地西他濱和奧沙利鉑在制備治療腎細胞癌組合藥物中應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供地西他濱和奧沙利鉑在制備治療腎細胞癌組合藥物中的應用，其中地西他濱和奧沙利鉑的優(yōu)選摩爾濃度比值為1:5～1:8，組合藥是由地西他濱和奧沙利鉑與藥學上可接受的輔料制成。本發(fā)明經(jīng)體內(nèi)、外實驗研究證明，地西他濱對奧沙利鉑治療腎細胞癌具有明顯的協(xié)同作用，該結(jié)果擴大了它們臨床應用的范圍。本發(fā)明提供的組合藥可增強奧沙利鉑在腎細胞癌小鼠模型腫瘤細胞中的積聚，同時增強腎細胞癌小鼠模型對奧沙利鉑的敏感性。
【專利說明】地西他濱和奧沙利鉑在制備治療腎細胞癌組合藥物中應用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及地西他濱與奧沙利鉬在制備治療腎細胞癌組合藥物中應 用，地西他濱與奧沙利鉬組合用時能顯著增強奧沙利鉬治療腎細胞癌中的作用。

【背景技術(shù)】
[0002] 腎細胞癌是泌尿生殖系腫瘤中死亡率最高的癌癥，也是最常見的腎實體腫瘤，其 發(fā)病率約占腎惡性腫瘤的90%，占癌癥綜合發(fā)病率的2?3%。除早期局部性腎癌可通過 外科手術(shù)治愈外，轉(zhuǎn)移性腎細胞癌的治療一直未取得突破性進展?；瘜W治療是目前治療腫 瘤的主要手段之一，但是腎細胞癌的多藥耐藥性常常導致化療失敗。
[0003] 聯(lián)組合用藥是目前腫瘤化學藥物治療的主流治療方案，其主要目的是為了增強療 效。藥物組合用可能產(chǎn)生的藥效學上的藥物相互作用包括協(xié)同作用、相加作用及拮抗作用。 協(xié)同作用是指藥物組合用的治療效果優(yōu)于各單一藥物的治療效應之和。反之，若藥物組合 用的治療效果低于各單一藥物治療效應總和則為拮抗作用。藥物協(xié)同作用產(chǎn)生的積極效果 包括：1)增強療效；2)在保證療效的基礎(chǔ)上減少用藥劑量以降低毒副作用；3)延緩或減弱 腫瘤細胞對藥物的耐受性。因此，臨床藥物治療應充分利用藥物間的協(xié)同作用，優(yōu)化治療效 果。
[0004] 地西他濱（Dacogen，Eisai)是一種DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，已于2006年被FDA批 準用于治療骨髓增生異常綜合征，但其對于實體腫瘤的療效并不理想。奧沙利鉬為第三代 鉬類抗癌藥物，通過與基因組DNA結(jié)合，影響細胞活性。與第一代鉬類抗癌藥順鉬相比，奧 沙利鉬具有更廣譜的抗腫瘤活性，且腎毒性顯著降低。但體外實驗已經(jīng)證明腎細胞系對奧 沙利鉬不敏感。近年來，地西他濱與鉬類藥物組合用藥以逆轉(zhuǎn)實體腫瘤對鉬類抗癌藥的耐 受性已有報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供地西他濱和奧沙利鉬在制備治療腎細胞癌組合藥物中的應 用，其中地西他濱和奧沙利鉬的優(yōu)選摩爾濃度比值為1:5?1:8。本發(fā)明提供的組合藥可增 強奧沙利鉬在腎細胞癌小鼠模型腫瘤細胞中的積聚，同時增強腎細胞癌小鼠模型對奧沙利 鉬的敏感性?？傊?，地西他濱和奧沙利鉬組合用藥能協(xié)同增強它們對腎細胞癌細胞系的藥 物敏感性。
[0006] 本發(fā)明提供的地西他濱和奧沙利鉬組合藥是由地西他濱和奧沙利鉬與藥學上可 接受的輔料制成，藥物劑型為固體制劑或液體制劑，選用口服制劑、注射液、凍干粉針劑、大 輸液劑型、貼劑、軟膏劑、凝膠劑、軟膠囊劑或栓劑。
[0007] 本發(fā)明提供一種地西他濱和奧沙利鉬組合在制備治療腎細胞癌藥物中的應用。地 西他濱是一種DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，已用于骨髓增生異常綜合征的治療。本發(fā)明經(jīng)體內(nèi)、 外實驗研究證明，地西他濱對奧沙利鉬治療腎細胞癌具有明顯的協(xié)同作用，該結(jié)果擴大了 它們臨床應用的范圍。同時，這種協(xié)同作用是地西他濱通過增強奧沙利鉬在腎細胞癌小鼠 模型腫瘤細胞中的積聚，同時增強腎細胞癌小鼠模型對奧沙利鉬的敏感性實現(xiàn)的。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0008] 圖1是地西他濱和奧沙利鉬在786-0和769-P兩株腎細胞癌細胞系中單獨給藥和 藥物組合用時的藥物劑量一細胞活性抑制效應曲線。
[0009] 圖2-1是地西他濱和奧沙利鉬在786-0腎細胞癌細胞系中的藥物組合用指數(shù)效果 分析圖。
[0010] 圖2-2是地西他濱和奧沙利鉬在769-P腎細胞癌細胞系中的藥物組合用指數(shù)效果 分析圖。
[0011] 圖2-3是786-0和769-P兩株細胞系中的藥物組合用等效線圖分析。
[0012] 圖3是地西他濱和奧沙利鉬在腎細胞癌小鼠模型上的給藥方案圖。
[0013] 圖4是不同給藥方式對腎細胞癌小鼠模型腫瘤細胞中DNA -奧沙利鉬加合物形成 的影響示意圖。
[0014] 圖5-1是地西他濱和奧沙利鉬在腎細胞癌小鼠模型上單獨給藥及藥物合用后腫 瘤相對體積增長示意圖。
[0015] 圖5-2是地西他濱和奧沙利鉬在腎細胞癌小鼠模型上單獨給藥及藥物合用第20 天腫瘤重量示意圖。
[0016] 圖5-3是地西他濱和奧沙利鉬在腎細胞癌小鼠模型上單獨給藥及藥物合用第20 天腎細胞癌小鼠模型及分離后的腫瘤照片。
[0017] 圖5-4是地西他濱和奧沙利鉬在腎細胞癌小鼠模型上單獨給藥及藥物合用腎細 胞癌小鼠模型相對體重變化示意圖。

【具體實施方式】
[0018] 本發(fā)明結(jié)合附圖和實施例作進一步的說明。
[0019] 實施例1 本發(fā)明提供地西他濱和奧沙利鉬在制備治療腎細胞癌組合藥物中的應用，其中地西他 濱和奧沙利鉬的優(yōu)選摩爾濃度比值為1:5?1:8。
[0020] 實施例2地西他濱與奧沙利鉬組合能協(xié)同增強腎細胞癌細胞系對這兩種藥物的 敏感性。
[0021] 1.試劑和材料： 腎癌細胞系 786-0 [CRL-1932 ?，ATCC]和 769-P [CRL-1933 ?，ATCC]均購自中國科 學院上海細胞庫。兩株細胞系均培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng)基（GIBC0,貨號31800022，添加 NaHC03 1.5 g/L, glucose 2.5 g/L, Sodium Pyruvate 0· 11 g/L)中，并含優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%。培養(yǎng)條件為37°C，5% C02. 地西他濱購自 Sigma-Aldrich (5-Aza_2'-deoxycytidine，A3656)。奧沙利鉬購自中 國食品藥品檢定研究院。
[0022] 2.實驗方法： 地西他濱，奧沙利鉬儲備液及工作液配制： 以DMS0為溶劑，將地西他濱，奧沙利鉬分別稀釋為1000 X儲備液和250 X儲備液，儲 存于-20 °C。
[0023] 工作液臨用前現(xiàn)配，加藥時每孔加入10 μ L工作液/200 μ L培養(yǎng)體系/ well : 地西他濱工作液：2 μ L儲備液+98 μ L培養(yǎng)基4 100 μ L工作液（20 X) 奧沙利鉬工作液：8 μ L儲備液+ 92 μ L培養(yǎng)基4 100 μ L工作液（20 X) 細胞培養(yǎng)及加藥： 按一定密度將 786-0 (200 cells/well)和 769-Ρ (1000 cells/well)細胞種于 96 孔 板，培養(yǎng)過夜。24 h后，向培養(yǎng)基中加入10 μ L預定濃度的地西他濱。奧沙利鉬組及對照 組加入0.1% DMS0處理。每24 h更換新的含藥培養(yǎng)基。72 h后，地西他濱組（DAC)的基 礎(chǔ)培養(yǎng)基更換為含0.4% DMS0的完全培養(yǎng)基，地西他濱濃度維持不變。奧沙利鉬組（0ΧΑ) 的基礎(chǔ)培養(yǎng)基更換為含0.1 % DMS0的完全培養(yǎng)基，并加入10 μ L預定濃度的奧沙利鉬。兩 藥組合用組（COMBO)同時加入10 μ L預定濃度的地西他濱及奧沙利鉬。各組培養(yǎng)體系中 DMS0終濃度均為0. 5%，每個濃度點設(shè)置4份復孔。24 h后，更換各組培養(yǎng)基為不含藥的完 全培養(yǎng)基，786-0繼續(xù)培養(yǎng)48 h，其余兩種細胞繼續(xù)培養(yǎng)72 h。兩株細胞系中地西他濱與奧 沙利鉬的藥物終濃度如表1所示。

【權(quán)利要求】
1. 一種地西他濱和奧沙利鉬在制備治療腎細胞癌組合藥物中的應用，其中地西他濱和 奧沙利鉬的優(yōu)選摩爾濃度比值為1:5?1:8。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地西他濱和奧沙利鉬在制備治療腎細胞癌組合藥物中 的應用，其特征在于，所述組合藥由地西他濱和奧沙利鉬與藥學上可接受的輔料制成。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地西他濱和奧沙利鉬在制備治療腎細胞癌組合藥物中 的應用，其特征在于，所述藥物的劑型為固體制劑或液體制劑。
【文檔編號】A61P35/00GK104147036SQ201410417386
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月24日
【發(fā)明者】曾蘇, 劉彥卿, 鄭小麗, 于琴琴, 王 華, 譚付清, 蔣惠娣, 余露山 申請人:浙江大學