一種獸用環(huán)丙-林可霉素長效注射液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種獸用環(huán)丙-林克霉素長效注射液及其制備方法。它是環(huán)丙沙星與鹽酸林可霉素組成的復(fù)方制劑。該方法包括將處方中環(huán)丙沙星于適量注射用水中，加乳酸適量，攪拌使其充分溶解；再將聚乙烯吡咯烷酮（PVP40）加入丙二醇溶劑中，加熱溶解；將鹽酸林可霉素溶于注射用水中，再將鹽酸林可霉素水溶液緩慢加入環(huán)丙沙星溶液中，然后再加入含聚乙烯吡咯烷酮（PVP40）的丙二醇溶劑、吐溫80，攪拌混合均勻，過濾、充氮氣、蒸汽流滅菌，得到所述的獸用環(huán)丙-林可霉素長效注射液。本發(fā)明制備的環(huán)丙-林可霉素長效注射液穩(wěn)定性良好，質(zhì)量可控，治療效果優(yōu)于單方環(huán)丙沙星和鹽酸林可霉素，而且半衰期長，能夠減少給藥次數(shù)，降低藥物的不良反應(yīng)和動物的應(yīng)激反應(yīng)，提高畜禽呼吸系統(tǒng)疾病的治療效果和效率，在獸醫(yī)臨床上將具有廣泛的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種獸用環(huán)丙-林可霉素長效注射液及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明為獸藥制劑領(lǐng)域，更具體，本發(fā)明涉及一種獸用環(huán)丙-林可霉素長效注射液及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]近年來，隨著畜牧業(yè)的規(guī)?；l(fā)展，不同地區(qū)、國家之間頻繁的引種，各類疾病尤其是畜禽呼吸道疾病日漸增多，已經(jīng)成為畜禽業(yè)生產(chǎn)過程中的一大難題。引起畜禽慢性呼吸道病及細(xì)菌性呼吸道疾病的致病菌主要有支原體、副嗜血桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌、支氣管敗血性波氏桿菌、沙門氏菌、鏈球菌等。不同細(xì)菌血清型多、流行背景復(fù)雜，目前主要結(jié)合藥物來預(yù)防和控制類似疾病的流行，因此如何合理選擇抗菌藥是畜牧業(yè)生產(chǎn)中的重要問題，合理使用抗菌藥，不僅降低用藥成本，減少盲目性，更重要的是減少耐藥菌株的出現(xiàn)。
[0003]環(huán)丙沙星又稱環(huán)丙氟哌酸，屬于化學(xué)合成的氟喹諾酮類抗菌藥。該藥對革蘭氏陰性菌、支原體具有強(qiáng)大而穩(wěn)定的殺滅作用，對革蘭氏陽性菌、衣原體等致病菌也有良好的抗菌作用，適用于治療畜禽慢性呼吸道疾病、支原體病、大腸桿菌病、沙門氏菌病、巴氏桿菌病等。其口服和注射均吸收迅速，體內(nèi)分布廣，生物利用度高、在豬體內(nèi)消除半衰期為3?5h，毒性較低，在獸醫(yī)臨床中廣泛使用。
[0004]林可霉素的抗菌譜與大環(huán)內(nèi)酷類抗生素相似，對革蘭氏陽性菌有較強(qiáng)的抗菌能力，特別對厭氧菌、金黃色葡萄球菌、肺炎球菌有良好療效，在臨床上多用于治療鏈球菌、葡萄球菌、肺炎鏈球菌弓I起的呼吸道感染、膽道感染及敗血癥等。
[0005]臨床實驗發(fā)現(xiàn)，環(huán)丙沙星和鹽酸林可霉素可以通過不同途徑阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，達(dá)到快速抑菌殺菌作用。但由于二者普通制劑在動物體內(nèi)有效作用時間短，用藥量大，一般每天用藥兩次，增加了動物的痛苦，也增加了藥物制備成本。
[0006]針對上述問題，發(fā)明人經(jīng)過反復(fù)探索，研究開發(fā)一種環(huán)丙-林可霉素長效注射液及其制備方法，該長效注射液具有長效緩釋作用及大大降低藥物的毒副作用。
[0007]環(huán)丙沙星和鹽酸林可霉素所組成的長效注射液未見報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是提供一種獸用環(huán)丙-林可霉素長效注射液及其制備方法。達(dá)到長效緩釋作用及降低藥物毒副作用。
[0009]為了解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
一種獸用環(huán)丙-林可霉素長效注射液，主要有以下組分組成:
所述獸用環(huán)丙-林可霉素長效注射液每10mL含有:環(huán)丙沙星2.0?5.0g、林克霉素
2.0?5.0g、聚乙烯吡咯烷酮(PVP4Q)3.0?5.0g、乳酸2.0?4.0mL、丙二醇20?30mL、吐溫-800.5?2.0mL、注射用水加至100mL。
[0010]上述的一種獸用獸用環(huán)丙-林可霉素長效注射液，其特征在于，優(yōu)選組分是:以10mL藥液計算，組分為:
環(huán)丙沙星5.0g、林克霉素5.0g、聚乙烯吡咯烷酮(PVP4tl)4.0g、乳酸2.5mL、丙二醇20mL、吐溫-80 lmL、注射用水加至100mL。
[0011]上述的一種獸用獸用環(huán)丙-林可霉素長效注射液，其制備方法:
(1)稱取環(huán)丙沙星2.0?5.0g,加入適量的注射用水，然后加入乳酸2?4mL，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙鉃橹梗瑐溆茫?br> (2)稱取鹽酸林可霉素2.0?5.0g，加入適量的注射用水，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙鉃橹?，備?
(3)稱取聚乙烯吡咯烷酮(PVP4tl)3.0?5.0g，加入丙二醇20?30mL，60?70。。水浴加熱，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙?，放至室溫，備用?br> (4)依次將步驟(2)制備溶液加入步驟(I)制備的溶液中，攪拌均勻，再加入步驟(3)制備的溶劑、吐溫-80，補(bǔ)加注射用水至10mL ；
(5)經(jīng)過濾，充氮氣分裝，100流通蒸汽滅菌30分鐘，即為成品。
[0012]本發(fā)明具有下述技術(shù)特點
(I)采用高效抗生素環(huán)丙沙星和林可霉素組合注射用藥，具有協(xié)同增效作用，可迅速殺滅病原微生物，縮短治療時間，其組方合理，穩(wěn)定性好，且制備工藝簡單，效果優(yōu)于單方的環(huán)丙沙星和鹽酸林克霉素，本發(fā)明制劑未見報道。(2 )該注射劑消除半衰期較普通環(huán)丙沙星和鹽酸林可霉素長，具有緩釋和長效作用，減少臨床用藥次數(shù)，提高治療效果，減少藥物的毒副作用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1環(huán)丙-林可霉素長效注射液和普通環(huán)丙沙星對豬肌注后血漿中環(huán)丙沙星濃度-時間曲線。
[0014]圖2環(huán)丙-林可霉素長效注射液和普通林可霉素對豬肌注后血漿中林可霉素濃度-時間曲線。
具體實施方案
[0015]下面結(jié)合具體實施案例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，這些實施案例僅限于說明本發(fā)明，并不僅限于本發(fā)明。
[0016]實施例1
(1)稱取環(huán)丙沙星2.0g,加入30mL注射用水，然后加入乳酸2.0mL,充分?jǐn)嚢柚寥咳芙鉃橹?，備用?br> (2)稱取鹽酸林可霉素2.0g，加入5.0mL注射用水，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙鉃橹梗瑐溆茫?br> (3)稱取聚乙烯吡咯烷酮(PVP4tl)3.0g，加入丙二醇20mL，60-70°C水浴加熱，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙猓胖潦覝兀瑐溆茫?br> (4)依次將步驟(2)制備溶液加入步驟(I)制備的溶液中，攪拌均勻，再加入步驟(3)制備的溶劑、吐溫-800.8mL，補(bǔ)加注射用水至10mL ；
(5)經(jīng)過濾，充氮氣分裝，100流通蒸汽滅菌30分鐘，即為成品。
[0017]實施例2 (1)稱取環(huán)丙沙星2.5g，加入40mL注射用水，然后加入乳酸3mL，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙鉃橹?，備用?br> (2)稱取鹽酸林可霉素3.0g，加入15mL注射用水，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙鉃橹?，備用?br> (3)稱取聚乙烯吡咯烷酮(PVP4tl)5.0g，加入丙二醇30mL，60-70°C水浴加熱，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙?，放至室溫，備用?br> (4)依次將步驟(2)制備溶液加入步驟(I)制備的溶液中，攪拌均勻，再加入步驟(3)制備的溶劑、吐溫-801.5mL，補(bǔ)加注射用水至10mL ；
(5)經(jīng)過濾，充氮氣分裝，100流通蒸汽滅菌30分鐘，即為成品。
[0018]實施例3
(O稱取環(huán)丙沙星5.0g,加入50mL注射用水,然后加入乳酸2.5mL,充分?jǐn)嚢柚寥咳芙鉃橹?，備用?br> (2)稱取鹽酸林可霉素5.0g，加入1mL注射用水，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙鉃橹?，備用?br> (3)稱取聚乙烯吡咯烷酮(PVP4tl)4.0g，加入丙二醇20mL，60-70°C水浴加熱，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙?，放至室溫，備用?br> (4)依次將步驟(2)制備溶液加入步驟(I)制備的溶液中，攪拌均勻，再加入步驟(3)制備的溶劑、吐溫_801mL，補(bǔ)加注射用水至10mL ；
(5)經(jīng)過濾，充氮氣分裝，100流通蒸汽滅菌30分鐘，即為成品。
[0019]環(huán)丙-林可霉素長效注射液在豬體內(nèi)藥物動力學(xué)研究一、試驗材料
1.藥品
環(huán)丙-林可霉素長效注射液(主要成分環(huán)丙沙星、林可霉素):信陽農(nóng)林學(xué)院獸藥實驗室自制；環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品(含量99.5%，由中國獸藥監(jiān)察所提供，批號:H010105);鹽酸林可霉素(含量99.0%，由中國獸藥監(jiān)察所提供，批號:H0080306);環(huán)丙沙星注射液(含量10%，湖南長沙遠(yuǎn)達(dá)牧業(yè)科技有限公司，批號:(2012) 180312769);鹽酸林可霉素注射液(含量10%，湖南長沙遠(yuǎn)達(dá)牧業(yè)科技有限公司，批號:(2011) 180311365)。
[0020]2.試劑
甲酸、乙腈為色譜純，檸檬酸、三乙胺、氫氧化鈉、二氯甲烷、磷酸、磷酸氫二鉀等均為分析純，均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0021]3.儀器
AgilentllOO型高效液相色譜儀:美國Agilent公司；
4.試驗動物與飼料
試驗動物:健康杜長大仔豬18頭，體重32±2kg，購于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)精品種豬場。試驗開始前飼養(yǎng)一周，使其適應(yīng)環(huán)境。飼料:試驗期間按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食，飼料為不含抗菌藥物的全價飼料。
[0022]二、試驗方法 1.標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制
環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)儲備液:精密稱取環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品50.2mg置于500mL容量瓶中，加入適量0.lmol/L的氫氧化鈉溶液溶解并加三蒸水定容，配成濃度為lOOPg/mL的環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)貯備液。避光置于4°C冰箱中保存?zhèn)溆?有效期2個月)。
[0023]鹽酸林可霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備液:精密稱取鹽酸林可霉素原料藥20.2mg置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得到濃度為200 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，避光置于4°C冰箱中保存?zhèn)溆?有效期2個月)。
[0024]2.動物分組與給藥
將每頭豬稱重后，隨機(jī)分為三組，每組6頭，A組:單劑量頸部注射環(huán)丙沙星注射液，劑量為10mg/kgbw出組:單劑量頸部注射林可霉素注射液,劑量為10mg/kgbw ;(:組:單劑量頸部注射環(huán)丙-林可霉素注射液，劑量為10mg/kgbw。
[0025]3.樣品采集
將豬仰臥保定，從前腔靜脈采血，每頭豬給藥前采集空白血樣，給藥后于0、0.083、
0.25,0.5,0.75、l、2、3、4、6、8、12、16、24、48、60h時分別對每頭豬進(jìn)行采血，每次采血量約5 mL,采集完畢立即轉(zhuǎn)至加有抗凝劑的5mL離心管中，3000 r/min離心10 min,分離血衆(zhòng)，于-20°C保存，待測。
[0026]4.樣品的處理
環(huán)丙沙星的血漿樣品處理:從冰箱中取出血漿，自然解凍后搖勻，準(zhǔn)確吸取lmL，置于15mL具塞塑料離心管中，依次加入5mL乙腈和3mL冰醋酸，于漩渦混懸器上混勻30s，以5000r/min離心lOmin，吸取全部上清液置于另一 15mL具塞塑料離心管中，于40°C水浴氮氣吹干，殘渣用100 μ L流動相充分溶解，50μ?進(jìn)樣分析。
[0027]鹽酸林可霉素的血漿樣品處理:取新鮮或解凍血漿樣品lmL，加入乙睛2mL，渦旋Imin, 12000 r/min 離心 10 min,轉(zhuǎn)移上清液到 15mL離心管中，加入 100 μ L , 0.4mol/LNaOH溶液，潤旋混勻后加入5mL乙酸乙醋,于鏇潤混懸器上混勻5min, 12000 r/min離心10 min,轉(zhuǎn)移下層至離心管中，于50°C水浴氮氣吹干，用250μ?流動相溶解，漩渦10秒鐘，12000 r/min離心10 min,取50μ?進(jìn)樣分析。
[0028]5.色譜條件
環(huán)丙沙星色譜條件:色譜柱:Agilent TC-C18 (4.6X 150mm, 5Mm),保護(hù)柱(4.6mmX 12.5mm);流動相:乙腈-磷酸鹽緩沖液(pH3)( 12:88, v/v);紫外檢測波長:278nm ；流速:lmL/min ;進(jìn)樣量:50μ? ;柱溫:40°C。
[0029]鹽酸林可霉素色譜條件:色譜柱:Agilent SB-C18柱(250mmX4.6mm, 5Mm),保護(hù)柱(4.6_X 12.5mm);流動相:甲醇-乙腈_ΡΗ5.5硼砂緩沖液(ν:ν:ν=30:5:65);紫外檢測波長:204nm ;流速:1.0mL/min ;柱溫:40°C ;進(jìn)樣量:50μ?ο
[0030]6.標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的建立
將環(huán)丙沙星和林可霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制成一定濃度梯度的藥物溶液，取適量分別添加到7份ImL空白豬血漿中，充分混勻，得到含環(huán)丙沙星和林可霉素濃度為0.05,0.2,0.5、
1.0,2.0,5.0、l(^g/mL的血漿，按血漿樣品前處理方法進(jìn)行處理，進(jìn)樣分析，分別以測得的環(huán)丙沙星和林可霉素的峰面積(A)為橫坐標(biāo)，血漿中環(huán)丙沙星和林可霉素的濃度(C)為縱坐標(biāo)，繪制環(huán)丙沙星和林可霉素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并進(jìn)行擬合回歸方程，求出相關(guān)系數(shù)(r)。環(huán)丙沙星回歸方程為C=0.0015A+0.023，相關(guān)系數(shù)r為0.9995，林可霉素回歸方程為C=
0.84A-0.022，相關(guān)系數(shù) r 為 0.9992。
[0031]7準(zhǔn)確度和精密度考察
分別配制成高、中、低三個濃度的環(huán)丙沙星、林可霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液，取適量分別添加到空白豬血漿中，混合均勻，配成含環(huán)丙沙星濃度和林可霉素濃度分別為0.05、1和lOPg/mL的血漿樣品，按照上述血漿處理方法分別處理并進(jìn)行HPLC分析，每個濃度同一天內(nèi)制備5份樣品以考察日內(nèi)變異系數(shù)，連續(xù)重復(fù)測定5天以考察日間變異系數(shù)。所測的環(huán)丙沙星的絕對回收率為83.26-91.22%，日內(nèi)變異系數(shù)為1.81-5.22，日間變異系數(shù)為2.58-7.39。林可霉素的絕對回收率為75.39-84.71%，日內(nèi)變異系數(shù)為2.79-4.78，日間變異系數(shù)為
3.15-4.53。
[0032]8.數(shù)據(jù)處理與分析
準(zhǔn)確度和精密度等方法學(xué)數(shù)據(jù)和藥時曲線圖采用Excel軟件繪制，藥物動力學(xué)模型擬合及參數(shù)計算用3p97藥動學(xué)軟件分析，評價環(huán)丙-林可霉素長效注射液的體內(nèi)藥動學(xué)特征。
[0033]三、試驗結(jié)果
1.血漿中藥-時數(shù)據(jù)
環(huán)丙-林可霉素長效注射液和普通環(huán)丙沙星對豬肌注給藥后血漿中環(huán)丙沙星濃度-時間曲線見附圖1;
環(huán)丙-林可霉素長效注射液和普通林可霉素對豬肌注給藥后血漿中林可霉素濃度-時間曲線見附圖2。
[0034]2.藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)分析
給豬分別注射環(huán)丙沙星注射液、鹽酸林可霉素注射液和環(huán)丙-林可霉素長效注射液后，藥物動力學(xué)參數(shù)見表1，經(jīng)過房室模型分析，環(huán)丙沙星注射液、鹽酸林可霉素注射液和環(huán)丙-林可霉素長效注射其血藥濃度-時間數(shù)據(jù)均符合一級吸收二室開放模型，試驗結(jié)果表明，環(huán)丙-林可霉素長效注射液肌肉注射后，環(huán)丙沙星的消除半衰期(tl/2i3 )為12.34小時，是普通環(huán)丙沙星注射劑的2倍。林可霉素的消除半衰期(tl/2i3 )為10.74小時，是普通林可霉素注射的3倍，可見環(huán)丙-林可霉素長效注射液具有較好的緩釋和長效作用。
[0035]表I環(huán)丙-林可霉素長效注射液在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)參數(shù)(n=5)

【權(quán)利要求】
1.一種獸用環(huán)丙-林可霉素長效注射液，其特征在于所述的注射液每10mL有以下組分組成:環(huán)丙沙星2.0?5.0g、鹽酸林克霉素2.0?5.0g、乳酸2.0?4.0mL、聚乙烯吡咯烷酮(PVP40) 3.0?5.0g、丙二醇20?30mL、吐溫-80 0.5?2.0mL、注射用水加至10mL0
2.權(quán)利要求1所述一種環(huán)丙-林克霉素長效注射液的制備方法，其特征在于:包括以下步驟 (1)稱取環(huán)丙沙星2.0?5.0g,加入適量的注射用水，然后加入乳酸2.0?4.0mL,充分?jǐn)嚢柚寥咳芙鉃橹?，備? (2)稱取鹽酸林可霉素2.0?5.0g，加入適量的注射用水，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙鉃橹?，備? (3)稱取聚乙烯吡咯烷酮(PVP4tl)3.0?5.0g，加入丙二醇20?30mL，60_7(TC水浴加熱，充分?jǐn)嚢柚寥咳芙?，放至室溫，備? (4)依次將步驟(2)制備溶液加入步驟(I)制備的溶液中，攪拌均勻，再加入步驟(3)制備的溶劑、吐溫-80，補(bǔ)加注射用水至10mL (5)經(jīng)過濾，充氮氣分裝，100流通蒸汽滅菌30分鐘，即為成品。
【文檔編號】A61P31/04GK104127431SQ201410364634
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年7月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月29日
【發(fā)明者】劉錦妮, 吳海港, 劉紀(jì)成, 陳培榮, 劉佳, 趙云煥, 李迎曉, 肖世文 申請人:劉錦妮