一種用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物及其制備方法。所述藥物由燈盞細(xì)辛、人參和/或紅參、麥冬組成，所述燈盞細(xì)辛、人參和/或紅參、麥冬的重量分?jǐn)?shù)比為1∶(0.08-10)∶(0.08-10)，進(jìn)一步的，所述藥物由燈盞細(xì)辛提取物、人參和/或紅參提取物、麥冬提取物組成，所述燈盞細(xì)辛提取物、人參和/或紅參提取物、麥冬提取物的重量分?jǐn)?shù)比為1∶(0.05-20)∶(0.05-20)。包括如下步驟：浸泡、回流提取、大孔吸附樹(shù)脂柱吸附、干燥、混合。本藥物成份簡(jiǎn)單、療效顯著、能夠從根本上預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)復(fù)發(fā)。此方法用較少的原料達(dá)到了較好的療效，大大提高了燈盞細(xì)辛藥材的利用率，且生產(chǎn)步驟簡(jiǎn)單、操作方便、易于產(chǎn)業(yè)化、生產(chǎn)成本低。
【專利說(shuō)明】一種用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物及其制 備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 缺血性腦中風(fēng)是指各種原因引起的腦部血液供應(yīng)障礙，使局部腦組織發(fā)生不可逆 性損害，導(dǎo)致腦組織缺血、缺氧性壞死而引起相應(yīng)的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征，具有高患病率、 高病死率、高致殘率和高復(fù)發(fā)率等特點(diǎn)，是導(dǎo)致人類死亡的三大疾病之一。MONICA調(diào)查資料 顯示，我國(guó)缺血性腦中風(fēng)的復(fù)發(fā)率高達(dá)30%，居國(guó)際之首。由于復(fù)發(fā)性中風(fēng)可導(dǎo)致更嚴(yán)重的 致殘和病死，防止具有中風(fēng)病史的患者再次發(fā)作，即缺血性腦中風(fēng)的"二級(jí)預(yù)防"在缺血性 腦中風(fēng)的預(yù)防和治療中尤為重要。因此開(kāi)發(fā)預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)二級(jí)預(yù)防的藥物具有 重要的社會(huì)意義。
[0003] 缺血性腦中風(fēng)是一個(gè)多環(huán)節(jié)的損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)，由缺血引發(fā)興奮性毒性、梗死周圍 去極化、炎癥和程序性細(xì)胞死亡，導(dǎo)致神經(jīng)元損害而引起神經(jīng)功能障礙是腦缺血損傷的主 要病理生理機(jī)制，目前臨床用于防治缺血性腦中風(fēng)的抗血小板藥和抗凝劑等化學(xué)藥物多作 用于腦中風(fēng)缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng)的某個(gè)環(huán)節(jié)或某一靶點(diǎn)，難于從根本上預(yù)防和治療中風(fēng)的復(fù)發(fā)。
[0004] 燈盤(pán)細(xì)辛來(lái)源于菊科（Compositae)飛蓬屬（Erigeron L.)植物短葶飛蓬 Erigeron breviscapus (Vant. )Hand_Mazz.，始載于明代醫(yī)學(xué)家藍(lán)止庵所著《滇南本草》： "燈盞花，一名燈盞菊，細(xì)辛草。味苦、辛，性溫"，能治"左癱右瘓，風(fēng)濕疼痛"，"水煎，點(diǎn)酒服" 等?！对颇现胁菟庍x》則云燈盞花"辛，微溫"，具有散寒、解表、活血舒筋、止痛消積之功效， 可預(yù)防和治療感冒頭痛鼻塞、風(fēng)濕痹痛、癱瘓、小兒疳疾、跌打損傷等。經(jīng)現(xiàn)代藥理和臨床驗(yàn) 證表明，燈盞細(xì)辛用于預(yù)防和治療腦血管病療效確切，以燈盞花素注射液、燈盞花素片、燈 盞細(xì)辛膠囊、燈盞細(xì)辛注射液、燈盞生脈膠囊等燈盞細(xì)辛入藥的制劑已廣泛用于臨床預(yù)防 和治療。到目前為止，已在燈盞細(xì)辛中分離鑒定出黃酮類、咖啡酸酯類、酚酸類、吡喃酮類及 倍半萜類等50多種成分，其中以燈盞乙素（野黃芩苷）為主，含有少量燈盞甲素的燈盞花 素類成分是燈盞細(xì)辛（breviscapin)主要有效成分，近幾年來(lái)從燈盞細(xì)辛中發(fā)現(xiàn)另一類特 征性活性成分咖啡酰類化合物，主要包括1，5-二咖啡酰氧基奎寧酸、4, 5-二咖啡酰氧基 奎寧酸、咖啡酸乙酯、3，4-二咖啡酰氧基奎寧酸、咖啡酰氧基環(huán)已甲酸甲酯、1，3-二咖啡酰 氧基奎寧酸、3, 5-二咖啡酰氧基奎寧酸、咖啡酸甲酯、1-0-甲基-3, 5-0-雙咖啡酰基奎寧酸 甲酯、5-0-咖啡?；鼘幩岫□?-^ -γ-吡喃酮）-6-咖啡?；? a -D-吡喃葡萄糖苷 等。它們?cè)趯?duì)體外肝組織勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化生成、對(duì)ADP誘導(dǎo)大鼠的血小板聚集、對(duì)離體大鼠 腦片缺氧復(fù)氧后脂質(zhì)過(guò)氧化等方面均表現(xiàn)了與燈盞乙素相當(dāng)?shù)纳锘钚?，是燈盞細(xì)辛中不 可忽視的一類有效成分。
[0005] 人參是五加科人參屬植物人參（Panax ginseng C.A. Mey)的根。人參的根味 甘、微苦、性溫，具有調(diào)氣養(yǎng)血、安神益智、生津止咳、滋補(bǔ)強(qiáng)身之功效。人參中主要含有皂 苷、揮發(fā)油（人參炔醇、人參倍半萜烯、留醇、脂肪酸）、糖、氨基酸、肽和維生素類等成分， 到目前為止，已從紅參、生曬參和白參中共分離得到40種人參皂苷，即人參皂苷RO、Ral、 Ra2、Ra3、Rbl、Rb2、Rb3、Rc、RcU Re、Rf、20-glc-Rf、Rgl、Rg2、20 (R)-人參皂苷-Rg2、Rg3、 20(S)-AS.- -Rg3、Rg5、Rhl、20(R)-AS.- -Rhl、Rh2、20(S)-AS.- -Rh2、Rh4、 Ri、Rsl、Rs2、丙二?；藚⒃碥誖bl、Rb2、Re、RcU三七人參苷RU西洋參皂苷RU 20 (R)-人 參阜昔-La、 F4、25-hydroxy-ginsenoside-Rg2、25_hydroxy-ginsenoside-Rg2、 la、 lb、 koryoginsenoside-Rgl和-Rg2。人參的莖、葉和花也含有人參皂苷類成分，亦可代替人參 入藥。此外，將人參的根經(jīng)過(guò)加工、炮制，制備成生曬參、紅參，亦可入藥。
[0006] 麥冬為百合科沿階草屬多年生常綠草本植物麥冬Ophiopogon japonicus (L. f) Ker-Gawl.的干燥塊根，在我國(guó)大部分地區(qū)均有野生分布和栽培，其著名產(chǎn)地有四川三臺(tái) (川麥冬）和浙江杭州（杭麥冬）。麥冬以塊根供藥用，具有養(yǎng)陰生津、潤(rùn)肺清心功效，主治 肺燥干咳，津傷口渴等癥，該藥為傳統(tǒng)的滋陰中藥，也是我國(guó)藥典規(guī)定的藥食同源品之一， 具有養(yǎng)陰生津，潤(rùn)肺清心等功能。化學(xué)成分研宄表明，麥冬含有異麥冬黃烷酮A、4-羥基茉 莉酮、甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B、麥冬黃烷酮A、麥冬黃烷酮B/C/D/E/F、6-醛基 異麥冬黃酮A/B、2,5,7-三羥基_6,8_二甲基-3-(f -甲氧基芐基）苯并二氫呋喃-4-酮、 2,5,7_三羥基_6,8_二甲基-3-(3'，4'-亞甲二氧基芐基）苯并二氫呋喃-4-酮以及5， 7,2'-三羥基-6-甲基-3-(3'，4'-亞甲二氧基苯甲基）色酮等高異黃酮類和慈溪麥冬 苷A、慈溪麥冬苷B、麥冬皂苷A、麥冬皂苷B、麥冬皂苷C、麥冬皂苷D、麥冬皂苷IV、麥冬 黃酮A、麥冬黃酮C、羅斯考皂苷元等留體皂苷類成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研宄表明麥冬具有抗氧 化、抗衰老及抗心肌缺血等作用。目前，麥冬皂苷類成分是麥冬的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)其制備 工藝和藥理作用的研宄較多；麥冬多糖類成分的降血糖作用引起越來(lái)越多的重視，同時(shí)也 有研宄表明麥冬中高異黃酮類成分具有良好的自由基清除作用，可顯著改善小鼠的氧化損 傷，也是麥冬中不可忽視的有效成分。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對(duì)上述問(wèn)題中存在的不足之處，本發(fā)明提供一種成份簡(jiǎn)單、療效顯著、能夠從根 本上預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)復(fù)發(fā)的一種中藥及其制備方法。
[0008] 中醫(yī)理論認(rèn)為，缺血性腦中風(fēng)急性期多見(jiàn)風(fēng)火相煽、痰熱奎盛、瘀血阻絡(luò)、氣血逆 亂等實(shí)證，隨著病情發(fā)展，邪實(shí)未除，而氣虛已現(xiàn)。氣虛加重血瘀，血瘀又可阻礙氣機(jī)，耗傷 氣血，二者互為因果。同時(shí)由于急性期大量使用清熱、化痰、活血之品，這些藥物在達(dá)到搶救 目的的同時(shí)，也能造成人體正氣的耗傷，使得恢復(fù)期氣陰兩虛的癥狀突出表現(xiàn)，同時(shí)由于中 風(fēng)患者多年過(guò)花甲，有肝腎陰虛之病理基礎(chǔ)，而氣虛、陰虛均可導(dǎo)致瘀血阻絡(luò)，因此在缺血 性腦中風(fēng)的恢復(fù)期常表現(xiàn)出氣陰兩虛、瘀血阻絡(luò)的主要病機(jī)，中醫(yī)臨床通常采用益氣養(yǎng)陰， 活血通絡(luò)的治則，使正氣得復(fù)，氣血旺盛，經(jīng)脈得以通暢，筋肉得以濡養(yǎng)，預(yù)防中風(fēng)復(fù)發(fā)。
[0009] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物，所述 藥物由燈盞細(xì)辛、人參和/或紅參、麥冬組成，所述燈盞細(xì)辛、人參、麥冬的重量分?jǐn)?shù)比為 1 : (0.08-10) : (0.08-10);所述燈盞細(xì)辛為植物短葶飛蓬的全草、花、莖、葉和根中的至 少一種，所述人參和/或紅參為植物人參和/或紅參的根、莖、葉和花中的至少一種，所述麥 冬為百合科植物麥冬、湖北麥冬或短葶山麥冬中至少一種的塊根；所述燈盤(pán)細(xì)辛、人參和/ 或紅參、麥冬為炮制后燈盞細(xì)辛、人參和/或紅參、麥冬或者為燈盞細(xì)辛、人參和/或紅參、 麥冬的鮮藥材。
[0010] 所述藥物也可以由燈盞細(xì)辛提取物、人參和/或紅參總提取物、麥冬提取物 組成，所述燈盞細(xì)辛提取物、人參和/或紅參總提取物、麥冬提取物的重量分?jǐn)?shù)比為 1 ： (0.05-20) ： (0.05-20) 〇
[0011] 其中，所述燈盞細(xì)辛提取物為燈盞細(xì)辛總多酚，所述燈盞細(xì)辛總多酚的質(zhì)量百分 含量大于50 %，優(yōu)選為大于等于80 %，如80-83 %，燈盞細(xì)辛總多酚包括燈盞乙素、燈盞甲 素、綠原酸、1，3-0-雙咖啡?；鼘幩?、1，5-0-雙咖啡?；鼘幩?、4，5-0-雙咖啡?；?寧酸、3, 5-0-雙咖啡?；鼘幩岷惋w蓬酯乙；所述燈盞乙素在燈盞細(xì)辛總多酚提取物中的 質(zhì)量百分含量大于等于5%，所述綠原酸在燈盞細(xì)辛總多酚提取物中的質(zhì)量百分含量大于 等于0. 8%，所述4, 5-0-雙咖啡?；鼘幩嵩跓舯K細(xì)辛總多酚提取物中的質(zhì)量百分含量大 于等于1.5% ;
[0012] 人參提取物為人參總皂苷，其質(zhì)量百分含量大于50%，優(yōu)選為大于等于80%，如 80-83% ;其中，人參總皂苷包括人參皂苷RgU人參皂苷Re、人參皂苷Rbl和人參皂苷Rf， 所述人參皂苷Rgl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量大于等于2%，人參皂苷Re在人參總皂 苷中的質(zhì)量百分含量大于等于2. 5%，人參皂苷Rbl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量大于 等于2% ;
[0013] 所述麥冬提取物為麥冬總黃酮和麥冬總阜苷，麥冬總黃酮的質(zhì)量百分含量大于 30%，優(yōu)選為大于等于50%，麥冬總皂苷的質(zhì)量百分含量大于20%，優(yōu)選為大于等于50%， 如 89-95%。
[0014] 本發(fā)明的藥物，在需要時(shí)，可加入藥學(xué)上可接受的載體，制成片劑、顆粒劑、膠囊 劑、滴丸劑、口腔崩解片、注射劑、輸液劑、緩控釋片劑、緩控釋微丸、氣霧劑或吸入劑等；所 述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、 表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑等，還可以加入香味劑或甜味劑等。
[0015] 制備如上所述的用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物的方法，包括如下步驟：
[0016] 1)對(duì)燈盞細(xì)辛、人參和/或紅參、麥冬進(jìn)行浸泡，然后用乙醇水溶液或水對(duì)至少 一種成份進(jìn)行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到含有至少一種成份的總提取 液；
[0017] 2)采用大孔吸附樹(shù)脂柱對(duì)上述步驟1)獲得的總提取液進(jìn)行吸附，先用水洗脫水 溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫大孔吸附樹(shù)脂柱，收集洗脫液，得到含有燈盞細(xì)辛總多 酚、人參總皂苷、麥冬總皂苷、麥冬黃烷酮中至少一種的洗脫液；
[0018] 3)對(duì)上述步驟2)獲得的洗脫液進(jìn)行干燥，得到燈盞細(xì)辛提取物、人參和/或紅參 /西洋參總提取物、麥冬提取物中的至少一種；
[0019] 4)重復(fù)以上1)至3)的步驟，直到得到所有總提取物；
[0020] 5)根據(jù)需要將上述三種粉末狀總提取物按照重量分?jǐn)?shù)比1 : (0.05-20): (0.05-20)混合，制得所需要的藥物。
[0021 ] 進(jìn)一步的，所述步驟1)中浸泡時(shí)間為0_90min，優(yōu)選30min ;回流時(shí)間為 30-150min，優(yōu)選90-120min ;回流次數(shù)為1-3次，優(yōu)選3次；乙醇水溶液中乙醇的體積百 分含量為50-95%，優(yōu)選體積百分含量為75-80% ;燈盞細(xì)辛和乙醇水溶液的重量份數(shù) 比為1 : (6-15)，優(yōu)選1 : 8;人參和/或紅參/西洋參和乙醇水溶液的重量份數(shù)比為 I : (6-15)，優(yōu)選I : 8;麥冬和乙醇水溶液的重量份數(shù)比為I : (6-15)，優(yōu)選I : 8。
[0022] 進(jìn)一步的，所述步驟2)中洗脫水溶性雜質(zhì)時(shí)，乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量 小于10% ;洗脫大孔吸附樹(shù)脂柱時(shí)，乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選 40-85 %〇
[0023] 優(yōu)選的，所述步驟2)大孔吸附樹(shù)脂柱中的樹(shù)脂填料為下述五種樹(shù)脂中的任意一 種：HPD600型樹(shù)脂、HPD300型樹(shù)脂、HPD100型樹(shù)脂、DlOl型樹(shù)脂及AB-8型樹(shù)脂。
[0024] 進(jìn)一步的，所述步驟3)中的干燥溫度為50-60°C。
[0025] 本發(fā)明的有益效果為：
[0026] 1、本發(fā)明所用原料較少，包括配伍比例明確的燈盞細(xì)辛總多酚、人參總皂苷、麥冬 總黃酮、麥冬總皂苷；通過(guò)大鼠中動(dòng)脈栓塞實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，采用燈盞細(xì)辛總多酚、人參總皂 苷、麥冬總黃酮、麥冬總皂苷相配伍具有最佳的藥效作用，通過(guò)神經(jīng)肌肉功能及前庭運(yùn)動(dòng)功 能等行為學(xué)評(píng)價(jià)、腦水腫及梗死面積的測(cè)定、腦組織勻漿和血清中超氧化物歧化酶（SOD)、 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX)、丙二醛（MDA)、一氧化氮（NO)等活性和水平的測(cè)定，可有效 改善模型大鼠神經(jīng)肌肉功能及前庭運(yùn)動(dòng)功能，改善腦水腫，減小梗死面積，降低動(dòng)物血清及 腦組織中超氧化物歧化酶（SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX)、丙二醛（MDA)、一氧化氮 (NO)等活性和水平，而且保持了與原藥材配伍方相同的療效，本發(fā)明的藥物組分較少，藥效 成分明確，質(zhì)量容易控制。
[0027] 2、在步驟2)中，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂富集，水-醇溶液洗脫，克服了現(xiàn)有技術(shù)中需 要堿溶酸沉或有機(jī)溶劑萃取等缺陷，減少了有機(jī)溶劑殘留、簡(jiǎn)化了生產(chǎn)步驟，優(yōu)化了生產(chǎn)條 件，降低了環(huán)境負(fù)荷，具有步驟簡(jiǎn)單、操作方便、易于產(chǎn)業(yè)化等優(yōu)點(diǎn)；
[0028] 3、本發(fā)明方法避免了現(xiàn)有技術(shù)中因醇沉造成燈盞細(xì)辛多酚酸類有效組分損失的 問(wèn)題，具有有效組分損失少、成品產(chǎn)率高的優(yōu)點(diǎn)；
[0029] 4、采用本發(fā)明方法得到的燈盞細(xì)辛提取物中的燈盞細(xì)辛總酚酸含量高，避免了現(xiàn) 有技術(shù)中大多僅針對(duì)燈盞乙素等黃酮類成分，而忽視了雙咖啡酰基奎寧酸類成分等問(wèn)題， 大大提高了燈盞細(xì)辛藥材的利用率；
[0030] 5、采用本發(fā)明方法制備預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)時(shí)，較目 前采用的其它方法可以使生產(chǎn)成本大大降低；
[0031] 6、本發(fā)明方法工藝穩(wěn)定，所制備出的藥物各批次之間質(zhì)量差異小，同時(shí)可通過(guò)色 譜指紋圖譜，對(duì)藥物中的燈盞細(xì)辛總多酚、人參總皂苷、麥冬總黃酮、麥冬總皂苷的組分進(jìn) 行含量測(cè)定，能有效控制本發(fā)明藥物的質(zhì)量。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0032] 圖IA為對(duì)中動(dòng)脈栓塞大鼠腦組織中GSH-PX含量影響；
[0033] 圖IB為對(duì)中動(dòng)脈栓塞大鼠腦組織中NO含量影響；
[0034] 圖IC為對(duì)中動(dòng)脈栓塞大鼠腦組織中SOD含量影響；
[0035] 圖ID為對(duì)中動(dòng)脈栓塞大鼠腦組織中MDA含量影響；
[0036] 圖2A為對(duì)中動(dòng)脈栓塞大鼠血清中GSH-PX含量的影響；
[0037] 圖2B為對(duì)中動(dòng)脈栓塞大鼠血清中NO含量的影響；
[0038] 圖2C為對(duì)中動(dòng)脈栓塞大鼠血清中SOD含量的影響；
[0039] 圖2D為對(duì)中動(dòng)脈栓塞大鼠血清中MDA含量的影響；
[0040] 圖3為對(duì)大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞模型的代謝輪廓分析圖（OPLS-DA)。

【具體實(shí)施方式】
[0041] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好的 理解本發(fā)明并能予以實(shí)施，但所舉實(shí)施例不作為對(duì)本發(fā)明的限定。
[0042] 在本說(shuō)明書(shū)中，除非特別指明，否則所用技術(shù)術(shù)語(yǔ)為本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員常 用術(shù)語(yǔ)；本說(shuō)明書(shū)中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法是按常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法；本說(shuō)明書(shū)中所用的試 驗(yàn)材料如無(wú)特別說(shuō)明均為市售購(gòu)買(mǎi)產(chǎn)品。
[0043] 實(shí)施例1 :
[0044] 本實(shí)施例的預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥物由燈盞細(xì)辛提取物、人參提取物和麥 冬提取物組成，其中，燈盞細(xì)辛提取物、人參提取物和麥冬提取物的制備方法如下：
[0045] -、燈盞細(xì)辛提取物的制備
[0046] 準(zhǔn)確稱取燈盞細(xì)辛粗粉10kg，加入80L，體積百分含量為75%的乙醇浸泡30分鐘 后進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為60分鐘；收集提取液，然后再向殘?jiān)屑尤?0L，體積百分含 量為75%的乙醇進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為60分鐘；再重復(fù)上述提取過(guò)程一次。將三次 的提取液混合，冷卻至室溫，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮（60°C，真空度0. 08Mpa)至無(wú)醇味，得到 2. 3kg提取物浸膏；取2. 3kg提取物浸膏加入14L水稀釋至20°C時(shí)溶液的密度為I. 06g/ml， 得到15L燈盞細(xì)辛提取液。
[0047] 采用預(yù)處理好的弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱（在樹(shù)脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙 烯苯為骨架的型號(hào)為AB-8的樹(shù)脂填料，該弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱和AB-8樹(shù)脂填料購(gòu)自河 北滄州寶恩化工有限公司），對(duì)上述獲得的15L人參皂苷提取液進(jìn)行分離純化，填料后柱床 體積為21L。人參皂苷提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹(shù)脂柱床體積的水以2bv/h (Ibv/ h即每小時(shí)按1倍柱床體積的流量）的流速?zèng)_洗樹(shù)脂柱，除去多糖等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫 液；再用4倍于樹(shù)脂柱床體積的體積百分含量為70%的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹(shù)脂柱， 收集洗脫液，得到燈盞細(xì)辛總多酚洗脫液；將燈盞細(xì)辛總多酚洗脫液減壓濃縮為稠清膏，將 稠清膏再經(jīng)60°C恒溫常壓干燥，得到240g燈盞細(xì)辛提取物粉末。
[0048] 此制備方法克服了現(xiàn)有技術(shù)中因醇沉造成燈盞細(xì)辛多酚酸類有效組分的損失，避 免了現(xiàn)有技術(shù)中大多僅針對(duì)燈盞乙素等黃酮類成分的提取，而忽視了雙咖啡?；鼘幩犷?成分等問(wèn)題，得到的燈盞細(xì)辛提取物中的燈盞細(xì)辛總酚酸含量高，大大提高了燈盞細(xì)辛藥 材的利用率，采用HPLC法檢測(cè)燈盞細(xì)辛提取物粉末中燈盞乙素及咖啡?；鼘幩岬暮?， 結(jié)果表明，上述得到的燈盞細(xì)辛提取物粉末中，燈盞多酚的質(zhì)量百分含量為80%，較傳統(tǒng)方 法含量提高了 49%，燈盞乙素的質(zhì)量百分含量為5%，綠原酸的質(zhì)量百分含量為0. 8%，4， 5-0-雙咖啡?；鼘幩岬馁|(zhì)量百分含量為1. 5%。
[0049] 二、人參提取物的制備
[0050] 準(zhǔn)確稱取人參粗粉10kg，加入80L，體積百分含量為80%的乙醇浸泡30分鐘后進(jìn) 行回流提取，提取時(shí)間為120分鐘；收集提取液，然后再向殘?jiān)屑尤?0L，體積百分含量為 80%的乙醇進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為120分鐘；再重復(fù)上述提取過(guò)程一次。將三次的提取 液混合，冷卻至室溫，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，得到I. 9kg提取物浸膏；取I. 9kg提 取物浸膏加入14L水稀釋，得到15L人參提取液。
[0051] 采用預(yù)處理好的弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱（在樹(shù)脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙 烯苯為骨架的型號(hào)為HPD100的樹(shù)脂填料，該弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱和HPD100樹(shù)脂填料購(gòu) 自河北滄州寶恩化工有限公司），對(duì)上述獲得的15L人參皂苷提取液進(jìn)行分離純化，填料 后柱床體積為21L。人參皂苷提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹(shù)脂柱床體積的水以2bv/ h(lbv/h即每小時(shí)按1倍柱床體積的流量）的流速?zèng)_洗樹(shù)脂柱，除去多糖等水溶性雜質(zhì)，棄 去洗脫液；再用4倍于樹(shù)脂柱床體積的體積百分含量為75 %的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹(shù) 脂柱，收集洗脫液，得到人參總皂苷洗脫液；將人參總皂苷洗脫液減壓濃縮（60°C，真空度 0. OSMpa)為稠清膏，將稠清膏再經(jīng)60°C恒溫常壓干燥，得到230g人參提取物粉末。
[0052] 采用HPLC法檢測(cè)人參提取物粉末中人參總皂苷的含量。結(jié)果表明，上述得到的人 參提取物粉末中，人參總皂苷的質(zhì)量百分含量為80%，人參皂苷Rgl在人參總皂苷中的質(zhì) 量百分含量為3. 4%，人參皂苷Re在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為3. 7%，人參皂苷Rbl 在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為4. 1 %。
[0053] 同時(shí)，此制備方法通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂富集，水-醇溶液洗脫，克服了現(xiàn)有技術(shù)中需 要堿溶酸沉或有機(jī)溶劑萃取等缺陷，減少了有機(jī)溶劑殘留、簡(jiǎn)化了生產(chǎn)步驟，優(yōu)化了生產(chǎn)條 件，降低了環(huán)境負(fù)荷，步驟簡(jiǎn)單、操作方便、易于產(chǎn)業(yè)化。
[0054] 三、麥冬提取物的制備
[0055] 準(zhǔn)確稱取麥冬（Ophiopogon japonicus)粗粉10kg，加入80L，體積百分含量為 80%的乙醇浸泡30分鐘后進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為120分鐘；收集提取液，然后再向殘 渣中加入80L，體積百分含量為80%的乙醇進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為120分鐘；再重復(fù)上 述提取過(guò)程一次。將三次的提取液混合，冷卻至室溫，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，得到 1. 9kg提取物浸膏；取I. 9kg提取物浸膏加入14L水稀釋，得到15L麥冬提取液。
[0056] 采用預(yù)處理好的弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱（在樹(shù)脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙 烯苯為骨架的型號(hào)為HPD-100的樹(shù)脂填料，該弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱和HPD-100樹(shù)脂填料 購(gòu)自河北滄州寶恩化工有限公司），對(duì)上述獲得的15L麥冬提取液進(jìn)行分離純化，填料后柱 床體積為21L。麥冬提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹(shù)脂柱床體積的水以2bv/h(lbv/ h即每小時(shí)按1倍柱床體積的流量）的流速?zèng)_洗樹(shù)脂柱，除去多糖等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫 液；再用4倍于樹(shù)脂柱床體積的體積百分含量為40%的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹(shù)脂柱， 收集洗脫液，得到麥冬總皂苷洗脫液；再用4倍于樹(shù)脂柱床體積的體積百分含量為80%的 乙醇以lbv/h的流速洗脫樹(shù)脂柱，收集洗脫液，得到麥冬總黃酮洗脫液；將麥冬總黃酮和麥 冬總皂苷洗脫液減壓濃縮為稠清膏，將稠清膏再經(jīng)60°C恒溫常壓干燥，分別得到麥冬總黃 酮提取物20. 3g和麥冬總皂苷提取物100g，合并后作為麥冬提取物（120. 3g)。結(jié)果表明， 上述得到的麥冬提取物粉末中，麥冬總黃酮的質(zhì)量百分含量為8%，麥冬總皂苷的質(zhì)量百分 含量為76%。
[0057] 四、藥物的制備
[0058] 將72g上述步驟一制備的燈盞細(xì)辛提取物粉末，15g上述步驟二制備的人參提取 物粉末與33g上述步驟三制備的麥冬提取物粉末混合，得到本發(fā)明的藥物。
[0059] 采用本發(fā)明方法制備預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)時(shí)，較目前 采用的其它方法可以使生產(chǎn)成本大大降低，較之前相比生產(chǎn)成本降低了 50 %。
[0060] 實(shí)施例2 :
[0061] 燈盞細(xì)辛提取物、人參提取物、麥冬提取物的制備方法同實(shí)施例1。將Ig上述步驟 一制備的燈盞細(xì)辛提取物粉末，20g上述步驟二制備的人參提取物粉末與20g上述步驟三 制備的麥冬總總皂苷提取物粉末混合，得到本發(fā)明的藥物。
[0062] 實(shí)施例3 :
[0063] 燈盞細(xì)辛提取物、人參提取物、麥冬提取物的制備方法同實(shí)施例1。將200g上述步 驟一制備的燈盞細(xì)辛提取物粉末，IOg上述步驟二制備的人參提取物粉末與IOg上述步驟 三制備的麥冬提取物粉末混合，得到本發(fā)明的藥物。
[0064] 實(shí)施例4 :
[0065] 預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥效實(shí)驗(yàn)。分別取上述實(shí)施例1、2和3制備的藥物， 用生理鹽水配制為lg/ml的藥液進(jìn)行藥效實(shí)驗(yàn)。
[0066] 基于經(jīng)典的線栓法，制備大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞（Middle cerebral artery occlusion，MACO)模型，大鼠隨機(jī)分為正常組，假手術(shù)組，模型對(duì)照組，燈盞乙素組，尼莫地 平組，實(shí)施例1、2和3制備的預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)疾病的藥物提取物；本實(shí)驗(yàn)采用Zea Longa線栓法制作大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞模型，造模前，連續(xù)給藥6天，每天灌胃給藥1次；第 6天給藥Ih后開(kāi)始造模，造模22h后再灌胃給藥1次。各組大鼠均在最后一次給藥2h后 處死。缺血前后灌胃給予實(shí)施例1、2和3制備的預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)疾病的藥物提取 物，進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，測(cè)量腦梗死率和腦組織含水量，以及測(cè)定腦組織中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX)、丙二醛（MDA)、一氧化氮（NO)的活性或水平。
[0067] 通過(guò)神經(jīng)肌肉功能及前庭運(yùn)動(dòng)功能等行為學(xué)評(píng)價(jià)、腦水腫及梗死面積的測(cè)定、腦 組織勻漿中超氧化物歧化酶（SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX)、丙二醛（MDA)、一氧化 氮（NO)等活性和水平的測(cè)定，評(píng)價(jià)采用本發(fā)明工藝制備樣品對(duì)缺血性腦中風(fēng)動(dòng)物的預(yù)防 和治療作用，如圖1A、圖1B、圖1C、圖1D、圖2A、圖2B、圖2C和圖2D (與正常組相比較，*P < 0· 05, #P < 0· 01 ;與模型組相比較，#P < 0· 05, ##P < 0· 01)所示。
[0068] -、腦組織勻漿中超氧化物歧化酶（SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX)、丙二醛 (MDA)、一氧化氮（NO)等活性和水平的測(cè)定
[0069] 假手術(shù)組和正常組大鼠腦勻漿中四種指標(biāo)均存在差異，其中S0D、MDA及NO三種指 標(biāo)在兩組之間存在顯著性差異（P < 0. 05、0. 01)，說(shuō)明雖然假手術(shù)組大鼠沒(méi)有進(jìn)行結(jié)扎，但 是手術(shù)過(guò)程也造成了大鼠機(jī)體的損傷，產(chǎn)生了一定的氧化應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致假手術(shù)組中的以上 指標(biāo)與正常組產(chǎn)生差異。大鼠腦缺血-再灌注后，模型組大鼠腦組織中MDA和NO含量明顯 升高，SOD和GSH-Px活力明顯降低，與假手術(shù)組大鼠比較有顯著性差異（P<0.01)。與模 型組比較，燈盞乙素組大鼠腦組織中GSH-Px和SOD活性明顯升高（P < 0. 05、0. 01)，MDA和 NO含量明顯降低（P < 0. 05、0. 01);尼莫地平組大鼠腦組織中GSH-Px和SOD活性明顯升高 (P < 0.01)，同時(shí)NO含量明顯降低（P < 0.01)，MDA含量有降低趨勢(shì)，但差異不顯著；實(shí)施 例1、2和3制備的預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)疾病的藥物提取物預(yù)防給藥各組動(dòng)物腦組織中 GSH-Px和SOD活性明顯升高（P< 0.01)，NO含量明顯降低（P< 0.01);實(shí)施例1和2制備 的預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)疾病的藥物提取物預(yù)防給藥各組動(dòng)物腦組織中MDA含量明顯 降低（P < 0. 01)，實(shí)施例3給藥組有降低趨勢(shì)但不顯著。與陽(yáng)性藥燈盞乙素組和尼莫地平 組相比，實(shí)施例1、2和3均顯示了優(yōu)于陽(yáng)性藥的藥效，證實(shí)復(fù)方配伍的合理性和優(yōu)效性。
[0070] 二、血清中超氧化物歧化酶（SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX)、丙二醛（MDA)、 一氧化氮（NO)等活性和水平的測(cè)定
[0071] 大鼠腦缺血-再灌注后，模型組大鼠血清中MDA和NO含量明顯升高，SOD和GSH-Px 活力明顯降低，與假手術(shù)組大鼠比較有顯著性差異（P < 0. 01)。與模型組比較，DZX組大鼠 血清中GSH-Px活性有升高的趨勢(shì)，但差異不顯著，SOD活性明顯升高（P < 0. 01)，MDA和NO 含量明顯降低（P< 0.01);尼莫地平組大鼠血清中GSH-Px和SOD活性明顯升高（P< 0.05、 0. 01)，同時(shí)明顯降低NO含量（P < 0. 01)，MDA含量有降低趨勢(shì)，但差異不顯著；CIS提取物 各劑量組血清中SOD活性明顯升高（P < 0. 01)，NO含量明顯降低（P < 0. 01、0. 05);實(shí)施 例1、2和3制備的預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)疾病的藥物提取物預(yù)防給藥各組動(dòng)物腦組織中 SOD活性明顯升高（P < 0. 01)，NO含量明顯降低（P < 0. 01);實(shí)施例1和2制備的預(yù)防和 治療缺血性腦中風(fēng)疾病的藥物提取物預(yù)防給藥各組動(dòng)物腦組織中GSH-Px活性明顯升高（P < 0. 01)，實(shí)施例3給藥組有升高趨勢(shì)但不顯著；實(shí)施例1和2制備的預(yù)防和治療缺血性腦 中風(fēng)疾病的藥物提取物預(yù)防給藥各組動(dòng)物腦組織中MDA含量明顯降低（P < 0. 01)，實(shí)施例 3給藥組有降低趨勢(shì)但不顯著。與陽(yáng)性藥燈盞乙素組和尼莫地平組相比，實(shí)施例1、2和3均 顯示了優(yōu)于陽(yáng)性藥的藥效，證實(shí)復(fù)方配伍的合理性和優(yōu)效性。
[0072] 三、干預(yù)中動(dòng)脈栓塞模型大鼠的代謝組學(xué)研宄
[0073] 基于對(duì)采用本發(fā)明工藝制備樣品干預(yù)中動(dòng)脈阻塞模型大鼠生物樣本（血清）的代 謝輪廓分析，根據(jù)內(nèi)源性生物標(biāo)志物的變化，從整體效應(yīng)角度證實(shí)了采用本發(fā)明工藝制備 樣品對(duì)缺血性腦中風(fēng)模型動(dòng)物的預(yù)防和治療作用，結(jié)果如圖3所示。其機(jī)制與一碳代謝、月旨 肪酸代謝以及留體激素代謝循環(huán)紊亂等有關(guān)，并發(fā)現(xiàn)和篩選了葉酸、半胱氨酸、四氫葉酸、 腺苷同型半胱氨酸、氧化型谷胱甘肽、羥基二十碳四烯酸、腺苷、去氧皮質(zhì)酮、羥基亞油酸、 醛固酮、甜菜苷和蔗糖6-磷酸等12個(gè)與預(yù)防和治療作用相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物。
[0074] 實(shí)施例5 :預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)藥物顆粒劑的制備
[0075] -、預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥物顆粒劑的制備
[0076] 取上述實(shí)施例1步驟一制備的燈盞細(xì)辛提取物粉末100g，上述實(shí)施例1步驟二制 備的人參提取物粉末l〇g，麥冬提取物20g，將三者混合均勻，再加入390g糊精（加入糊精 的重量是燈盞細(xì)辛提取物、人參提取物和麥冬提取物質(zhì)量之和的3倍）和260g蔗糖粉（加 入蔗糖粉的重量是燈盞細(xì)辛提取物、人參提取物和麥冬提取物質(zhì)量之和的2倍），混合均 勻，制成為粒度為16目的藥物顆粒，60°C條件下對(duì)藥物顆粒進(jìn)行干燥，得到缺血性腦中風(fēng) 的藥物顆粒劑。
[0077] 二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0078] 具體實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例4。結(jié)果表明，本實(shí)施例的藥物顆粒劑對(duì)大鼠中動(dòng)脈栓塞模 型的預(yù)防和治療效果與實(shí)施例1、2和3的藥物的效果相同。
[0079] 實(shí)施例6 :預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥物注射劑的制備
[0080] 一、紅參提取物的制備
[0081] 準(zhǔn)確稱取紅參粗粉150g，加入1500ml，體積百分含量為70%的乙醇浸泡30分鐘后 進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為90min ;收集提取液，然后再向殘?jiān)屑尤?500ml，體積百分含 量為70%的乙醇進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為90min ;再重復(fù)上述提取過(guò)程一次。將三次提取 液混合，冷卻至室溫，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮（60°C，真空度0. 08Mpa)至無(wú)醇味，得到32g提 取物浸膏；取32g提取物浸膏加入90ml水稀釋至20°C時(shí)溶液的密度為I. 06g/ml，得到96ml 紅參提取液。
[0082] 采用預(yù)處理好的弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱（在樹(shù)脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙 烯苯為骨架型號(hào)為HPD700的樹(shù)脂填料，該弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱和HPD700樹(shù)脂填料購(gòu)自 河北滄州寶恩化工有限公司），對(duì)上述獲得的96ml紅參提取液進(jìn)行分離純化，填料后柱床 體積為117ml。人參皂苷提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹(shù)脂柱床體積的水以2bv/h (Ibv/ h即每小時(shí)按1倍柱床體積的流量）的流速?zèng)_洗樹(shù)脂柱，除去多糖等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫 液；再用4倍于樹(shù)脂柱床體積的體積百分含量為60%的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹(shù)脂柱， 收集洗脫液，得到人參總皂苷洗脫液；將人參總皂苷洗脫液減壓濃縮為稠清膏，將稠清膏再 經(jīng)60°C恒溫常壓干燥，得到9g紅參提取物粉末（其中人參總皂苷的含量達(dá)83% (測(cè)定方 法同實(shí)施例1))，人參皂苷Rgl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為2. 3%，人參皂苷Re在 人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為2. 6%，人參皂苷Rbl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為 3. 1% ;人參皂苷Rf在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為0.015%。
[0083] 二、燈盞細(xì)辛提取物的制備
[0084] 準(zhǔn)確稱取燈盞細(xì)辛粗粉10kg，加入80L，體積百分含量為75%的乙醇浸泡30分鐘 后進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為60分鐘；收集提取液，然后再向殘?jiān)屑尤?0升，體積百分 含量為75%的乙醇進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為60分鐘；再重復(fù)上述提取過(guò)程一次。將三 次的提取液混合，冷卻至室溫，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，得到2. 3kg提取物浸膏；取 2. 3kg提取物浸膏加入14L水稀釋至20°C時(shí)溶液的密度為I. 06g/ml，得到15L燈盞細(xì)辛提 取液。
[0085] 采用大孔吸附樹(shù)脂柱（以型號(hào)為HPD300的苯乙烯型樹(shù)脂為填料，購(gòu)自河北滄州 寶恩化工有限公司），對(duì)上述獲得的15L燈盞細(xì)辛提取液進(jìn)行分離純化，填料后柱床體積為 65L。燈盞細(xì)辛提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹(shù)脂柱床體積的水以2bv/h (lbv/h即每小 時(shí)按1倍柱床體積的流量）的流速?zèng)_洗樹(shù)脂柱，棄去洗脫液，然后再用3倍于樹(shù)脂柱床體積 的體積百分含量為50%的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹(shù)脂柱，收集洗脫液，得到燈盞細(xì)辛總 多酚洗脫液；將燈盞細(xì)辛總多酚洗脫液進(jìn)行減壓濃縮（60°C，真空度0. 08Mpa)，得到820g比 重為1.2(60°C)的稠清膏；對(duì)稠清膏再經(jīng)60°C恒溫常壓干燥，得到660g燈盞細(xì)辛提取物粉 末（其中燈盞細(xì)辛總多酚的產(chǎn)率為6. 6% )。經(jīng)檢測(cè)，燈盞細(xì)辛提取物粉末中，丹參總酚酸 的含量為82% (測(cè)定方法同實(shí)施例1)。
[0086] 三、短葶山麥冬提取物的制備
[0087] 準(zhǔn)確稱取短葶山麥冬（Liriope muscari (Decne. )Bailey)粗粉 10kg，加入 80L， 體積百分含量為80%的乙醇浸泡30分鐘后進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為120分鐘；收集提取 液，然后再向殘?jiān)屑尤?0L，體積百分含量為80%的乙醇進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為120 分鐘；再重復(fù)上述提取過(guò)程一次。將三次的提取液混合，冷卻至室溫，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮 (60°C，真空度0. 08Mpa)至無(wú)醇味，得到I. 9kg提取物浸膏；取I. 9kg提取物浸膏加入14L 水稀釋，得到15L短葶山麥冬提取液。
[0088] 采用預(yù)處理好的弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱（在樹(shù)脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙 烯苯為骨架的型號(hào)為HPD-100的樹(shù)脂填料，該弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱和HPD-100樹(shù)脂填料 購(gòu)自河北滄州寶恩化工有限公司），對(duì)上述獲得的15L麥冬提取液進(jìn)行分離純化，填料后柱 床體積為21L。麥冬提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹(shù)脂柱床體積的水以2bv/h (lbv/h即 每小時(shí)按1倍柱床體積的流量）的流速?zèng)_洗樹(shù)脂柱，除去多糖等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液； 再用4倍于樹(shù)脂柱床體積的體積百分含量為70 %的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹(shù)脂柱，收集 洗脫液，將麥冬總黃酮和麥冬總皂苷洗脫液減壓濃縮為稠清膏，將稠清膏再經(jīng)60°C恒溫常 壓干燥，分別得到短葶山麥冬提取物l〇〇g。結(jié)果表明，上述得到的短葶山麥冬提取物粉末 中，麥冬總黃酮的質(zhì)量百分含量為5%，麥冬總皂苷的質(zhì)量百分含量為75%。
[0089] 四、預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥物注射劑的制備
[0090] 取上述步驟一制備的紅參提取物粉末9g，上述步驟二制備的燈盞細(xì)辛總多酚提取 物粉末180g和上述短葶山麥冬提取物9g，再加入630ml注射用水，攪拌均勻，于4°C條件下 靜置24h。吸取上清液，按0. 05g注射劑用活性炭/IOOml上清液的比例在上清液中加入注 射劑用活性炭，40°C條件下保溫30min，用0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾；取濾液，再加入注射用水 使混合液的總重量為840g，攪拌均勻，安瓿灌封，115°C條件下熱壓滅菌30分鐘，包裝，得到 治缺血性腦中風(fēng)的藥物注射劑。
[0091] 五、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0092] 具體實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例4。結(jié)果表明，本實(shí)施例的藥物注射劑對(duì)大鼠中動(dòng)脈栓塞模 型的預(yù)防和治療效果與實(shí)施例1、2和3的藥物的效果相同。
[0093] 實(shí)施例7 :預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥物片劑的制備
[0094] -、燈盞細(xì)辛、人參和麥冬混合提取物的制備
[0095] 將300g燈盞細(xì)辛全草與60g紅參飲片與150g麥冬飲片混合，加入4000ml，體積百 分含量為60%的乙醇進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為90min，收集提取液，然后再向殘?jiān)屑尤?3500ml體積百分含量為60%的乙醇進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間為90min ;再重復(fù)上述提取過(guò) 程一次。將三次的提取液混合，冷卻至室溫，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮（60°C，真空度O.OSMpa) 至無(wú)醇味，得到127g提取物浸膏；取127g提取物浸膏加入600ml水進(jìn)行稀釋，得到640ml 混合提取液。
[0096] 采用預(yù)處理好的弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱（在樹(shù)脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙 烯苯為骨架的型號(hào)為HPD100的樹(shù)脂填料，購(gòu)自河北滄州寶恩化工有限公司），對(duì)上述獲得 的640ml混合提取液進(jìn)行分離純化，填料后柱床體積為790ml?；旌咸崛∫航?jīng)色譜柱吸附 后，用7倍于樹(shù)脂柱床體積的水以2bv/h (lbv/h即每小時(shí)按1倍柱床體積的流量）的流速?zèng)_ 洗樹(shù)脂柱，除去水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液；再用3倍于樹(shù)脂柱床體積的體積百分含量為50% 的乙醇以2bv/h的流速洗脫樹(shù)脂柱一次，用3倍于樹(shù)脂柱床體積的體積百分含量為80 %的 乙醇以2bv/h的流速洗脫樹(shù)脂柱一次，收集兩次的洗脫液并將其合并，得到含有燈盞細(xì)辛 總多酚、人參總皂苷、麥冬總皂苷和麥冬總黃酮的混合洗脫液；將燈盞細(xì)辛總多酚、人參總 皂苷、麥冬總皂苷和麥冬總黃酮的混合洗脫液進(jìn)行干燥，得到22g燈盞細(xì)辛、紅參和麥冬的 混合提取物粉末。
[0097] 二、預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥物片劑的制備
[0098] 稱取22g上述步驟一制備的燈盞細(xì)辛、紅參和麥冬的混合提取物粉末，加入22g淀 粉（加入淀粉的重量和混合提取物粉末的重量相等）和Ilg乳糖（加入乳糖的重量是混合 提取物粉末重量的一半），混合均勻，制成粒度為16目的顆粒，經(jīng)干燥，壓片，得到預(yù)防和治 療缺血性腦中風(fēng)的藥物片劑。
[0099] 三、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0100] 具體實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例4。結(jié)果表明，本實(shí)施例的藥物片劑對(duì)大鼠缺血性腦中風(fēng)的 預(yù)防和治療效果與實(shí)施例1、2和3的藥物的效果相同。
[0101] 實(shí)施例8 :預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥物湯劑的制備及其藥效實(shí)驗(yàn)
[0102] -、預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥物湯劑的制備
[0103] 取人參花與燈盞細(xì)辛全草和麥冬按照I : 2 : 1的重量比混合，在得到的IOOg混 合物中加入800ml水煎煮1小時(shí)，過(guò)濾，分別取煎煮液和濾渣，在濾渣中再加入600ml水煎 煮1小時(shí)，將兩次的煎煮液合并，過(guò)濾、濃縮，得到IIOOml濾液，該濾液即為預(yù)防和治療缺血 性腦中風(fēng)的藥物湯劑。該湯劑中，人參總皂苷的含量為3. 4mg/ml，人參皂苷Rgl的含量為 0. 18mg/ml，人參皂苷Re在人參總皂苷中的含量為0. 23mg/ml，人參皂苷Rbl在人參總皂苷 中的含量為〇. 14mg/ml ;燈盞細(xì)辛總酚酸的含量為I. lmg/ml (測(cè)定方法同實(shí)施例1)。
[0104] 二、預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥物湯劑的藥效實(shí)驗(yàn)
[0105] 按照上述實(shí)施例4的方法構(gòu)建大腦中動(dòng)脈栓塞大鼠模型，并分為模型組和給藥 組，給藥組大鼠按照5. Oml/kg體重的劑量灌胃給予上述步驟一制備的預(yù)防和治療缺血性 腦中風(fēng)的藥物湯劑，模型組給予相同劑量的生理鹽水，考察該藥物對(duì)大鼠中動(dòng)脈栓塞大鼠 腦梗死面積的影響（X土s，η = 9)。結(jié)果如表1所示。
[0106] 表1預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)的藥物湯劑對(duì)大鼠中動(dòng)脈栓塞大鼠腦梗死面積的 影響
[0107]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物，其特征在于：所述藥物由燈盞細(xì) 辛、人參和/或紅參、麥冬組成，所述燈盞細(xì)辛、人參和/或紅參、麥冬的重量分?jǐn)?shù)比為 1 : (0.08-10) : (0.08-10)。
2. 如權(quán)利要求1所述的用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物，其特征在于：所述藥物 由燈盞細(xì)辛提取物、人參和/或紅參提取物、麥冬提取物組成，所述燈盞細(xì)辛提取物、人參 和/或紅參提取物、麥冬提取物的重量分?jǐn)?shù)比為1 : (0.05-20) : (0.05-20)。
3. 如權(quán)利要求2所述的用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物，其特征在于：所述燈盞 細(xì)辛提取物為燈盞細(xì)辛總多酚，所述燈盞細(xì)辛總多酚的質(zhì)量百分含量大于50%。
4. 如權(quán)利要求3所述的用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物，其特征在于：所述燈盞 細(xì)辛總多酚包括燈盞乙素、燈盞甲素、綠原酸、1，3-0-雙咖啡?；鼘幩帷?，5-0-雙咖啡酰 基奎寧酸、4, 5-0-雙咖啡?；鼘幩帷?, 5-0-雙咖啡?；鼘幩岷惋w蓬酯乙； 所述燈盞乙素在燈盞細(xì)辛總多酚提取物中的質(zhì)量百分含量大于等于5%，所述綠原酸 在燈盞細(xì)辛總多酚提取物中的質(zhì)量百分含量大于等于〇. 8%，所述4, 5-0-雙咖啡酰基奎寧 酸在燈盞細(xì)辛總多酚提取物中的質(zhì)量百分含量大于等于1. 5%。
5. 如權(quán)利要求2所述的用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物，其特征在于：所述人參 和/或紅參提取物為人參總皂苷，所述人參總皂苷的質(zhì)量百分含量大于50%。
6. 如權(quán)利要求5所述的用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物，其特征在于：所述人參 總皂苷包括人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl和人參皂苷Rf，所述人參皂苷Rgl在 人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量大于等于2%，人參皂苷Re在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量 大于等于2. 5%，人參皂苷Rbl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量大于等于2%。
7. 如權(quán)利要求2所述的用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物，其特征在于：所述麥冬 提取物為麥冬總黃烷酮、麥冬總皂苷，麥冬總黃酮的質(zhì)量百分含量大于30%，麥冬總皂苷的 質(zhì)量百分含量大于20%。
8. 制備如權(quán)利要求2所述的用于缺血性腦中風(fēng)預(yù)防和治療的藥物的方法，其特征在 于，包括如下步驟： 1) 對(duì)燈盞細(xì)辛、人參和/或紅參、麥冬進(jìn)行浸泡，然后用乙醇水溶液或水對(duì)至少一種 成份進(jìn)行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到含有至少一種成份的總提取液， 其中，浸泡時(shí)間為0_90min，回流時(shí)間為30-150min，回流次數(shù)為1-3次，乙醇水溶液中乙 醇的體積百分含量為50-95%，燈盞細(xì)辛和乙醇水溶液的重量份數(shù)比為1 : (6-15)，人參 和/或紅參和乙醇水溶液的重量份數(shù)比為1 : (6-15)，麥冬和乙醇水溶液的重量份數(shù)比為 1 ： (6-15) 2) 采用大孔吸附樹(shù)脂柱對(duì)上述步驟1)獲得的總提取液進(jìn)行吸附，先用水洗脫水溶性 雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫大孔吸附樹(shù)脂柱，收集洗脫液，得到含有燈盞細(xì)辛總多酚、 人參總皂苷、麥冬總皂苷、麥冬黃烷酮中至少一種的洗脫液；其中，洗脫水溶性雜質(zhì)時(shí)，乙醇 水溶液中乙醇的體積百分含量小于10% ;洗脫大孔吸附樹(shù)脂柱時(shí)，乙醇水溶液中乙醇的體 積百分含量為30-90% ; 3) 對(duì)上述步驟2)獲得的洗脫液50-60°C進(jìn)行干燥，得到燈盞細(xì)辛提取物、人參和/或 紅參總提取物、麥冬提取物中的至少一種； 4) 重復(fù)以上1)至3)的步驟，直到得到所有總提取物； 5)根據(jù)需要將上述三種粉末狀總提取物按照重量分?jǐn)?shù)比1 : (0.05-20) : (0.05-20) 混合，制得所需要的藥物。
9. 如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)洗脫大孔吸附樹(shù)脂柱時(shí)，乙 醇水溶液中乙醇的體積百分含量為40-85 %。
10. 如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)大孔吸附樹(shù)脂柱中的樹(shù) 脂填料為下述五種樹(shù)脂中的任意一種：HPD600型樹(shù)脂、HPD300型樹(shù)脂、HPD100型樹(shù)脂、D101 型樹(shù)脂及AB-8型樹(shù)脂。
【文檔編號(hào)】A61P9/10GK104435658SQ201410314535
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年7月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月3日
【發(fā)明者】羅國(guó)安, 王義明 申請(qǐng)人:羅國(guó)安