一種芹菜總黃酮的提取方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種芹菜總黃酮的提取方法及其應(yīng)用，具體涉及一種利用超聲波輔助醇提和液-液-液三相萃取相結(jié)合的方法。其處理步驟：將新鮮的野生芹菜烘干、粉碎→超聲波法提取→合并濾液→減壓濃縮→萃取→干燥。本發(fā)明工藝簡單、提取效率高、節(jié)約能源、成本低、適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明所述的芹菜總黃酮提取物尤其適合在制備抗腫瘤產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述的產(chǎn)品包括藥品、保健品。
【專利說明】一種芹菜總黃酮的提取方法及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種利用超聲波輔助醇提和液-液-液三相萃取相結(jié)合提取芹菜總黃酮的方法，以及所得芹菜總黃酮在制備抗腫瘤產(chǎn)品中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]癌癥是一大類惡性腫瘤的統(tǒng)稱。癌細(xì)胞的特點是無限制、無止境地增生，使患者體內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)被大量消耗；癌細(xì)胞釋放出多種毒素，使人體產(chǎn)生一系列癥狀；癌細(xì)胞還可轉(zhuǎn)移到全身各處生長繁殖，導(dǎo)致人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發(fā)熱以及嚴(yán)重的臟器功能受損等等。與之相對的有良性腫瘤，良性腫瘤則容易清除干凈，一般不轉(zhuǎn)移、不復(fù)發(fā)，對器官、組織只有擠壓和阻塞作用，但癌癥(惡性腫瘤)還可破壞組織、器官的結(jié)構(gòu)和功能，引起壞死出血合并感染，患者最終由于器官功能衰竭而死亡。到了科學(xué)高速發(fā)展的今天，我們有理由相信癌癥并非不治之癥。致力于自然醫(yī)學(xué)研究的醫(yī)學(xué)專家們研究發(fā)現(xiàn):負(fù)離子對抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移有令人鼓舞的效果，重要的是利用自然因子負(fù)離子對癌癥患者治療對機體無任何損害，沒有任何毒副作用。
[0003]癌癥嚴(yán)重威脅著人類的生命，是當(dāng)今世界上大多數(shù)國家的主要死因之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全世界每年死于癌癥的患者約500萬，因此癌癥的治療和預(yù)防任務(wù)十分艱巨。
[0004]生物總黃酮是指黃酮類化合物，是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃(醇)、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等。
[0005]近年來，由于自由基生命科學(xué)的進(jìn)展，使具有很強的抗氧化和消除自由基作用的類黃酮受到空前的重視。類黃酮參與了磷酸與花生四烯酸的代謝、蛋白質(zhì)的磷酸化、鈣離子的轉(zhuǎn)移、自由基的清除、抗氧化活力的增強、氧化還原作用、螯合作用和基因的表達(dá)。它們對健康的好處有:(1)抗炎癥(2)抗過敏(3)抑制細(xì)菌(4)抑制寄生蟲(5)抑制病毒
[6]防治肝病(7)防治血管疾病(8)防治血管栓塞(9)防治心與腦血管疾病(10)抗腫瘤
(11)抗化學(xué)毒物等。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能時入脂肪組織，進(jìn)而體現(xiàn)出如下功能:消除疲勞、保護(hù)血管、防動脈硬化、擴張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、活化大腦及其他臟器細(xì)胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老。
[0006]芹菜，屬傘形科植物。有水芹、旱芹兩種，功能相近，藥用以旱芹為佳。旱芹香氣較濃，又名“香芹”，亦稱“藥芹”。富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、胡蘿卜素、B族維生素、鈣、磷、鐵、鈉等，同時，具有有平肝清熱，祛風(fēng)利濕，除煩消腫，涼血止血，解毒宣肺，健胃利血、清腸利便、潤肺止咳、降低血壓、健腦鎮(zhèn)靜的功效。常吃芹菜，尤其是吃芹菜葉，對預(yù)防高血壓、動脈硬化等都十分有益，并有輔助治療作用。
[0007]盡管芹菜在人類食品方面已獲得廣泛應(yīng)用，但有關(guān)芹菜在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用很少見報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]為了充分利用芹菜資源，擴大抗腫瘤產(chǎn)品的應(yīng)用品種，本發(fā)明特別提供了一種芹菜總黃酮的提取方法和其在抗腫瘤產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0009]為實現(xiàn)上述目的，芹菜總黃酮的提取方法采用以下操作步驟:
O以新鮮的野生芹菜為原料，清洗干凈，烘干，用粉碎機粉碎；
2)取一定量芹菜粉末于提取器中，在提取器中加入料液比為1:1-5、50%-70%的乙醇溶液，超聲提取時間為50-90min，提取溫度為60_75°C，超聲波提取頻率為20_80KHz ；
3)冷卻抽濾，濾渣利用超聲提取2次，合并三次濾液后，將其減壓濃縮，減壓濃縮至原體積的1/4-1/2，然后轉(zhuǎn)至分液漏斗中用石油醚和乙酸乙酯的混合物進(jìn)行萃取，取下層，回收試劑，冷凍干燥得到芹菜總黃酮。
[0010]本發(fā)明中，步驟2)中所述的濃縮液、石油醚、乙酸乙酯體積比為1:3-5:3_6。
[0011]本發(fā)明的目的在于提供一種液-液-液三相萃取相的方法提取芹菜總黃酮。
[0012]本發(fā)明的另一目的在于提供一種芹菜總黃酮在抗腫瘤產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0013]本發(fā)明制備的芹菜總黃酮的藥理活性通過以下藥理實驗得到了驗證。
[0014]1、實驗?zāi)康?br> 通過體外實驗研究芹菜總黃酮組分的抗腫瘤作用。
[0015]2、實驗方法
采用MTT法觀察芹菜總黃酮體外對人肺癌(A549)和人大腸癌(HT-29)細(xì)胞系的生長抑制率。
[0016]3、實驗步驟
(O選用人肺癌(A549)或人大腸癌(HT-29)細(xì)胞系對數(shù)期細(xì)胞，用0.3%的胰蛋白酶分解細(xì)胞后，用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液中配成單個細(xì)胞懸浮液，接種到96孔培養(yǎng)板中，每孔200 μ L，置37°C，5%C02的條件下培養(yǎng)48小時，倒置顯微鏡下觀察。(2)設(shè)置實驗組和對照組，實驗組換新的含不同濃度芹菜總黃酮培養(yǎng)基(芹菜總黃酮提取物的濃度為
1.51,0.56,0.21,0.08,0.0020mg/ml )，對照組則換含等體積溶劑的培養(yǎng)基，每組設(shè)3組平行孔，置37°C，5%C02的條件下培養(yǎng)2?4天，離心(1000轉(zhuǎn)，5min)，棄去上清液。(3)每孔加Λ 10yL新鮮配置的含0.15mg/ml MTT的無血清培養(yǎng)基。37°C繼續(xù)培養(yǎng)3h。小心棄去上清液，并加入200 μ LDMS0，用微型超聲振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀上以實驗波長為570nm測定光密度值。并計算不同藥劑量對腫瘤細(xì)胞的抑制率，求出IC5(I。結(jié)果見表I和表2。
[0017]腫瘤細(xì)胞抑制率=(1-OD實驗/OD對照)*100%
4、實驗結(jié)果
表I芹菜總黃酮對人肺癌細(xì)胞(A549)的影響

【權(quán)利要求】
1.一種芹菜總黃酮的提取方法，其特征在于:以新鮮野生芹菜為原料，清洗干凈，烘干，用粉碎機粉碎，將芹菜粉末置于提取器中，然后按照一定的料液比加入乙醇溶液，超聲提取，冷卻抽濾，濾渣重復(fù)提取2次，合并三次濾液后，減壓濃縮至原體積的1/4-1/2，濃縮液轉(zhuǎn)至分液漏斗中用石油醚和乙酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行萃取，取下層，回收試劑，冷凍干燥得到芹菜總黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芹菜總黃酮的提取方法，其特征在于:所述的料液比為1:1_5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芹菜總黃酮的提取方法，其特征在于:所述的乙醇濃度為50%-70%，超聲的提取時間為50-90min，提取溫度為60_75°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芹菜總黃酮的提取方法，其特征在于:所述的超聲波提取頻率為20-80KHz。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芹菜總黃酮的提取方法，其特征在于:所述的濃縮液、石油醚、乙酸乙酯體積比為1:3-5:3-6。
6.根據(jù)權(quán)利要求Γ5所述方法制備的芹菜總黃酮提取物在制備抗腫瘤產(chǎn)品中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗腫瘤產(chǎn)品包括藥品、保健品。
【文檔編號】A61P35/00GK104173397SQ201410445536
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年9月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月4日
【發(fā)明者】張金芳, 楊存 申請人:南京標(biāo)科生物科技有限公司