掌葉木葉中抗氧化物的提取方法及獲得的產(chǎn)品和用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及天然物質(zhì)，尤其涉及掌葉木葉中抗氧化物的提取方法及獲得的產(chǎn)品和用途。掌葉木葉中抗氧化物的提取方法，是將掌葉木葉烘干至恒重后粉碎，加入乙醇溶液回流提取2～3小時，重復提取3～4次，合并濾液，將濾液減壓濃縮，制得浸膏，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別收集石油醚有機相、乙酸乙酯有機相、正丁醇有機相、水相，將收集到的有機相和水相分別回收溶劑即可制備得抗氧化物。本發(fā)明的制備方法工藝簡單、容易操作、成本低廉；所制備的掌葉木抗氧化物穩(wěn)定性強、保質(zhì)期長。
【專利說明】掌葉木葉中抗氧化物的提取方法及獲得的產(chǎn)品和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及天然物質(zhì)，尤其涉及掌葉木葉中抗氧化物的提取方法及獲得的產(chǎn)品和用途。
【背景技術(shù)】
[0002]掌葉木(Handel1dendronbodinieri)是無患子科(Sapindaceae)掌葉木屬(Handel1dendron Rehd.)木本油料植物，是中國廣西與貴州交界處石灰?guī)r山地特有的野生物種[參考文獻I]。近年來，由于石灰?guī)r地區(qū)遭嚴重破壞，加之種子富含油脂，易被動物覓食等原因，天然更新極為困難，1999年被國務(wù)院公布為國家一級重點保護植物[參考文獻2] ο
[0003]對有應(yīng)用價值的珍稀瀕危物種，強調(diào)其保護的同時，研究其應(yīng)用價值，將保護與應(yīng)用有機地結(jié)合，可促進其種群的保護與人工擴繁。如被譽為“茶族皇后”、“植物大熊貓”和“幻想中的黃色山茶”的國家一級保護植物金花茶(Camellianitidssima)[參考文獻I]就是最成功的例子，目前，金花茶在保護和開發(fā)利用方面達到了雙贏，廣西桂人堂金花茶產(chǎn)業(yè)集團股分有限公司推出的“防城金花茶袋泡茶”是廣西特產(chǎn)的天然健康飲品，在廣西各大超市均有銷售。
[0004]掌葉木是一種極具發(fā)展?jié)摿Φ亩喙δ軜浞N，其種仁含油量高達52.6%，且不飽和脂肪酸含量高，是一種優(yōu)良的生物質(zhì)能源物種[參考文獻3，4];其根系發(fā)達，常見于裸露的巖石上生長，是一種 優(yōu)良的耐瘠薄的水土保持樹種，可用于石漠化治理；其樹形優(yōu)美，葉色濃綠，掌狀對生，花果顏色鮮艷、特別，可用于園林綠化、園藝觀賞。
[0005]掌葉木為落葉樹種，每年2月開始發(fā)芽，3月長葉，10月落葉，通過對3~10月份采集的葉的成分分析結(jié)果表明，其葉的化學成分隨著生長時期的延長無明顯差異，且掌葉木的葉萌生能力強，上月采集后，下月又重新長出，葉的更新比較快，是一種可利用的可再生資源。然而，目前國內(nèi)外學者尚未關(guān)注其葉的應(yīng)用價值及相關(guān)研究。
[0006]參考文獻:
[0007]文獻[I]:傅立國，金鑒明.中國植物紅皮書:稀有瀕危植物(第I冊)[M].北京:科學出版社，1992:590~591。
[0008]文獻[2]:貴州省林業(yè)廳.貴州野生珍貴植物資源[M].北京:中國林業(yè)科學出版社，2000:159。
[0009]文獻[3]:中國油脂植物編委會.中國油脂植物[M].北京:科學出版社，1987。
[0010]文獻[4]:陳波濤，陳潤生，鄧伯龍，等.貴州生物柴油原料林樹種的選擇[J].貴州農(nóng)業(yè)科學，2010，38 (5): 173~176。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)狀況，提供了掌葉木葉中抗氧化物的提取方法及獲得的產(chǎn)品和用途。[0012]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案實現(xiàn):
[0013]掌葉木葉中抗氧化物的提取方法，所述方法包括以下步驟:
[0014]I)將掌葉木葉烘干至恒重后粉碎；
[0015]2)將步驟I)所得產(chǎn)品與乙醇溶液混合，每1.5kg步驟I)所得產(chǎn)品加入12~15L乙醇溶液，回流提取2~3小時，重復提取3~4次，合并濾液；
[0016]3)將步驟2)所得濾液減壓濃縮至無醇味，制得浸膏；
[0017]4)將步驟3)所得浸膏用水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別收集石油醚有機相、乙酸乙酯有機相、正丁醇有機相、水相，將收集到的有機相和水相分別回收溶劑后即可制備得抗氧化物。
[0018]優(yōu)選的是:步驟I)所述干燥的溫度為30~35°C。
[0019]優(yōu)選的是:步驟2)中所述乙醇溶液中乙醇體積百分數(shù)為70~80%。
[0020]優(yōu)選的是:步驟2)中所述回流提取的溫度為80~85°C。
[0021]優(yōu)選的是:步驟3)中所述浸膏與水成1:1體積比；所述浸膏與石油醚成1:4體積比；所述浸膏與乙酸乙酯成1:2體積比；所述浸膏與正丁醇成1:2體積比。
[0022]本發(fā)明提供上述提取方法獲得的掌葉木葉抗氧化物。 [0023]上述提取方法獲得的掌葉木葉抗氧化物可作為添加劑在食品、化妝品、保健品中的應(yīng)用。
[0024]本發(fā)明的有益效果如下:
[0025]本發(fā)明的制備方法工藝簡單、容易操作、成本低廉；所制備的掌葉木葉抗氧化物穩(wěn)定性強、保質(zhì)期長。從掌葉木葉提取的高濃度的抗氧化物可用于開發(fā)高含量的新型天然掌葉木葉抗氧化劑，它可以作為添加劑在食品、化妝品、保健品實現(xiàn)其應(yīng)用，進而實現(xiàn)了掌葉木高附加值的綜合利用。另外掌葉木葉是一種可再生資源，結(jié)合掌葉木的油用價值和石漠化治理的生態(tài)價值，可將經(jīng)濟、生態(tài)和社會三大效益相結(jié)合，實現(xiàn)石漠化治理與瀕危植物的保護與適度利用有機結(jié)合，促成三大效益的協(xié)調(diào)發(fā)展。
【具體實施方式】
[0026]下面結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步詳細的闡述，但本發(fā)明的實施方式并不局限于實施例表示的范圍。這些實施例僅用于說明本發(fā)明，而非用于限制本發(fā)明的范圍。此外，在閱讀本發(fā)明的內(nèi)容后，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種修改，這些等價變化同樣落于本發(fā)明所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
[0027]實施例1
[0028]取2千克掌葉木葉于30°C下鼓風干燥至恒重，所得掌葉木葉恒重重量為1.5千克，粉碎后加入12L體積分數(shù)為70%的乙醇溶液，于80°C下回流2小時，重復提取4次，合并濾液，58°C減壓濃縮至無醇味，制得浸膏。取IL浸膏用IL水分散，依次用4L石油醚、2L乙酸乙酯和2L正丁醇室溫下萃取，分別收集石油醚有機相、乙酸乙酯有機相、正丁醇有機相、水相，所述石油醚萃取物提取率為0.3% ;乙酸乙酯萃取物提取率為6.5% ;正丁醇提取率為38.2% ;水相提取率為44.4%。將所得石油醚有機相、乙酸乙酯有機相、正丁醇有機相、水相分別回收溶劑后即可制備得抗氧化活性極強的抗氧化物。所獲得的掌葉木葉抗氧化物在食品、化妝品、保健品中可作為添加劑加以使用。[0029]實施例2
[0030]取2千克掌葉木葉于32°C下鼓風干燥至恒重，所得掌葉木葉恒重重量為1.5千克，粉碎后加入14L體積分數(shù)為75%的乙醇溶液，于82°C下回流3小時，重復提取3次，合并濾液，58°C減壓濃縮至無醇味，制得浸膏。取IL浸膏用IL水分散，依次用4L石油醚、2L乙酸乙酯和2L正丁醇室溫下萃取，分別收集石油醚有機相、乙酸乙酯有機相、正丁醇有機相、水相，所述石油醚萃取物提取率為0.45% ;乙酸乙酯萃取物提取率為5.6% ;正丁醇提取率為36.6% ;水相提取率為46.2%。將所得石油醚有機相、乙酸乙酯有機相、正丁醇有機相、水相分別回收溶劑后即可制備得抗氧化活性極強的抗氧化物。所獲得的掌葉木葉抗氧化物在食品、化妝品、保健品中可作為添加劑加以使用。
[0031]實施例3
[0032]取2千克掌葉木葉于35°C下鼓風干燥至恒重，所得掌葉木葉恒重重量為1.5千克，粉碎后加入15L體積分數(shù)為80%的乙醇溶液，于85°C下回流2小時，重復提取4次，合并濾液，58°C減壓濃縮至無醇味，制得浸膏。取IL浸膏用IL水分散，依次用4L石油醚、2L乙酸乙酯和2L正丁醇室溫下萃取，分別收集石油醚有機相、乙酸乙酯有機相、正丁醇有機相、水相，所述石油醚萃取物提取率為0.5% ;乙酸乙酯萃取物提取率為5.2% ;正丁醇提取率為35.4% ;水相提取率為48.1 %。將所得石油醚有機相、乙酸乙酯有機相、正丁醇有機相、水相分別回收溶劑后即可制備得抗氧化活性極強的抗氧化物。所獲得的掌葉木葉抗氧化物在食品、化妝品、保健品中可作為添加劑加以使用。
[0033]以下為掌葉木葉抗氧化物抗氧化活性評價試驗
[0034]I材料與方法 [0035]1.1材料與儀器
[0036]DPPH(2，2-二苯基-1-苦肼基)購于Sigma公司；乙酸乙酯、甲醇、乙醇、石油醚、正丁醇、鐵氰化鉀、三氯乙酸、V。、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、三氯化鐵為國產(chǎn)分析純。
[0037]EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器;UV 一 3100型紫外可見分光光度計(上海美普達儀器有限公司)。
[0038]1.2實驗方法
[0039]1.2.1各樣品的提取方法
[0040]取上述實施例1所得正丁醇萃取物通過DlOl大孔樹脂分離，乙醇-水梯度洗脫，得到正丁醇-30%乙醇洗脫部位，正丁醇-60%乙醇洗脫部分，正丁醇-95%乙醇洗脫部分。
[0041]取實施例1及乙醇-水梯洗脫后所得樣品:乙醇粗提物、正丁醇萃取物、乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物、水相、正丁醇-30%乙醇部位、正丁醇-60%乙醇部位、正丁醇-95%乙醇部位，分別標記為I至8號樣品。
[0042]1.2.2抗氧化活性的測定
[0043]1.2.2.1DPPH自由基清除能力的測定
[0044](I)精確稱取15.8mg DPPH,溶于10mL無水乙醇，配置成0.4mmol/L的DPPH母液。依次精確量取 0.1、0.15、0.20、0.25、0.30、0.5、0.75、ImL 的 DPPH 母液稀釋至 2.0OmL,在517nm下測其吸光度，得標準曲線。
[0045](2)將1.0mL粗樣品溶液與0.15mmol/L的DPPH溶液1.0mL加入同一試管中，搖勻，放置30min,然后用溶劑(無水乙醇)做參比，測定其吸光度Ai,同時測定1.0mL0.15mmol/L的DPPH溶液與1.0mL溶劑混合后所得混合物的吸光度A0，以及1.0mL粗樣品溶液與1.0mL溶劑混合后的吸光度N按照下式計算清除率，清除率越大，抗氧化能力越強。
[0046]清除率(S0)= [1-(A1-Aj)AjXlOO
[0047]式中:k0:未加抗氧劑時DPPH溶液的吸光度A:加抗氧劑后DPPH溶液的吸光度；Aj:樣品在測定波長的吸光度。
[0048]1.2.2.2Fe3+ 還原力測定
[0049]取2.5mL不同質(zhì)量分數(shù)的樣品溶液，加入0.2mol/L, pH為6.6的磷酸緩沖溶液
2.5mL及I %的鐵氰化鉀2.5mL, 50°C水浴反應(yīng)20min后浸泡在冷水中急速冷卻至室溫。加入10%三氯乙酸溶液2.5mL，再用微孔過濾器過濾，取上清液5mL，加蒸餾水4mL，及0.1%FeCl3ImL,混合均勻，1min后于700nm處測定吸光值，吸光值越大則還原力越強。同時以Vc作為陽性對照。
[0050]1.3數(shù)據(jù)處理
[0051]DPPH標準曲線線性回歸分析用excel進行；采用Spssl6.0軟件對多次抗氧化測試結(jié)果進行均值分析。
[0052]2結(jié)果與分析 [0053]2.1各提取物對DPPH.清除能力的測定
[0054]按照實驗方法1.2.2.1的(I)得到DPPH和A之間的標準曲線:y = 2.4672χ_0.09，R2 = 0.9909。由表1可知，各提取物對DPPH自由基的清除率總體趨勢是隨濃度的增加而提高，但當濃度增加到一定值后，DPPH.清除率隨濃度的增大不再明顯提高，反而有所下降，主要原因是樣品顏色加深和溶解性問題，使得空白吸光值較大。表1中，相同濃度的乙酸乙酯萃取物對DPPH.清除率效果明顯高于Vc和其他樣品，說明清除效果較好的物質(zhì)主要集中乙酸乙酯萃取物部位，其乙酸乙酯萃取物對DPPH ?清除率效果最好，與V。相當；次之為石油醚相，當其質(zhì)量濃度大于2.5mg/mL，其清除率均大于VC ;再次之為正丁醇-95%乙醇部位，當其質(zhì)量濃度達到5mg/mL，其清除率均大于VC ;活性最差的為正丁醇-60%乙醇部位。清除率順序為:3號樣品>4號樣品>8號樣品>5號樣品>2號樣品>1號樣品>6號樣品>7號樣品，即乙酸乙酯萃取物 > 石油醚萃取物 > 正丁醇-95%乙醇部位 > 水相 > 正丁醇萃取物>乙醇粗提物 > 正丁醇-30%乙醇部位 > 正丁醇-60%乙醇部位。
[0055]表1掌葉木葉提取物各樣品對DPPH.清除率)
[0056]
【權(quán)利要求】
1.掌葉木葉中抗氧化物的提取方法，其特征在于:所述方法包括以下步驟: 1)將掌葉木葉烘干至恒重后粉碎； 2)將步驟I)所得產(chǎn)品與乙醇溶液混合，每1.5kg步驟I)所得產(chǎn)品加入12~15L乙醇溶液，回流提取2~3小時，重復提取3~4次，合并濾液； 3)將步驟2)所得濾液減壓濃縮至無醇味，制得浸膏； 4)將步驟3)所得浸膏用水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別收集石油醚有機相、乙酸乙酯有機相、正丁醇有機相、水相，將收集到的有機相和水相分別回收溶劑后即可制備得抗氧化物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟I)所述干燥的溫度為30~35。。。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟2)中所述乙醇溶液中乙醇體積百分數(shù)為70~80%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟2)中所述回流提取的溫度為80 ~85?。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟3)中所述浸膏與水成1:1體積比；所述浸膏與石油醚成1:4體積比；所述浸膏與乙酸乙酯成1:2體積比；所述浸膏與正丁醇成1:2體積 比。
6.權(quán)利要求1所述提取方法獲得的掌葉木葉抗氧化物。
7.權(quán)利要求1所述提取方法獲得的掌葉木葉抗氧化物可作為添加劑在食品、化妝品、保健品中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P39/06GK104027275SQ201410292916
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月25日
【發(fā)明者】李在留, 鄒坤, 郭志勇, 郭松, 張娜, 王玉婷 申請人:廣西大學, 三峽大學