包括銀離子源和薄荷醇的抗菌組合物及其用途本發(fā)明是申請(qǐng)日2010年2月11日、發(fā)明名稱(chēng)為“包括銀離子源和薄荷醇的抗菌組合物及其用途”、申請(qǐng)?zhí)枮?01080016122.X的申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明在其一些實(shí)施方案中涉及抗菌組合物及其用途，并且更具體而言但是不限于，涉及可有效用于對(duì)表面例如身體表面進(jìn)行消毒并且因此可有效用于治療例如與感染相關(guān)的諸如急性和慢性傷口、燒傷和手術(shù)傷口的醫(yī)學(xué)病癥的抗菌組合物。

背景技術(shù)：
慢性傷口的特征為愈合過(guò)程受損、炎癥階段延長(zhǎng)、缺乏再上皮化以及細(xì)胞外基質(zhì)重塑存在缺陷。積累在這些傷口中的細(xì)胞是衰老細(xì)胞并且它們對(duì)外源生長(zhǎng)因子的響應(yīng)降低。慢性傷口愈合過(guò)程受損的最終結(jié)果為組織破壞、局部壞死和感染。對(duì)傷口床的處理是實(shí)現(xiàn)最終傷口閉合必需的多階段過(guò)程。清創(chuàng)術(shù)、控制感染和傷口閉合是慢性傷口愈合中的重要階段。2005年，醫(yī)院獲得性感染已被列為美國(guó)的第四大死因。據(jù)報(bào)導(dǎo)每年約一千萬(wàn)具有外傷性傷口的患者在美國(guó)的急診部接受治療。慢性傷口累及1-3％的總?cè)丝诓⑶抑饕ㄏ轮o脈性潰瘍、糖尿病足潰瘍和壓瘡。由慢性靜脈功能不全引起的靜脈性潰瘍?cè)陔y愈慢性傷口中最常見(jiàn)(～70％)。慢性傷口感染導(dǎo)致危及生命的并發(fā)癥的急診病例的數(shù)量隨著被抗生素抗性微生物感染的慢性傷口數(shù)量的增加而不斷增加。細(xì)菌定植的存在是大多數(shù)慢性傷口發(fā)病機(jī)制中的最主要因素之一，引起傷口組織中高細(xì)菌計(jì)數(shù)和宿主炎癥反應(yīng)。在被感染的慢性傷口中，當(dāng)被大量細(xì)菌感染時(shí)創(chuàng)傷愈合會(huì)延遲甚至停止。減少細(xì)菌載量非常關(guān)鍵并且應(yīng)該在愈合過(guò)程之前進(jìn)行。為了優(yōu)化傷口愈合過(guò)程，通常有必要與減少細(xì)菌載量一起對(duì)潛在的影響因素例如營(yíng)養(yǎng)不良和缺血進(jìn)行治療。慢性傷口感染延遲愈合并且經(jīng)常引起慢性傷口床的情況惡化，這也會(huì)引起傷口的完全破壞。除了對(duì)傷口的有害作用，感染還能夠引起在一些條件下是致命的全身作用。細(xì)菌污染通過(guò)數(shù)種不同的機(jī)制延遲傷口愈合，例如持續(xù)產(chǎn)生炎癥介質(zhì)，其導(dǎo)致炎癥反應(yīng)延長(zhǎng)從而促使宿主損傷并且延遲愈合過(guò)程。另外，細(xì)菌與宿主細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)傷口愈合過(guò)程必需的養(yǎng)分和氧。傷口感染還會(huì)導(dǎo)致組織缺氧、阻礙肉芽組織生長(zhǎng)、減少成纖維細(xì)胞的數(shù)量和膠原產(chǎn)生并且破壞再上皮化。因此解決感染傷口清洗的問(wèn)題是傷口護(hù)理的主要目標(biāo)并且對(duì)傷口處理具有重要作用。一大部分足潰瘍是由糖尿病并發(fā)癥引起的。這些損傷經(jīng)常被感染并且經(jīng)常伴有骨髓炎。這些損傷中的大多數(shù)感染為輕度至中度并且可以通過(guò)適當(dāng)?shù)膫谧o(hù)理和口服抗生素療法進(jìn)行治療。但是一些感染擴(kuò)散至筋膜、肌肉、關(guān)節(jié)和骨。在這些情況下，患者需要住院治治療、腸胃外抗生素治療以及手術(shù)。在一些病例中，糖尿病患者的足感染難以治療并且治療失敗常常導(dǎo)致下肢截肢。另外，由耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)引起的糖尿病足感染與延遲愈合相關(guān)并且在許多病例中與截肢相關(guān)。抗菌劑通常被用于預(yù)防和治療傷口感染。與選擇性作用于特異微生物的抗生素不同，抗菌劑具有多個(gè)靶點(diǎn)和較寬的活性范圍。大多數(shù)現(xiàn)有抗菌劑未顯示明顯地阻礙愈合。在可商購(gòu)的抗菌劑中，臨床最常使用的為碘、氯己定、乙醇、醋酸、過(guò)氧化氫、溴酸、硝酸銀、磺胺嘧啶銀和次氯酸鈉。但是鑒于近期報(bào)導(dǎo)的與被污染的抗菌劑相關(guān)的疾病爆發(fā)，它們的功效似乎具有局限性[Weber等人，2007,AntimicrobAgentChemother51:4217-4224]。銀化合物被廣泛用作傷口抗菌劑以對(duì)抗慢性傷口和包括燒傷在內(nèi)的急性傷口的細(xì)菌感染[Burrell2003,OstomyWoundManag49:19-24；Ovington2004,OstomyWoundManag50:1S-15]。已知銀可以阻斷革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌的生長(zhǎng)。銀離子可以殺滅微生物但是它對(duì)于增殖的肉芽組織無(wú)細(xì)胞毒性。銀制劑表現(xiàn)出可增加微生物殺滅的速率和程度，減少滲出液形成并且據(jù)近期報(bào)導(dǎo)可作用于細(xì)菌被膜。最常使用的銀化合物是磺胺嘧啶銀(SSD)和硝酸銀(AgNO3)。其他通常使用的局部用含銀藥劑是銀納米晶顆粒。磺胺嘧啶銀(SSD)通常被用作預(yù)防燒傷患者感染的治療[Klasen2000,Burns26:131-138]。已研發(fā)了銀納米晶釋放系統(tǒng)例如[Tredget等人，1998,J.BurnCareRehabil.19:531-537]以延長(zhǎng)其功效。對(duì)具有被感染的慢性壓瘡的患者進(jìn)行SSD治療并且在所有潰瘍中觀察到細(xì)菌載量有效減少。SSD1％霜?jiǎng)┛娠@著減少靜脈性潰瘍、對(duì)傷口清洗和肉芽組織形成具有正向作用。硝酸銀最早被用于慢性傷口和潰瘍的治療[Klasen2000,Burns26:131-138]。已發(fā)現(xiàn)其對(duì)寬范圍的菌群特別是對(duì)革蘭氏陰性菌有效。后來(lái)將銀納米晶以緩釋制劑摻入傷口敷料中用于治療包括燒傷在內(nèi)的急性和慢性傷口[Voight等人，2001,Wounds13:B11-B21；Sondi和Salopek-Sondi2004,JColloidInterfSci275:177-182；Parsons等人，2005,Wounds,17:222-232]。用于局部傷口治療的含銀制劑大多是基于含銀的傷口敷料。將銀離子通過(guò)此類(lèi)敷料遞送并擴(kuò)散至感染傷口常常受限于導(dǎo)致非活性氯化銀沉淀的例如與氯離子的化學(xué)反應(yīng)，減少了到達(dá)靶感染區(qū)域的抗菌銀離子的有效量。其他缺點(diǎn)包括由銀引起的著色和局部刺激。在普遍并且過(guò)多地使用基于銀的局部治療用于處理傷口的同時(shí)還注意到關(guān)于細(xì)菌銀耐藥性的報(bào)導(dǎo)的數(shù)量增加[Silver2003,FEMSMicrobiologyReviews27:341-353；Chopra2007,JAntimicrobialChemotherapy59:587-590]。薄荷醇是植物來(lái)源的天然單萜，其常常作為止癢、防腐、鎮(zhèn)痛和/或清涼制劑的一部分用于皮膚病。最近報(bào)導(dǎo)了構(gòu)成薄荷醇對(duì)這些活性特別是對(duì)其抗菌活性的作用基礎(chǔ)的分子機(jī)制[Patel,2007,JAmAcadDermatol57:873-878；Evrand2001,PharmaResear18:943-949；Trombetta等人，2005,AntimicrobAgentChemother49:2474-2478；Schelz等人，2006,Fiterapia77:279-285；Cristani等人2007,JAgriFoodChem55:6300-6308]。預(yù)期高滲溶液通過(guò)減少微生物載量、加強(qiáng)滲出液的清除和對(duì)體液循環(huán)的影響而增加對(duì)傷口床處理的益處。已證明高滲鹽溶液是神經(jīng)外科實(shí)踐中非常有用的工具。相關(guān)技術(shù)包括第5,643,589和5,562,643號(hào)美國(guó)專(zhuān)利。這些技術(shù)中將薄荷醇記載為還可用于皮膚病應(yīng)用的止癢劑、抗菌劑、鎮(zhèn)痛劑和清涼劑。還記載了包含銀離子和薄荷醇的組合物。例如默克手冊(cè)在“皮膚病局部治療原則”一章中建議將薄荷醇和銀組合用于皮膚病組合物(www.merck.com/mmpe/print/sec10/ch110/ch110a.html)。其中將銀定義為抗菌劑并且將薄荷醇定義為止癢劑(抗癢劑)。另外的相關(guān)技術(shù)包括第PCT/IL2007/000015號(hào)國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)、第6,551,608號(hào)美國(guó)專(zhuān)利、第11/783,668號(hào)美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)(公開(kāi)號(hào)20070255193)和第10/535,961號(hào)美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)(公開(kāi)號(hào)20060105000)。包含銀離子的抗菌組合物還記載于第5,607,683號(hào)美國(guó)專(zhuān)利和第6,093,414號(hào)美國(guó)專(zhuān)利。治療液連續(xù)沖流(CST)是由本發(fā)明人和其他人員一起研發(fā)的新的慢性傷口處理方式，并且涉及新鮮劑量的治療液連續(xù)沖流入受控的創(chuàng)傷環(huán)境中。在慢性傷口上沖流(stream，流動(dòng))使得能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)傷口的抗菌抑制(asepticconfinement)、負(fù)壓治療(不需使用泵)、潤(rùn)濕傷口、對(duì)傷口床的連續(xù)清洗和整體處理。此類(lèi)連續(xù)沖流療法記載于例如本發(fā)明一些發(fā)明人的第7,364,565號(hào)美國(guó)專(zhuān)利中。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
在研究性能改善的抗菌組合物時(shí)，本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)銀離子和薄荷醇的組合物表現(xiàn)出協(xié)同作用。已進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)該活性在高滲劑存在下得以保留。因此，本文公開(kāi)當(dāng)在等滲或高滲介質(zhì)中與低濃度薄荷醇組合時(shí)基于銀離子的抗菌組合物表現(xiàn)出協(xié)同作用，其中所述銀離子以低于通常用于抗菌(防腐)目的的濃度存在。此類(lèi)組合物能夠?qū)V譜的病原微生物發(fā)揮抗微生物活性同時(shí)能夠?qū)崿F(xiàn)緩解疼痛、清涼和傷口愈合，而與現(xiàn)有含銀離子溶液經(jīng)常觀察到的不良副作用例如著色和刺激無(wú)關(guān)。已進(jìn)一步證明包含與濃度為0.05％w/v至0.5％w/v的薄荷醇和高滲劑例如甘油組合的濃度為0.005％w/v至0.5％w/v的銀離子或其絡(luò)合物的抗菌組合物為無(wú)沉淀的澄清溶液。因此，可以使用本文所述的抗菌組合物有效治療急性和慢性傷口例如糖尿病潰瘍。此外，當(dāng)將本文所述的防腐組合物以連續(xù)流施用至傷口上并通過(guò)傷口從而將與傷口接觸的抗微生物藥劑和高滲劑的濃度保持恒定時(shí)，可達(dá)到較高的傷口愈合率。已進(jìn)一步證明此類(lèi)抗菌組合物可通過(guò)預(yù)防或減少非無(wú)菌條件下的細(xì)菌生長(zhǎng)充當(dāng)防腐劑(preservative)。已進(jìn)一步證明此類(lèi)抗菌組合物表現(xiàn)出優(yōu)于商購(gòu)抗真菌產(chǎn)品的有效的殺真菌活性。已進(jìn)一步證明本文所述的抗菌組合物和基于聚己縮胍(polyhexadine)的商購(gòu)抗菌產(chǎn)品的組合、連續(xù)治療對(duì)抑制各種真菌菌株的生長(zhǎng)非常有效，尤其是當(dāng)首先使用銀抗菌組合物時(shí)。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案的一個(gè)方面提供了包含作為活性成分的薄荷醇和銀離子源以及藥學(xué)可接受的載體的抗菌組合物，其中銀離子在該組合物中的濃度低于6mM。在一些實(shí)施方案中，所述薄荷醇和銀離子具有協(xié)同作用。在一些實(shí)施方案中，薄荷醇的濃度為0.3mM至32mM。在一些實(shí)施方案中，薄荷醇的濃度為0.6mM至6.4mM。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.05mM至6mM。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.25mM至0.6mM。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.25mM至0.6mM,并且薄荷醇的濃度為0.6mM至6.4mM。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.29mM，并且薄荷醇的濃度為6.4mM。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.29mM,并且薄荷醇的濃度為3.2mM。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.29mM,并且薄荷醇的濃度為0.64mM。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.44mM,并且薄荷醇的濃度為3.2mM。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.6mM,并且薄荷醇的濃度為3.2mM。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.6mM,并且薄荷醇的濃度為0.64mM。在一些實(shí)施方案中，所述銀離子源選自硝酸銀、磺胺嘧啶銀(silversulfadiazine)、氨基醇-銀離子絡(luò)合物、氨基酸-銀離子絡(luò)合物以及聚合物-銀離子絡(luò)合物。在一些實(shí)施方案中，所述聚合物-銀離子絡(luò)合物為聚乙烯吡咯烷酮(PVP)-銀離子絡(luò)合物。在一些實(shí)施方案中，所述抗菌組合物還包含高滲劑。在一些實(shí)施方案中，所述高滲劑選自甘油、聚乙二醇、多糖、甘露醇以及它們的組合。在一些實(shí)施方案中，所述高滲劑是甘油。在一些實(shí)施方案中，基于抗菌組合物的總體積，甘油的濃度為3％v/v至15％v/v。在一些實(shí)施方案中，基于抗菌組合物的總體積，甘油的濃度為10％v/v。在一些實(shí)施方案中，所述高滲劑是聚乙二醇(PEG)。在一些實(shí)施方案中，基于抗菌組合物的總體積，PEG的濃度為8％v/v至16％v/v。在一些實(shí)施方案中，所述抗菌組合物還包含增溶劑。在一些實(shí)施方案中，所述增溶劑是TWEEN20(吐溫20)。在一些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)可接受的載體是水溶液。在一些實(shí)施方案中，將所述抗菌組合物配制成局部劑型。在一些實(shí)施方案中，所述局部劑型選自霜?jiǎng)?、噴霧劑、紗布、擦劑、海綿體、無(wú)紡布、棉布、泡沫劑、溶液劑、洗劑、軟膏劑、糊劑和凝膠劑。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的一個(gè)方面提供包括包裝材料和包裝于該包裝材料內(nèi)的如本文所述的抗菌組合物的抗菌試劑盒。在一些實(shí)施方案中，在包裝材料之內(nèi)或之上以印刷方式指明所述試劑盒抗菌試劑盒用于表面消毒。在一些實(shí)施方案中，所述表面為身體表面。在一些實(shí)施方案中，在包裝材料之內(nèi)或之上以印刷方式指明所述試劑盒抗菌試劑盒用于處理傷口。在一些實(shí)施方案中，所述傷口選自急性傷口、慢性傷口、燒傷和手術(shù)傷口。在一些實(shí)施方案中，所述慢性傷口選自糖尿病潰瘍、靜脈性潰瘍和壓瘡。在一些實(shí)施方案中，將銀離子源、薄荷醇和藥學(xué)可接受的載體中至少之一單獨(dú)包裝于所述包裝材料中。在一些實(shí)施方案中，將銀離子源、薄荷醇和藥學(xué)可接受的載體各自單獨(dú)包裝于所述包裝材料中。在一些實(shí)施方案中，將銀離子源、薄荷醇和藥學(xué)可接受的載體一起包裝于所述包裝材料中。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的一個(gè)方面提供用于對(duì)表面進(jìn)行消毒的方法，所述方法包括將有效量的本文所述的抗菌組合物施用至表面，由此對(duì)該表面進(jìn)行消毒。在一些實(shí)施方案中，所述表面是身體表面，所述方法是用于消毒有此需要的患者的身體表面。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將所述抗菌組合物局部施用至身體表面。在一些實(shí)施方案中，所述身體表面為皮膚組織。在一些實(shí)施方案中，所述方法是用于處理(treat，治療)所述身體表面內(nèi)的感染。在一些實(shí)施方案中，所述感染是由選自細(xì)菌、酵母和真菌的致病微生物引起的。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的一方面提供在有此需要的患者中治療如本文所述的傷口的方法，所述方法包括將有效量的本文所述的抗菌組合物施用至傷口區(qū)域，由此對(duì)該傷口進(jìn)行處理。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將所述抗菌組合物局部施用至傷口區(qū)域。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)使抗菌組合物液流(fluid)在傷口區(qū)域上流動(dòng)并流過(guò)傷口區(qū)域而進(jìn)行抗菌組合物的施用。在一些實(shí)施方案中，該液流(流)是由來(lái)自至少一個(gè)包含所述抗菌組合物的貯器的重力引起的。在一些實(shí)施方案中，該液流(流)是由與至少一個(gè)包含所述抗菌組合物的貯器成液體流通的泵引起的。本發(fā)明一些實(shí)施方案的一方面提供了本文所述抗菌組合物在制備用于表面消毒的產(chǎn)品中的用途。在一些實(shí)施方案中，所述產(chǎn)品為用于消毒身體表面的藥物。在一些實(shí)施方案中，所述藥物是用于治療所述身體表面內(nèi)的感染。在一些實(shí)施方案中，所述感染是由選自細(xì)菌、酵母和真菌的致病微生物引起的。本發(fā)明一些實(shí)施方案的一方面提供了本文所述抗菌組合物在制備用于處理本文所述傷口的藥物中的用途。本發(fā)明一些實(shí)施方案的一方面提供了制備本文所述抗菌組合物的方法，所述方法包括將銀離子源、薄荷醇和藥學(xué)可接受的載體混合，由此獲得抗菌組合物。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括將高滲劑與所述組合物混合。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括將增溶劑與所述組合物混合。在一些實(shí)施方案中，在將薄荷醇與銀離子源和載體混合前將增溶劑與薄荷醇混合。在一些實(shí)施方案中，所述增溶劑是TWEEN20(吐溫20)。根據(jù)本發(fā)明一些實(shí)施方案的一方面提供了降低包含銀離子的抗菌組合物中銀離子濃度的方法，所述方法包括將銀離子源與協(xié)同有效量的薄荷醇混合，由此降低抗菌組合物中銀離子的濃度。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度被降低至少2倍。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度被降低至少10倍。本發(fā)明一些實(shí)施方案的一方面提供了增加包含濃度低于6mM的銀離子的抗菌組合物的抗菌活性的方法，所述方法包括將該組合物與協(xié)同有效量的薄荷醇混合。除非另外定義，本文使用的所有技術(shù)和/或科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。盡管可使用與本文所述那些相似或相等的方法和材料實(shí)施或檢測(cè)本發(fā)明的實(shí)施方案，但是仍在下文描述了示例性方法和/或材料。如有沖突，以包括定義在內(nèi)的專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。另外，所述材料、方法和實(shí)施例為示例性的并且不意圖一定具有限制作用。附圖說(shuō)明通過(guò)結(jié)合附圖僅以舉例說(shuō)明的方式在本文中描述本發(fā)明的一些實(shí)施方案。雖然現(xiàn)在具體詳細(xì)地結(jié)合了附圖，應(yīng)強(qiáng)調(diào)所顯示的細(xì)節(jié)僅為示例性的并且用于說(shuō)明性討論本發(fā)明的實(shí)施方案。就此而言，描述與附圖一起使得如何實(shí)施本發(fā)明的實(shí)施方案對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。所述附圖中：圖1示出的圖總體圖解了在暴露于供試溶液30分鐘并且隨后洗滌之后培養(yǎng)24天后的真菌培養(yǎng)物的外觀，表現(xiàn)出無(wú)生長(zhǎng)(殺真菌作用，表示為“F”)、最小不良生長(zhǎng)(抑制作用，表示為“IN”)或者完全生長(zhǎng)(無(wú)作用，表示為“NE”)。圖2至圖4示出的圖圖解了在暴露于每一種供試溶液30分鐘并且隨后清洗之后培養(yǎng)3、8、11和16天后的已暴露真菌培養(yǎng)物的外觀。供試溶液包括：如上文實(shí)施例5所述的包含銀離子和薄荷醇的組合物(表示為“S”)、(表示為“P”)、交替相繼暴露于包含銀離子和薄荷醇的組合物和(表示為“S+P”和“P+S”)、(表示為“M”)和(表示為“A”)以及它們的稀釋液(1:2；1:4；1:8)。供試真菌菌株為紅色毛癬菌(Trichophytonrubrum)的臨床菌株(圖2)、紅色毛癬菌的NCPF118商購(gòu)菌株(圖3)和犬小孢子菌(Microsporumcanis)的臨床菌株(圖4)。具體實(shí)施方式本發(fā)明在其一些實(shí)施方案中涉及抗菌組合物及其用途，并且更具體而言但是不限于，涉及可有效用于消毒表面例如身體表面并且因此可有效用于例如治療與感染相關(guān)的諸如急性和慢性傷口、燒傷和手術(shù)傷口的醫(yī)學(xué)病癥和/或用作防腐劑的抗菌組合物。本文所述抗菌組合物包含銀離子源和薄荷醇，其中銀離子和薄荷醇具有協(xié)同作用，因此使能夠使用各自相對(duì)低的濃度。因此可容易地將本文所述的抗菌組合物制備成溶液(舉例而言)，其不含活性成分的沉淀并且不具有與現(xiàn)有的基于銀離子的抗菌劑相關(guān)的不良副作用同時(shí)表現(xiàn)出高且寬范圍的治療功效。在詳細(xì)闡述至少一個(gè)本發(fā)明的實(shí)施方案之前，應(yīng)理解本發(fā)明的應(yīng)用不一定受限于下文說(shuō)明中所列或?qū)嵤├兴e例說(shuō)明的細(xì)節(jié)。本發(fā)明還有其他實(shí)施方案或者能夠以各種方式實(shí)踐或?qū)嵤?。本發(fā)明人已認(rèn)識(shí)到對(duì)銀的微生物抗性形成的潛在解決方法之一為使用銀離子源和另一種與銀離子一起表現(xiàn)出抗細(xì)菌(或抗微生物)協(xié)同作用的抗菌劑的組合。這樣的組合使能夠大大減少銀使用量并且因此消除了由銀離子引起的諸如傷口著色和刺激的副作用。但是這樣的組合需基于所有成份與銀離子的相容性從而避免銀的潛在沉淀。如果所提出的組合物是相容的，可容易地獲得用于協(xié)同抗微生物作用的可行性驗(yàn)證的檢測(cè)(參見(jiàn)，例如Mackay等人，2000IntJAntimicrobAgents15:125-129；和Peter等人，2006,JAntimicChemother57:573-576)。盡管已知許多抗細(xì)菌、抗微生物和/或抗菌(防腐)劑，但是難以預(yù)測(cè)當(dāng)這些藥劑組合時(shí)是否具有協(xié)同作用。本文使用的術(shù)語(yǔ)“抗菌的(antiseptic)”描述一種藥劑或組合物通過(guò)局部施用該藥劑或組合物實(shí)現(xiàn)微生物載量減少和/或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防微生物載量增長(zhǎng)的能力。因此抗菌組合物或藥劑能夠預(yù)防或阻止微生物(例如細(xì)菌、酵母和真菌)的生長(zhǎng)或作用，其方式為抑制它們的活性和/或生長(zhǎng)或者為破壞(殺滅)微生物。術(shù)語(yǔ)“抗菌劑”在本領(lǐng)域中通常用于描述用于局部施用至如下文詳述的感染的活組織或任何其他感染的表面或具有被感染風(fēng)險(xiǎn)的表面的制劑?？咕M合物和藥劑在本文中還被稱(chēng)作抗微生物組合物或藥劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)“抗微生物劑”描述能夠通過(guò)抑制微生物的活性、抑制微生物的生長(zhǎng)或殺滅微生物來(lái)預(yù)防或阻止微生物的生長(zhǎng)和/或作用的組合物或藥劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)“協(xié)同”、“協(xié)同效應(yīng)”及其任何語(yǔ)法轉(zhuǎn)換形式描述在兩種或更多種生物活性化合物的組合中出現(xiàn)的協(xié)同作用，其中當(dāng)兩種化合物被同時(shí)使用時(shí)表現(xiàn)出的組合作用超過(guò)每一種化合物單獨(dú)使用時(shí)作用的累加。因此通常當(dāng)表示兩種活性藥劑的組合的作用的數(shù)值大于每一種這些藥劑單獨(dú)作用時(shí)獲得的同類(lèi)數(shù)值的總和時(shí)可以確定存在“協(xié)同”。兩種抗菌劑之間的協(xié)同可由本領(lǐng)域公知的方法來(lái)確定。如下文的實(shí)施例部分所示，出乎意料地發(fā)現(xiàn)銀離子和薄荷醇具有協(xié)同作用。通過(guò)測(cè)量單獨(dú)薄荷醇和單獨(dú)銀離子對(duì)各種細(xì)菌的抗菌活性并且與一起給藥時(shí)它們的活性相比確定協(xié)同。如果一起給藥時(shí)所觀察到的兩種藥劑的抗菌活性超過(guò)將單獨(dú)使用時(shí)所觀察到的藥劑的活性相加得到的預(yù)期累加抗菌活性，則認(rèn)為這兩種藥劑具有協(xié)同作用。另外，當(dāng)一起給予藥劑時(shí)所表現(xiàn)出的抗菌活性的藥劑代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)優(yōu)于將每一種藥劑單獨(dú)給藥時(shí)所述藥劑的抗菌活性的相同藥劑代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，則可以證明并因此確定存在協(xié)同作用。示例性藥劑代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)為達(dá)到某一水平的抗菌作用所需要的時(shí)長(zhǎng)。因此，如果當(dāng)一起給藥兩種藥劑時(shí)達(dá)到這一抗菌作用水平所需要的時(shí)長(zhǎng)與每一種藥劑單獨(dú)給藥時(shí)的這一時(shí)長(zhǎng)相比有所減少，則認(rèn)為這兩種藥劑具有協(xié)同作用。就這一點(diǎn)而言，應(yīng)注意在藥劑代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)數(shù)值總和常常沒(méi)有任何意義，因此相對(duì)于單獨(dú)給藥每一種化合物，將兩種藥劑合并給藥后的藥劑代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)的任何改善均認(rèn)為反應(yīng)了協(xié)同作用。因此，已證明例如當(dāng)對(duì)大腸桿菌ATCC47076菌株進(jìn)行檢測(cè)時(shí)分別觀察包含濃度為0.005％w/v％+0.1w/v％、0.005％w/v+0.05％w/v、0.005％w/v+0.01％w/v、0.0075％w/v+0.05％w/v、0.01％w/v+0.05％w/v以及0.01％w/v+0.01％w/v的銀離子源AgNO3和薄荷醇的高滲溶液的協(xié)同抗菌活性(參見(jiàn)，下文表1)。這些數(shù)值分別對(duì)應(yīng)于0.29mM+6.4mM、0.29mM+3.2mM、0.29mM+0.64mM、0.44mM+3.2mM、0.6mM+3.2mM和0.6mM+0.64mM的銀離子和薄荷醇摩爾濃度。具體而言，在這些濃度下，當(dāng)單獨(dú)給藥時(shí)薄荷醇和銀離子的累積抗菌活性低于將藥劑一起給藥時(shí)觀察到的抗菌活性。還證明了銀離子和薄荷醇對(duì)各種類(lèi)型的細(xì)菌具有協(xié)同作用，包括克雷伯氏肺炎桿菌、金黃色葡萄球菌的耐甲氧西林臨床菌株(MRSA)、表皮葡萄球菌的臨床菌株、產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶的大腸桿菌的臨床菌株、多重耐藥性鮑氏不動(dòng)桿菌的臨床菌株以及多重耐藥性綠膿假單胞菌的臨床菌株(參見(jiàn)下文的表2)。在這些研究中，通過(guò)與單獨(dú)給藥每一種藥劑時(shí)觀察到直至某一水平的抗菌活性的時(shí)長(zhǎng)相比，觀察到直至銀離子和薄荷醇的相同水平的抗菌活性所測(cè)量到的更短的時(shí)長(zhǎng)證明了銀離子和薄荷醇的協(xié)同作用。還證明了包含銀離子源和薄荷醇的溶液為無(wú)沉淀的澄清溶液。還證明了以1:4稀釋所述組合物后獲得這樣的組合物的最小抑菌濃度，并且以1:2稀釋所述組合物后獲得這樣的組合物的最小殺菌濃度(參見(jiàn)，下文實(shí)施例部分的表3)。因此，當(dāng)以至少1:2并且任選1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9、1:3、1:3.1、1:3.2、1:3.3、1:3.5、1:3.5、1:3.6、1:3.7、1:3.8、1:3.9、1:4甚至更高的稀釋倍數(shù)稀釋(例如1:5、1:6、1:7、1:8、1:9和1:10)時(shí)，本文所述的抗菌組合物可有利地用于本文所述的任何方法中。還證明了1:10稀釋后，包含銀離子和薄荷醇的示例性組合物可防止非無(wú)菌樣品中各種細(xì)菌和真菌菌株的生長(zhǎng)(參見(jiàn)，下文實(shí)施例部分的實(shí)施例5)。通過(guò)與商購(gòu)產(chǎn)品和比較進(jìn)一步證明了本文所述抗菌組合物的有益治療作用(參見(jiàn)下文實(shí)施例部分的實(shí)施例6和圖2-4)。已證明本文所述抗菌組合物表現(xiàn)出對(duì)真菌菌株例如紅色毛癬菌和犬小孢子菌的殺真菌活性，其超過(guò)了一些商購(gòu)產(chǎn)品并且發(fā)現(xiàn)可與有效組合。因此所觀察到的銀離子和薄荷醇組合物的協(xié)同作用能夠提供具有濃度降低的銀離子同時(shí)利用薄荷醇的其他有利性質(zhì)例如其止癢作用、清涼劑作用等的抗菌組合物。這些發(fā)現(xiàn)證明包含銀離子和薄荷醇的組合物可充當(dāng)有效的抗菌組合物用于消毒表面例如身體表面并且因此可用于治療或預(yù)防與感染相關(guān)的病癥例如傷口，如下文詳述。這些發(fā)現(xiàn)還證明包含銀離子和薄荷醇的組合物可充當(dāng)有效的抗菌組合物用于消毒例如醫(yī)療器械和保存容器的表面并且用于防止此類(lèi)表面上微生物載量的增長(zhǎng)。因此，根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案的一方面提供了包含作為活性成分的薄荷醇和銀離子源以及藥學(xué)可接受的載體的抗菌組合物，其中銀離子在該組合物中的濃度低于6mM。根據(jù)一些實(shí)施方案中，薄荷醇和銀離子具有如上文定義的協(xié)同作用。薄荷醇(5-甲基-2-丙-2-基-環(huán)己-1-醇；CASNo.89-78-1,MW＝156克/mol)是植物來(lái)源的天然單萜，常常作為止癢、抗菌、鎮(zhèn)痛和或清涼制劑的一部分用于皮膚病。薄荷醇是一種蠟狀晶體物質(zhì)、透明或呈白色，其在室溫下為固體并且在高于室溫時(shí)略微熔化。薄荷醇具有三個(gè)不對(duì)稱(chēng)中心并且以八種立體異構(gòu)體存在：(+)-薄荷醇、(+)-異薄荷醇、(+)-新薄荷醇、(+)-新異薄荷醇、(-)-薄荷醇、(-)-異薄荷醇、(-)-新薄荷醇、(-)-新異薄荷醇，均被本文使用的術(shù)語(yǔ)“薄荷醇”所涵蓋。自然界中最常見(jiàn)的薄荷醇形式是(-)-薄荷醇立體異構(gòu)體，其具有(1R,2S,5R)構(gòu)型并且具有以下結(jié)構(gòu)：本文使用的術(shù)語(yǔ)“銀離子源”描述當(dāng)存在于適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中時(shí)生成銀離子的化學(xué)部分。一旦化合物與本文所述的組合物載體混合即可生成銀離子(例如水溶性銀鹽在水性載體中的情況)?；蛘?，包含銀離子的化學(xué)絡(luò)合物降解后生成銀離子，一旦將所述絡(luò)合物置于組合物的載體中即發(fā)生所述降解。在此類(lèi)化學(xué)絡(luò)合物中，銀離子通常以配位相互作用結(jié)合，而在銀鹽中，銀離子以離子相互作用結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)可接受的載體是水溶液。在這些實(shí)施方案中，所述銀離子源優(yōu)選是水溶性銀鹽例如硝酸銀、醋酸銀和部分水溶性磺胺嘧啶銀。適合用于本發(fā)明背景中的銀離子源的非限制性實(shí)例包括硝酸銀、磺胺嘧啶銀以及銀離子絡(luò)合物例如氨基醇-銀離子絡(luò)合物、氨基酸-銀離子絡(luò)合物和聚合物-銀離子絡(luò)合物。術(shù)語(yǔ)“氨基醇-銀離子絡(luò)合物”描述氨基醇(即包含胺官能團(tuán)和醇官能團(tuán)二者的分子)與銀離子的絡(luò)合物。此類(lèi)絡(luò)合物的非限制性實(shí)例包括氨基乙醇、氨基丙醇、2-氨基-2-(羥基甲基)-1,3-丙二醇和氨基丁醇。在一些實(shí)施方案中，氨基醇組分的濃度為約50mM。術(shù)語(yǔ)“氨基酸-銀離子絡(luò)合物”描述氨基酸(即包含胺官能團(tuán)和羧酸官能團(tuán)二者的分子)與銀離子的絡(luò)合物。在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸選自天然氨基酸、非天然氨基酸和氨基酸類(lèi)似物。此類(lèi)絡(luò)合物的非限制實(shí)例包括組氨酸-銀(I)絡(luò)合物、絲氨酸-銀絡(luò)合物和賴(lài)氨酸-銀絡(luò)合物。術(shù)語(yǔ)“聚合物-銀離子絡(luò)合物”描述聚合物與銀離子的絡(luò)合物。這樣的絡(luò)合物中的聚合物應(yīng)具有一個(gè)或多個(gè)與銀離子配位相互作用的官能團(tuán)(例如羥基、氨基、氧代基(＝O)、羧酸根、酰胺等)。所述聚合物可為合成的、天然的或半合成的聚合物并且優(yōu)選為生物相容的。這樣的聚合物-銀離子絡(luò)合物的非限制實(shí)例包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)-銀離子絡(luò)合物、聚丙烯酰胺-銀離子絡(luò)合物和聚賴(lài)氨酸-銀離子絡(luò)合物。根據(jù)一些實(shí)施方案，所述聚合物-銀離子絡(luò)合物為聚乙烯吡咯烷酮(PVP)-銀離子絡(luò)合物。聚乙烯吡咯烷酮是一種水溶性聚合物，其具有良好的安全性并且廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、藥理學(xué)、化妝品和工業(yè)產(chǎn)品中。聚乙烯吡咯烷酮容易形成薄膜并且可用作許多藥物片劑的粘合劑。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)銀離子源是聚乙烯吡咯烷酮(PVP)-銀離子絡(luò)合物時(shí)，以抗菌組合物的總體積計(jì)，抗菌組合物中聚合物的濃度為0.2％w/v至10％w/v。如本文所使用，“％w/v”描述組分或藥劑在組合物總體積中的重量百分?jǐn)?shù)。因此，例如1％w/v描述100ml組合物含有1mg組分或藥劑。盡管“％w/v”單位表示一定體積中存在的質(zhì)量，其還可以表示為摩爾濃度，即摩爾每升M)?！埃/v”單位描述組分或藥劑在組合物總體積中的體積百分?jǐn)?shù)。如上文所述，薄荷醇和銀離子具有協(xié)同作用這一出乎意料的發(fā)現(xiàn)使得能夠使用與通常用于發(fā)揮抗菌活性的每一種藥劑的濃度相比包含濃度降低的每一種藥劑的抗菌組合物，同時(shí)獲得期望的抗菌活性。例如，通常將0.5％w/v濃度的基于硝酸銀的抗菌(防腐)溶液用于治療嚴(yán)重?zé)齻鸞SweetmanSC(ed)Martindale:Thecompletedrugreference35,London:Pharmaceuticalpress,2007]。如上文進(jìn)一步討論，該濃度相對(duì)較高并且會(huì)引起不良反應(yīng)例如傷口著色和刺激。0.5％w/v濃度的硝酸銀對(duì)應(yīng)于約30mM。目前已知的用于局部給藥的組合物中的薄荷醇的濃度為用于治療高熱和黏膜炎(厚重的粘膜滲出液)的施用至鼻粘膜的0.25w/v％至用于治療神經(jīng)痛、座骨神經(jīng)痛和腰痛的20％w/v。上述薄荷醇濃度范圍對(duì)應(yīng)于約15mM至約1.3M。本文中應(yīng)注意盡管薄荷醇的抗菌性質(zhì)是已知的，但是在該領(lǐng)域中未發(fā)現(xiàn)薄荷醇在抗菌組合物中的建議濃度的指示。如下文實(shí)施例部分所示例說(shuō)明的，除非與薄荷醇組合，低于目前抗菌組合物中可接受的濃度的硝酸銀(即0.005％w/v至0.01％w/v，對(duì)應(yīng)于約0.29mM至約0.6mM)具有有限的抗菌活性(參見(jiàn)表1)。以對(duì)應(yīng)于約0.6mM至約6mM的0.01w/v％至0.1w/v％的濃度加入薄荷醇引起抗菌活性大大增強(qiáng)。如下文實(shí)施例部分進(jìn)一步示例說(shuō)明的，上文所述較低濃度的硝酸銀溶液的有限的抗菌活性還從表現(xiàn)出殺菌活性所需的時(shí)長(zhǎng)得以證明(參見(jiàn)，表2)。加入低濃度的薄荷醇引起該時(shí)長(zhǎng)大大縮短。不愿受到任何具體理論的約束，假設(shè)除薄荷醇發(fā)揮的抗菌活性之外，將銀離子與薄荷醇一起給藥時(shí)所觀察到的協(xié)同防腐活性還由薄荷醇充當(dāng)滲透促進(jìn)劑的能力所引起，其增加了滲透進(jìn)入感染區(qū)域和/或微生物細(xì)胞的銀離子的量和滲透速率。因此，根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案，本文所述抗菌組合物中薄荷醇的濃度為約0.3mM至約35mM。以抗菌組合物的總體積計(jì)，該濃度范圍對(duì)應(yīng)于在0.005％w/v至0.5％w/v范圍的％w/v薄荷醇濃度。在一些實(shí)施方案中，薄荷醇的濃度為約0.6mM至約6.4mM。以抗菌組合物的總體積計(jì)，該摩爾濃度范圍對(duì)應(yīng)于0.01％w/v至0.1％w/v的％w/v薄荷醇濃度。在一些實(shí)施方案中，選擇銀離子源的濃度從而提供組合物中約0.05mM至約6mM的銀離子濃度。因此，在一些實(shí)施方案中，銀離子源的濃度使得組合物中銀離子的濃度為例如0.05mM、0.06、mM、0.07mM、0.08mM、0.09mM、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、0.6mM、0.7mM、0.8mM、0.9mM、1mM、1.5mM、2mM、2.5mM、3mM、3.5mM、4mM、4.5mM、5mM、5.5mM或6mM。還設(shè)想0.05mM和6mM之間的任何其他銀離子濃度數(shù)值。在一些實(shí)施方案中，所述銀離子源是AgNO3并且以抗菌組合物的總體積計(jì)AgNO3的濃度為0.001％w/v至0.5％w/v。在一些實(shí)施方案中，以抗菌組合物的總體積計(jì)，AgNO3的濃度為0.005％w/v至0.01％w/v。在一些實(shí)施方案中，以抗菌組合物的總體積計(jì)，AgNO3的濃度為0.001％w/v至0.5％w/v并且薄荷醇的濃度為0.005％w/v至0.5％w/v。在一些實(shí)施方案中，以抗菌組合物的總體積計(jì)，AgNO3的濃度為0.001％w/v至0.5％w/v并且薄荷醇的濃度為0.005％w/v至0.5％w/v?；阢y離子源在所選擇載體中的溶解度和/或降解程度、其分子量以及從銀離子源的每一個(gè)分子生成的銀離子的數(shù)量可容易地確定提供這樣的銀離子濃度的銀離子源的濃度。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.29mM至0.6mM。因此存在于本文所述的抗菌組合物中的銀離子的濃度可為例如0.06mM(0.001％w/vAgNO3)、0.29mM(0.005％w/vAgNO3)、0.6mM(0.01％w/vAgNO3)、2.9mM(0.05％w/vAgNO3)或5.9mM(0.1％w/vAgNO3)，均大大低于現(xiàn)有抗菌組合物中通常使用的銀離子濃度。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.05mM至6mM,并且薄荷醇的濃度為0.29mM至32mM。在一些實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.29mM至0.6mM,并且薄荷醇的濃度為0.6mM至6.4mM。在一實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.29mM,并且薄荷醇的濃度為6.4mM。在另一實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.29mM,并且薄荷醇的濃度為3.2mM。在另一實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.29mM,并且薄荷醇的濃度為0.64mM。在另一實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.4mM,并且薄荷醇的濃度為3.2mM。在另一實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.6mM,并且薄荷醇的濃度為3.2mM。在另一實(shí)施方案中，銀離子的濃度為0.6mM,并且薄荷醇的濃度為0.64mM。在另一實(shí)施方案中，當(dāng)銀離子源是AgNO3時(shí)，以抗菌組合物的總體積計(jì)，AgNO3的濃度為0.01％w/v并且薄荷醇的濃度為0.05％w/v。在另一實(shí)施方案中，以抗菌組合物的總體積計(jì)，AgNO3的濃度為0.01％w/v并且薄荷醇的濃度為0.01％w/v。在另一實(shí)施方案中，以抗菌組合物的總體積計(jì)，AgNO3的濃度為0.0075％w/v并且薄荷醇的濃度為0.05％w/v。在另一實(shí)施方案中，以抗菌組合物的總體積計(jì)，AgNO3的濃度為0.005％w/v并且薄荷醇的濃度為0.1％w/v。在另一實(shí)施方案中，以抗菌組合物的總體積計(jì)，AgNO3的濃度為0.005％w/v并且薄荷醇的濃度為0.05％w/v。在另一實(shí)施方案中，以抗菌組合物的總體積計(jì)，AgNO3的濃度為0.005％w/v并且薄荷醇的濃度為0.01％w/v。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，本文所述抗菌組合物還包含高滲劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)“高滲劑”描述升高在其施用位點(diǎn)的滲透壓的物質(zhì)。高滲劑旨在增加微生物例如細(xì)菌周?chē)臐B透壓從而殺滅或抑制微生物的生長(zhǎng)。包含高滲劑的組合物具有比等滲液體更高的滲透壓。通常，這樣的組合物具有高于生理壓力的滲透壓。適合用于本發(fā)明實(shí)施方案背景中的示例性高滲劑包括但不限于甘油、聚乙二醇(PEG)、多糖、甘露醇以及它們的任意組合。在一些實(shí)施方案中，所述高滲劑與銀離子源和薄荷醇是相容的，使得當(dāng)其存在于抗菌組合物中時(shí)不引起沉淀。因此，選擇高滲劑的濃度使其與它們?cè)诳咕M合物中使用的藥學(xué)可接受的載體中的溶解度相容，從而提供滲透壓高于等滲溶液滲透壓的組合物。在一些實(shí)施方案中，所述高滲劑是生物相容的。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“生物相容的”描述當(dāng)施用至活體器官、細(xì)胞或組織時(shí)無(wú)毒且無(wú)免疫原性的制劑或組合物。在一些實(shí)施方案中，所述高滲劑是丙三醇(甘油)。丙三醇是通常被稱(chēng)作甘油(glycerin)的化學(xué)化合物。其為無(wú)色、無(wú)臭的粘性液體并且具有低毒性，廣泛用于藥劑制劑中。以組合物的總體積計(jì)，甘油優(yōu)選以3％v/v至15％v/v的濃度存在于抗菌組合物中。如本文所使用并且在本領(lǐng)域中，濃度單位“％v/v”描述制劑或組分在組合物總體積中的體積百分?jǐn)?shù)。因此，例如1％v/v表示100ml組合物中含有1ml制劑或組合物。在一些實(shí)施方案中，甘油的濃度為10％v/v。在一些實(shí)施方案中，所述高滲劑是聚乙二醇(PEG)。PEG是柔性的無(wú)毒(生物相容的)水溶性聚合物?？梢陨藤?gòu)300DA至10,000KDa的寬范圍分子量的PEG。由于其特性，PEG可用于產(chǎn)生滲透壓。適用于本實(shí)施方案背景中的示例性PEG包括但不限于可商購(gòu)的低分子量PEG例如PEG200(Da)、PEG300(Da)和PEG400(Da)。以組合物的總體積計(jì)，PEG優(yōu)選以8％至16％v/v的濃度存在于抗菌組合物中。如上文所述，已證明本文所述抗菌組合物形成不含沉淀的澄清溶液。這樣的組合物是有利的因?yàn)楫?dāng)采用任何可用的局部施用技術(shù)時(shí)可容易地將它們施用至表面。在一些情況下，可將增溶劑或任何其他物質(zhì)加入組合物中以輔助其組分的完全溶出。因此，根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案，所述組合物還包含增溶劑。如本文所使用并且在本領(lǐng)域中，術(shù)語(yǔ)“增溶劑”描述能夠輔助不溶性或溶解性差的組分在包含所述組分的溶液中溶解的化學(xué)物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案，增溶劑應(yīng)與所使用的銀離子源相容從而避免不溶性銀鹽沉淀。應(yīng)注意大多數(shù)銀鹽是不溶性的或者在水溶液中具有有限的溶解度，因此應(yīng)根據(jù)其對(duì)組合物中銀溶解度的作用考慮加入本文所述抗菌組合物中的任何組分，從而維持組合物中可溶銀離子的有效濃度。適用于本發(fā)明背景中的增溶劑的代表性實(shí)例包括但不限于形成絡(luò)合物的增溶劑例如環(huán)糊精、聚乙烯吡咯烷酮和形成膠束的增溶劑例如吐溫和司盤(pán)(span)，例如TWEEN80和TWEEN20。適用于本發(fā)明實(shí)施例的背景中的其他增溶劑包括但不限于聚氧乙烯山梨糖脂肪酸酯、聚氧乙烯正烷基醚、正烷基胺正氧化物、泊洛沙姆、有機(jī)溶劑、磷脂和環(huán)糊精。增溶劑的選擇是基于其與銀離子相容而不導(dǎo)致銀在所選載體中沉淀。如下文實(shí)施例部分所述，將薄荷醇與適當(dāng)?shù)脑鋈軇├鏣WEEN20等組合用于本文所述的組合物中。所述增溶劑有助于形成包含銀離子源和薄荷醇的穩(wěn)定且澄清的溶液。因此，在一些實(shí)施方案中，所述增溶劑是TWEEN20。根據(jù)一些實(shí)施方案，薄荷醇和TWEEN20的比為1:10，例如0.05％w/v薄荷醇和0.5％w/vTWEEN20。不愿受到任何具體理論的約束，已表明由于TEEWEN20的滲透促進(jìn)性質(zhì)，所以向本文所述組合物中加入TWEEN20還可提供組合物的增強(qiáng)的活性。因此表明銀離子、薄荷醇和TWEEN20均具有協(xié)同作用，因此進(jìn)一步使得能夠在抗菌組合物中使用低濃度的銀離子同時(shí)表現(xiàn)出期望活性。本文所述抗菌組合物還可包含旨在改進(jìn)或輔助其制備、施用和/或性能的另外的成分。此類(lèi)另外的成分包括例如抗刺激劑、抗起泡劑、潤(rùn)濕劑、除臭劑、止汗劑、pH調(diào)節(jié)劑、抗菌劑、乳化劑、封閉劑、軟化劑、增稠劑、滲透促進(jìn)劑、著色劑、拋射劑(視組合物的最終形式而定)和表面活性劑。適合用于本發(fā)明背景中的潤(rùn)濕劑的代表性實(shí)例包括但不限于胍、乙醇酸和乙醇酸鹽(例如銨鹽和烷基季銨鹽)、以多種形式中的任何一種形式的蘆薈(例如蘆薈凝膠)、尿囊素、尿唑、多羥基醇例如山梨醇、甘油、己烷三醇、丙二醇、丁二醇、己二醇等、聚乙二醇、糖和淀粉、糖和淀粉衍生物(例如烷氧基化葡萄糖)、透明質(zhì)酸、乳酸胺單乙醇胺、乙酰胺單乙醇胺以及它們的任意組合。適合的pH調(diào)節(jié)劑包括例如三咪唑三甲胺緩沖劑和與其他組分相容而不引起任何一種組分沉淀的任何其他緩沖液。適用于本實(shí)施方案背景中的除臭劑的代表性實(shí)例包括但不限于2,4,4'-三氯-2'-羥基二苯基醚和二氨基烷基酰胺例如L-賴(lài)氨酸十六烷基酰胺。適合用于本實(shí)施方案背景中的適合的防腐劑(preservative)包括但不限于一種或多種烷醇、尼泊金例如尼泊金甲酯和尼泊金丙酯、丙二醇、山梨酸酯、尿素衍生物例如重氮烷基脲或它們的任意組合。適合用于本實(shí)施方案背景中的適合的乳化劑包括例如一種或多種山梨糖、烷氧基化脂肪醇、烷基多糖苷、肥皂、烷基硫酸鹽或它們的任意組合。可用于本發(fā)明背景中的適合的封閉劑包括例如凡士林油、礦物油、蜂蠟、硅油、羊毛脂和油溶性羊毛脂衍生物、飽和和不飽和的脂肪醇例如二十二醇、烴例如角鯊?fù)橐约案鞣N動(dòng)物和植物油例如杏仁油、花生油、小麥胚芽油、亞麻籽油、荷荷芭油、杏核油、胡桃油、棕櫚堅(jiān)果油、開(kāi)心果油、芝麻籽油、油菜籽油、杜松油、玉米油、桃核油、罌粟子油、松油、蓖麻油、大豆油、鱷梨油、紅花油、椰子油、榛子油、橄欖油、葡萄籽油以及向日葵籽油。可用于本實(shí)施方案背景中的適合的軟化劑包括例如十二烷、角鯊?fù)椤⒛懝檀肌愂?、異壬酸異壬酯、PEG醚、凡士林油、羊毛脂、紅花油、蓖麻油、椰子油、大豆油、多元醇羧酸酯以及它們的衍生物和它們的混合物?？捎糜诒緦?shí)施方案背景中的適合的增稠劑包括例如非離子水溶性聚合物例如羥乙基纖維素(以商品名250或350購(gòu)買(mǎi))、陽(yáng)離子水溶性聚合物例如Polyquat37(以商品名CN購(gòu)買(mǎi))、脂肪醇以及它們的混合物?？捎糜诒緦?shí)施方案背景中的適合的滲透促進(jìn)劑包括但不限于聚乙二醇單月桂酸酯(PEGML)、丙二醇(PG)、丙二醇單月桂酸酯(PGML)、甘油單月桂酸酯(GML)、卵磷脂、1-取代氮雜環(huán)庚-2-酮，特別是1-正十二烷基環(huán)氮雜環(huán)庚-2-酮(以商品名購(gòu)自WhitbyResearchIncorporated,Richmond,Va.)、醇類(lèi)、薄荷醇、吐溫例如TWEEN20等。滲透促進(jìn)劑還可為植物油。此類(lèi)油包括例如向日葵籽油、棉籽油和玉米油。可用于本實(shí)施方案背景中的適合的抗刺激劑包括例如甾體和非甾體抗炎藥或其他物質(zhì)例如薄荷醇、蘆薈、甘菊、α-紅沒(méi)藥醇、可拉提取物、綠茶提取物、茶樹(shù)油、甘草提取物、尿囊素、咖啡因或其他黃嘌呤、甘草酸及其衍生物。優(yōu)選選擇本文所述的任何另外的成分或物質(zhì)使其與至少組合物中所使用的濃度范圍內(nèi)的銀離子相容，從而不產(chǎn)生沉淀并且不影響組合物中銀離子的利用度。本文所述的任何另外成分被進(jìn)一步優(yōu)選選擇成是生物相容的。應(yīng)注意包含于所述組合物中的一些物質(zhì)或成分可提供雙重作用。例如，使薄荷醇與銀離子協(xié)同作用以增強(qiáng)抗菌活性，但是其還可用作滲透促進(jìn)劑和抗刺激劑。TEEN20可用作增溶劑但是還已知其可充當(dāng)滲透促進(jìn)劑。在一些實(shí)施方案中，所述抗菌組合物還包含另外的治療活性藥劑，例如能夠治療如本文所述的病癥的藥劑或者如下文進(jìn)一步詳述的能夠消毒表面(例如身體表面)的藥劑。在一些實(shí)施方案中，所述抗菌組合物還包含能夠預(yù)防、減少或抑制一種消毒微生物例如細(xì)菌或真菌的生長(zhǎng)的藥劑或者能夠減少一種消毒微生物載量的藥劑。在一些實(shí)施方案中，所述抗菌組合物還包含能夠處理本文所述傷口的另外的藥劑。示例性另外的治療活性藥劑包括但不限于甜菜堿和聚己縮胍?？蓪⒈疚乃龅目咕M合物與藥學(xué)可接受且適合的載體一起配制。本文使用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受的載體”描述用于輔助組合物給藥并且不會(huì)對(duì)有機(jī)體引起明顯的刺激并且不會(huì)破壞所給藥的活性化合物的生物活性和性質(zhì)的載體或稀釋劑。載體的實(shí)例包括但不限于水、緩沖的水性溶液、丙二醇、有機(jī)溶劑和水的乳液和混合物以及固體(例如粉末)和氣體載體。藥劑的制劑和給藥技術(shù)可參見(jiàn)最新版的“Remington’sPharmaceuticalSciences,”MackPublishingCo.,Easton,PA，其通過(guò)援引納入本文。因此可使用一種或多種可輔助將所述化合物加工成可以作為藥劑使用的制劑的藥學(xué)可接受的載體、賦形劑和/或輔劑以常規(guī)方式配制根據(jù)本實(shí)施方案使用的抗菌組合物。所述劑量可隨所使用的劑型和所采用的給藥途徑而變化。每一位醫(yī)生可視患者的病情選擇準(zhǔn)確的制劑、給藥途徑和劑量(參見(jiàn)，例如Fingl等人，1975,“ThePharmacologicalBasisofTherapeutics”,第一章第一頁(yè))。藥學(xué)可接受的載體可以是有機(jī)載體或者水性載體。在一些實(shí)施方案中，所述載體是銀離子源在其中可溶的水性載體。在一些實(shí)施方案中，所述水性載體是緩沖液。水性載體優(yōu)選包括注射用水，即USP級(jí)“注射用水”。但是，其他形式的純化水也可能是適合的，例如蒸餾水和去離子水。水性制劑是優(yōu)選的，因?yàn)檫@些制劑對(duì)皮膚和粘膜組織是溫和的并且適合用于開(kāi)放的傷口。但是也設(shè)想非水性制劑。例如，在抗菌組合物為糊劑或乳劑形式的情況下，只要可以在載體中生成銀離子，可使用非水性載體或水性和有機(jī)載體的混合載體?？蓪⒖咕M合物配置成用于一種或多種途徑給藥，視待治療的區(qū)域而定。根據(jù)一些實(shí)施方案，將所述抗菌組合物配制成用于局部施用，例如局部劑型。本文使用的短語(yǔ)“局部劑型”描述適合用于局部給藥至治療區(qū)域的劑型。通過(guò)選擇適合的載體和任選可包含于所述組合物中的其他成分，可將本文所述抗菌組合物配制成任何正常用于局部施用的形式。因此，本文所述組合物可為例如以下形式：霜?jiǎng)?、軟膏劑、糊劑、凝膠劑、洗劑、乳劑、溶液劑、氣霧劑、噴霧劑、泡沫劑、紗布、擦劑、海綿紗布、無(wú)紡布、棉布、脫脂棉、貼劑和襯墊。示例性局部劑型包括但不限于霜?jiǎng)?、噴霧劑、紗布、擦劑、海綿紗布、無(wú)紡布、棉布、泡沫劑、溶液劑、洗劑、糊劑和凝膠劑。此類(lèi)局部劑型還任選包含用于輔助將組合物長(zhǎng)時(shí)間施用至治療區(qū)域的粘合劑。在一些實(shí)施方案中，將所述抗菌組合物配制成以滴劑、噴霧劑、氣霧劑、液體劑、泡沫劑等施用的液體藥庫(kù)。在這些情況中可使用適合的載體和其他成分。例如，對(duì)于以氣霧劑或泡沫施用可使用拋射劑。在一些實(shí)施方案中，將所述抗菌組合物配制成霜?jiǎng)?。示例性霜?jiǎng)┛赏ㄟ^(guò)將本文所述抗菌組合物與包含纖維素衍生物例如醋酸纖維素、羥乙基纖維素和/或聚乙二醇的載體混合而獲得。待給藥的組合物的量當(dāng)然取決于被治療的個(gè)體、疾病的嚴(yán)重度、給藥方式、處方醫(yī)師的判斷等?？梢曅枰獙⒈景l(fā)明組合物呈現(xiàn)于包裝或分配器中，例如FDA(美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局)批準(zhǔn)的試劑盒，其可包括一個(gè)或多個(gè)包含活性成分的單位劑量形式。所述包裝可包含例如玻璃或塑料箔。所述包裝或分配器可附有給藥說(shuō)明。所述包裝或分配器還可附有由管理藥劑的生產(chǎn)、使用或銷(xiāo)售的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定形式的與所述容器相關(guān)的通告，該通告可反映該機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)所述組合物形式用于人或獸給藥。此類(lèi)通告例如為由美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的用于處方藥的標(biāo)簽或者經(jīng)批準(zhǔn)的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。還可制備配制于相容的藥學(xué)載體中的本發(fā)明組合物，將其置于適合的容器內(nèi)并且標(biāo)注用于消毒或處理傷口，如本文詳述?？梢匀魏伪憷姆绞桨b或呈現(xiàn)本文所述組合物。例如，可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的和參考文獻(xiàn)例如Remington'sPharmaceuticalScience第15版列出的技術(shù)將它們包裝于管、瓶、分配器、可壓縮容器或加壓容器中。優(yōu)選以這樣一種方式進(jìn)行包裝以將未使用的組合物與環(huán)境的接觸降至最低，從而在打開(kāi)容器之前和之后將組合物的污染降至最低。優(yōu)選以預(yù)期使用的濃度提供本文所述組合物，但是還可以制備成在使用前進(jìn)行稀釋的濃縮物。例如設(shè)想需要載體(例如水)與濃縮物為2:1至10:1的稀釋比例的濃縮物。濃縮物的上限受限于較高濃度時(shí)各種組分的溶解度和相容性。在一些實(shí)施方案中，將本文所述抗菌組合物包裝于包裝材料內(nèi)并且如本文所述在包裝材料內(nèi)或包裝材料上以印刷方式指明用于消毒表面。在一些實(shí)施方案中，將本文所述抗菌組合物包裝于包裝材料內(nèi)并且在包裝材料內(nèi)或包裝材料上以印刷方式指明用于消毒身體表面，如下文進(jìn)一步詳述。在一些實(shí)施方案中，將本文所述抗菌組合物包裝于包裝材料內(nèi)并且在包裝材料內(nèi)或包裝材料上以印刷方式指明用于處理傷口。在一些實(shí)施方案中，將本文所述抗菌組合物包裝于包裝材料內(nèi)并且在包裝材料內(nèi)或包裝材料上以印刷方式指明用于治療感染，如下文進(jìn)一步詳述。本文所述組合物作為消毒劑和在處理傷口中的功效在下文實(shí)施例部分得到很好的證明。因此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的另一方面提供試劑盒，其包含包裝于所述包裝材料內(nèi)的本文所述的抗菌組合物。如本文所述，例如通過(guò)在包裝材料內(nèi)或包裝材料上以印刷方式標(biāo)注所述試劑盒用于消毒和/或處理傷口?？蓪⒖咕M合物的多種組分一起包裝于包裝材料內(nèi)作為單一組合物，或者單獨(dú)包裝至少一種組分。當(dāng)單獨(dú)包裝一種或多種組分時(shí)，還為所述試劑盒提供指明制備可立即使用的抗菌組合物的方法的說(shuō)明書(shū)。此類(lèi)說(shuō)明書(shū)可與例如下文詳細(xì)描述的制備抗菌組合物的方法一致。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案的另一方面，提供消毒基體(substrate)的方法，其通過(guò)將有效量的本文所述抗菌組合物施用至所述基體上而實(shí)現(xiàn)，由此消毒所述基體。如本文通篇使用，術(shù)語(yǔ)“消毒”指減少基體內(nèi)或基體上的微生物載量，降低基體內(nèi)或基體上的微生物生長(zhǎng)速率、抑制或防止基體內(nèi)或基體上的微生物的生長(zhǎng)和/或消除基體內(nèi)或基體上的微生物。本文使用的術(shù)語(yǔ)“基體”指可不利地荷載、容納或促進(jìn)其表面上的微生物生長(zhǎng)的任何結(jié)構(gòu)、產(chǎn)品或材料。非限制性實(shí)例包括醫(yī)療設(shè)備、醫(yī)療儀器、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)產(chǎn)品的容器、包裝材料、用于藥學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)、營(yíng)養(yǎng)制品和食品工業(yè)的工業(yè)儀器和機(jī)器、墻壁、建筑、倉(cāng)庫(kù)、艙室、容器或運(yùn)輸工具、染料或油漆和任何其他材料以及需要保護(hù)它們的表面不被微生物侵襲的材料和工業(yè)化合物例如建筑材料。根據(jù)一些實(shí)施方案，通過(guò)例如用組合物洗滌基體、將組合物分散至基體表面、將組合物噴灑至基體表面或者將基體浸漬在組合物中實(shí)現(xiàn)將抗菌組合物施用至基體上。施用途徑至少部分取決于組合物的形式。根據(jù)一些實(shí)施方案，所述基體為有此需要的個(gè)體的身體表面。本文使用的術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”指任何動(dòng)物例如哺乳動(dòng)物，包括但不限于人、非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、哺乳動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物以及接受具體治療的任何其他動(dòng)物。通常，提及人類(lèi)個(gè)體時(shí)，術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”和“患者”在本文中可互換使用。根據(jù)一些實(shí)施方案，通過(guò)將抗菌組合物局部施用至身體表面上實(shí)現(xiàn)所述方法。根據(jù)一些實(shí)施方案，所述身體表面為可從局部施用受益的皮膚、皮膚組織、粘膜組合或者任何其他被感染的或可能被感染的身體區(qū)域。因此，本文所述抗菌組合物可用于消毒被感染的區(qū)域(例如急性或慢性傷口，如下文詳述)或者用于預(yù)防存在被感染風(fēng)險(xiǎn)的區(qū)域的感染。后者包括例如手術(shù)傷口、急性傷口、潰瘍等，它們非常容易被各種微生物感染。如上文所述，本文所述抗菌組合物表現(xiàn)出對(duì)各種細(xì)菌菌株的有效的殺菌活性以及對(duì)各種真菌菌株的有效的殺真菌活性。因此，本文所述抗菌組合物可用于處理傷口，其中在傷口中減少微生物載量具有治療益處。因此，根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案的一方面提供在有此需要的個(gè)體中處理傷口的方法，所述方法包括將有效量的本文所述抗菌組合物施用至傷口區(qū)域，由此處理該傷口。根據(jù)一些實(shí)施方案，通過(guò)將抗菌組合物局部施用至傷口區(qū)域上實(shí)現(xiàn)所述方法。本文使用的術(shù)語(yǔ)“傷口”應(yīng)根據(jù)其最寬泛的含義理解為用以描述受損的或被破壞的皮膚或粘膜區(qū)域，不論是否包含失活的或者焦痂組織，并且包括任何類(lèi)型的傷口，包括但不限于急性傷口、慢性傷口、手術(shù)傷口、燒傷等。本文使用的術(shù)語(yǔ)“皮膚損傷”描述受損的皮膚并且在整個(gè)本申請(qǐng)中可與術(shù)語(yǔ)“傷口”互換使用。術(shù)語(yǔ)“傷口區(qū)域”描述與傷口相鄰的區(qū)域。該區(qū)域通常從緊鄰傷口延伸約30cm。應(yīng)理解傷口周?chē)鷧^(qū)域的內(nèi)界可與傷口的形狀一致或平行。術(shù)語(yǔ)“急性傷口”描述由外傷性磨損、撕裂或經(jīng)表面損傷引起的并且最終通過(guò)傷口愈合的正常階段(例如止血、炎癥、增殖和重塑)自動(dòng)愈合而無(wú)并發(fā)癥的傷口。但是急性傷口如果與導(dǎo)致局部感染的致病微生物接觸會(huì)出現(xiàn)并發(fā)癥。在本文中可互換使用的短語(yǔ)“手術(shù)傷口”和“手術(shù)性傷口”描述由于手術(shù)而形成的傷口。手術(shù)傷口感染是常見(jiàn)感染，占所有醫(yī)院獲得性感染的12％。感染率視所進(jìn)行手術(shù)的類(lèi)型而變化。特別高的感染率與被污染的手術(shù)例如結(jié)直腸手術(shù)或者對(duì)外傷性傷口的延期手術(shù)相關(guān)。手術(shù)傷口感染通常是由患者的正常菌群或者來(lái)自環(huán)境或醫(yī)務(wù)人員皮膚上的細(xì)菌引起的。導(dǎo)致手術(shù)傷口感染的最常見(jiàn)的微生物是金黃色葡萄球菌。其他常見(jiàn)的成因微生物包括其他革蘭氏陰性好氧菌、鏈球菌屬和厭氧菌。術(shù)語(yǔ)“燒傷”描述由熱、冷、電、化學(xué)物質(zhì)、光、輻射或摩擦引起的傷口。燒傷就受影響的組織、嚴(yán)重度以及所引起的并發(fā)癥而言是高度變化的。肌肉、骨、血管和上皮組織均可受到損傷并且由于對(duì)神經(jīng)末梢的長(zhǎng)期損傷繼而產(chǎn)生疼痛。根據(jù)受影響的位置和嚴(yán)重度，燒傷患者可能會(huì)經(jīng)歷多種可能致命的并發(fā)癥，包括休克、感染、電解質(zhì)失衡和呼吸性窘迫。感染是燒傷最常見(jiàn)的并發(fā)癥并且是燒傷患者的主要死因。每年有超過(guò)一萬(wàn)的美國(guó)人死于燒傷的感染性并發(fā)癥。通常感染燒傷傷口的致病微生物包括例如革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌例如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和革蘭氏陰性細(xì)菌例如鮑氏不動(dòng)桿菌-乙酸鈣復(fù)合物、綠膿假單胞菌和克雷伯氏菌屬。術(shù)語(yǔ)“慢性傷口”描述正常出現(xiàn)在以一些方式受影響的患者中并且難以愈合的無(wú)血塊形成的傷口。慢性傷口的實(shí)例為慢性皮膚潰瘍例如糖尿病潰瘍、褥瘡潰瘍(壓瘡)和靜脈性潰瘍。術(shù)語(yǔ)“糖尿病潰瘍”描述由與糖尿病相關(guān)的因素的組合引起的傷口，所述因素是例如循環(huán)減少、感覺(jué)喪失、結(jié)構(gòu)性足畸形和皮膚完整性受損。糖尿病潰瘍可為不會(huì)及時(shí)且有序愈合的皮膚簡(jiǎn)單破裂或者延伸至深層結(jié)構(gòu)和骨的傷口。糖尿病潰瘍經(jīng)常是細(xì)菌和真菌微生物侵襲人體的進(jìn)入點(diǎn)并且引起危機(jī)四肢和生命的感染，在本領(lǐng)域中通常被稱(chēng)作糖尿病性感染。糖尿病性感染通常是由多種好氧和厭氧微生物引起的涉及多種微生物的感染。金黃色葡萄球菌、β-溶血性鏈球菌、腸桿菌科、脆弱擬桿菌、消化球菌和消化鏈球菌是從糖尿病潰瘍培養(yǎng)獲得的示例性菌株。短語(yǔ)“褥瘡潰瘍”，也稱(chēng)作“壓瘡”，描述由諸如壓力、摩擦、潮濕、剪切力、溫度、年齡、自控和藥劑的各種因素對(duì)身體任何部分特別是骨和軟骨區(qū)例如薦骨、肘、膝蓋、踝等上面的部分引起的皮膚損傷。盡管如果在早期發(fā)現(xiàn)容易預(yù)防并且完全可以治愈，但是褥瘡潰瘍通常是致命的并且是發(fā)達(dá)國(guó)家所報(bào)導(dǎo)的主要醫(yī)源性死因之一。褥瘡潰瘍可由血液供給不足和當(dāng)血液重新進(jìn)入組織時(shí)引起的再灌注不足引起。從壓瘡分離的最常見(jiàn)的微生物為奇異變形桿菌、D族鏈球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄菌屬、假單胞菌屬和棒狀桿菌屬微生物。術(shù)語(yǔ)“靜脈性潰瘍”描述被認(rèn)為是由于通常是腿的靜脈瓣功能障礙引起靜脈壓力增加而出現(xiàn)的傷口。它們是慢性傷口的主要誘因，出現(xiàn)在約30-40％的慢性傷口病例中。大多數(shù)靜脈性潰瘍被細(xì)菌例如金黃色球菌、大腸桿菌、變形菌和假單胞菌嚴(yán)重感染。如上文所述，通過(guò)本文所述抗菌組合物減少急性傷口和慢性傷口例如糖尿病潰瘍、褥瘡潰瘍(壓瘡)、靜脈性潰瘍以及燒傷的細(xì)菌細(xì)胞載量具有治療益處。如上文進(jìn)一步描述，已發(fā)現(xiàn)本文所述抗菌組合物可有效抑制各種細(xì)菌菌株的生長(zhǎng)。例如，已證明根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案的一種組合物即0.01％銀離子和0.05％薄荷醇的溶液在接觸后可有效殺滅細(xì)菌菌株大腸桿菌ATCC47076、克雷伯氏肺炎桿菌、金黃色葡萄球菌的耐甲氧西林臨床菌株(MRSA)、表皮葡萄球菌的臨床菌株、產(chǎn)超廣譜內(nèi)酰胺酶的大腸桿菌的臨床菌株、多重耐藥性鮑氏不動(dòng)桿菌的臨床菌株以及多重耐藥性綠膿假單胞菌的臨床菌株并且阻止它們的生長(zhǎng)(參見(jiàn)，表3和4)。還證明了根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施方案的一種組合物即0.01％銀離子和0.05％薄荷醇的溶液表現(xiàn)出對(duì)紅色毛癬菌臨床菌株和犬小孢子菌臨床菌株的殺真菌活性(參見(jiàn)，下文實(shí)施例6和圖2-4)。2-4).因此，由于本文所述抗菌組合物對(duì)包括已知從傷口區(qū)域分離的菌株在內(nèi)的各種細(xì)菌和真菌菌株的抗菌活性，它們可有效用于傷口處理。如本文進(jìn)一步論述和下文實(shí)施例部分所例證，已表明本文所述抗菌組合物可有效抑制微生物生長(zhǎng)并且有效阻止各種微生物在非無(wú)菌(未消毒的)樣品中的生長(zhǎng)。因此，本文所述抗菌組合物可用于治療或預(yù)防感染的方法中。所述感染可為細(xì)菌感染、真菌感染以及由酵母引起的感染，或它們的組合。本文所述包含銀離子和薄荷醇的組合物的抗真菌活性在慢性糖尿病足潰瘍的情況下以及在甲癬(真菌指甲感染，主要由皮癬菌紅色毛癬菌引起)、皮膚癬菌病例如腳癬(腳氣，也是由紅色毛癬菌引起)和體癬(皮癬菌侵入皮膚)以及主要由犬小孢子菌引起的頭癬(頭皮癬和皮癬菌侵入頭發(fā))的抗真菌治療中具有很大的治療潛力。糖尿病和真菌足感染發(fā)病率之間存在顯著相關(guān)性：在非糖尿病老年群體中該發(fā)病率為60％，在糖尿病個(gè)體中該發(fā)病率增加至80％。糖尿病對(duì)腳癬和甲癬二者的發(fā)病率具有顯著的不利作用，導(dǎo)致x1.48的增加比率。通常與腳癬相關(guān)的甲癬大大增加了其他感染和損傷的風(fēng)險(xiǎn)，最終導(dǎo)致潰瘍和截肢。糖尿病患者中腳癬的發(fā)病率為32％，相比而言對(duì)照群體中為7％[GuptaAK,HumkeS(2000)EurJDermatol10:379-384；Saunte等人，(2006)ActaDermVenereol86:425-428]。因此本文中通篇使用的術(shù)語(yǔ)“消毒”包括治療如本文所述的感染。另外，本文所述的抗菌組合物還可用作防腐劑，用于預(yù)防或減少非無(wú)菌條件下和/或懷疑不利地為非無(wú)菌條件下的微生物載量的形成。因此可將本文所述抗菌組合物加入例如貯存容器中特別是用于保存和/或運(yùn)輸醫(yī)用產(chǎn)品例如醫(yī)療設(shè)備、藥用活性物質(zhì)和藥劑的容器中。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的另一些方面，提供了本文所述抗菌組合物在制備用于消毒本文所述基體的產(chǎn)品中的用途。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的另一些方面，提供了本文所述抗菌組合物在制備如本文所述的用于消毒身體區(qū)域表面和/或處理傷口的藥劑中的用途。在本文所述的任何方法和用途中，可使用任何適合的方式將抗菌組合物施用至治療區(qū)域。通常，將一些類(lèi)型的吸收劑例如紗布、泡沫海綿、無(wú)紡布、棉布、棉拭子或棉球等浸漬于組合物中并且施用至傷口上。或者，所述組合物可為噴霧劑或氣霧劑的形式，其還可包含例如成膜劑。因此可通過(guò)噴霧將所述組合物施用至治療區(qū)域。又或者，所述組合物為霜?jiǎng)?、糊劑或凝膠劑的形式并且通過(guò)涂抹或者通過(guò)敷用包含所述組合物的粘性貼劑施用至傷口上。又或者且優(yōu)選地，通過(guò)將所述抗菌組合物以連續(xù)液流施用至傷口上和通過(guò)傷口從而將與傷口接觸的抗菌劑物和高滲劑的濃度保持恒定，可達(dá)到較高的傷口愈合率。因此，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，通過(guò)使抗菌組合物液流在傷口區(qū)域上流動(dòng)并流過(guò)傷口區(qū)域進(jìn)行本文所述抗菌組合物的局部施用。將本文所述組合物液流在傷口上并通過(guò)傷口遞送預(yù)定的一段時(shí)間。根據(jù)一些實(shí)施方案，將連續(xù)遞送組合物液流進(jìn)行至少5分鐘，在一些實(shí)施方案中為至少15分鐘，在一些實(shí)施方案中為至少30分鐘，在一些實(shí)施方案中為至少1小時(shí)。對(duì)傷口進(jìn)行監(jiān)測(cè)以評(píng)價(jià)減少微生物載量和傷口愈合的進(jìn)展。通過(guò)停止組合物液流并且除去任何阻礙患者自由移動(dòng)的導(dǎo)管可實(shí)現(xiàn)短時(shí)間暫停治療?？蓪⑴c導(dǎo)管重新連接的封閉敷料留在傷口上?？墒褂萌绻_(kāi)號(hào)為2004/0186421或WO2005/070480的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)所記載的裝置進(jìn)行治療，所述申請(qǐng)通過(guò)援引并入本文視同其全文在本文中陳述。根據(jù)示例性實(shí)施方案，此類(lèi)裝置包括具有在其中形成的至少一個(gè)孔隙和用于將該裝置固定在皮膚損傷周?chē)钠つw上的裝置的殼體，其中所述殼體包括(i)至少一個(gè)具有第一縱軸的入口管，并且被構(gòu)造成可沿著其經(jīng)過(guò)孔隙的縱軸調(diào)節(jié)；和(ii)至少一個(gè)具有第二縱軸的出口管。所述裝置還包括適用于裝載抗菌組合物的貯器，所述貯器與一個(gè)或多個(gè)入口成液體流通。出口可包括用于控制貯器和治療區(qū)之間的流量的閥門(mén)。優(yōu)選地，所述出口還可包括能夠?qū)んw與貯器斷開(kāi)和重新連接的裝置，由此能夠暫停治療。將患者與液流裝置斷開(kāi)和再連接的簡(jiǎn)單性使能夠?qū)⒖咕M合物施用更長(zhǎng)的時(shí)間?？咕M合物液流可持續(xù)至少一小時(shí)或者持續(xù)數(shù)小時(shí)，視個(gè)體需要而定。根據(jù)一些實(shí)施方案，所述液流是由來(lái)自至少一個(gè)包含所述抗菌組合物的貯器的重力引起的。根據(jù)一些實(shí)施方案，所述液流是由與至少一個(gè)包含所述抗菌組合物的貯器成液體流通的泵引起的。在一些實(shí)施方案中，所述液流是由不與流動(dòng)液直接接觸的蠕動(dòng)泵引起的。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的另一方面提供了制備如本文所述的抗菌組合物的方法，所述方法包括將銀離子源、薄荷醇和藥學(xué)可接受的載體混合，從而獲得抗菌組合物。根據(jù)一些實(shí)施方案中，所述方法還包括將高滲劑與所述組合物混合。組合物組分(即銀離子源、薄荷醇、藥學(xué)可接受的載體以及任選高滲劑)的加入順序可隨例如對(duì)溶解度的考慮而變化。因此，例如可通過(guò)制備銀離子源和載體的溶液并且向其中加入薄荷醇來(lái)實(shí)施所述方法?；蛘撸赏ㄟ^(guò)制備薄荷醇和載體的溶液并且向其中加入銀離子源來(lái)實(shí)施所述方法。如果存在高滲劑，可在加入銀離子或薄荷醇中的任何一種之前或之后加入。相似地，可在任何階段向組合物中加入如上文所述的任何其他成分。根據(jù)一些實(shí)施方案，所述方法還包括將所述薄荷醇與本文所述的增溶劑例如TWEEN20混合，由此獲得薄荷醇和增溶劑的溶液；并且將所述薄荷醇溶液與所述組合物混合。在一些實(shí)施方案中，所述增溶劑是TWEEN20。在一些實(shí)施方案，薄荷醇和TWEEN20的重量比為1:10。在一些實(shí)施方案中，以薄荷醇和TWEEN20溶液的總體積計(jì)，以0.5％w/v的濃度使用TWEEN20。在一些實(shí)施方案中，銀離子源和薄荷醇的量使得混合后銀離子的終濃度為0.05mM至30mM并且薄荷醇的終濃度為0.3mM至32mMw。在一些實(shí)施方案中，銀離子源的終濃度為0.3mM至0.6mM,并且薄荷醇的終濃度為0.6mM至6.4mM。考慮到將薄荷醇和銀離子源組合所表現(xiàn)出的協(xié)同作用使的能夠與現(xiàn)有抗菌產(chǎn)品相比使用濃度大大降低的銀離子，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的另一方面提供降低包含銀離子(作為活性成分)的抗菌組合物中銀離子濃度的方法。根據(jù)這些實(shí)施方案，通過(guò)將協(xié)同有效量的薄荷醇與銀離子源混合實(shí)現(xiàn)所述方法。在一些實(shí)施方案中，與不含協(xié)同有效量的薄荷醇的抗菌組合物相比銀離子濃度被降低至少2倍、至少3倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍甚至以級(jí)數(shù)降低并且甚至是其兩倍，或者被降低30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍和100倍。在一些實(shí)施方案中，與不含協(xié)同有效量的薄荷醇的抗菌組合物相比，銀離子濃度被降低50倍。短語(yǔ)“抗菌有效量”描述表現(xiàn)出如本文定義的抗菌活性的物質(zhì)(在文中為銀離子源)的量。術(shù)語(yǔ)“協(xié)同有效量”描述與抗菌組合物中的銀離子源混合后的薄荷醇的濃度，其引起如本文定義的銀離子與薄荷醇組合的協(xié)同作用。又根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案提供了增加包含濃度低于6mM的銀離子源的抗菌組合物的抗菌活性的方法，所述方法包括將該抗菌組合物與協(xié)同有效量的薄荷醇混合。可根據(jù)本所述的抗菌組合物的制備方法實(shí)現(xiàn)將薄荷醇與抗菌組合物混合。因此，還可將另外的成分例如高滲劑和增溶劑與銀離子混合。應(yīng)理解，為了清楚起見(jiàn)描述于不同實(shí)施方案背景中的本發(fā)明的某些特征還可組合提供于一個(gè)實(shí)施方案中。相反的，為了簡(jiǎn)略起見(jiàn)描述于一個(gè)實(shí)施方案中的本發(fā)明的各種特征還可單獨(dú)地或以任何適合的亞組合或適合地在本發(fā)明的任何其他所述實(shí)施方案中提供。不應(yīng)認(rèn)為各種實(shí)施方案背景中描述的某些特征是那些實(shí)施方案的必要特征，除非在不存在這些元素的情況下無(wú)法實(shí)施該實(shí)施方案。如上文所述以及如下文權(quán)利要求部分所要求的本發(fā)明的各種實(shí)施方案和方面可在以下實(shí)施例中得到試驗(yàn)支持。實(shí)施例現(xiàn)參考以下實(shí)施例，其與上文說(shuō)明一起以非限制性方式舉例說(shuō)明本發(fā)明的一些實(shí)施方案。材料和試驗(yàn)方法材料：通過(guò)磁力攪拌并且略微加熱將10克Tryptone(Cat.No.161200,Pronadisa,Conda)、5克酵母提取物(Cat.No.212750,DIFCO)、10克NaCl(Cat.No.1.06404.1000,Merck)和2克葡萄糖(Cat.No.1.08337.1000,Merck)溶解于終體積為1升的高純化水中制備LB培養(yǎng)基。通過(guò)向LB培養(yǎng)基中加入15克Bacto瓊脂(Cat.No.214010,BD)制備LB-瓊脂培養(yǎng)基。BHI生長(zhǎng)培養(yǎng)基獲自LaboratoryofMolecularEpidemiologyandAntimicrobialResistance(分子流行病學(xué)和抗微生物抗性實(shí)驗(yàn)室),TelAvivSouraskyMedicalCenter。NaNO3獲自Riedel-deHa?N(Cat.No.31440)。TWEEN20(Cat.No.8.17072.1000)、AgNO3(Cat.No.1.01510.0050)、薄荷醇(Cat.No.1.05995.1000)、甘油(Cat.No.1.04093.1000)、Tris(Cat.No.1.08386.1000)和冰醋酸(Cat.No.1.00056.2500)獲自默克。組合物通過(guò)向50mMTris-緩沖液中加入終濃度為10％的甘油(高滲劑)、薄荷醇(0.5％TWEEN-20)和硝酸銀制備硝酸銀和薄荷醇的溶液。用冰醋酸將終組合物調(diào)節(jié)至pH7.45，然后濾過(guò)0.22μmPES膜濾器。如此獲得的無(wú)菌溶液是澄清且不含沉淀的。通用方案：E.大腸桿菌生長(zhǎng)方案：使大腸桿菌ATCC47076的冷凍原種在搖床培養(yǎng)箱(37℃，200rpm)中過(guò)夜生長(zhǎng)(9mlLB培養(yǎng)基中1ml)直至培養(yǎng)基的OD600達(dá)到1.6-1.8。然后將一毫升培養(yǎng)基等分試樣轉(zhuǎn)移至50ml新鮮無(wú)菌LB培養(yǎng)基中并置于搖床培養(yǎng)箱中(37℃，200rpm)培養(yǎng)兩小時(shí)直至培養(yǎng)基的OD600nm達(dá)到0.6-0.8(2x108菌落形成單位/ml(CFU/ml))。通過(guò)用無(wú)菌培養(yǎng)基稀釋將細(xì)菌懸浮液調(diào)節(jié)至108CFU/ml。然后用0.9％NaNO3將細(xì)菌細(xì)胞洗滌三遍。按照以下步驟進(jìn)行NaNO3洗滌循環(huán)：將5ml細(xì)菌懸浮液轉(zhuǎn)移至15ml試管中并且于4℃將懸浮液4000rpm離心4分鐘，然后除去上清并且將細(xì)菌細(xì)胞團(tuán)塊(pellet)重懸于5ml0.9％NaNO3中。通過(guò)向如上文所述制備的細(xì)菌細(xì)胞團(tuán)塊中加入5ml供試組合物并且通過(guò)渦旋將細(xì)胞團(tuán)塊重懸來(lái)評(píng)價(jià)銀離子(來(lái)自AgNO3)和薄荷醇(加入0.5％TWEEN20增溶)的各種濃度的組合物的殺菌活性。僅包含0.9％NaNO3的試管充當(dāng)對(duì)照。將如此獲得的細(xì)菌懸浮液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌玻璃試管以減少細(xì)胞與管壁的潛在吸附并且在整個(gè)檢測(cè)階段于37℃保持覆蓋。靜止溫育5分鐘后，移除100μl被處理的細(xì)菌懸浮液，并且將該懸浮液在0.9％NaNO3中的1比10十倍稀釋物10μl滴到LB瓊脂板上。通過(guò)對(duì)生長(zhǎng)在培養(yǎng)板上的菌落數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)并且計(jì)算37℃培養(yǎng)18小時(shí)后的CFU/ml和log10CFU/ml評(píng)價(jià)細(xì)菌增殖水平。對(duì)與特定組合溫育的細(xì)菌懸浮液計(jì)算得到的較高的log10CFU/ml表明該組合較低的殺菌活性水平。其他細(xì)菌細(xì)胞系的生長(zhǎng)方案：從LaboratoryofMolecularEpidemiologyandAntimicrobialResistance(分子流行病學(xué)和抗微生物抗性實(shí)驗(yàn)室),TelAvivSouraskyMedicalCenter的臨床菌株收集中心獲得各種細(xì)菌細(xì)胞系。因此檢測(cè)供試抗菌組合對(duì)克雷伯氏肺炎桿菌、金黃色葡萄球菌的耐甲氧西林臨床菌株(MRSA)、表皮葡萄球菌的臨床菌株、產(chǎn)超廣譜內(nèi)酰胺酶的大腸桿菌的臨床菌株、多重耐藥性鮑氏不動(dòng)桿菌的臨床菌株以及多重耐藥性綠膿假單胞菌的臨床菌株的殺菌活性。細(xì)菌生長(zhǎng)方案基本如上文所述，只是細(xì)菌細(xì)胞系在BHI生長(zhǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)(并且在細(xì)菌于培養(yǎng)基中生長(zhǎng)之后，通過(guò)用無(wú)菌培養(yǎng)基稀釋將細(xì)菌懸浮液調(diào)節(jié)至107CFU/ml)。另外，在這些試驗(yàn)中，每一種細(xì)菌懸浮液與銀離子+薄荷醇組合的靜止溫育時(shí)間為0、30和60分鐘。協(xié)同作用：為了評(píng)價(jià)薄荷醇和銀離子是否具有協(xié)同作用，將一起給藥薄荷醇和銀離子時(shí)觀察到的殺菌活性與單獨(dú)給藥每一種這些化合物觀察到的殺菌活性進(jìn)行比較(根據(jù)以下方法測(cè)定：Lehmann,2000.YnergisminDisinfectantFormulation,inDisinfection,Sterilization,andPreservation，第5版，S.S.Block編輯，LippincottWilliamsandWilkins.第459-472頁(yè))。在以下情況中認(rèn)為組合具有協(xié)同作用：薄荷醇和銀離子的殺菌活性大于當(dāng)以特定的濃度單獨(dú)檢測(cè)每一種化合物時(shí)觀察到的殺菌活性的累加值；或者檢測(cè)到薄荷醇和銀離子的某一水平的殺菌活性的時(shí)間短于以特定的濃度單獨(dú)檢測(cè)每一種物質(zhì)時(shí)測(cè)定的時(shí)間。實(shí)施例110％(v/v)甘油高滲溶液中的薄荷醇和銀離子對(duì)大腸桿菌ATCC47076的殺菌活性的協(xié)同作用為了評(píng)價(jià)薄荷醇和銀離子之間殺菌活性的協(xié)同作用，使用銀離子和薄荷醇的各種濃度的組合，如表1所示。結(jié)果總結(jié)于表1并且顯示出分別觀察到0.005％(w/v)+0.1％(w/v)、0.005％+0.05％、0.0075％+0.05％、0.01％+0.05％和0.01％+0.01％w/v(對(duì)應(yīng)于表1中的陰影區(qū)域)的銀離子(來(lái)自AgNO3)和薄荷醇組合的協(xié)同作用。這些濃度對(duì)應(yīng)于以下組合的銀離子和薄荷醇組合：0.29mM+6.4mM、0.29mM+3.2mM、0.44mM+3.2mM、0.6mM+3.2mM和0.6mM+0.64mM。表1的左邊部分表示所觀察到的每一種組合殺滅的細(xì)菌細(xì)胞百分?jǐn)?shù)而表1的右邊部分表示將薄荷醇和銀離子的殺菌活性自然累加而非協(xié)同作用下的預(yù)期殺滅細(xì)菌細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。表1a通過(guò)暴露于指定的薄荷醇和AgNO3組合而被殺滅的大腸桿菌細(xì)胞百分?jǐn)?shù)b當(dāng)假設(shè)薄荷醇和銀離子之間為累加活性而非協(xié)同活性時(shí)指定組合殺滅的預(yù)期大腸桿菌百分?jǐn)?shù)。選擇0.01％銀離子和0.05％薄荷醇的協(xié)同組合用于進(jìn)一步研究。實(shí)施例2含10％(v/v)甘油的高滲溶液中0.01％(w/v)銀離子和0.05％(w/v)薄荷醇組合對(duì)各種類(lèi)型細(xì)菌的殺菌活性評(píng)價(jià)0.01％(w/v)銀離子和0.05％(w/v)薄荷醇(用0.5％(v/v)TWEEN20增溶)組合對(duì)各種類(lèi)型細(xì)菌的生長(zhǎng)和生存力的作用。將僅與NaNO30.9％(w/v)溶液溫育而不加入任何抗菌物質(zhì)的細(xì)胞用作對(duì)照。將殺菌活性定義為與對(duì)照相比菌落計(jì)數(shù)減少5-log10或更低(根據(jù)Cremieux,MethodsoftestingDisinfectants,inDisinfection,Sterilization,andPreservation第5版，S.S.Block編輯，2000,LippincottWilliamsandWilkins,第1305-1328頁(yè))。表2示出了未與抗菌劑(對(duì)照)溫育、單獨(dú)與0.01％銀離子(0.01％AgNO3)溫育、單獨(dú)與0.05％薄荷醇溫育或與0.01％銀離子和0.05％薄荷醇組合溫育0、30和60分鐘的不同類(lèi)型的細(xì)菌細(xì)胞懸浮液的計(jì)算所得log10CFU/ml。將基線水平定義為當(dāng)向細(xì)菌懸浮液中加入非抗菌劑時(shí)于時(shí)間0觀察到的細(xì)菌生長(zhǎng)。結(jié)果清楚地證明了細(xì)菌懸浮液與0.01％銀離子和0.05％薄荷醇組合溫育后細(xì)菌生存力被完全消除。除了在金黃色葡萄球菌的耐甲氧西林臨床菌株中在殺滅所有細(xì)菌后30分鐘觀察到生存力即刻降低50％之外，所有作用均立刻顯現(xiàn)(于時(shí)間點(diǎn)0)。表2a當(dāng)用指定處理將細(xì)菌懸浮液處理0、30和60分鐘后細(xì)菌的log10CFU/ml。這些結(jié)果指出將銀離子和薄荷醇組合所表現(xiàn)出的協(xié)同殺菌活性。實(shí)施例3測(cè)定0.01％(w/v)銀離子和0.05％(w/v)薄荷醇組合的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)通法：使用試管稀釋法進(jìn)行試驗(yàn)用于測(cè)定供試銀離子-薄荷醇組合對(duì)供試微生物的有效使用稀釋度。在細(xì)菌生長(zhǎng)培養(yǎng)基中對(duì)供試樣品進(jìn)行系列稀釋。將供試微生物加入產(chǎn)品稀釋物中并且溫育使其生長(zhǎng)。將表現(xiàn)出無(wú)供試微生物的可見(jiàn)生長(zhǎng)的供試樣品稀釋物接種以驗(yàn)證該產(chǎn)品的致死率。該操作為用于抗菌藥劑的標(biāo)準(zhǔn)敏感性測(cè)定法并且并入了美國(guó)微生物學(xué)會(huì)(ASM)的目的(intent)。于≥70％驗(yàn)證中和作用。供試樣品：所使用的供試樣品取自包含0.1mg硝酸銀每1ml緩沖液的250ml原種溶液。每一份供試樣品包含以下組分：甘油：10％v/v薄荷醇：0.05％w/vTWEEN20:0.5％v/vAgNO3:0.01％w/vTris:50mM供試微生物：在該試驗(yàn)中使用以下微生物菌株：E.大腸桿菌ATCCNo.8739；表皮葡萄球菌ATCCNo.12228；克雷伯氏肺炎桿菌ATCCNo.4352和金黃色葡萄球菌ATCCNo.6538。試驗(yàn)方案：可接受標(biāo)準(zhǔn)：所有陽(yáng)性對(duì)照均表現(xiàn)出目標(biāo)微生物的生長(zhǎng)。所有培養(yǎng)基和陰性對(duì)照不應(yīng)表現(xiàn)出目標(biāo)微生物生長(zhǎng)。培養(yǎng)物制備：用細(xì)菌的原種培養(yǎng)物接種含大豆酪蛋白消化肉湯(SCDB)的試管內(nèi)并且于37℃培養(yǎng)18-48小時(shí)。必要時(shí)，根據(jù)目測(cè)濁度通過(guò)在0.9％硝酸鈉(NaNO3)中稀釋將培養(yǎng)物濃度調(diào)節(jié)至約108菌落形成單位(CFU)/ml。檢測(cè)當(dāng)日，通過(guò)在0.9％NaNO3中稀釋并且一式三份接種至含中和劑的瓊脂板上以測(cè)定起始滴度對(duì)懸浮液進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)。MIC測(cè)定操作：將上文所述供試樣品在無(wú)菌純化水(PURW)中兩倍系列稀釋。然后，將5ml的每一種稀釋物加入5ml2X培養(yǎng)基中。最終供試稀釋物為1:2至1:4096。通過(guò)將5mlPURW與5ml2X培養(yǎng)基混合和為每一種微生物制備兩個(gè)陽(yáng)性對(duì)照管。將5ml最低樣品稀釋物與5ml2X培養(yǎng)基混合為每一種樣品制備兩個(gè)陰性對(duì)照管。通過(guò)將5mlPURW與5ml2X培養(yǎng)基混合制備兩個(gè)培養(yǎng)基對(duì)照管。不向陰性對(duì)照管或培養(yǎng)基對(duì)照管中加入供試培養(yǎng)物。用0.05ml供試微生物接種所有供試樣品稀釋物與陽(yáng)性對(duì)照管。將所有試管于37±2℃2培養(yǎng)16-20小時(shí)?；谖⑸锏纳L(zhǎng)，將所有試管稀釋物評(píng)為陽(yáng)性(+)或陰性(0)。MBC測(cè)定操作：檢測(cè)不表現(xiàn)出生長(zhǎng)的稀釋物的MBC。從不表現(xiàn)出生長(zhǎng)的各管取0.1ml。將各稀釋物一式三份接種于NUAG上。對(duì)于陰性對(duì)照，將無(wú)菌2X培養(yǎng)基接種到NUAG上。通過(guò)將≤100CFU供試微生物接種到NUAG上制備陽(yáng)性對(duì)照。將供試板于37±2℃培養(yǎng)2-4天中和驗(yàn)證：測(cè)定經(jīng)檢測(cè)可抑制供試微生物生長(zhǎng)的供試樣品的最低稀釋物(MIC)在2X培養(yǎng)基中供試微生物的中和回收。將0.1ml供試樣品稀釋物一式三份接種到NUAG上。為每一種微生物制備另外三個(gè)平板作為滴度對(duì)照。向平板中加入≤100CFU的供試微生物。將平板于37±2℃培養(yǎng)2-4天。將獲自滴度對(duì)照的計(jì)數(shù)和供試樣品的那些進(jìn)行比較。結(jié)果：MIC和MBC的結(jié)果顯示于表3表4示出了中和結(jié)果。測(cè)定符合上文所述的可接受標(biāo)準(zhǔn)。表3表4這些結(jié)果為本文所述組合物的多種功效的抗菌活性提供了進(jìn)一步的證據(jù)。實(shí)施例4測(cè)定USP微生物限量進(jìn)行試驗(yàn)以測(cè)定非無(wú)菌樣品中金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿假單胞菌和沙門(mén)氏菌屬或其他不可接受的或者被認(rèn)為是致病性的相關(guān)微生物的存在。這些微生物的存在指明使相似的致病細(xì)菌能夠生長(zhǎng)的環(huán)境。試驗(yàn)方案：可接受標(biāo)準(zhǔn)：原始平板計(jì)數(shù)結(jié)果應(yīng)在30-300菌落形成單位(CFU)每平板之內(nèi)或者報(bào)告為估算值。黑曲霉和其他相似的微生物僅可準(zhǔn)確讀出8-80CFU每板。如果未發(fā)現(xiàn)菌落，可將結(jié)果報(bào)告為低于樣品稀釋度。當(dāng)陰性監(jiān)測(cè)物在現(xiàn)有操作建立的參數(shù)之內(nèi)時(shí)可認(rèn)為平板計(jì)數(shù)是可靠的。用于定性的陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)表現(xiàn)出特征性生長(zhǎng)。用于選擇性篩選的陰性測(cè)定監(jiān)測(cè)物不應(yīng)表現(xiàn)出指示微生物的生長(zhǎng)。樣品制備：通過(guò)將如上文實(shí)施例3所述的10ml樣品原種溶液與90ml50mMTris-緩沖液pH7.45組合制備供試樣品。然后將10ml該溶液置于90ml的液體酪蛋白消化-大豆卵磷脂-聚山梨醇酯20培養(yǎng)基(FCDM)和acumedia乳糖肉湯(ALBR)中。平板計(jì)數(shù)：使用傾倒平板技術(shù)，將1ml樣品一式三份接種于大豆酪蛋白消化瓊脂(SCDA)中用于細(xì)菌計(jì)數(shù)。一式三份使用土豆右旋糖瓊脂(PDXA)進(jìn)行相同的操作用于真菌計(jì)數(shù)。將SCDA平板于30-35℃培養(yǎng)48-72小時(shí)而將PDXA平板于20-25℃培養(yǎng)5-7天。樣品富集：將樣品稀釋于FCDM用于金黃色葡萄球菌和綠膿假單胞菌篩選，并且稀釋于ALBR用于沙門(mén)氏菌和大腸桿菌篩選。將富集肉湯于30-35℃培養(yǎng)24-48小時(shí)。微生物篩選：富集培養(yǎng)之后，將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至或劃線至適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基進(jìn)行如下培養(yǎng)：沙門(mén)氏菌：亞硒酸鹽-胱氨酸肉湯和四硫磺酸鹽肉湯-在30-35℃，12-24小時(shí)；亮綠、亞硫酸鉍和XLD瓊脂-在30-35℃，24-48小時(shí)。綠膿假單胞菌：溴化十六烷基三甲銨瓊脂-在30-35℃，24-48小時(shí)；金黃色葡萄球菌：甘露醇鹽瓊脂-在30-35℃，24-48小時(shí)大腸桿菌：MacConkey瓊脂-在30-35℃，24-48小時(shí)使用生物化學(xué)測(cè)定驗(yàn)證任何可疑菌落。定性：在該樣品類(lèi)型的第一次檢測(cè)中如下進(jìn)行定性測(cè)定：使四種供試微生物的二十四小時(shí)肉湯培養(yǎng)物于30-35℃生長(zhǎng)并且以1:1000稀釋。用于接種的微生物當(dāng)量為≤1％的樣品制備物。在將樣品稀釋于肉湯的一小時(shí)內(nèi)加入接種物。進(jìn)行篩選操作。必須回收所有四種供試微生物以證明樣品中和。結(jié)果：供試溶液以1:10稀釋通過(guò)定性。所觀察到的總好氧微生物計(jì)數(shù)以及霉菌和酵母組合計(jì)數(shù)的數(shù)值均低于10，表明“未檢出”。因此可以1:10的樣品稀釋進(jìn)行常規(guī)分析。在致病性篩選中，結(jié)果顯示所有供試微生物均不存在于總好氧和真菌計(jì)數(shù)中。未對(duì)平板計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行細(xì)菌或真菌回收的定性。測(cè)定符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)施例5抗微生物敏感性測(cè)定進(jìn)行試驗(yàn)用于篩選包含銀離子和薄荷醇的供試樣品的抗微生物活性。測(cè)試微生物為金黃色葡萄球菌ATCCNo.6538和大腸桿菌ATCCNo.8739。測(cè)定操為經(jīng)修改的用于抗生素敏感性檢測(cè)的紙片擴(kuò)散(Kirby-Bauer)法。試驗(yàn)方案：培養(yǎng)物制備：用來(lái)自原種培養(yǎng)物的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌接種Mueller-Hinton培養(yǎng)基并且于30-35℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。用生理鹽水將供試微生物標(biāo)準(zhǔn)化以達(dá)到與0.5McFatland標(biāo)準(zhǔn)相等的細(xì)胞密度。在標(biāo)準(zhǔn)化后15分鐘內(nèi)使用接種物。供試樣品：所使用的供試樣品取自包含0.1mg硝酸銀每1ml緩沖液的250ml原種溶液。每一份供試樣品包含以下組分：甘油：10％v/v薄荷醇：0.05％w/vTWEEN20:0.5％v/vAgNO3:0.01％w/vTris:50mM測(cè)定實(shí)施：將無(wú)菌棉簽蘸入標(biāo)準(zhǔn)化的接種物中，旋轉(zhuǎn)數(shù)周，并且緊緊按壓在高于液面的管內(nèi)壁上以從棉簽除去過(guò)量的接種物。用棉簽在Mueller-Hinton瓊脂板的整個(gè)表面上劃線三次，每次將平板旋轉(zhuǎn)60°，然后沿瓊脂邊緣最后涂抹一周。蓋子擱置在瓊脂上不超過(guò)15分鐘以使過(guò)量的表面水分被吸收。用一對(duì)無(wú)菌鑷子將無(wú)菌紙片置于瓊脂板上。將每一個(gè)紙片置于各平板的中央，用力按壓從而使樣品保持于原位并且與瓊脂表面均勻接觸。用約0.1ml供試樣品接種各紙片。對(duì)于陰性對(duì)照，用無(wú)菌純化水接種各紙片。將平板于30-35℃培養(yǎng)約24小時(shí)。之后將樣品轉(zhuǎn)移至新鮮制備的平板上并且培養(yǎng)約24小時(shí)。重復(fù)該操作直至平板不顯示出抑菌圈。使用精確度為0.01mm的經(jīng)校準(zhǔn)的卡尺測(cè)量抑菌圈(如果存在)的直徑。測(cè)量包括樣品直徑在內(nèi)的完整抑菌圈(zoneofinhibition)。結(jié)果：結(jié)果顯示于表5并且證明了細(xì)菌對(duì)供試樣品的敏感性。表5實(shí)施例6包含銀離子和薄荷醇的溶液與商購(gòu)的B.Braun'sPRONTOSAN的殺真菌/抑真菌活性的比較試驗(yàn)測(cè)定本文所述組合物(上文實(shí)施例5中所述的供試樣品)的抗真菌活性并且與商購(gòu)產(chǎn)品(由B.Braun提供)、(由Occulus提供)和(由Anacapa提供)比較。殺真菌活性的體外篩選和比較測(cè)定：用供試菌株接種ELISA板孔中的SDB瓊脂(100ml)并且于30℃培養(yǎng)24小時(shí)使其初步生長(zhǎng)。將100ml供試物水溶液(或者為包含如本文所述的銀離子和薄荷醇的溶液或者為或的溶液)，或者為0.9％鹽溶液(作為對(duì)照))涂抹一次，將板子于30℃培養(yǎng)30分鐘，棄去溶液，然后加入100mlSDB生長(zhǎng)培養(yǎng)基，將板子于30℃培養(yǎng)30分鐘，然后棄去培養(yǎng)基。然后將板子于30℃培養(yǎng)24天，并且每天進(jìn)行檢測(cè)和照相。圖1示出的圖總體圖解了在暴露于供試溶液30分鐘并且隨后洗滌后培養(yǎng)24天之后的真菌培養(yǎng)物的外觀，表現(xiàn)出無(wú)生長(zhǎng)(殺真菌作用，表示為“F”)、最小不良生長(zhǎng)(抑制作用，表示為“IN”)或者完全生長(zhǎng)(無(wú)作用，表示為“NE”)。圖2-4示出的圖圖解了在暴露于每一種供試溶液30分鐘并且隨后洗滌后培養(yǎng)3、8、11和16天之后的已暴露真菌培養(yǎng)物的外觀。供試溶液包括：如上文實(shí)施例5所述的包含銀離子和薄荷醇的組合物(表示為“S”)、(表示為“P”)、交替相繼暴露于包含銀離子和薄荷醇的組合物和(表示為“S+P”和“P+S”)、(表示為“M”)以及(表示為“A”)以及它們的稀釋液(1:2；1:4；1:8)。供試真菌菌株為紅色毛癬菌的臨床菌株(圖2)；紅色毛癬菌NCPF118商購(gòu)菌株(圖3)和犬小孢子菌(圖4)。圖2-4示出的數(shù)據(jù)清楚地證明了用根據(jù)本發(fā)明一實(shí)施方案的包含銀離子和薄荷醇的組合物一次處理后的殺真菌作用。銀離子-薄荷醇組合物表現(xiàn)出與相似的活性；以1:2–1:4稀釋仍有效；并且優(yōu)于包含次氯酸鹽的藥劑和此外，已清楚地證明了用銀離子-薄荷醇組合物和相繼處理提供顯著提高的抗真菌活性，首先使用銀離子-薄荷醇組合物并且接著使用PRONTOSAN這一順序具有明顯優(yōu)勢(shì)，該組合甚至在1:8稀釋時(shí)對(duì)紅色毛癬菌臨床菌株表現(xiàn)出顯著的高抗真菌功效(參見(jiàn)，圖2)。盡管已結(jié)合具體的實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但是許多選擇、修改和更改對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。因此，預(yù)期包括屬于附加權(quán)利要求的精神的寬范圍內(nèi)的所有此類(lèi)選擇、修改和更改。本說(shuō)明書(shū)中提及的所有出版物、專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)以其全文通過(guò)援引納入本說(shuō)明書(shū)，視同具體并且單獨(dú)指明每一個(gè)出版物、專(zhuān)利或?qū)＠暾?qǐng)通過(guò)援引納入本文。此外，本說(shuō)明書(shū)中對(duì)任何參考文獻(xiàn)的引用或確認(rèn)不應(yīng)理解為承認(rèn)此類(lèi)參考文獻(xiàn)可作為本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)獲得。對(duì)于所使用的章節(jié)標(biāo)題，不應(yīng)理解它們一定具有限制性。