一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：(1)向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液，隔日注射一次，共注射2～4次使豚鼠致敏；(2)在步驟(1)末次致敏后第12～15天，使豚鼠經(jīng)由口鼻吸入霧化的卵白蛋白生理鹽水溶液，從而激發(fā)氣道過敏性哮喘，即得。與現(xiàn)有方法比，本發(fā)明所述制備方法模擬霧化吸入給藥，模擬鼻腔給藥的吸入制劑，靶器官唯一，針對性強(qiáng)，而普通豚鼠靜脈注射激發(fā)過敏試驗(yàn)無法預(yù)測呼吸道吸入藥物是否引起過敏。實(shí)驗(yàn)證明該制備方法致敏效果良好，以僅經(jīng)口鼻吸入霧化的OVA生理鹽水溶液為途徑進(jìn)行致敏激發(fā)，成功地建立了豚鼠氣道過敏性哮喘模型。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的制備方法。 一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的制備方法

【背景技術(shù)】
[0002] 目前，隨著對肺疾病和呼吸功能的了解愈發(fā)深入，鼻腔給藥的應(yīng)用范圍逐漸擴(kuò)大， 各類吸入制劑作為行之有效的治療手段也越來越受重視。定量吸入氣霧劑因具有靶向和局 部給藥的特點(diǎn)，已成為哮喘和慢性阻塞性肺病最有效的維持治療方式。而哮喘本身對呼吸 道過敏及其敏感，判斷吸入藥物是否對患者具有過敏性非常重要。
[0003] 通常采用低劑量卵白蛋白（0VA)構(gòu)建豚鼠過敏性哮喘模型，致敏階段：哮喘模型 組在腹腔注射3mg/mL卵白蛋白生理鹽水加氫氧化鋁（粉劑）作為免疫佐劑致敏，分3次反 復(fù)致敏；末次致敏后14天通過靜脈注射卵白蛋白，激發(fā)后即刻起至少觀察30分鐘，觀察豚 鼠過敏征狀。該方法可出現(xiàn)過敏反應(yīng)征狀，但無法模擬鼻部吸入給藥時(shí)，靶器官為呼吸道的 過敏性哮喘，具有局限性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對目前缺乏豚鼠氣道過敏性哮喘模型這一臨床上常見疾病的疾病動(dòng)物 模型的現(xiàn)狀，提供用于一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的制備方法。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案之一為：一種豚鼠氣道過敏性哮喘 模型的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：
[0006] (1)向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液，隔日注射一次，共注射2?4次使豚 鼠致敏；
[0007] (2)在步驟⑴末次致敏后第12?15天，使豚鼠經(jīng)由口鼻吸入霧化的卵白蛋白生 理鹽水溶液，從而激發(fā)氣道過敏性哮喘，即得。
[0008] 其中步驟（1)所述的注射為本領(lǐng)域常規(guī)的注射方法，較佳地為腹腔注射。其中所 述卵白蛋白生理鹽水溶液的濃度較佳地為2?5mg/ml，優(yōu)選地為3mg/ml。
[0009] 其中步驟（1)所述的卵白蛋白生理鹽水溶液的注射的劑量較佳地為2?5ml/kg， 優(yōu)選地為3ml/kg。
[0010] 其中步驟（1)所述向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液，隔日注射一次的方法 較佳地為：在豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液的第一天，第三天和第五天，共注射三次 卵白蛋白生理鹽水溶液。
[0011] 其中步驟⑵所述的霧化的卵白蛋白生理鹽水溶液濃度較佳地為4?7mg/ml，優(yōu) 選地為5mg/ml。
[0012] 其中步驟（2)所述的霧化的卵白蛋白生理鹽水溶液的流速較佳地為2. 0?3. 0升 /分，優(yōu)選地為2. 5升/分。
[0013] 其中步驟⑵所述使豚鼠經(jīng)由口鼻吸入霧化的卵白蛋白生理鹽水溶液的方法為 本領(lǐng)域常規(guī)方法，較佳地是利用ΙΝ-Τ0Χ小動(dòng)物鼻式暴露系統(tǒng)使豚鼠經(jīng)由口鼻吸入霧化的 卵白蛋白生理鹽水溶液。
[0014] 其中步驟（2)所述的豚鼠經(jīng)由口鼻吸入霧化的卵白蛋白生理鹽水溶液的時(shí)間較 佳地為15?25分鐘，優(yōu)選地為20分鐘。
[0015] 在符合本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)
[0016] 明各較佳實(shí)例。
[0017] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0018] 本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：與現(xiàn)有方法比，本方法模擬霧化吸入給藥，模擬鼻腔 給藥的吸入制劑，靶器官唯一，針對性強(qiáng)，選擇性強(qiáng)、重復(fù)性好。而且普通豚鼠靜脈注射激發(fā) 過敏試驗(yàn)無法預(yù)測呼吸道吸入藥物是否引起過敏。實(shí)驗(yàn)證明致敏效果良好，以僅經(jīng)鼻霧化 吸入0VA為途徑進(jìn)行致敏激發(fā)，成功地誘發(fā)了氣道過敏性哮喘，成功建立了豚鼠氣道過敏 性哮喘模型。

【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí) 施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商 品說明書選擇。
[0020] 實(shí)施例1制備豚鼠氣道過敏性哮喘模型
[0021] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：采用豚鼠12只，雌雄各半。Hartley-Dunkin，SPF級，體重300?360g, 購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。
[0022] 實(shí)驗(yàn)用卵白蛋白（0VA)購買自SIGMA公司。
[0023] 飼養(yǎng)環(huán)境為：溫度：20?26°C;濕度：40%?70%;換氣次數(shù)：每小時(shí)換氣次數(shù)不小 于15次，使用100%的全新風(fēng)（無空氣循環(huán)）。光照：自動(dòng)光照，每12小時(shí)明暗交替，7:00ΡΜ 關(guān)燈，次日7:00AM開燈。
[0024] 豚鼠氣道過敏性哮喘模型制備方法主要分為致敏期和激發(fā)期兩個(gè)階段。
[0025] 致敏期為：豚鼠腹腔注射3mg/ml 0VA生理鹽水溶液3ml/kg致敏，隔日注射1次， 給藥時(shí)間為Dl、D3和D5天，共給藥3次。
[0026] 激發(fā)期為：上述末次致敏后第14天（D19)，單次霧化給藥激發(fā)：將豚鼠置入 ΙΝ-Τ0Χ小動(dòng)物鼻式暴露系統(tǒng)的動(dòng)物試管，將動(dòng)物試管插入暴露艙內(nèi)。吸入霧化的0VA生理 鹽水溶液（0VA生理鹽水溶液的濃度為5mg/ml)進(jìn)行攻擊，吸入霧化的0VA生理鹽水溶液的 時(shí)間為20min。
[0027] 激發(fā)途徑為吸入霧化的OVA生理鹽水溶液。設(shè)定霧化生理鹽水溶液的流速：按照 豚鼠的最小呼吸量，一次暴露6只動(dòng)物，設(shè)定流速為2. 5升/分。運(yùn)用ΙΝ-Τ0Χ鼻式暴露系統(tǒng)， 動(dòng)物在暴露試管內(nèi)，僅有口鼻接觸藥物，能最大程度上模擬臨床上吸入藥物的給藥途徑。將 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為兩組，其中組1為陰性對照組，組2為0VA激發(fā)組。
[0028] 所得結(jié)果為：致敏期各組豚鼠均無異常表現(xiàn)。激發(fā)期：激發(fā)后立即觀察動(dòng)物表現(xiàn)， 觀察有無出現(xiàn)顫抖、堅(jiān)毛、呼吸困難、步態(tài)不穩(wěn)、痙攣、休克以及死亡等反應(yīng)征狀，按表1的 標(biāo)準(zhǔn)對過敏反應(yīng)的強(qiáng)度進(jìn)行判斷。致敏期間每日2次進(jìn)行動(dòng)物的一般觀察，上、下午各1次 (致敏給藥當(dāng)天給藥前、后各1次）；激發(fā)后即刻起至少觀察30分鐘，觀察以下征狀，征狀 0-20為：0、正常；1、躁動(dòng)；2、堅(jiān)毛；3、顫抖；4、搔鼻；5、噴嚏；6、咳嗽；7、呼吸急促；8、排尿； 9、排糞；10、流淚；11、呼吸困難；12、哮鳴音；13、紫癜；14、步態(tài)不穩(wěn)；15、跳躍；16、喘息； 17、痙攣；18、橫轉(zhuǎn)；19、潮式呼吸；20、死亡。若出現(xiàn)以上癥狀，記錄出現(xiàn)及消失時(shí)間，觀察最 長不超過3小時(shí)。根據(jù)表1判斷過敏反應(yīng)發(fā)生程度。
[0029] 表1豚鼠全身致敏性標(biāo)準(zhǔn)
[0030]

【權(quán)利要求】
1. 一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步 驟： (1) 向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液，隔日注射一次，共注射2?4次使豚鼠致 敏； (2) 在步驟（1)末次致敏后第12?15天，使豚鼠經(jīng)由口鼻吸入霧化的卵白蛋白生理鹽 水溶液，從而激發(fā)氣道過敏性哮喘，即得。
2. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述卵白蛋白生理鹽水溶液的 濃度為2?5mg/ml。
3. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述卵白蛋白生理鹽水溶液的 濃度為3mg/ml。
4. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述卵白蛋白生理鹽水溶液的 注射的劑量為2?5ml/kg。
5. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述卵白蛋白生理鹽水溶液的 注射的劑量為3ml/kg。
6. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述的霧化的卵白蛋白生理鹽 水溶液的濃度為4?7mg/ml。
7. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述的霧化的卵白蛋白生理鹽 水溶液的流速為2. 0?3. 0升/分。
8. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述的使豚鼠經(jīng)由口鼻吸入霧 化的卵白蛋白生理鹽水溶液的方法是利用IN-TOX小動(dòng)物鼻式暴露系統(tǒng)給予豚鼠霧化的卵 白蛋白生理鹽水溶液。
9. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述的豚鼠經(jīng)由口鼻吸入霧化 的卵白蛋白生理鹽水溶液的時(shí)間為15?25分鐘。
10. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述的豚鼠經(jīng)由口鼻吸入霧 化的卵白蛋白生理鹽水溶液的時(shí)間為20分鐘。
【文檔編號】A61K38/38GK104096220SQ201410328516
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月10日
【發(fā)明者】馬璟, 李華, 胡天羽, 史民華, 劉毅, 黃歡夏, 南雅萍 申請人:上海益諾思生物技術(shù)有限公司