一種轉(zhuǎn)移因子溶液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體的說是一種轉(zhuǎn)移因子溶液及其制備方法。具體，動物脾臟與NaCl溶液按重量比為1∶1.3-1.4的混合經(jīng)反復(fù)凍融后調(diào)節(jié)pH值至6.2～7.2，再經(jīng)過濾，即為轉(zhuǎn)移因子溶液。采用本發(fā)明方法利于提高轉(zhuǎn)移因子溶液有效成分的含量、提高產(chǎn)品收率、增加藥物的穩(wěn)定性和安全性。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體的說是一種轉(zhuǎn)移因子溶液及其制備方法。 一種轉(zhuǎn)移因子溶液及其制備方法

【背景技術(shù)】
[0002] 轉(zhuǎn)移因子溶液是一種天然雙向免疫調(diào)節(jié)劑，是目前治療免疫功能低下、缺陷等相 關(guān)疾病的理想藥物。
[0003] 轉(zhuǎn)移因子溶液系用健康豬或牛脾臟為原料，經(jīng)去脂肪、細(xì)胞破碎、透析或超濾制成 的分子量小于6000道爾頓的多肽、氨基酸和多核苷酸混合物的溶液。
[0004] 但，現(xiàn)有技術(shù)制得的轉(zhuǎn)移因子溶液中多肽、游離氨基酸、核苷酸的含量較低，高分 子物質(zhì)含量相對較高，轉(zhuǎn)移因子溶液的收率較低。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的在于提供一種轉(zhuǎn)移因子溶液及其制備方法。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用技術(shù)方案為：
[0007] -種轉(zhuǎn)移因子溶液，動物脾臟與NaCl溶液按重量比為1:1. 3-1. 4的混合經(jīng)反復(fù)凍 融后調(diào)節(jié)PH值至6. 2?7. 2,再經(jīng)過濾，即為轉(zhuǎn)移因子溶液。
[0008] 進(jìn)一步的說，動物脾臟與NaCl溶液按重量比為1:1. 3-1. 4的混合，混合后磨勻獲 得的勻漿液經(jīng)反復(fù)凍融處理4-6次，凍融后用HCL溶液，調(diào)勻漿液PH值3. 5?4. 5,而后離 心收集上清液，上清液再經(jīng)NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值至6. 2?7. 2,最后過濾，即得轉(zhuǎn)移因子溶 液。
[0009] 所述反復(fù)凍融處理是將勻漿液在_25±3°C冷凍48-56小時，而后在20-25°C的 循環(huán)水中融化，作為一次凍融處理，按照此凍融條件反復(fù)凍融3-4次；而后再以下述另一 凍融條件反復(fù)凍融1-2次，另一凍融條件為將勻漿液在_25±3°C冷凍12-18小時，而后在 20-25 °C的循環(huán)水中融化。
[0010] 所述動物脾臟為豬或牛的脾臟。
[0011] 所述動物脾臟與NaCl溶液按重量比為1:1. 3-1. 4的混合，混合后加入膠體磨機(jī)中 磨1?2分鐘，即得勻楽液；其中，膠體磨的縫隙5?10um。
[0012] 一種轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法，動物脾臟與NaCl溶液按重量比為1:1. 3-1. 4的混 合經(jīng)反復(fù)凍融后調(diào)節(jié)PH值至6. 2?7. 2,再經(jīng)過濾，即為轉(zhuǎn)移因子溶液。
[0013] 進(jìn)一步的說，動物脾臟與NaCl溶液按重量比為1:1. 3-1. 4的混合，混合后磨勻獲 得的勻漿液經(jīng)反復(fù)凍融處理5-6次，凍融后用HCL溶液，調(diào)勻漿液PH值3. 5?4. 5,而后離 心收集上清液，上清液再經(jīng)NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值至6. 2?7. 2,最后過濾，即得轉(zhuǎn)移因子溶 液。
[0014] 所述反復(fù)凍融處理是將勻漿液在-25 ± 3 °C冷凍48-56小時，而后在20-25 °C的 循環(huán)水中融化，作為一次凍融處理，按照此凍融條件反復(fù)凍融3-4次；而后再以下述另一 凍融條件反復(fù)凍融2-3次，另一凍融條件為將勻漿液在-25±3°C冷凍12-18小時，而后在 20-25 °C的循環(huán)水中融化。
[0015] 所述動物脾臟與NaCl溶液按重量比為1:1. 3-1. 4的混合，混合后加入膠體磨機(jī)中 磨1?2分鐘，即得勻楽液；其中，膠體磨的縫隙5?10um。
[0016] 所述PH值3. 5?4. 5的勻漿液在2000-2500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心20-30分鐘，收 集上清液，上清液再經(jīng)NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值至6. 2?7. 2,調(diào)節(jié)PH值后過濾，過濾后濾液再經(jīng) 中空纖維柱超濾濾液即得轉(zhuǎn)移因子溶液；其中，中空纖維柱超濾壓力控制在0. 1-0. 2Mpa。
[0017] 本發(fā)明所具有的優(yōu)點：
[0018] 本發(fā)明所獲得的轉(zhuǎn)移因子溶液有效成分的含量高，主要技術(shù)指標(biāo)多肽6mg/ ml，核苷酸：彡170 μ g/ml (以D-核糖計），高于標(biāo)準(zhǔn)的2倍。高分子物質(zhì)低于3% (標(biāo)準(zhǔn) 為5% )。同時采用本發(fā)明方法利于提高轉(zhuǎn)移因子溶液有效成分的含量、提高產(chǎn)品收率、增 加藥物的穩(wěn)定性和安全性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 圖1為本發(fā)明實施例提供的工藝流程圖。

【具體實施方式】
[0020] 實施例1
[0021] 轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法（參見圖1):
[0022] 將融化后的豬脾臟用純化水沖洗，去除脂肪，剪去結(jié)締組織，置入絞肉機(jī)內(nèi)絞碎， 絞碎（2-3mm)后待用。
[0023] 絞碎后脾臟與0. 9% NaCl(W/V) (W/V，質(zhì)量體積比）溶液按重量比為1:1. 3的混 合，混合后加入至膠體磨機(jī)中磨1?2分鐘，即得勻漿液，其中，膠體磨的縫隙5?lOum。
[0024] 勻漿液經(jīng)反復(fù)凍融處理5次，凍融后用2mol/L的HCL溶液調(diào)勻漿液PH值4. 0,而 后以2000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心30分鐘，收集上清液，上清液再經(jīng)2mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié) PH值至7. 0,調(diào)節(jié)PH值后過濾，過濾后濾液再經(jīng)中空纖維柱超濾，濾液即得轉(zhuǎn)移因子溶液， 所得轉(zhuǎn)移因子溶液分裝，送入_25±3°C低溫冷凍保存。其中，中空纖維柱超濾壓力控制在 0. 1-0. 2Mpa〇
[0025] 所述反復(fù)凍融處理是將勻漿液在_25±3°C冷凍48小時，而后在20°C的循環(huán)水中 融化，作為一次凍融處理，按照此凍融條件反復(fù)凍融4次；而后再以下述另一凍融條件反復(fù) 凍融1次，另一凍融條件為將勻漿液在_25±3°C冷凍18小時，而后在20°C的循環(huán)水中融 化。
[0026] 通過上述制備所得的轉(zhuǎn)移因子溶液有效成分的含量高，主要技術(shù)指標(biāo)多肽： 彡6mg/ml，核苷酸：彡170μ g/ml(以D -核糖計），高于標(biāo)準(zhǔn)（標(biāo)準(zhǔn)為多肽：彡1. 5mg/ml， 核苷酸（以D-核糖計）：彡50 μ g/ml)的3倍以上。高分子物質(zhì)低于3% (標(biāo)準(zhǔn)為不得過 5% )。細(xì)胞活力測定玫瑰花結(jié)百分率彡15% (標(biāo)準(zhǔn)為玫瑰花結(jié)百分率彡10% );每毫升含 游離氨基酸的量大于2. 5mg (標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不得少于2mg)。
[0027] 實施例2
[0028] 轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法（參見圖1):
[0029] 將融化后的豬脾臟用純化水沖洗，去除脂肪，剪去結(jié)締組織，置入絞肉機(jī)內(nèi)絞碎， 絞碎后待用。
[0030] 絞碎后脾臟與0. 9% NaCl溶液按重量比為1:1. 4的混合，混合后加入至膠體磨機(jī) 中磨1?2分鐘，即得勻楽液。其中，膠體磨的縫隙5?10um。
[0031] 勻漿液經(jīng)反復(fù)凍融處理5次，凍融后用2mol/L的HCL溶液調(diào)勻漿液PH值4. 0,而后 以2500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心20分鐘，收集上清液，上清液再經(jīng)2mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH 值至7. 0,調(diào)節(jié)PH值后過濾，過濾后濾液再經(jīng)中空纖維柱超濾（壓力控制在0. 1-0. 2Mpa)， 濾液即得轉(zhuǎn)移因子溶液，所得轉(zhuǎn)移因子溶液分裝，送入_25±3°C低溫冷凍保存。其中，中空 纖維柱超濾壓力控制在〇· 1-0. 2Mpa。
[0032] 所述反復(fù)凍融處理是將勻漿液在_25±3°C冷凍56小時，而后在25°C的循環(huán)水中 融化，作為一次凍融處理，按照此凍融條件反復(fù)凍融3次；而后再以下述另一凍融條件反復(fù) 凍融2次，另一凍融條件為將勻漿液在-25±3°C冷凍12小時，而后在25°C的循環(huán)水中融 化。
[0033] 通過上述制備所得的轉(zhuǎn)移因子溶液有效成分的含量高，主要技術(shù)指標(biāo)多肽： 彡6mg/ml，核苷酸：彡170μ g/ml(以D -核糖計），高于標(biāo)準(zhǔn)（標(biāo)準(zhǔn)為多肽：彡1. 5mg/ml， 核苷酸（以D-核糖計）：彡50 μ g/ml)的3倍以上。高分子物質(zhì)低于3% (標(biāo)準(zhǔn)為不得過 5% )。細(xì)胞活力測定玫瑰花結(jié)百分率彡15% (標(biāo)準(zhǔn)為玫瑰花結(jié)百分率彡10% );每毫升含 游離氨基酸的量大于2. 5mg (標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不得少于2mg)。
【權(quán)利要求】
1. 一種轉(zhuǎn)移因子溶液，其特征在于：動物脾臟與NaCl溶液按重量比為1:1. 3-1. 4的混 合經(jīng)反復(fù)凍融后調(diào)節(jié)PH值至6. 2?7. 2,再經(jīng)過濾，即為轉(zhuǎn)移因子溶液。
2. 按權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)移因子溶液，其特征在于：動物脾臟與NaCl溶液按重量比為 1:1. 3-1. 4的混合，混合后磨勻，獲得的勻漿液經(jīng)反復(fù)凍融處理4-6次，凍融后用HCL溶液， 調(diào)勻漿液PH值3. 5?4. 5,而后離心收集上清液，上清液再經(jīng)NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值至6. 2? 7. 2,最后過濾，即得轉(zhuǎn)移因子溶液。
3. 按權(quán)利要求1或2所述的轉(zhuǎn)移因子溶液，其特征在于：所述反復(fù)凍融處理是將勻漿 液在-25±3°C冷凍48-56小時，而后在20-25°C的循環(huán)水中融化，作為一次凍融處理，按照 此凍融條件反復(fù)凍融3-4次；而后再以下述另一凍融條件反復(fù)凍融1-2次，另一凍融條件為 將勻漿液在_25±3°C冷凍12-18小時，而后在20-25°C的循環(huán)水中融化。
4. 按權(quán)利要求1或2所述的轉(zhuǎn)移因子溶液，其特征在于：所述動物脾臟為豬或牛的脾 臟。
5. 按權(quán)利要求1或2所述的轉(zhuǎn)移因子溶液，其特征在于：所述動物脾臟與NaCl溶液按 重量比為1:1. 3-1. 4的混合，混合后加入膠體磨機(jī)中磨1?2分鐘，即得勻漿液。
6. -種權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法，其特征在于：動物脾臟與NaCl溶 液按重量比為1:1. 3-1. 4的混合經(jīng)反復(fù)凍融后調(diào)節(jié)PH值至6. 2?7. 2,再經(jīng)過濾，即為轉(zhuǎn)移 因子溶液。
7. 按權(quán)利要求6所述的轉(zhuǎn)移因子溶液的制備方法，其特征在于：動物脾臟與NaCl溶液 按重量比為1:1. 3-1. 4的混合，混合后磨勻，獲得的勻漿液經(jīng)反復(fù)凍融處理5-6次，凍融后 用HCL溶液，調(diào)勻漿液PH值3. 5?4. 5,而后離心收集上清液，上清液再經(jīng)NaOH溶液調(diào)節(jié) PH值至6. 2?7. 2,最后過濾，即得轉(zhuǎn)移因子溶液。
8. 按權(quán)利要求6或7所述的轉(zhuǎn)移因子溶液，其特征在于：所述反復(fù)凍融處理是將勻漿 液在-25±3°C冷凍48-56小時，而后在20-25°C的循環(huán)水中融化，作為一次凍融處理，按照 此凍融條件反復(fù)凍融3-4次；而后再以下述另一凍融條件反復(fù)凍融2-3次，另一凍融條件為 將勻漿液在_25±3°C冷凍12-18小時，而后在20-25°C的循環(huán)水中融化。
9. 按權(quán)利要求6或7所述的轉(zhuǎn)移因子溶液，其特征在于：所述動物脾臟與NaCl溶液按 重量比為1:1. 3-1. 4的混合，混合后加入膠體磨機(jī)中磨1?2分鐘，即得勻漿液。
10. 按權(quán)利要求6或7所述的轉(zhuǎn)移因子溶液，其特征在于：所述PH值3. 5?4. 5的勻 漿液在2000-2500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心20-30分鐘，收集上清液，上清液再經(jīng)NaOH溶液調(diào) 節(jié)PH值至6. 2?7.2,調(diào)節(jié)PH值后過濾，過濾后濾液再經(jīng)中空纖維柱超濾，濾液即得轉(zhuǎn)移因 子溶液。
【文檔編號】A61P37/02GK104095879SQ201410306339
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年6月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月30日
【發(fā)明者】賈天亮, 鄭桂榮, 梁愛葵 申請人:遼寧天醫(yī)生物制藥股份有限公司