天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法及天然復(fù)合氨基酸原料的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，包括如下步驟：a.取凍存新鮮豬腦，解凍，清洗，勻漿，將漿液加入濃鹽酸攪勻、然后離心分離，得沉淀腦蛋白；b.將沉淀蛋白加入硫酸進(jìn)行水解，調(diào)pH值為7.5-8.5，過濾，得酸水解液；c.將酸水解液加熱，加活性炭，分離，收集上清液，調(diào)pH值為2.5-4.5，得粗提液；d.將粗提液上陽離子交換柱，調(diào)pH值為6.5-7.5，用氨水洗脫，收集洗脫液，濃縮去氨水，調(diào)pH值為6.5-7.5，﹣20℃保存，得冷凍液；e.將冷凍液自然解凍，離心分離，去除酪氨酸及相關(guān)雜質(zhì)，收集上清液，將上清液超濾，收集過濾液，干燥，即得所需天然復(fù)合氨基酸原料。
【專利說明】天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法及天然復(fù)合氨基酸原料

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，還涉及一種天然復(fù)合氨基酸原料。

【背景技術(shù)】
[0002]氨基酸(Amino acid)是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位,賦予蛋白質(zhì)特定的分子結(jié)構(gòu)形態(tài)，使他的分子具有生化活性。蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)重要的活性分子，包括催化新陳代謝的酵素和酶。氨基酸是構(gòu)成生物體蛋白質(zhì)并同生命活動(dòng)有關(guān)的最基本的物質(zhì)，是在生物體內(nèi)構(gòu)成蛋白質(zhì)分子的基本單位，與生物的生命活動(dòng)有著密切的關(guān)系。它在抗體內(nèi)具有特殊的生理功能，是生物體內(nèi)不可缺少的營養(yǎng)成分之一。
[0003]氨基酸大致可以分為三類:
1、必需氨基酸:指人體或其它脊椎動(dòng)物不能合成或合成速度遠(yuǎn)不適應(yīng)機(jī)體的需要，必需由食物蛋白供給，這些氨基酸稱為必需氨基酸。成人必需氨基酸的需要量約為蛋白質(zhì)需要量的20-37%。共有8種，分別是:賴氨酸，促進(jìn)大腦發(fā)育，是肝及膽的組成成分，能促進(jìn)脂肪代謝，調(diào)節(jié)松果腺、乳腺、黃體及卵巢，防止細(xì)胞退化；色氨酸:促進(jìn)胃液及胰液的產(chǎn)生；苯丙氨酸:參與消除腎及膀胱功能的損耗；蛋氨酸(甲硫氨酸):參與組成血紅蛋白、組織與血清，有促進(jìn)脾臟、胰臟及淋巴的功能；蘇氨酸:有轉(zhuǎn)變某些氨基酸達(dá)到平衡的功能；異亮氨酸:參與胸腺、脾臟及腦下腺的調(diào)節(jié)以及代謝；腦下腺屬總司令部作用于甲狀腺、性腺；亮氨酸:作用平衡異亮氨酸；纈氨酸:作用于黃體、乳腺及卵巢。
[0004]2、半必需氨基酸和條件必需氨基酸:精氨酸:精氨酸與脫氧膽酸制成的復(fù)合制劑(明諾芬)是主治梅毒、病毒性黃疸等病的有效藥物；組氨酸:可作為生化試劑和藥劑，還可用于治療心臟病，貧血，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等的藥物。人體雖能夠合成精氨酸和組氨酸，但通常不能滿足正常的需要，因此，又被稱為半必需氨基酸或條件必需氨基酸，在幼兒生長期這兩種是必需氨基酸。人體對必需氨基酸的需要量隨著年齡的增加而下降，成人比嬰兒顯著下降。
[0005]3、非必需氨基酸:指人或其它脊椎動(dòng)物自己能由簡單的前體合成，不需要從食物中獲得的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。
[0006]如果人體缺乏任何一種必需氨基酸，就可導(dǎo)致生理功能異常，影響機(jī)體代謝的正常進(jìn)行，最后導(dǎo)致疾病。同樣，如果人體內(nèi)缺乏某些非必需氨基酸，會產(chǎn)生機(jī)體代謝障礙。精氨酸和瓜氨酸對形成尿素十分重要；胱氨酸攝入不足就會引起胰島素減少，血糖升高。又如創(chuàng)傷后胱氨酸和精氨酸的需要量大增，如缺乏，即使熱能充足仍不能順利合成蛋白質(zhì)?？傊?，氨基酸在人體內(nèi)通過代謝可以發(fā)揮下列一些作用:①合成組織蛋白質(zhì)變成酸、激素、抗體、肌酸等含氨物質(zhì)；③轉(zhuǎn)變?yōu)樘妓衔锖椭荆虎苎趸啥趸己退澳蛩?，產(chǎn)生能量。因此，氨基酸在人體中的存在，不僅提供了合成蛋白質(zhì)的重要原料，而且對于促進(jìn)生長，進(jìn)行正常代謝、維持生命提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。如果人體缺乏或減少其中某一種，人體的正常生命代謝就會受到障礙，甚至導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生或生命活動(dòng)終止。所以，人體需要不斷補(bǔ)充氨基酸，一些疾病需要依靠氨基酸治療。
[0007]現(xiàn)在人們常使用的氨基酸產(chǎn)品是人工合成的非天然的復(fù)方氨基酸輸液。這種復(fù)方氨基酸輸液具有促進(jìn)人體蛋白質(zhì)代謝正常，糾正負(fù)氮平衡，補(bǔ)充蛋白質(zhì)，加快傷口愈合的作用。氨基酸輸液在能量供給充足的情況下，可進(jìn)入組織細(xì)胞，參與蛋白質(zhì)的合成代謝，獲得正氮平衡，并生成酶類、激素、抗體、結(jié)構(gòu)蛋白，促進(jìn)組織愈合，恢復(fù)正常生理功能。但是現(xiàn)有復(fù)合氨基酸產(chǎn)品都有很大的副作用，如復(fù)方氨基酸注射液可致疹樣過敏反應(yīng)，一旦發(fā)生需要停止用藥；偶有惡心、嘔吐、胸悶、心悸、發(fā)冷、發(fā)熱或頭痛等。
[0008]人們?yōu)楝F(xiàn)有的非天然復(fù)合氨基酸產(chǎn)品的安全性擔(dān)憂。本領(lǐng)域技術(shù)人員渴望獲得一種使用安全的復(fù)合氨基酸產(chǎn)品，但一直沒有解決這個(gè)技術(shù)問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題就是提供一種天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，該天然復(fù)合氨基酸原料能夠用于制備使用安全的復(fù)合氨基酸產(chǎn)品。還提供一種天然復(fù)合氨基酸原料。
[0010]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法包括如下步驟:
a.取凍存新鮮豬腦，解凍，清洗，勻漿，將漿液加入濃鹽酸攪勻、然后離心分離，去除上層乳濁液，收集沉淀物，即得沉淀腦蛋白；
b.將經(jīng)上述步驟得到的沉淀蛋白加入硫酸進(jìn)行水解，過濾，得酸水解液；
c.將經(jīng)上述步驟得到的酸水解液加熱，加活性炭，分離，收集上清液，調(diào)PH值為
2.5-4.5，得粗提液；
d.將經(jīng)上述步驟得到的粗提液上陽離子交換柱，調(diào)pH值為6.5-7.5，用氨水洗脫，收集洗脫液，濃縮去氨水，調(diào)PH值為6.5-7.5，- 20°C保存，得冷凍液；
e.將經(jīng)上述步驟所得冷凍液自然解凍，離心分離，去除酪氨酸及相關(guān)雜質(zhì)，收集上清液，將上清液超濾，收集過濾液，干燥，即得所需天然復(fù)合氨基酸原料。
[0011]作為進(jìn)一步改進(jìn)，所述a步驟，取凍存新鮮豬腦，加水浸泡自然解凍，再用水清洗，然后加入豬腦重2-4倍重量的純化水用膠體磨勻漿15min，將勻漿所得漿液倒入提取罐中加熱至70-100°C后保溫10-30min，再按豬腦重每Ikg加入2_5 ml的比例加入濃度為12mol/L的濃鹽酸攪勻、冷卻至10-50°C，再以3000_4000r/min的速度離心分離，然后去除上層乳濁液，收集沉淀物，即得沉淀腦蛋白。
[0012]作為進(jìn)一步改進(jìn),所述b步驟,將經(jīng)a步驟所得沉淀蛋白按每Ikg加入750_1500ml的比例加入濃度為18.4mol/L的硫酸，制成濃度為6_12mol/L的硫酸溶液，加熱至110-121 °C，水解6-9h，再以重量比5-10倍的水稀釋，用氫氧化鈣溶液調(diào)pH值為7.5-8.5，然后用200-300目濾布過濾，去除硫酸鈣沉淀物，得酸水解液。
[0013]作為進(jìn)一步改進(jìn)，所述c步驟，將經(jīng)b步驟所得酸水解液加熱至75_80°C，再加入酸水解液重量0.5-1%的活性炭，加熱至80-90°C，保溫15min，趁熱以3000_4000r/min的速度離心分離5min，收集上清液，用草酸溶液調(diào)pH值為2.5-4.5，靜置l_3h，取上清液，沉淀物再以3000-4000r/min的速度離心分離5min,去除草酸?丐沉淀物,合并上清液得粗提液。
[0014]作為進(jìn)一步改進(jìn)，所述d步驟，將經(jīng)c步驟所得粗提液過陽離子交換柱，然后用純化水沖洗至pH值為6.5-7.5，去除剩余草酸及鈣離子，再用1.8-2mol/L的氨水洗脫，收集洗脫液，調(diào)PH值為8-12，再以每公斤豬腦加入l-3g的比例加入氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，濃縮至豬腦重1/5-1/3的量，然后用6mol/L的鹽酸調(diào)ph至6.6-7.5，以-20°C保存24h，得冷凍液。
[0015]作為進(jìn)一步改進(jìn)，所述e步驟，將d步驟所得冷凍液自然解凍，然后以3000-40001./min的速度離心分離，去除酪氨酸及相關(guān)雜質(zhì)，收集上清液，將上清液用10000道爾頓分子量濾膜進(jìn)行超濾，收集過濾液，再以-60°C真空干燥箱或噴霧干燥即得天然復(fù)合氨基酸原料。
[0016]所述天然復(fù)合氨基酸原料由豬腦組織提取而得。
[0017]按照本發(fā)明的方法制備的天然復(fù)合氨基酸原料，經(jīng)定溶，按原液標(biāo)準(zhǔn)檢定含量后調(diào)配的原液，經(jīng)檢定:性狀:為淺黃色至棕黃色液體；鑒別:供試品溶液色譜圖與對照品溶液色譜圖基本一致；pH值為6.5-7.5。其由豬腦組織提取而得，含有門冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸等15種氨基酸。經(jīng)臨床試驗(yàn)，本發(fā)明的天然復(fù)合氨基酸原料制備的產(chǎn)品，克服了現(xiàn)有非天然的復(fù)方氨基酸產(chǎn)品的缺陷，完全沒有現(xiàn)有非天然的復(fù)方氨基酸輸液的副作用，也沒有其他不良反應(yīng)，使用安全可靠，能夠用于制備使用安全的復(fù)合氨基酸產(chǎn)品以替代現(xiàn)有的非天然的復(fù)方氨基酸產(chǎn)品，以滿足市場需求。
[0018]本發(fā)明的天然復(fù)合氨基酸原料可以用于制備使用安全的各種復(fù)合氨基酸產(chǎn)品，如醫(yī)用的大輸液、注射液、凍干粉針及口服制劑等；還可用于制備大眾健康食品及保健品，作為添加劑用等，具有廣闊的市場前景。
[0019]本發(fā)明的方法能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明的目的，能夠制備出天然復(fù)合氨基酸原料以用于生產(chǎn)使用安全的各種復(fù)合氨基酸產(chǎn)品。
[0020]本發(fā)明的方法，鹽酸和氫氧化鈉使用量至鈉鹽存在原液中的含量少，經(jīng)硫酸水解后用氫氧化鈣和草酸中和硫酸形成硫酸鈣和草酸鈣沉淀及去除部分雜質(zhì)，再經(jīng)層析能徹底去除硫酸鈣和草酸鈣，制得15種純天然酸水解的復(fù)合氨基酸原料，詳見附圖。本發(fā)明的方法簡單可靠、成本低，能夠一次性處理大量動(dòng)物腦組織如豬腦，純化時(shí)上樣量大，可以進(jìn)行天然復(fù)合氨基酸原料規(guī)模化生產(chǎn)，滿足市場需要。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1是本發(fā)明方法所得的15種純天然復(fù)合氨基酸的HPLC檢測圖。

【具體實(shí)施方式】
[0022]下面詳細(xì)說明本發(fā)明方法的實(shí)施方式，但不僅限于以下實(shí)施例。
[0023]實(shí)施例一
本發(fā)明的該天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法包括如下步驟:
a.取凍存新鮮豬腦50kg，加水浸泡自然解凍，再用水清洗，然后加入10kg純化水用膠體磨勻漿15min，將勻漿所得漿液倒入提取罐中加熱至80°C后保溫15min，再加入250 ml濃度為12mol/L的濃鹽酸攪勻、冷卻至40°C，再以3800r/min的速度離心分離，然后去除上層乳濁液，收集沉淀物，即得沉淀腦蛋白2.3kg ； b.將經(jīng)a步驟所得沉淀蛋白加入3000ml濃度為18.4mol/L的硫酸進(jìn)行水解,制成濃度為12mol/L的硫酸溶液，加熱至121°C，水解8h，再以重量比10倍的水稀釋，用氫氧化鈣溶液調(diào)pH值為7.5 (所用氫氧化鈣溶液用2800g氫氧化鈣加5000ml純化水溶解而得),然后用300目濾布過濾，去除硫酸鈣沉淀物，得酸水解液；
c.脫色，即將經(jīng)b步驟所得酸水解液加熱至75°C，再加入酸水解液重量1%的活性炭，加熱至80°C，保溫15min，趁熱以3800r/min的速度離心分離5min，收集上清液，用草酸溶液調(diào)pH值為3.5 (所用草酸溶液用750g草酸加2000ml純化水加熱溶解而得),靜置3h，取上清液，沉淀物再以3800r/min的速度離心分離5min，去除草酸鈣沉淀物，合并上清液得粗提液；
d.將經(jīng)c步驟所得粗提液過陽離子交換柱，然后用純化水沖洗至pH值為6.5，去除剩余草酸及鈣離子，再用1.8mol/L的氨水洗脫,收集洗脫液,調(diào)PH值為12，再加入150g氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，濃縮至30g的量，然后用6mol/L的鹽酸調(diào)ph至7.2，以-20°C保存24h，得冷凍液；
e.將d步驟所得冷凍液自然解凍，然后以3800r/min的速度離心分離，去除酪氨酸及相關(guān)雜質(zhì)，收集上清液，將上清液用10000道爾頓分子量濾膜進(jìn)行超濾，收集過濾液，再噴霧干燥即得天然復(fù)合氨基酸原料。
[0024]所得天然復(fù)合氨基酸原料包含如下重量份的氨基酸:門冬氨酸4.87，絲氨酸
2.08，谷氨酸5.92，甘氨酸2.55，組氨酸0.94，精氨酸1.77，蘇氨酸1.58，丙氨酸2.81，脯氨酸2.42，纈氨酸1.77，甲硫氨酸0.91，賴氨酸3.81，異亮氨酸1.20，亮氨酸3.08,苯丙氨酸
1.24。15種氨基酸總量36.95。經(jīng)定溶，按原液標(biāo)準(zhǔn)檢定含量后調(diào)配的原液，經(jīng)檢定:性狀:為淺黃色至棕黃色液體；鑒別:供試品溶液色譜圖與對照品溶液色譜圖基本一致；PH值為
7.5。
[0025]實(shí)施例二
a.取凍存新鮮豬腦50kg，加水浸泡自然解凍，再用水清洗，然后加入200kg純化水用膠體磨勻漿15min，將勻漿所得漿液倒入提取罐中加熱至70°C后保溫lOmin，再加入100 ml濃度為12mol/L的濃鹽酸攪勻、冷卻至10°C，再以3000r/min的速度離心分離，然后去除上層乳濁液，收集沉淀物，即得沉淀腦蛋白2.4kg ；
b.將經(jīng)a步驟所得沉淀蛋白加入2500ml濃度為18.4mol/L的硫酸進(jìn)行水解，制成濃度為6mol/L的硫酸溶液，加熱至110°C，水解6h，再以重量比5倍的水稀釋，用氫氧化鈣溶液調(diào)pH值為8 (所用氫氧化鈣溶液用2500g氫氧化鈣加5000ml純化水溶解而得),然后用200目濾布過濾，去除硫酸鈣沉淀物，得酸水解液；
c.脫色，即將經(jīng)b步驟所得酸水解液加熱至75°C，再加入酸水解液重量0.5%的活性炭，加熱至85°C,保溫15min,趁熱以3000r/min的速度離心分離5min,收集上清液,用草酸溶液調(diào)pH值為2.5 (所用草酸溶液用150g草酸加3000ml純化水加熱溶解而得),靜置lh，取上清液，沉淀物再以4000r/min的速度離心分離5min，去除草酸鈣沉淀物，合并上清液得粗提液；
d.將經(jīng)c步驟所得粗提液過陽離子交換柱，然后用純化水沖洗至pH值為7.5，去除剩余草酸及鈣離子，再用2mol/L的氨水洗脫，收集洗脫液，調(diào)PH值為8，再加入50g氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，濃縮至50g的量，然后用6mol/L的鹽酸調(diào)ph至6.6，以-20°C保存24h，得冷凍液；
e.將d步驟所得冷凍液自然解凍，然后以3000r/min的速度離心分離，去除酪氨酸及相關(guān)雜質(zhì)，收集上清液，將上清液用10000道爾頓分子量濾膜進(jìn)行超濾，收集過濾液，再以-60°C真空干燥箱干燥即得天然復(fù)合氨基酸原料。
[0026]上述例舉了 2個(gè)典型的實(shí)施例，但不限于這些實(shí)施例。 申請人:經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)得到本發(fā)明的方法，并按照該方法進(jìn)行了反復(fù)的試驗(yàn)，都能得到本發(fā)明的天然復(fù)合氨基酸原料。所得天然復(fù)合氨基酸原料由豬腦組織提取而得，含有15種氨基酸。經(jīng)檢定，性狀:為淺黃色至棕黃色液體；鑒別:供試品溶液色譜圖與對照品溶液色譜圖基本一致；pH值為6.5-7.5。
【權(quán)利要求】
1.一種天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于包括如下步驟: a.取凍存新鮮豬腦，解凍，清洗，勻漿，將漿液加入濃鹽酸攪勻、然后離心分離，去除上層乳濁液，收集沉淀物，即得沉淀腦蛋白； b.將經(jīng)上述步驟得到的沉淀蛋白加入濃硫酸進(jìn)行水解，過濾，得酸水解液； c.將經(jīng)上述步驟得到的酸水解液加熱，加活性炭，分離，收集上清液，調(diào)pH值為2.5-4.5，得粗提液； d.將經(jīng)上述步驟得到的粗提液上陽離子交換柱，調(diào)pH值為6.5-7.5，用氨水洗脫，收集洗脫液，濃縮去氨水，調(diào)PH值為6.5-7.5，- 20°C保存，得冷凍液； e.將經(jīng)上述步驟所得冷凍液自然解凍，離心分離，去除酪氨酸及相關(guān)雜質(zhì)，收集上清液，將上清液超濾，收集過濾液，干燥，即得所需天然復(fù)合氨基酸原料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于:所述a步驟，取凍存新鮮豬腦，加水浸泡自然解凍，再用水清洗，然后加入豬腦重2-4倍重量的純化水用膠體磨勻漿15min，將勻漿所得漿液倒入提取罐中加熱至70-100°C后保溫10_30min，再按豬腦重每Ikg加入2-5 ml的比例加入濃度為12mol/L的濃鹽酸攪勻、冷卻至10_50°C，再以3000-4000r/min的速度離心分離，然后去除上層乳濁液，收集沉淀物，即得沉淀腦蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于:所述b步驟，將經(jīng)a步驟所得沉淀蛋白按每Ikg加入750-1500ml的比例加入濃度為18.4mol/L的硫酸,制成濃度為6-12mol/L的硫酸溶液，加熱至110_121°C，水解6_9h，再以重量比5_10倍的水稀釋，用氫氧化韓溶液調(diào)pH值為7.5-8.5,然后用200-300目濾布過濾,去除硫酸韓沉淀物，得酸水解液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于:所述c步驟，將經(jīng)b步驟所得酸水解液加熱至75-80°C，再加入酸水解液重量0.5-1%的活性炭，加熱至80-90°C，保溫15min，趁熱以3000_4000r/min的速度離心分離5min，收集上清液，用草酸溶液調(diào)PH值為2.5-4.5，靜置l_3h，取上清液，沉淀物再以3000-4000r/min的速度離心分離5min，去除草酸鈣沉淀物，合并上清液得粗提液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于:所述d步驟，將經(jīng)c步驟所得粗提液過陽離子交換柱，然后用純化水沖洗至PH值為6.5-7.5，去除剩余草酸及鈣離子，再用1.8-2mol/L的氨水洗脫，收集洗脫液，調(diào)PH值為8_12，再以每公斤豬腦加入l-3g的比例加入氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，濃縮至豬腦重1/5-1/3的量，然后用6mol/L的鹽酸調(diào)Ph至6.6-7.5，以-20°C保存24h，得冷凍液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于:所述e步驟，將d步驟所得冷凍液自然解凍，然后以3000-4000r/min的速度離心分離，去除酪氨酸及相關(guān)雜質(zhì)，收集上清液，將上清液用10000道爾頓分子量濾膜進(jìn)行超濾，收集過濾液，再以-60°C真空干燥箱或噴霧干燥即得天然復(fù)合氨基酸原料。
7.一種天然復(fù)合氨基酸原料，其特征在于:所述天然復(fù)合氨基酸原料由豬腦組織提取而得。
【文檔編號】A61P3/02GK104127439SQ201410335822
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年7月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月16日
【發(fā)明者】彭長福, 釧助勝, 耿華靖 申請人:湖南利諾生物藥業(yè)有限公司