一種羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠及其制備工藝與用途
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥和日用品【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠及其制備工藝與在制備具有改善牙齦炎作用的藥物制劑或口腔護(hù)理產(chǎn)品的用途。由本發(fā)明羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠制備的牙膏對(duì)牙齦炎所致的牙齦紅腫及牙齦出血癥狀有較好的改善效果，對(duì)口腔異味有一定的緩解作用，無(wú)明顯不良反應(yīng)，對(duì)口腔黏膜潰瘍也具有一定的改善和治療作用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠及其制備工藝與用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥和日用品【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合 凝膠及其制備工藝與用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 脊椎動(dòng)物硬組織（如骨骼和牙齒）是一種由有機(jī)和無(wú)機(jī)納米雜化體所組成的復(fù)合 物，其中無(wú)機(jī)物主要為納米級(jí)輕基磷灰石[Ca 1Q(P04)6(0H)2, Hydroxyapatite,簡(jiǎn)稱(chēng)HA]，人 的牙釉質(zhì)中羥基磷灰石的含量在95%以上。人工合成的羥基磷灰石由于具有優(yōu)良的生物相 容性，對(duì)新骨生長(zhǎng)有一定的誘導(dǎo)作用，因而，在眾多的人工合成骨替代物中脫穎而出，倍受 矚目。此外，羥基磷灰石對(duì)口腔保健具有一定的再礦化、脫敏以及美白等作用，應(yīng)用于牙膏 已經(jīng)有很多報(bào)道，在日本、歐美等國(guó)家已經(jīng)有產(chǎn)品投放市場(chǎng)。
[0003] 單純的HA存在高結(jié)晶度不易生物降解、吸附和再礦化作用較慢等不足，在醫(yī)療實(shí) 踐中，磷酸鈣基材料在溶解速率、生物活性以及涂層與基體之間的結(jié)合強(qiáng)度方面還存在著 一些問(wèn)題，嚴(yán)重影響著植入體的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。因此，對(duì)羥基磷灰石的物理機(jī)械性能、表面和 整體生物活性的改進(jìn)已成為研究的一個(gè)熱點(diǎn)。然而，人工合成的羥基磷灰石用于硬組織置 換和口腔保健還存在一些不足，如物理機(jī)械性能不理想、脆性大、骨誘導(dǎo)作用弱等問(wèn)題。從 仿生學(xué)角度出發(fā)，要求保持骨替代物中HA呈納米狀態(tài)，以盡可能避免HA顆粒發(fā)生團(tuán)聚，所 以傳統(tǒng)使用的陶瓷燒結(jié)體中的HA顆粒由于結(jié)晶度高，一般均在微米以上尺寸，與天然骨磷 灰石的尺寸相去甚遠(yuǎn)，使得應(yīng)用受到限制，因此，在制備骨修復(fù)材料時(shí)一般只能選擇HA非 燒結(jié)體或HA漿料。但是，隨之而來(lái)的問(wèn)題是，HA制品只有通過(guò)燒結(jié)才能獲得較好的力學(xué)性 能，單純的HA粉體或漿料存在成形困難、承受外力和液體沖刷的能力極差，以及不能用作 承重骨組織的修復(fù)材料等諸多問(wèn)題。
[0004] 在人體骨骼中，除了磷酸鈣基物質(zhì)外，還有許多種類(lèi)的微量元素，如Mg2+、Mn 2+、 Zn2+、Na+等。這些離子由于和參與新陳代謝的200多種生物酶直接相關(guān)而在人體中起到十 分重要的作用。因此，基于仿生原理對(duì)羥基磷灰石分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行改進(jìn)已成為研究的熱點(diǎn)。
[0005] 自然界中一些生物體（如動(dòng)物骨組織、貝殼、珍珠等）是通過(guò)無(wú)機(jī)物和有機(jī)物之間 奇特的相互作用而成的具有優(yōu)異力學(xué)性能的生物復(fù)合物，其中的無(wú)機(jī)相呈納米狀態(tài)分散在 有機(jī)相中，起彌散增強(qiáng)的作用。因此尋找一種合適的有機(jī)物與HA復(fù)合成為熱點(diǎn)課題。
[0006] 殼聚糖（CS)是一種天然的生物可降解多糖，由甲殼素（Chitin)經(jīng)脫乙酰化反應(yīng) 而得，化學(xué)名稱(chēng)為（1_4) _2_氨基_2_脫氧-D-匍萄糖。它是自然界中少見(jiàn)的一種帶正電荷 的堿性多糖，殼聚糖具有良好的生物降解性和生物相容性，無(wú)毒性、無(wú)刺激性，并且在一定 的條件下可以形成水凝膠。CS作為大分子模板在生物礦化中起到了重要作用，而且它跟無(wú) 機(jī)礦物晶體之間的相互作用提供了高度的分子識(shí)別點(diǎn)。另外，CS的主要成分是氨基葡聚糖， 具有誘導(dǎo)刺激組織再生重建的活性，能夠誘導(dǎo)骨與軟骨細(xì)胞再生，具有優(yōu)異骨傳導(dǎo)性、引導(dǎo) 和促進(jìn)骨形成的能力。因此，成為近年來(lái)生物材料的研究熱點(diǎn)之一。
[0007] 生物礦化基于仿生的原理，以大分子為模板，通過(guò)自組裝或者自組織誘導(dǎo)無(wú)機(jī)晶 體的生長(zhǎng)，復(fù)制天然骨組織的納米復(fù)合和梯度結(jié)構(gòu)。目前體外礦化制備HA/CS復(fù)合材料方 法主要是模擬體液礦化法、水溶膠法、共沉淀法及乳化法等，比如將CS浸入模擬體液中一 定時(shí)間可在其表面沉積出HA顆粒，但是這些礦化方法均是在材料的外表面形成一層礦化 層，與天然骨組織形態(tài)相差甚遠(yuǎn)。天然骨中的礦化有兩個(gè)重要步驟，首先是游離的磷酸鈣 鹽與納米膠原復(fù)合，然后這種液態(tài)的高分子材料固定的無(wú)定形磷酸I丐（Amorphous calcium phosphate，ACP)被吸附到原膠原及空隙中，作為HA的前軀體調(diào)控磷酸鈣的沉積、維度及結(jié) 構(gòu)，最終形成深度礦化的復(fù)合體。
[0008] 而由于單純的HA存在不易生物降解、吸附和再礦化等不足，使得其即便形成復(fù)合 體依然存在著不適合于臨床醫(yī)療的問(wèn)題。為了研制和探索更適合于臨床應(yīng)用的骨修復(fù)和口 腔保健材料，改進(jìn)羥基磷灰石復(fù)合凝膠材料的性能也已成為研究的一個(gè)熱點(diǎn)。越來(lái)越多的 研究從羥基磷灰石分子結(jié)構(gòu)及仿生學(xué)等角度出發(fā)，以人工合成的羥基磷灰石為基體，采用 離子置換、有機(jī)或無(wú)機(jī)材料摻雜、復(fù)合等方法，對(duì)羥基磷灰石的物理機(jī)械性能、表面和整體 生物活性進(jìn)行了改進(jìn)，以期待其更為適用于臨床實(shí)踐的需求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠及其制 備工藝與用途。
[0010] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0011] 本發(fā)明一種羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠，由以下重量份數(shù)的原料制成：羥基磷 灰石10-50重量份、改性羥基磷灰石10-50重量份、殼聚糖10-50重量份；所述改性羥基磷 灰石為羥基磷灰石與適量Al 3+、Na+、K+和Mg2+的深度礦化的復(fù)合體。
[0012] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠，由以下重量份數(shù)的原料制成：羥基磷 灰石35重量份、改性輕基磷灰石35重量份、殼聚糖30重量份。
[0013] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠，所述改性羥基磷灰石由重量比為 100-300 :1-5 :20-70 :2-10 :20-70的羥基磷灰石、氫氧化鋁、氯化鈉、氯化鉀和氯化鎂制備 而成。
[0014] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠，所述改性羥基磷灰石由重量比為200 : 2 :45 :6 :45的羥基磷灰石、氫氧化鋁、氯化鈉、氯化鉀和氯化鎂制備而成。
[0015] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，包括如下步驟：
[0016] (1)取選定重量份的羥基磷灰石和改性羥基磷灰石混勻，加入15-30重量倍量水 混勻，形成懸浮液，調(diào)整所述懸浮液pH值至強(qiáng)酸性，得澄清A液；
[0017] (2)取選定重量份的殼聚糖，加入50-100重量倍量濃度為0· 3% -1. 0%的乙酸溶 液混勻并過(guò)濾，得B液；
[0018] (3)將上述A液與B液混合均勻，以氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH彡10 ;
[0019] (4)將溶液于室溫下陳化處理12-48小時(shí)，過(guò)濾取沉淀物，并洗滌至濾液為中性；
[0020] (5)配制pH值為6. 0-7. 5的PBS緩沖液1000-3000重量份，與上述沉淀物混勻，并 于2000-5000rpm轉(zhuǎn)速下均質(zhì)處理，出料，即得所需的復(fù)合凝膠。
[0021] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，包括如下步驟：
[0022] (1)取選定重量份的羥基磷灰石和改性羥基磷灰石混勻，加入20重量倍量水混 勻，形成懸浮液，調(diào)整所述懸浮液pH值為2,得澄清A液；
[0023] (2)取選定重量份的殼聚糖，加入60重量倍量濃度為0. 5%的乙酸溶液混勻并過(guò) 濾，得B液；
[0024] (3)將上述A液與B液混合均勻，以氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH彡10 ;
[0025] (4)將溶液于室溫下陳化處理24小時(shí)，過(guò)濾取沉淀物，并洗滌至濾液為中性；
[0026] (5)配制pH值為7. 0的PBS緩沖液2000重量份，與上述沉淀物混勻，并于3000rpm 轉(zhuǎn)速下均質(zhì)20分鐘，出料，即得所需的復(fù)合凝膠。
[0027] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，所述步驟（1)中，以濃硝酸 調(diào)整所述懸浮液的pH值。
[0028] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，還包括制備所述改性羥基 磷灰石的步驟，具體包括：
[0029] (a)稱(chēng)取選定重量的羥基磷灰石、氫氧化鋁混合，加入濃硝酸攪拌至完全溶解，得 C液；
[0030] (b)稱(chēng)取選定重量的氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂混合，加水?dāng)嚢柚镣耆芙猓^(guò)濾得D 液；
[0031] (C)將所述C液和D液混合，并調(diào)節(jié)pH值為> 10,得到白色懸濁液；
[0032] (d)將所述懸濁液攪拌完全，并于室溫下靜置陳化，過(guò)濾并取沉淀物洗滌至濾液為 中性，烘干，即得。
[0033] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，所述改性羥基磷灰石的制 備包括如下步驟：
[0034] (a)稱(chēng)取選定重量的羥基磷灰石、氫氧化鋁混合，加入2-4重量倍量質(zhì)量濃度為 65-70 %并優(yōu)選68 %的濃硝酸攪拌至完全溶解，得C液；
[0035] (b)稱(chēng)取選定重量的氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂混合，加入2-5重量倍量的水?dāng)嚢柚?完全溶解，過(guò)濾得D液；
[0036] (c)將所述C液和D液混合，并調(diào)節(jié)pH值為> 10,得到白色懸濁液；
[0037] (d)將所述懸濁液于20-50rpm轉(zhuǎn)速下持續(xù)攪拌至完全，并于室溫下靜置陳化 12-48小時(shí)，過(guò)濾并取沉淀物洗滌至濾液為中性，烘干，即得。
[0038] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，所述步驟（3)和所述步驟 (c)中，所述氫氧化鈉溶液的濃度為5-25%。
[0039] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，所述步驟（d)中，還包括將 烘干后的所述改性羥基磷灰石研成粒徑為200-400目的步驟。
[0040] 本發(fā)明上述方法制備得到的羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠。
[0041] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠添加常規(guī)輔料，采用常規(guī)工藝制得的臨 床可接受的藥物制劑或口腔護(hù)理產(chǎn)品。
[0042] 本發(fā)明上述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠在制備具有改善牙齦炎、治療口腔黏膜 潰瘍作用的藥物制劑或口腔護(hù)理產(chǎn)品中的用途。
[0043] 本發(fā)明所述改性羥基磷灰石由羥基磷灰石與適量Al3+、Na+、K+和Mg 2+深度礦化的 復(fù)合體，基于仿生原理對(duì)羥基磷灰石分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行改進(jìn)，在保持羥基磷灰石性質(zhì)的基礎(chǔ)上， 由于添加了可以直接影響骨骼的鈣化過(guò)程的Mg2+，有助于影響甚至控制著新生骨中礦物質(zhì) 的晶化及形成過(guò)程，合成的改性羥基磷灰石材料的生物活性有著重要的醫(yī)學(xué)價(jià)值。
[0044] 本發(fā)明所述復(fù)合凝膠采用生物礦化法制備，以所述改性羥基磷灰石制備得到的凝 膠劑牙膏對(duì)牙齦炎所致的牙齦紅腫及牙齦出血癥狀有較好的改善效果，對(duì)口腔異味有一定 的緩解作用，無(wú)明顯不良反應(yīng)，對(duì)口腔黏膜潰瘍也具有一定的改善和治療作用。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0045] 為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例并結(jié)合 附圖，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，其中：
[0046] 圖1為實(shí)驗(yàn)例1中實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組牙周各項(xiàng)指數(shù)基線水平的比較；
[0047] 圖2為實(shí)驗(yàn)例1中實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組PLI的比較，* :與基線比較，P < 0. 05 :與2 周比較，P < 0. 05 ;◎:與對(duì)照組比較，P < 0. 05 ;
[0048] 圖3為實(shí)驗(yàn)例1中實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組BI的比較，* :與基線比較，P < 0. 05 :與2 周比較，P < 0. 05 ;◎:與對(duì)照組比較，P < 0. 05 ;
[0049] 圖4為實(shí)驗(yàn)例1中實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組GI的比較，* :與基線比較，P < 0. 05 ;#，與2 周比較，P < 0. 05 ;◎:與對(duì)照組比較，P < 0. 05。
[0050] 實(shí)驗(yàn)例
[0051] 實(shí)驗(yàn)例1
[0052] 含羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠功效因子牙膏對(duì)改善牙齦炎癥的臨床驗(yàn)證
[0053] 一、材料與方法
[0054] 為了驗(yàn)證含本發(fā)明所述改性羥基磷灰石的羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠即含 (HA/SHA/CS)復(fù)合凝膠功效因子牙膏改善牙齦炎癥的效果，我們與三甲口腔醫(yī)院進(jìn)行合作， 采用雙盲法，對(duì)患有牙齦炎癥問(wèn)題的患者使用后，由技術(shù)過(guò)硬、資質(zhì)較深的口腔醫(yī)師進(jìn)行口 腔檢查，并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
[0055] 1、病例選擇
[0056] 選取臨床診斷為牙齦炎的患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：全身健康狀況良好且同時(shí)按時(shí)配合檢 查；口腔內(nèi)至少保留20顆牙齒；牙齦指數(shù)> 1. 0 ;預(yù)期能夠完成本實(shí)驗(yàn)并愿意在受試期間 避免使用其他牙膏和服用抗菌素，不使用其它口腔衛(wèi)生措施（牙線、漱口水等）；對(duì)口腔衛(wèi) 生保健產(chǎn)品無(wú)過(guò)敏史。
[0057] 排除標(biāo)準(zhǔn)：目前長(zhǎng)期服用化學(xué)藥物；有消化道潰瘍等系統(tǒng)性疾病口腔粘膜有需要 治療的病灶或嚴(yán)重的反復(fù)發(fā)作的潰瘍；義齒修復(fù)或佩帶正畸矯治器者，口腔內(nèi)存在不良修 復(fù)體者；基線檢查前2周內(nèi)服用過(guò)抗生素或進(jìn)行過(guò)牙周治療；糖尿病、乙型肝炎、結(jié)核或其 它傳染或代謝性疾病患者；對(duì)口腔衛(wèi)生保健品有過(guò)敏史者；需要使用任何有可能造成牙齦 反應(yīng)的藥物者；妊娠期婦女。
[0058] 在所有臨床實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，自愿者均簽署知情同意書(shū)并提供醫(yī)學(xué)病史。
[0059] 2、試驗(yàn)樣品
[0060] 外觀標(biāo)示一致，分別標(biāo)記有A、B字樣。A為含（HA/SHA/CS)復(fù)合凝膠功效因子牙 膏，B為不含（HA/SHA/CS)復(fù)合凝膠功效因子牙膏。
[0061] 2. 1 (HA/SHA/CS)復(fù)合凝膠功效因子牙膏的制備
[0062] 原料：甘油5%，山梨醇20%，羧甲基纖維素鈉（CMC) 1%，十二醇硫酸鈉2%，二氧 化硅15 %，磷酸氫鈣25%，實(shí)施例4制備的羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠即（HA/SHA/CS) 復(fù)合凝膠2 %，糖精鈉0. 2 %，香精1 %，水余量。
[0063] 按照以上原料配方，采用常規(guī)的牙膏制造工藝，可制得含有（HA/SHA/CS)復(fù)合凝 膠功效因子牙膏。
[0064] 上述牙膏按規(guī)定的質(zhì)量考核條件和考核周期，經(jīng)高低溫、常溫觀察，膏體外觀正 常，顏色、口味沒(méi)有發(fā)生明顯的變化，各項(xiàng)理化指標(biāo)達(dá)到牙膏國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB8372的要求。
[0065] 2. 2 牙刷
[0066] 所有受試者使用廣州高露潔有限公司生產(chǎn)的360°牙刷。
[0067] 3、試驗(yàn)方法
[0068] 3. 1試驗(yàn)原則
[0069] 該實(shí)驗(yàn)遵照隨機(jī)、雙盲、對(duì)照實(shí)驗(yàn)原則。
[0070] 3. 2觀察方法和指標(biāo)
[0071] 3. 2. 1記錄病人的主訴癥狀（如牙齦出血和口腔異味等）在牙膏使用前后的變化
[0072] 1) 口腔異味：分為常有，偶有，無(wú)三個(gè)等級(jí)來(lái)記錄在牙膏使用前后的變化。
[0073] 2)牙齦出血：分為常有，偶有，無(wú)三個(gè)等級(jí)來(lái)記錄在牙膏使用前后的變化。
[0074] Z :自發(fā)性出血（晨起吐唾有血跡）
[0075] C :刺激后出血（刷牙或咬硬物出血，吮吸出血）
[0076] 3. 2. 2牙周專(zhuān)科觀察指標(biāo)
[0077] 3. 2. 2. 1 牙銀指數(shù)（gingival index, GI)
[0078] 0 =牙齦健康；1 =牙齦輕度炎癥：牙齦的色澤有輕度改變并伴有輕度水腫，探診 不出血；2 =牙齦中等炎癥：牙齦色紅、水腫光亮，探診出血；3 =牙齦嚴(yán)重炎癥：牙齦明顯 紅腫或有潰瘍，有自動(dòng)出血傾向。
[0079] 檢查方法：將Williams牙周探針?lè)诺窖例l邊緣齦溝開(kāi)口處，并沿齦緣輕輕滑動(dòng)， 牙齦組織只被輕微的波及。
[0080] 3. 2. 2. 2 菌斑指數(shù)（plaque index, PLI)
[0081] 0 =牙面無(wú)菌斑；1 =近銀緣處牙面上有散在斑點(diǎn)狀菌斑；2 =近銀緣處牙面上有 薄的菌斑連續(xù)成帶狀，寬度不超過(guò)1mm ;3 =菌斑著色帶大于1mm但覆蓋區(qū)小于牙冠的頸 1/3 ;4 =菌斑覆蓋區(qū)在牙冠的1/3?2/3之間；5 =菌斑覆蓋區(qū)在牙冠的2/3或2/3以上。
[0082] 檢查方法：菌斑顯示劑涂布于牙面，漱口后再檢查著色的菌斑在牙面的分布部位 和范圍。
[0083] 3. 2. 2. 3 出血指數(shù)（bleeding index，BI)
[0084] 檢查方法：Williams牙周探針輕探入齦溝，取出探針30秒后，觀察有無(wú)出血及出 血程度。
[0085] 以0至5級(jí)記分：0=牙齦健康，無(wú)炎癥及出血；1 =牙齦顏色有炎癥性改變，探診 不出血；2 =探診后有點(diǎn)狀出血；3 =探診出血沿牙銀緣擴(kuò)散；4 =出血流滿并溢出銀溝；5 =自動(dòng)出血。
[0086] 3. 2. 2. 4 試驗(yàn)流程
[0087] 檢查牙位為Ramfjord指數(shù)牙（檢查16、21、24、36、41、44作為全口牙列的代表，如 果1顆指數(shù)牙缺失，將由其遠(yuǎn)中鄰牙17、11、25、37、42或45代替），檢查BI和GI時(shí)，每個(gè)指 數(shù)牙檢查6個(gè)位點(diǎn)：近中頰面、頰面正中、遠(yuǎn)中頰面、近中舌面、舌面正中以及遠(yuǎn)中舌面，記 錄反應(yīng)最重的部位。檢查PLI時(shí)，檢查每個(gè)指數(shù)牙的唇頰面和舌腭面，記錄最重的部位。
[0088] 3. 2. 3每次牙周檢查的同時(shí)，檢查口腔軟組織情況，用以評(píng)價(jià)牙膏對(duì)口腔軟組織的 作用。
[0089] 3. 3實(shí)驗(yàn)方法
[0090] 篩選符合納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)者，按隨機(jī)表分成A (實(shí)驗(yàn)組）、B (對(duì)照組）兩組，兩 組在身體狀況、牙周炎癥嚴(yán)重程度、年齡、性別比例上基本相同?；颊呓y(tǒng)一使用廣州高露潔 有限公司生產(chǎn)的360°牙刷，并教會(huì)使用Bass刷牙法刷牙，每天早晚各一次，每次用量約為 2g(擠出牙膏長(zhǎng)約1. 5cm)，每次刷牙3分鐘。在實(shí)驗(yàn)的第2、4周時(shí)對(duì)受試者的臨床指標(biāo)按 照基線檢查的程序進(jìn)行再評(píng)估。檢查時(shí)分別由2名口腔專(zhuān)業(yè)醫(yī)師分別檢查牙齦炎指數(shù)、菌 斑指數(shù)、出血指數(shù)。檢查者在實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)中都進(jìn)行了自身重復(fù)性試驗(yàn)，統(tǒng)一檢查工具和各 項(xiàng)檢查指征。牙齦指數(shù)和出血指數(shù)檢查采用Williams牙周探針探觸齦溝后目測(cè)。菌斑指 數(shù)在牙齦指數(shù)和出血指數(shù)檢測(cè)后進(jìn)行，用菌斑指示劑（堿性品紅）染色后讀數(shù)。
[0091] 3. 4統(tǒng)計(jì)分析
[0092] 采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析評(píng)價(jià)各組實(shí)驗(yàn)后第4周與第2周指數(shù)變化情況。
[0093] 4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0094] 本實(shí)驗(yàn)共收集符合納入標(biāo)準(zhǔn)者258例，由于部分研究對(duì)象于2周或4周時(shí)相繼失 訪，最終納入研究的135例研究對(duì)象中，實(shí)驗(yàn)組69例，對(duì)照組66例。
[0095] 4. 1牙周專(zhuān)科觀察指標(biāo)
[0096] 4. 1. 1實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組牙周各項(xiàng)指數(shù)基線水平的比較
[0097] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，基線時(shí)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組三項(xiàng)臨床指標(biāo)：菌斑指數(shù)（PLI)、牙 齦出血指數(shù)（BI)、牙齦指數(shù)（GI)無(wú)顯著性差異（P>0. 05)。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩組 具有可比性。
[0098] 4. 1. 2基線及使用牙膏2周、4周后實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組牙周各項(xiàng)指數(shù)的比較
[0099] 4. 1. 2. 1PLI
[0100] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在基線、實(shí)驗(yàn)2周、實(shí)驗(yàn)4周后，隨著牙膏使 用時(shí)間的延長(zhǎng)，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間比較，PLI值逐漸降低，且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在基線，實(shí) 驗(yàn)2周和4周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組間PLI差異均無(wú)顯著性。
[0101] 4.1.2.2BI
[0102] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在基線，實(shí)驗(yàn)2周，實(shí)驗(yàn)4周后，三個(gè)時(shí)間點(diǎn) 間比較，BI值逐漸降低，且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在實(shí)驗(yàn)2周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組間BI值 有顯著性差異，實(shí)驗(yàn)組BI值較對(duì)照組明顯降低。在實(shí)驗(yàn)4周時(shí)，BI值在兩組間差異無(wú)顯著 性。
[0103] 4. 1. 2. 3GI
[0104] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示，對(duì)照組在基線，實(shí)驗(yàn)2周、實(shí)驗(yàn)4周后，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間比較， GI值逐漸降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組基線、實(shí)驗(yàn)2周、實(shí)驗(yàn)4周后，GI值逐漸降 低，基線與實(shí)驗(yàn)2周間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但實(shí)驗(yàn)2周和實(shí)驗(yàn)4周間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 在實(shí)驗(yàn)2周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組間GI差異有顯著性，實(shí)驗(yàn)組GI值較對(duì)照組明顯降低；在實(shí) 驗(yàn)4周時(shí)，GI在兩組間差異均無(wú)顯著性。
[0105] 4.2主訴癥狀
[0106] 4.2. 1基線、實(shí)驗(yàn)2周和4周后，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組間患者的主訴癥狀描述（包括口 腔異味和牙齦出血）差異無(wú)顯著性。
[0107] 4. 2. 2實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間的比較
[0108] 4. 2. 2.1 口 腔異味
[0109] 實(shí)驗(yàn)2周時(shí)，與實(shí)驗(yàn)前相比，兩組患者的口腔異味無(wú)明顯改善。實(shí)驗(yàn)4周時(shí)，與實(shí) 驗(yàn)前相比，兩組患者口腔異味均減輕，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用4周后，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組 獲得口腔異味改善的比例分別為73 %和55%。
[0110] 4. 2. 2. 2刺激后出血
[0111] 兩組患者的刺激后出血癥狀在實(shí)驗(yàn)2周、實(shí)驗(yàn)4周時(shí)較實(shí)驗(yàn)前均有所緩解，且差異 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0112] 4. 2. 2. 3自發(fā)性出血
[0113] 兩組患者的自發(fā)性出血癥狀在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0114] 4. 3不良反應(yīng)
[0115] 132名受試對(duì)象在實(shí)驗(yàn)期間均未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)，對(duì)口腔粘膜及味覺(jué)無(wú)明顯影 響，多數(shù)受試對(duì)象認(rèn)為牙膏口感"良好"。
[0116] 二、結(jié)論
[0117] 通過(guò)牙銀指數(shù)（GI)、銀溝出血指數(shù)（BI)、菌斑指數(shù)（plaque index, PLI)的測(cè)試標(biāo) 準(zhǔn)，給牙齦炎癥患者使用含（HA/SHA/CS)復(fù)合凝膠功效因子牙膏，觀察受試者牙齦炎癥的 外觀變化。
[0118] 通過(guò)此次臨床試驗(yàn)，可以得出以下結(jié)論：
[0119] 1、在本實(shí)驗(yàn)條件下，含（HA/SHA/CS)復(fù)合凝膠功效因子牙膏對(duì)牙齦炎所致的牙齦 紅腫及牙齦出血癥狀有較好的改善效果。
[0120] 2、在本實(shí)驗(yàn)條件下，含（HA/SHA/CS)復(fù)合凝膠功效因子牙膏對(duì)口腔異味有一定的 緩解作用。
[0121] 3、在本實(shí)驗(yàn)條件下，使用含（HA/SHA/CS)復(fù)合凝膠功效因子牙膏無(wú)明顯不良反 應(yīng)，對(duì)口腔粘膜及味覺(jué)無(wú)明顯影響，多數(shù)受試對(duì)象認(rèn)為牙膏口感"良好"。
[0122] 實(shí)驗(yàn)例2復(fù)合凝膠對(duì)豚鼠口腔牙齦炎治療效果研究實(shí)驗(yàn)
[0123] -、實(shí)驗(yàn)方法
[0124] 將豚鼠分為6只一組，公母各半。用6根綁在一起只露出針頭處1mm的5號(hào)針頭， 刺傷豚鼠兩個(gè)下門(mén)牙中間的牙齦處，并用棉簽沾取正丁酸涂抹傷口，24小時(shí)后拍照記錄炎 癥，試驗(yàn)組每天每只涂抹樣品l〇〇mg在炎癥處，對(duì)照組不做處理，按牙齦指數(shù)（GI)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí) 記錄炎癥情況。
[0125] 牙齦指數(shù)（GI)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)：0級(jí)：無(wú)炎癥；1級(jí)：輕度發(fā)炎，牙齦色發(fā)紅，質(zhì)輕微改變， 不出血；2級(jí)：中度發(fā)炎，牙齦發(fā)紅、肥大、探觸出血；3級(jí)：重度發(fā)炎，牙齦發(fā)紅、水腫、肥大、 潰瘍、自發(fā)性出血
[0126] 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0127] 表1每天記錄的牙齦指數(shù)
[0128]

【權(quán)利要求】
1. 一種羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠，其特征在于，由以下重量份數(shù)的原料制成：羥基 磷灰石10-50重量份、改性羥基磷灰石10-50重量份、殼聚糖10-50重量份； 所述改性羥基磷灰石為羥基磷灰石與適量Al3+、Na+、K+和Mg2+的深度礦化的復(fù)合體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠，其特征在于，由以下重量份數(shù) 的原料制成：羥基磷灰石35重量份、改性羥基磷灰石35重量份、殼聚糖30重量份。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠，其特征在于，所述改性羥 基磷灰石由重量比為100-300 :1-5 :20-70 :2-10 :20-70的羥基磷灰石、氫氧化鋁、氯化鈉、 氯化鉀和氯化鎂制備而成。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠，其特征在于，所述改性羥基磷 灰石由重量比為200 :2 :45 :6 :45的羥基磷灰石、氫氧化鋁、氯化鈉、氯化鉀和氯化鎂制備 而成。
5. -種權(quán)利要求1-4任一所述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，其特征在于， 包括如下步驟： (1) 取選定重量份的羥基磷灰石和改性羥基磷灰石混勻，加入15-30重量倍量水混勻， 形成懸浮液，調(diào)整所述懸浮液pH值至強(qiáng)酸性，得澄清A液； (2) 取選定重量份的殼聚糖，加入50-100重量倍量濃度為0. 3% -1. 0%的乙酸溶液混 勻并過(guò)濾，得B液； (3) 將上述A液與B液混合均勻，以氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH彡10 ; (4) 將溶液于室溫下陳化處理12-48小時(shí)，過(guò)濾取沉淀物，并洗滌至濾液為中性； (5) 配制pH值為6. 0-7. 5的PBS緩沖液1000-3000重量份，與上述沉淀物混勻，并于 2000-5000rpm轉(zhuǎn)速下均質(zhì)處理，出料，即得所需的復(fù)合凝膠。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，其特征在于，包括 如下步驟： (1) 取選定重量份的羥基磷灰石和改性羥基磷灰石混勻，加入20重量倍量水混勻，形 成懸浮液，調(diào)整所述懸浮液pH值為2,得澄清A液； (2) 取選定重量份的殼聚糖，加入60重量倍量濃度為0. 5%的乙酸溶液混勻并過(guò)濾，得 B液； (3) 將上述A液與B液混合均勻，以氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH彡10 ; (4) 將溶液于室溫下陳化處理24小時(shí)，過(guò)濾取沉淀物，并洗滌至濾液為中性； (5) 配制pH值為7. 0的PBS緩沖液2000重量份，與上述沉淀物混勻，并于3000rpm轉(zhuǎn) 速下均質(zhì)20分鐘，出料，即得所需的復(fù)合凝膠。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，其特征在于，所 述步驟（1)中，以濃硝酸調(diào)整所述懸浮液的pH值。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5-7任一所述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，其特征在于， 還包括制備所述改性羥基磷灰石的步驟，具體包括： (a) 稱(chēng)取選定重量的羥基磷灰石、氫氧化鋁混合，加入濃硝酸攪拌至完全溶解，得C液； (b) 稱(chēng)取選定重量的氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂混合，加水?dāng)嚢柚镣耆芙?，過(guò)濾得D液； (c) 將所述C液和D液混合，并調(diào)節(jié)pH值為彡10,得到白色懸濁液； (d) 將所述懸濁液攪拌完全，并于室溫下靜置陳化，過(guò)濾并取沉淀物洗滌至濾液為中 性，烘干，即得。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，其特征在于，所述改 性羥基磷灰石的制備包括如下步驟： (a) 稱(chēng)取選定重量的羥基磷灰石、氫氧化鋁混合，加入2-4重量倍量質(zhì)量濃度為 65-70 %的濃硝酸攪拌至完全溶解，得C液； (b) 稱(chēng)取選定重量的氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂混合，加入2-5重量倍量的水?dāng)嚢柚镣耆?溶解，過(guò)濾得D液； (c) 將所述C液和D液混合，并調(diào)節(jié)pH值為彡10,得到白色懸濁液； (d) 將所述懸濁液于20-50rpm轉(zhuǎn)速下持續(xù)攪拌至完全，并于室溫下靜置陳化12-48小 時(shí)，過(guò)濾并取沉淀物洗滌至濾液為中性，烘干，即得。
10. 根據(jù)權(quán)利要求5-9任一所述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，其特征在 于，所述步驟（3)和所述步驟（c)中，所述氫氧化鈉溶液的濃度為5-25%。
11. 根據(jù)權(quán)利要求8-10任一所述羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠的制備方法，其特征在 于，所述步驟（d)中，還包括將烘干后的所述改性羥基磷灰石研成粒徑為200-400目的步 驟。
12. 根據(jù)權(quán)利要求5-11任一所述方法制備得到的羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠。
13. 由權(quán)利要求1-4任一或12所述的羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠添加常規(guī)輔料，采 用常規(guī)工藝制得的臨床可接受的藥物制劑或口腔護(hù)理產(chǎn)品。
14. 權(quán)利要求1-4任一或12所述的羥基磷灰石-殼聚糖復(fù)合凝膠在制備具有改善牙齦 炎、治療口腔黏膜潰瘍作用的藥物制劑或口腔護(hù)理產(chǎn)品中的用途。
【文檔編號(hào)】A61L15/44GK104248775SQ201410487167
【公開(kāi)日】2014年12月31日 申請(qǐng)日期:2014年9月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月22日
【發(fā)明者】林藝青, 洪緋, 潘裕添, 沈育松 申請(qǐng)人:片仔癀（上海）生物科技研發(fā)有限公司