一種外用中藥組合物的新用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種中藥組合物的新用途。具體來說提供了一種中藥組合物在制備提高機體免疫力藥物中的應用，該中藥組合物的原料藥主要包括麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索、生姜。該中藥組合物能顯著提高免疫力低下大鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)、大鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞百分率和吞噬指數(shù)以及大鼠的NK細胞活性（p〈0.05)，具有明顯的提高機體免疫力的活性。
【專利說明】一種外用中藥組合物的新用途

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥組合物的新用途，具體涉及一種中藥組合物在制備提高機體 免疫力方面的新用途，屬于醫(yī)藥領域。

【背景技術】
[0002] 麻芥平喘方源于清代《張氏醫(yī)通》所載白芥子涂方，由麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡 索和生姜組成，通過外敷穴位法治療急慢性哮喘，療效顯著。方中麻黃功能發(fā)汗解表宣肺平 喘為君藥，主要含有生物堿黃酮等成分；苦杏仁功能止咳平喘潤腸通便為臣藥，主要成分為 苦杏仁苷等，白芥子主治寒痰喘咳胸脅脹痛痰滯經(jīng)絡，同為方中臣藥；延胡索、生姜分別為 佐使藥。
[0003] 現(xiàn)有技術公開的麻芥平喘方多外用治療支氣管哮喘，未見其他方面的用途。


【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種外用中藥組合物在制備提高機體免疫力藥物中的應 用。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的：
[0006] -種外用中藥組合物在制備提高機體免疫力藥物中的應用，所述中藥組合物的原 料藥主要組成為：麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索和生姜。
[0007] 進一步，所述中藥組合物在治療化療藥物對人體免疫損害的應用。更進一步，所述 化療藥物包括環(huán)磷酰胺、紫杉醇、多西他賽、長春新堿、門冬酰胺、阿糖胞苷、比柔比星、氟尿 嘧啶、硫嘌呤、阿霉素中的任一種。
[0008] 進一步，所述應用在于提高機體非特異性免疫。
[0009] 進一步，所述應用在于增加吞噬細胞活性。
[0010] 進一步，所述應用在于增加 NK淋巴細胞活性。
[0011] 進一步，所述中藥組合物原料藥組成為麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索和生姜按重 量比1?10 :1?10 :1?10 :1?10 :1?10混合而成；更進一步，所述中藥組合物原料藥 組成為麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索和生姜按重量比5?10 :1?4 :6?9 :2?5 :7?10 混合而成；更進一步，所述中藥組合物原料藥組成為麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索和生姜按 重量比1?5 :6?10 :2?4 :5?9:1?6混合而成；更進一步，所述中藥組合物原料藥組 成為麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索和生姜按重量比1 :1 :1 :1 :1混合而成。
[0012] 本發(fā)明中藥組合物可按如下方法制備：按比例取原料藥，麻黃、苦杏仁、白芥子、延 胡索四味以水或乙醇溶液提??；生姜榨汁，與提取物合并，即得；
[0013] 進一步，所述提取溶劑為50-90 %的乙醇溶液；更進一步優(yōu)選為60-80 %的乙醇溶 液；更進一步優(yōu)選為80 %的乙醇溶液。
[0014] 本發(fā)明中藥組合物除采用上述對原料藥進行合并提取的方法制備外，還可以采用 分別對各原料藥進行單獨提取的方法制備，具體方法如下：
[0015] 取麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索，分別以水提取，或以50-90%的乙醇溶液提取， 制備得到麻黃提取物、苦杏仁提取物、白芥子提取物、延胡索提取物，將麻黃提取物、苦杏仁 提取物、白芥子提取物、延胡索提取物與生姜汁按比例合并，即得；其中所述乙醇溶液優(yōu)選 80 %的乙醇溶液；
[0016] 上述制備方法中所用的提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或 滲漉提取中的一種或幾種方式。
[0017] 上述制備方法中原料藥經(jīng)提取后還可經(jīng)純化、精制，并進一步按常規(guī)的制劑工藝 制成膏劑、貼劑、巴布劑、凝膠劑、溶液劑、洗劑、擦劑等臨床常規(guī)外用制劑。
[0018] 為使上述劑型能夠實現(xiàn)，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的輔料，例如：填充 劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、矯味劑、保濕劑、透皮吸收促進劑、防腐劑等。填充劑包括：淀 粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；潤滑劑包括：硬脂酸鎂、十二 烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、 羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括：淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；矯味 劑包括：甜味劑及各種香精；防腐劑包括：尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、 苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等。為使上述劑型能夠實現(xiàn)中藥藥劑學，需在制備這些劑型 時加入藥學可接受的其它輔料（范碧亭《中藥藥劑學》，上?？茖W出版社1997年12月第1 版中各劑型記載的輔料）。
[0019] 進一步，本發(fā)明中藥組合物巴布劑原輔料組成：聚丙烯酸鈉5-10重量份、聚乙烯 吡咯烷酮〇. 5-2重量份、甘油20-40重量份，組合物浸膏15-40重量份；
[0020] 更進一步，本發(fā)明中藥組合物巴布劑原輔料組成：聚丙烯酸鈉6-9重量份、聚乙烯 吡咯烷酮〇. 8-1. 5重量份、甘油25-35重量份，組合物浸膏20-30重量份；
[0021] 更進一步，本發(fā)明中藥組合物巴布劑原輔料組成：聚丙烯酸鈉7重量份、聚乙烯吡 咯烷酮1. 2重量份、甘油30重量份，組合物浸膏25重量份；
[0022] 其中，組合物浸膏制備方法為：按比例取麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索四味，以 50-80 %的乙醇溶液回流提取1-3次；生姜榨汁，生姜汁與麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索四 味乙醇提取物合并，得組合物浸膏。
[0023] 實驗研究表明，本發(fā)明中藥組合物能顯著提高免疫力低下模型大鼠的胸腺指數(shù) 和脾指數(shù)、大鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞百分率和吞噬指數(shù)以及大鼠的NK細胞活性 (ρ〈0· 05)，具有明顯的提高機體免疫力的活性。
[0024] 效果實驗例
[0025] 實驗例1
[0026] 1實驗方法
[0027] 1. 1 建模
[0028] 將大鼠隨機分為3組：空白對照組，環(huán)磷酰胺組，環(huán)磷酰胺+巴布劑貼敷組（巴布 劑按實施例1方法制備），每組10只，空白對照組：實驗進程中正常飼養(yǎng)不作任何處理；環(huán) 磷酰胺組：腹內注射l〇〇mg/kg環(huán)磷酰胺腹腔注射造成大鼠免疫低下模型，1次/ld，連續(xù)3 天；環(huán)磷酰胺+巴布劑貼敷組：腹腔內注射環(huán)磷酰胺l〇〇mg/kg造成免疫力低下模型，1次 /ld，連續(xù)3天，并在造模第一天給予巴布劑貼敷，一周后第二次注射環(huán)磷酰胺，劑量同第一 次。當大鼠出現(xiàn)萎靡不振，少動，食量減少，毛發(fā)失去光澤，喜相扎堆，堅毛現(xiàn)象明顯等癥狀 時，即已證明造模成功。
[0029] 1. 2 指標
[0030] 1. 2. 1大鼠免疫器官重量的測定：稱大鼠體重，頸椎脫白處死大鼠，取胸腺、脾臟 稱其濕重，按下列公式計算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)：胸腺指數(shù)=胸腺重（mg)/體重（g);脾指數(shù) =脾重（m g)/體重（g)。
[0031] 1. 2. 2大鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞百分率的測定試驗：在飼養(yǎng)的第20天無菌 注射3%淀粉溶液lml于大鼠腹腔內。4d后注射1 %雞紅細胞懸液lml于大鼠腹腔內，輕 揉腹部，使雞紅細胞懸液分散，20?30min后，將大鼠拉頸椎處死，用解剖剪剪開腹腔，用尖 吸管吸適量生理鹽水（或Hanks液）沖洗腹腔并吸出腹腔液置清潔小試管內，用生理鹽水 (或Hanks液）調節(jié)腹腔內細胞濃度，于載玻片上制成推片，自然干燥。加甲醇固定lOmin， 以Giemsa染液染色lOmin，用蒸餾水輕輕沖洗吹干，最后鏡檢。計100個腹腔巨噬細胞中吞 有雞紅細胞的吞噬細胞數(shù)，按下式計算吞噬百分率和吞噬指數(shù)：吞噬百分率（％)=巨噬細 胞中吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)/巨噬細胞數(shù)X 100% ;吞噬指數(shù)=巨噬細胞中吞噬的雞 紅細胞總數(shù)/巨噬細胞數(shù)。
[0032] 1. 2. 3碳廓清實驗：采用碳粒廓清法，在末次給藥后0. 5小時按0. 2ml/10g從大鼠 尾靜脈注入墨汁，待墨汁注入，立即計時，注入墨汁后lmin(tl), lOmin(tlO),分別從目內目此 靜脈叢取血20μ 1，并立即將其加到2ml 0. 1%似20)3溶液中，0. lml于96孔酶標板中，用酶 標儀在680nm波長處測光密度值（0D1，0D10)，以Na2C0 3溶液作陰性對照。按公式計算：廓 清指數(shù)（值K) = (l〇g0Dl-l〇g0D10V(tl0-tl)。胸腺指數(shù)、脾指數(shù)及吞噬指數(shù)測定：碳廓 清實驗完成后，立即頸椎脫白法處死大鼠，稱取體重，解剖胸腺、脾臟、肝臟，并分別稱取其 重量。按下列公式計算：胸腺指數(shù)=胸腺重（mg)/體重（g);脾指數(shù)=脾重（mg)/體重（g); 吞噬指數(shù)（a值）=[體重八肝重+脾重）ΧΓ 3]。
[0033] 1.2. 4淋巴細胞轉化率：于實驗第9d起，各組大鼠每日肌內注射PHA(植物血凝 素）l〇mg/kg，連續(xù)3d，實驗第13d剪尾，取血，涂片。待片干后，以瑞氏染色液及磷酸鹽緩沖 液染色15_20min,用水沖洗，室溫下晾干。用顯微鏡油鏡觀察血涂片，計數(shù)200個淋巴細胞 中淋巴母細胞和過渡態(tài)細胞數(shù)，計算淋巴細胞轉化率。淋巴細胞轉化率=100X轉化細胞 數(shù)/ (轉化細胞數(shù)+未轉化細胞數(shù)）。
[0034] 1.2. 5NK細胞活性測定（LDH釋放法）：取靶細胞和效應細胞各ΙΟΟμ 1(效靶比 50 : 1)，加入U型96孔培養(yǎng)板中，靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養(yǎng)液各ΙΟΟμΙ，靶細胞 最大釋放孔加靶細胞和2. 5 % Triton各100 μ 1，上述三項均設三個平行孔，于37°C、5 % C02 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h。然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清100 μ 1置于 平底96孔培養(yǎng)板中，同時加入乳酸脫氫酶（LDH)基質液100 μ 1，反應5min，每孔加入30 μ 1 HC1 (lmol/L)，在酶標儀490nm處測定吸光度（Α)。按下式計算ΝΚ細胞活性：ΝΚ細胞活性 (%)=(反應孔A值-自然釋放孔A值V(最大釋放孔A值-自然釋放孔A值）X100%。
[0035] 2實驗結果
[0036] 2. 1大鼠免疫器官重量的測定結果
[0037] 結果見表1。
[0038] 表1對胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響（無± \ η = 8)
[0039]

【權利要求】
1. 一種外用中藥組合物在制備提高機體免疫力藥物中的應用，其特征在于，所述中藥 組合物的原料藥主要組成為：麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索和生姜。
2. 如權利要求1所述的應用，其特征在于，治療化療藥物對人體免疫的損害。
3. 如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述化療藥物包括環(huán)磷酰胺、紫杉醇、多西 他賽、長春新堿、門冬酰胺、阿糖胞苷、比柔比星、氟尿嘧陡、硫嘌呤、阿霉素中的任一種。
4. 如權利要求2所述的應用，其特征在于，提高機體非特異性免疫。
5. 如權利要求2所述的應用，其特征在于，增加吞噬細胞活性。
6. 如權利要求2所述的應用，其特征在于，增加淋巴細胞活性。
7. 如權利要求1-6任一項所述的應用，其特征在于，所述中藥組合物原料藥組成為麻 黃、苦杏仁、白芥子、延胡索和生姜按重量比1?10:1?10:1?10:1?10:1?10混合而 成。
8. 如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述中藥組合物按如下方法制備：按比例取 原料藥，麻黃、苦杏仁、白芥子、延胡索四味以50-90%乙醇溶液提取得到乙醇提取物；生姜 榨汁，與乙醇提取物合并，得中藥組合物浸膏。
9. 如權利要求8所述的應用，其特征在于，所述外用中藥組合物浸膏按常規(guī)的制劑工 藝制成膏劑、貼劑、巴布劑、凝膠劑、溶液劑、洗劑、擦劑。
10. 如權利要求9所述的應用，其特征在于，所述中藥組合物巴布劑原輔料組成：聚丙 烯酸鈉5-10重量份、聚乙烯批咯燒酮0. 5-2重量份、甘油20-40重量份，中藥組合物浸膏 15-40重量份。
【文檔編號】A61P37/04GK104208637SQ201410478172
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月18日 優(yōu)先權日:2014年9月18日
【發(fā)明者】王雪茜, 屈會化, 趙琰, 程發(fā)峰, 王慶國, 孔慧, 續(xù)潔琨, 劉原君, 朱文翔, 李長香 申請人:北京中醫(yī)藥大學