3)對冬蟲夏草粗多糖進(jìn)行脫蛋白后，制得蟲草多糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，所述蟲草多糖的制備方法具體為， 1)中國被毛孢于斜面培養(yǎng)基中活化，從經(jīng)活化的斜面菌種中取菌苔接入種子培養(yǎng)基內(nèi)，于搖床培養(yǎng)7d，得種子液；按10%接種量將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵5d，獲得冬蟲夏草菌絲體和發(fā)酵液； 2)將冬蟲夏草菌絲體和發(fā)酵液分離，分離后的冬蟲夏草菌絲體用去離子水沖洗，烘干，得冬蟲夏草樣品，按料液比1:30將冬蟲夏草樣品與蒸餾水混勻進(jìn)行提取，置于85°C水浴浸提3h，趁熱離心，取上清液，減壓濃縮得濃縮物，向濃縮物中加人4倍體積的95%乙醇溶液，4°C靜置12h，3000r/min離心15min，收集沉淀，洗滌，置于_25°C冷凍干燥，得冬蟲夏草粗多糖； 3)冬蟲夏草粗多糖脫蛋白:將冬蟲夏草粗多糖與胰蛋白酶按重量比12:1混合，保持酶解溫度為37°C,pH為7.5,酶解45min,酶解后滅酶5min,冷卻至室溫,3500r/min離心5min棄去沉淀，取上層清液，將濃度為20%的三氯乙酸溶液加入到上清液中，使三氯乙酸溶液終濃度為5-7%，靜置12h充分反應(yīng)，3500r/min離心5min，取上清液，上清液濃縮至相對密度為1.05，加入乙醇至體積份數(shù)達(dá)80%，靜置12h，離心得沉淀物，依次用適量無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，抽濾，干燥后得冬蟲夏草多糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于:所述斜面培養(yǎng)基為:馬鈴薯200g、葡萄糖 20g、牛肉膏 10g、蠶蛹粉 10g、蛋白胨 10g、KH2P043g、MgSO4.7Η201.5g、維生素 B1 IOmgJ脂20g、水1000mL，pH7-8 ;所述種子培養(yǎng)基為:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、牛肉膏10g、蛋白胨10g、KH2P043g、MgSO4.7Η201.5g、維生素 B1 10mg、水 1000mL, pH7_8 ;所述發(fā)酵培養(yǎng)基為:馬鈴薯 200g、蔗糖 10g、蛋白胨 10g、大豆粉 10g、KH2P043g、MgS04.7Η201.5g、維生素 B1 10mg，水1000mL0
5.權(quán)利要求1所述的含蟲草多糖的組合物在制備具有抗氧化作用的藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù) 權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于:將權(quán)利要求1所述的含蟲草多糖的組合物單用或與輔料混合制成臨床接受的藥物制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的藥物制劑是片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑或口服液。
【文檔編號】A61P37/04GK104000961SQ201410256102
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年6月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月10日
【發(fā)明者】李魁君, 趙瑩, 楊紹斌, 田秀英 申請人:沈陽天益堂生物科技有限公司