小檗堿用于制備抑制食欲的藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥和生理學領域，公開了小檗堿在制藥方面應用，具體是將小檗堿用于制備抑制食欲的藥物，尤其是用于減少糖尿病或肥胖癥患者進食量。小檗堿副作用小，又能夠降低血糖血脂，為2型糖尿病和肥胖癥治療提供了新的方向。
【專利說明】小檗堿用于制備抑制食欲的藥物

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥和生理學領域，具體為小檗堿在制藥方面應用，尤其是用于 制備抑制食欲的藥物。

【背景技術】
[0002] 隨著人們生活水平的不斷提高，肥胖及其相關性疾病如2型糖尿?。═2DM)、心腦 血管病等這些以前常見于西方發(fā)達國家的與能量代謝相關的疾病現(xiàn)在越來越成為威脅中 國人群健康的重要疾病。據(jù)統(tǒng)計，目前中國成年人中超重和肥胖的發(fā)病率分別為30. 6%和 12.0%。如此高的發(fā)病率以及各種嚴重的并發(fā)癥，使得對肥胖的防治已然成為一項全民性 問題。
[0003] T2DM患者很容易并發(fā)高血壓和動脈粥樣硬化等大血管病變以及視網膜和腎臟等 微血管病變，這些并發(fā)癥成為2型糖尿病患者致殘、致死的主要原因。另外，T2DM患者大多 數(shù)伴有肥胖（腹型肥胖）和高血脂。這兩種伴隨癥狀的存在會加速2型糖尿病并發(fā)癥的出 現(xiàn)。因此，目前臨床醫(yī)生在有效控制T2DM患者血糖的同時會積極治療肥胖和高血脂。
[0004] 肥胖是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結果，是由機體能量攝入超過能量消耗所 造成。肥胖與T2DM有著密切的關系。研究證實肥胖本身即可引起胰島素抵抗，而肥胖引 起的機體慢性低度炎性狀態(tài)又直接影響了胰島功能和胰島素信號傳遞。雖然這兩種常見 的代謝性疾病在發(fā)病原因上密切相關，但目前臨床對于這兩種疾病的常規(guī)治療仍是各自為 政、分而治之。根據(jù)熱力動力學，任何治療肥胖的手段必須能降低能量攝入，有效地增加能 量的消耗，二者有一或二者兼顧。原則雖然看起來很簡單，但肥胖的治療仍舊充滿著挑戰(zhàn)。 目前在臨床上所被接受的治療肥胖的方案包括節(jié)食、運動、減少卡路里攝入及吸收的藥物 治療，以及對極度肥胖患者的外科手術治療。不幸的是，僅有一小部分人通過節(jié)食和運動 能維持長期的體重減輕，此外，雖然手術治療效果明顯，但手術的風險還是讓很多人忘而卻 步。許多抑制食欲的藥物因未達到審批標準或上市后發(fā)現(xiàn)嚴重的不良反應被撤出。大麻 素-受體拮抗劑利莫那班（rimonabant)因為增加抑郁，焦慮風險未能被美國食品和藥品 管理局（FDA)批準并從歐洲市場上撤回，該類藥物失敗的經驗告訴我們，飽食中樞與腦部 其它調節(jié)中樞交錯在一起，因而在應用上可能會帶來精神及心理方面難以預料的副作用另 夕卜，5-羥色胺系統(tǒng)激動劑西布曲明和芬氟拉明也由于不可接受的副作用及缺乏充分的長期 臨床有效性的驗證，在臨床上被限制使用。另外，近年篩選研發(fā)新型降糖藥物時除注意藥物 本身的副作用外，對體重、血脂等代謝指標的作用也成為一個重要的衡量因素，比如腸胰高 血糖素樣肽（GLP-1)通過抑制胃腸道蠕動和胃液分泌，抑制食欲及攝食，延緩胃內容物排 空等來降低患者體重，可減輕體重、降低血脂、降血壓及保護神經。
[0005] 小檗堿（Berberine，BBR)又名黃連素，是從我國傳統(tǒng)中藥黃連中提取出來的一種 季胺類生物堿。黃連用于治療消渴癥在我國醫(yī)藥典籍中早有記載。而BBR為黃連的主要成 分一直以其抗感染作用應用于臨床。研究證實BBR不但具有較廣的抗菌譜，而且對病毒和 真菌感染也有一定作用。上世紀80年代，我國臨床工作者在應用BBR治療胃腸道感染性疾 病過程中發(fā)現(xiàn)BBR具有降低血糖的作用，應用BBR治療T2DM的研究并取得了較好的療效。 研究結果還顯示BBR通過穩(wěn)定低密度脂蛋白受體（LDLR) mRNA來促進LDLR表達進而降低血 月旨，這一機制與目前臨床廣泛應用的他汀類藥物作用機理完全不同。2006年韓國首爾國立 大學的研究人員發(fā)表在《Diabetes》上的文章指出，小檗堿通過作用于AMPK改善糖尿病小 鼠的糖脂代謝并且能夠減輕肥胖小鼠體重。


【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明旨在提供小檗堿在制備藥物方面的應用。
[0007] 小檗堿可以用作制備抑制食欲的藥物。優(yōu)選的，小檗堿用于制備減少糖尿病患者 或肥胖癥患者進食量的藥物。更優(yōu)選的，小檗堿可以用于制備減少2型糖尿病患者或肥胖 癥患者進食量的藥物。
[0008] db/db小鼠 （diabetes mouse)是一種瘦素受體缺陷的糖尿病小鼠模型，由C57BL/ KsJ近親交配株常染色體隱性遺傳衍化而來，屬II型糖尿病模型，表現(xiàn)為3-4周齡時開始出 現(xiàn)肥胖，同時伴有血糖升高。隨著周齡的增長肥胖和糖尿病癥狀逐漸加重，最后可因酮癥酸 中毒而死亡，是糖尿病藥理實驗和糖尿病機制研究中常用的小鼠模型。本發(fā)明中，以db/db 小鼠為模型，將實驗小鼠隨機分為BBR干預組和空白溶劑對照組，通過觀察兩組小鼠的體 重、攝食量、血糖代謝指標的變化探討B(tài)BR對肥胖機體代謝的影響作用。
[0009] 結果發(fā)現(xiàn)，小檗堿可以明顯抑制肥胖小鼠的體重增長，并且減少肥胖小鼠進食量。 也就是說，小檗堿能夠抑制肥胖糖尿病小鼠的食欲。
[0010] 因此，小檗堿能夠用作制備抑制食欲的藥物，尤其是制備減少糖尿病患者或肥胖 癥進食量肥胖癥進食量的藥物。
[0011] 本發(fā)明通過對小檗堿的研究，提供了小檗堿新的醫(yī)藥用途，這種抑制食欲的藥物 副作用小，又能夠降低血糖血脂，為2型糖尿病和肥胖癥治療提供了新的方向。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 圖1為實施例1中小檗堿干預組（BBR)和溶劑對照組（Vechile)小鼠的體重
[0013] 圖2為實施例1中小檗堿干預組（BBR)和溶劑對照組（Vechile)小鼠的平均攝食 量
[0014] 圖3為實施例2中小檗堿干預組（BBR)和溶劑對照組（Vechile)小鼠的隨機血糖
[0015] 圖4為實施例2中小檗堿干預組（BBR)和溶劑對照組（Vechile)小鼠的胰島素耐 量測試結果
[0016] 圖5實施例2中小檗堿干預組（BBR)和溶劑對照組（Vechile)小鼠進行腹腔注射 葡萄糖耐量試驗血糖結果
[0017] 圖6為實施例2中小檗堿干預組（BBR)和溶劑對照組（Vechile)小鼠的腹腔注射 葡萄糖耐量試驗中血清胰島素水平
[0018] 圖7實施例2中小檗堿干預組（BBR)和溶劑對照組（Vechile)小鼠的丙酮酸耐量 試驗結果

【具體實施方式】
[0019] 所使用的小鼠為：8周齡雄性、健康SPF級C57bl/Ksj_db/+m Leprdb(db/db)小鼠， 購于南京大學模式動物研究所。
[0020] db/db小鼠飼養(yǎng)條件：環(huán)境溫度為22±0. 5°C，12小時/12小時明暗交替。
[0021] 普通飼料由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，基本組成：魚粉、小麥、玉米、 豆柏、植物油、奶粉、苜蓿草粉、各種維生素、礦物質、必需氨基酸等。普通飼料熱量組成為碳 水化合物占65 %、蛋白質22 %、脂肪5 %、纖維和其它成份8 %。每1克飼料含熱量3. 3Kcal。
[0022] 實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)土標準誤表示，BBR干預組小鼠與空白溶劑對照組小鼠對比， *Ρ〈0· 05, **p < 0· 01BBR, ***p < 0· 001, η = 5。
[0023] 實施例1小檗堿對db/db小鼠進食量和體重的影響
[0024] 經普通飼料適應性飼養(yǎng)一周后，將db/db小鼠隨機分成溶劑對照組（Vehicle)和 小檗堿干預組（BBR)兩組，并按體重、空腹血糖校準。分組后開始給予藥物干預，小檗堿干 預組給予Smg+kg-Scf 1小檗堿注射液腹腔注射，空白溶劑對照組給予腹腔注射對照溶劑。
[0025] 小檗堿注射液配制：將DMS0用超聲儀超聲處理15min，再加入聚乙二醇（PEG) 400， 經超聲儀超聲處理15min后再加入生理鹽水，然后再超聲15min以此作為對照溶劑 (Vehicle)，其中DMS0、聚乙二醇和生理鹽水的體積比為1 :20 :79。將小檗堿溶于上述溶劑 中攪拌混勻制成BBR混懸液。
[0026] 小鼠進食量計算：每日稱取小鼠進食后所剩食物重量，用前一日投食量減去所剩 適量計算每日進食量。
[0027] 實驗過程中，從開始給藥第一天起，每天稱量小鼠的體重與食物重量。兩組小鼠給 藥前體重無明顯差異，給藥第7天時兩組小鼠體重開始出現(xiàn)差異，BBR組體重明顯低于對照 組（P〈0. 01)，并且隨時間變化差異逐漸增大（如圖1)。實驗中通過對兩組小鼠進食量的監(jiān) 測發(fā)現(xiàn)BBR組的平均攝食量低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義。（P〈0. 001，如圖2)。
[0028] 我們的實驗結果顯示，BBR能夠明顯抑制肥胖小鼠的體重增長。雖然BBR處理組 小鼠體重明顯低于對照組小鼠，但與實驗開始時相比BBR干預組小鼠自身體重并沒有明顯 降低，這可能與實驗動物的年齡有關。在db/db小鼠9周齡時開始BBR干預，而這時期小鼠 正處于身體生長期，因此BBR對小鼠主要表現(xiàn)為抑制體重增長。
[0029] 實施例2
[0030] 分別于給藥前（0周）、給藥1周、2周、3周和4周檢測小鼠隨機血糖胰島素。結果 顯示，如圖3所示，在給藥前兩組小鼠隨機血糖沒有明顯差異，但隨著實驗進展對照組小鼠 的血糖逐漸升高，而BBR處理組（小檗堿干預組）小鼠血糖測呈現(xiàn)出逐漸下降的趨勢，在給 藥2周時兩組小鼠血糖經統(tǒng)計學分析有了顯著性差異，3周和4周時差異逐漸增大。
[0031] 給藥后第2周時進行胰島素耐量試驗（ITT):小鼠禁食6h后，腹腔注射胰島素 (2U/Kg體重），分別于0、15、30、45、60、90及120min通過尾靜脈采血，應用美國強生公司血 糖儀（One Touch)測取血糖值。
[0032] 在注射胰島素后，BBR干預組小鼠各個監(jiān)測時間點的血糖均明顯低于對照組小鼠 (圖4)。這說明db/db小鼠對胰島素的敏感性在經BBR干預后得到了改善。
[0033] 給藥第3周時行腹腔注射葡萄糖耐量試驗（IPGTT)，并眼眶取血測血清胰島素水 平。葡萄糖耐量實驗（IPGTT):小鼠禁食12-16h后，腹腔注射葡萄糖（2g/Kg體重），分別于 0、15、30、45、60、90、120及180min檢測小鼠血糖。血清胰島素檢測通過眼睛竇靜脈叢采血 方式進行，分別于0、30及60min時間點采血，每次采血約20 μ 1。實驗結果顯示，給予葡萄 糖后BBR處理組小鼠各時間點血糖值均低于對照組小鼠，且血糖達到峰值的時間提前（圖 5Α)，兩組小鼠血糖的曲線下面積具有統(tǒng)計學差異（圖5Β)。在葡萄糖耐量實驗中我們分別 于給糖前、給糖30min和60min時采集眼眶靜脈血進行血清胰島素檢測，發(fā)現(xiàn)在各個時間點 BBR處理組小鼠血清胰島素水平均明顯低于對照組小鼠（圖6)。這些結果說明BBR使db/ db小鼠的糖耐量和胰島素抵抗得到了改善。
[0034] 第4周時進行丙酮酸耐量試驗（PTT):小鼠禁食12_16h后，腹腔注射丙酮酸（lg/ Kg體重），分別于0、15、30、45、60、90、120及180min采血測血糖。結果發(fā)現(xiàn)BBR干預組小 鼠在給予丙酮酸后從60min開始血糖值明顯低于對照組小鼠（圖7)。這說明BBR對db/db 小鼠肝臟糖異生產生了抑制作用。
【權利要求】
1. 小檗堿用于制備抑制食欲的藥物。
2. 小檗堿用于制備減少糖尿病患者或肥胖癥患者進食量的藥物。
3. 小檗堿用于制備減少2型糖尿病患者或肥胖癥患者進食量的藥物。
【文檔編號】A61K31/4375GK104095848SQ201410286415
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年6月24日 優(yōu)先權日:2014年6月24日
【發(fā)明者】寧光, 張會志, 王衛(wèi)慶, 張志國 申請人:上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院