一種從蒙藥藍(lán)盆花中制備總黃酮的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從蒙藥藍(lán)盆花中提取和純化總黃酮的方法，70％乙醇16倍量回流提取3次，每次2.5h；樣品液中生藥量與干樹脂重量比為1∶2.1，色譜柱徑高比為1∶25，流速控制在4BV/h，吸附完全后，用去離子水洗脫至洗脫液無色用，再用90％乙醇7BV洗脫，控制流速為4BV/h，收集洗脫液，減壓濃縮至干，得到的總黃酮純度28％以上。本發(fā)明提取純化工藝方法簡便、易行，可為藍(lán)盆花有效部位的進一步研究奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】一種從蒙藥藍(lán)盆花中制備總黃酮的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于制藥工程【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種從蒙藥藍(lán)盆花中制備總黃酮的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 蒙藥藍(lán)盆花來源于川續(xù)斷科植物窄葉藍(lán)盆花Scabiosa comosa Fisch. Ex Roem. et Schult和華北藍(lán)盆花Scabiosa tschilliensis Grunning的干燥花序，蒙藥名為陶森-陶 日莫，屬于蒙醫(yī)專用、常用藥材。主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、黑龍江、吉林、遼寧、河北等省區(qū)。味甘、澀， 性鈍、燥、膩、重、涼，具清熱、清"協(xié)日"之功效，蒙醫(yī)臨床用于肺熱、肝熱、咽喉熱等病，主治 肝火頭痛、發(fā)燒、肺熱咳嗽、黃疸等病，蒙醫(yī)臨床治療肝炎的方劑多有藍(lán)盆花，如給旺-9、額 力根-7等，且具有良好的療效?，F(xiàn)代藥理研究顯示藍(lán)盆花總黃酮具有抗炎、解熱、抗氧化、 降血壓、抑制血小板聚集、鎮(zhèn)靜，保護腎缺血再灌注損傷、提高機體免疫功能等多種作用；芹 菜素具有抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集作用，從中分離鑒定的三萜皂苷具抑制胰脂肪酶的作 用。同屬植物的藥理活性研究報道極少，僅報道從該屬植物S. hymettia中分離得到的部分 黃酮類、環(huán)烯醚萜類、香豆素類顯示不同程度的抗菌活性。
[0003] 目前，國內(nèi)學(xué)者曾對藍(lán)盆花總黃酮的提取工藝進行了研究報道，尚未檢索到有關(guān) 蒙藥藍(lán)盆花有效部位研究方面的報道和專利，更無有效部位純化工藝研究報道，現(xiàn)有的制 劑均為生藥粉直接入藥，工藝簡單，標(biāo)準(zhǔn)提取物的制備是目前解決這一問題的有效途徑之 O


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服上述蒙藥藍(lán)盆花現(xiàn)有制備工藝中存在的技術(shù)缺陷，提供一 種從蒙藥藍(lán)盆花中制備總黃酮的方法。本發(fā)明采用乙醇回流提取法提取藍(lán)盆花中總黃酮， 采用大孔吸附樹脂富集純化藍(lán)盆花總黃酮，方法簡單方便、工藝穩(wěn)定、重現(xiàn)性良好，適于工 業(yè)化推廣，對有效利用蒙藥藍(lán)盆花藥材、推動藥材的現(xiàn)代研究和應(yīng)用方面具有重要意義。其 具體技術(shù)方案為：
[0005] 在蒙藥藍(lán)盆花現(xiàn)有藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，結(jié)合臨床實踐，研究出一種 從蒙藥藍(lán)盆花中制備總黃酮的方法。本方法特點：采用乙醇回流法提取總黃酮，依次通過單 因素實驗和正交實驗，以出膏率和總黃酮的浸出率為考察指標(biāo)，運用統(tǒng)計學(xué)方法分析實驗 結(jié)果，確定最佳提取工藝；采用大孔吸附樹脂純化富集藍(lán)盆花總黃酮，通過靜態(tài)-動態(tài)吸附 解吸實驗確定最優(yōu)純化樹脂和最佳純化工藝；方法簡單方便、工藝穩(wěn)定、重現(xiàn)性良好，適于 工業(yè)化推廣。
[0006] 一種從蒙藥藍(lán)盆花中提取總黃酮的方法，包括以下步驟：
[0007] (a)蒙藥藍(lán)盆花總黃酮的提?。核{(lán)盆花藥材，以6?16倍量50%?90%乙醇回流 提取1?4次，每次1?3h，合并提取液，回收乙醇，使制成生藥濃度為0. 08gmL?0. 2g/ml 的提取液，備用；
[0008] (b)蒙藥藍(lán)盆花總黃酮的純化：選取 S-8、D101、AB-8、HPD100、HPD400、X-5、D4020、 D3520、NKA-9型等常用大孔吸附樹脂，按常規(guī)方法預(yù)處理后，以去離子水為溶媒濕法裝柱， 徑高比為I : 10?1 : 25;將提取液按樣品液中生藥量與干樹脂重量比為1 : 15? 1 : 1.5上樣，流速控制在l-4BV/h，吸附完全后，用去離子水洗脫至洗脫液無色，再用 10-7(?￥的60%?90%乙醇洗脫，控制流速為1?48￥/11，收集洗脫液，回收溶劑至干，產(chǎn)物 中總黃酮純度為16. 56%?31. 95%。
[0009] 進一步優(yōu)選，步驟（a)中：藍(lán)盆花藥材適量，以16倍量70%乙醇回流提取3次，每 次2. 5h，合并提取液，回收乙醇，制成生藥濃度為0. 2g/ml的提取液，備用。
[0010] 步驟（b)中：選取S-8型大孔吸附樹脂，按常規(guī)方法預(yù)處理后，以去離子水為溶媒 濕法裝柱，徑高比為1 : 25;將提取液按樣品液中生藥量與干樹脂重量比為1 : 2.1上樣， 流速控制在4BV/h，吸附完全后，用去離子水洗脫至洗脫液無色，再用7BV的90%乙醇洗脫， 控制流速為4BV/h，收集洗脫液，回收溶劑至干，產(chǎn)物中總黃酮純度在28%以上，可有效去 除雜質(zhì)。
[0011] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明采用乙醇提取法結(jié)合大孔吸附樹 脂純化法富集了藥材中的黃酮類有效成分，得到了蒙藥藍(lán)盆花的標(biāo)準(zhǔn)提取物，提取純化工 藝簡便穩(wěn)定，適于工業(yè)化，可促進蒙藥藍(lán)盆的有效利用和現(xiàn)代研究，并可減少臨床服用劑 量、提高臨床療效和順應(yīng)性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 圖1是總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0013] 圖2是乙醇濃度對出膏率的影響；
[0014] 圖3是乙醇濃度對總黃酮浸出率的影響；
[0015] 圖4是乙醇用量對出膏率的影響；
[0016] 圖5是乙醇用量對總黃酮浸出率的影響；
[0017] 圖6是提取時間對出膏率的影響；
[0018] 圖7是提取時間對總黃酮浸出率的影響；
[0019] 圖8是提取次數(shù)對出膏率的影響；
[0020] 圖9是提取次數(shù)對總黃酮浸出率的影響；
[0021] 圖10是上樣濃度對回收率的影響；
[0022] 圖11是上樣速度對回收率的影響；
[0023] 圖12是徑高比對回收率的影響；
[0024] 圖13是藍(lán)盆花總黃酮泄漏曲線；
[0025] 圖14是洗脫濃度對回收率的影響；
[0026] 圖15是洗脫體積對總黃酮量的影響；
[0027] 圖16是不同洗脫速度對回收率的影響。

【具體實施方式】
[0028] 下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步詳細(xì)地說明。
[0029] 實施例1蒙藥藍(lán)盆花總黃酮的提取工藝研究
[0030] 1材料、儀器及試劑
[0031] I. 1 材料
[0032] 藍(lán)盆花藥材于2009年3月購于內(nèi)蒙古藥材公司（產(chǎn)地：錫林郭勒），經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué) 院藥學(xué)院喬俊纏老師鑒定為川續(xù)斷科植物華北藍(lán)盆花Scabiosa tschilliensis Grunning 的干燥花序。
[0033] 1. 2 儀器
[0034] DZF-6050型真空干燥箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；ES-J200-4電子天平（沈 陽龍騰電子有限公司）；AB135-S電子天平（METTLERT0LED0);永光明恒溫水浴鍋（北京市 永光明醫(yī)療儀器廠）；TC-15恒溫電熱套（海寧市華星儀器廠）；RE-52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上 海雅榮生化儀器設(shè)備有限公司）；TV-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀 器）。
[0035] 1. 3 試劑
[0036] 95%乙醇（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）分析純；蒸餾水。
[0037] 2主要參數(shù)
[0038]

【權(quán)利要求】
1. 一種從蒙藥藍(lán)盆花中提取總黃酮的方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 蒙藥藍(lán)盆花總黃酮的提?。核{(lán)盆花藥材20g，以6?16倍量50%?90%乙醇回流 提取1?4次，每次1?3h，合并提取液，回收乙醇，使制成生藥濃度為008gmL?0. 2g/ml 的提取液，備用； (b) 蒙藥藍(lán)盆花總黃酮的純化：選取 S-8、D101、AB-8、HPD100、HPD400、X-5、D4020、 D3520、NKA-9型等常用大孔吸附樹脂，按常規(guī)方法預(yù)處理后，以去離子水為溶媒濕法裝柱， 徑高比為1 : 10?1 : 25;將提取液按樣品液中生藥量與干樹脂重量比為1 : 15? 1 : 1.5上樣，流速控制在1?4BV/h，吸附完全后，用去離子水洗脫至洗脫液無色，再用 10-7(?￥的60%?90%乙醇洗脫，控制流速為1?48￥/11，收集洗脫液，回收溶劑至干，產(chǎn)物 中總黃酮純度為16. 56%?31. 95%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從蒙藥藍(lán)盆花中提取總黃酮的方法，其特征在于， 步驟（a)中：藍(lán)盆花藥材，以16倍量70%乙醇回流提取3次，每次2. 5h，合并提取液， 回收乙醇，制成生藥濃度為0. 2g/ml的提取液，備用； 步驟（b)中：選取S-8型大孔吸附樹脂，按常規(guī)方法預(yù)處理后，以去離子水為溶媒濕法 裝柱，徑高比為1 : 25;將提取液按樣品液中生藥量與干樹脂重量比為1 : 2.1上樣，流速 控制在4BV/h，吸附完全后，用去離子水洗脫至洗脫液無色，再用7BV的90%乙醇洗脫，控制 流速為4BV/h，收集洗脫液，回收溶劑至干，產(chǎn)物中總黃酮純度在28%以上。
【文檔編號】A61K36/185GK104288189SQ201410509210
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月18日
【發(fā)明者】薛培鳳, 趙子龍, 王娜娜, 魏慧 , 王國英, 李曉娟, 解紅霞, 高建萍, 李春燕, 王麗, 王靜 申請人:內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)