柴胡加龍骨牡蠣湯治療精神疾病的有效部位及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了柴胡加龍骨牡蠣湯治療精神疾病的有效部位及其提取方法，按柴胡加龍骨牡蠣湯處方重量比例稱取柴胡、龍骨、黃芩、生姜(切)、鉛丹、人參、桂枝去皮、茯苓，半夏(洗)、大黃、牡蠣(熬)、大棗六枚，以上十二味加水煎煮，離心，上清濃縮后分別依次進行石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，將正丁醇部分進行真空干燥，粉碎得正丁醇提取物，粉碎、加蒸餾水溶解，過AB-8大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇水、30％乙醇水、50％乙醇水、70％乙醇水、90％乙醇水洗脫，收集10％洗脫液、濃縮、干燥得有效部位CLM-10％。本發(fā)明的有效部位與原柴胡加龍骨牡蠣湯復方相比，對神經(jīng)細胞的保護和修復作用明顯提高，而且減少服用量，增強藥物的順應性，方便貯藏和運輸；其對神經(jīng)細胞的保護和修復作用達到或超過現(xiàn)有臨床常用的治療精神疾病的西藥。
【專利說明】柴胡加龍骨牡蠣湯治療精神疾病的有效部位及其制備方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥復方有效部位，具體屬于柴胡加龍骨牡蠣湯治療精神疾病的有效部位及其制備方法。

【背景技術】
[0002]精神疾病是自古即有的疾病，在其發(fā)病中既有先天遺傳等生物屬性為主的致病因素，也有由于社會環(huán)境及個人生活經(jīng)歷等社會屬性為主的致病因素，這二者之間還存在交互作用，嚴重威脅了人類的精神健康。精神類疾病的治療多以西藥為主，但大多數(shù)西藥會產(chǎn)生嚴重的不良反應，如錐體外系反應、高催乳素血癥、代謝綜合癥等，影響患者治療依從性。隨著中醫(yī)及中西醫(yī)結合治療精神類疾病研究的深入，已顯示出中醫(yī)藥治療精神類疾病的特色和優(yōu)勢。
[0003]柴胡加龍骨牡蠣湯出自漢?張仲景《傷寒論》，為經(jīng)典明方，目前在臨床上廣泛用于精神或神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如精神分裂癥、抑郁癥、癲癇、更年期綜合癥等，療效顯著，被公認為最適合的古方之一。隨著現(xiàn)代研究的不斷深入，近來本方的臨床應用亦頗受眾多醫(yī)家的重視，現(xiàn)在本方在治療精神、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的臨床應用和實驗研究方面均取得了一定的成就。
[0004]臨床應用方面，梁開榮等對126例精神分裂癥患者以陰陽為綱辨治。陽證(即狂癥)用柴胡加龍骨牡蠣湯加減，療程65天，總有效率84.13%。中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院李海霞等臨癥運用本方治療精神分裂癥、小兒多動癥和小兒抽動穢語綜合癥等取得一定療效。新鄉(xiāng)醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院王云等以單用氯丙嗪為對照組，發(fā)現(xiàn)臨床應用柴胡加龍骨牡蠣湯合并小劑量氯丙嗪治療精神分裂癥，起效快、副作用少而輕微，依從性好，認為中西醫(yī)結合可以作為治療精神分裂癥的一種有效方法。
[0005]實驗研究方面，張有志等進行小鼠強迫游泳試驗，發(fā)現(xiàn)柴胡加龍骨牡蠣湯大、小劑量、甘麥大棗湯小劑量、百合地黃湯大劑量均能顯著縮短小鼠強迫游泳的不動時間，其中柴胡加龍骨牡蠣湯小劑量作用最為顯著。中國藥科大學孟海彬等采用小鼠強迫游泳、懸尾、高劑量阿撲嗎啡拮抗、利血平拮抗、5-HTP誘導甩頭等抑郁動物模型，發(fā)現(xiàn)柴胡加龍骨牡蠣湯具有顯著的抗抑郁作用。李艷等認為中醫(yī)病機方面，柴胡加龍骨牡蠣湯調(diào)和陰陽，宣暢化郁，助陽入陰；生理機制方面，柴胡加龍骨牡蠣湯被證明能調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺軸以及大腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，對抑郁和焦慮行為具有調(diào)節(jié)作用。
[0006]然而，中藥復方“柴胡加龍骨牡蠣湯”的藥物成份復雜，而且方劑之間不是藥物成份的單純迭加，各成份間還存在著復雜的相互作用，以藥材為原來制成的散劑、丸劑、顆粒劑等均以藥材為原料，簡單加工，存在無效成分多、服藥劑量大、順應性差，質(zhì)量難以控制，藥效物質(zhì)基礎不明確，藥物作用機理不清晰等諸多缺陷。
[0007]到目前為止，尚未有將柴胡加龍骨牡販湯有效部位制備成治療精神疾病藥物的信息，發(fā)明人經(jīng)過體外神經(jīng)細胞保護和修復作用的活性篩選試驗研究證實，按本發(fā)明所述工藝制備柴胡加龍骨牡蠣湯有效部位可發(fā)揮明顯的神經(jīng)保護和修復作用等藥理作用，完成了柴胡加龍骨牡蠣湯有效部位的制備工藝研究及其藥物制劑研究。
[0008]本發(fā)明所述的柴胡加龍骨牡蠣湯有效部位的制備及其治療精神疾病的用途，是采用AB-8大孔吸附樹脂富集其中具有神經(jīng)保護和修復作用的活性成分。至今尚未見文獻報道和專利公開。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是公開一類具有強神經(jīng)保護和修復作用的柴胡加龍骨牡蠣湯有效部位，采用現(xiàn)代提取分離技術，以柴胡加龍骨牡蠣湯整體復方為原料，制備并篩選出活性高出或相當于原方的有效部位，進一步以有效部位為組分制成各種制劑，與現(xiàn)有粗制劑相比，具有減少服藥量，增強藥物順應性的特點，方便貯藏和運輸。
[0010]本發(fā)明提供的柴胡加龍骨牡蠣湯治療精神疾病的有效部位，通過如下制備方法獲得:按重量份數(shù)稱取柴胡12、龍骨6、黃岑6、生姜(切)6、鉛丹6、人參6、桂枝去皮6、獲考半夏(洗)6、大黃6、牡蠣(熬)4.5、大棗6枚；粉碎后按每克藥材加6?10升水，加熱煎煮，離心，上清濃縮至浸膏，60°C真空干燥，粉碎得粗提物，用蒸餾水溶解后依次進行石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，將正丁醇部分減壓回收溶劑，濃縮至浸膏，60°C真空干燥，粉碎，用蒸餾水溶解，過AB-8大孔吸附樹脂柱，分別用水、10%乙醇水、30%乙醇水、50%乙醇水、70%乙醇水、90%乙醇水洗脫，收集10%洗脫液、濃縮、干燥得有效部位CLM-10%。體外細胞活性篩選實驗證明CLM-10%提取物可使過氧化氫損傷的SH-SY5Y細胞存活率提高到80%以上，具有顯著的保護和修復作用，與原有制劑相當，可作為藥物活性成分制備成常規(guī)的藥物劑型，例如，片劑、丸劑、散劑、膏劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑等，進一步制成的制劑可減少服用量，增強藥物順應性，方便了貯藏和運輸。
[0011]本發(fā)明的有益效果是提供了柴胡加龍骨牡蠣湯有效部位CLM-10%提取物在神經(jīng)保護和修復作用的醫(yī)療用途，即柴胡加龍骨牡蠣湯有效部位CLM-10%提取物在制備精神和神經(jīng)退行性藥物方面的用途，并采用大孔吸附樹脂分離技術，不同比例乙醇水依次洗脫，去除其中的無效成分，獲得的柴胡加龍骨牡蠣湯有效部位CLM-10 %提取物為活性成分，并含有一種或多種醫(yī)學上可接受的載體，按常規(guī)的制劑工藝，即可制成口服和注射藥物制劑。
[0012]所述及的載體是指藥學領域常規(guī)的載體，例如:稀釋劑、賦形劑如水等；粘合劑如纖維素衍生物、明膠、聚乙烯吡咯烷酮等；填充劑如淀粉等；崩裂劑如碳酸鈣、碳酸氫鈣?’另夕卜，還可以在柴胡加龍骨牡蠣湯有效部位CLM-10%提取物中加入其他輔助劑如香味劑和甜味劑。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1不同濃度過氧化氫損傷對SH-SY5Y細胞存活率的影響
[0014]圖2、3、4、5、6 分別顯示 CLM-10 %、CLM-30 %、CLM-50 %、CLM-70 %、CLM-90 % 乙醇提取物對SH-SY5Y細胞及其過氧化氫損傷前后存活率的影響(A表示藥物本身毒性實驗；B表示先加過氧化氫后加藥實驗；C表示先加藥物后加過氧化氫實驗)
[0015]1.過氧化氫損傷濃度的確定
[0016]隨著H2O2濃度的逐漸增大，SH-SY5Y細胞的存活率顯著降低，在170μπιΟ1/1時，SH-SY5Y細胞的存活率為50%，有顯著的抑制作用，故選擇170 μ mol/1的H2O2進行造模實驗。
[0017]2.柴胡加龍骨牡蠣湯不同部位提取物對SH-SY5Y細胞存活率的影響
[0018]藥物對未損傷SH-SY5Y細胞存活率的影響結果顯示:正常對照組的細胞存活率為100%，DMSO組與正常組相比，細胞的存活率為98.9%。藥物組與對照組相比有顯著增殖作用而無毒性的藥物為=CLM-1O%乙醇提取物，CLM-30%乙醇提取物，CLM-50%乙醇提取物，CLM-70%乙醇提取物，CLM-90%乙醇提取物。
[0019]3.柴胡加龍骨牡蠣湯不同部位提取物對H2O2誘導的SH-SY5Y細胞損傷的修復作用
[0020]由圖2、3、4、5、6可知，對H2O2誘導的SH-SY5Y細胞損傷具有修復作用的部位CLM-10 %乙醇提取物。CLM-10 %乙醇提取物濃度為6.25?100 μ g/ml均可使過氧化氫損傷的SH-SY5Y細胞存活率提高到100%以上，具有顯著修復作用。
[0021]4.柴胡加龍骨牡蠣湯不同部位提取物對H2O2誘導的SH-SY5Y細胞損傷的保護作用
[0022]由圖2、3、4、5、6可知，對H2O2誘導的SH-SY5Y細胞損傷具有保護作用的藥物為CLM-10 %乙醇提取物。通過先加入低濃度CLM-10 %乙醇提取物，可使過氧化氫損傷的SH-SY5Y細胞存活率提高到80 %以上，顯示具有顯著的保護作用，但未呈濃度依性。

【具體實施方式】
[0023]實施例1
[0024]中藥復方柴胡加龍骨牡蠣湯混合藥材重約IKg浸潰30分鐘，然后熬20分鐘和10X3次(v/w)蒸餾水總共三個濾液收集和混合在一起，離心(2400r/分鐘)5分鐘，上清是集中在40°C到500毫升，依次用石油醚，乙酸乙酯和正丁醇萃取。將正丁醇萃取液真空干燥到棕色粉末，然后將粉末溶解在蒸餾水中，通過大孔吸附樹脂吸附，先用水洗脫，然后依次用10%，30%，50%，70%的乙醇-水溶液洗脫。將洗脫液減壓干燥，最后真空干燥得CLM-H2O, CLM-10 %，CLM-30 %，CLM-50 %，CLM-70 % 和 CLM-90 % 提取物。取 CLM-10 % 30 克加入藥用淀粉30克，混合均勻，再與糊精60克混合均勻，加入乙醇(50%)適量制軟材。通過16目尼龍篩制粒，在60°C干燥，干粒再過16目篩整粒，加入硬脂酸鎂10克，混合均勻后壓片。
[0025]實施例2
[0026]中藥復方柴胡加龍骨牡蠣湯混合藥材重約3Kg浸潰30分鐘，然后熬20分鐘和10X3次(v/w)蒸餾水總共三個濾液收集和混合在一起，離心(2400r/分鐘)5分鐘，上清是集中在40°C到500毫升，依次用石油醚，乙酸乙酯和正丁醇萃取。將正丁醇萃取液真空干燥到棕色粉末，然后將粉末溶解在蒸餾水中，通過大孔吸附樹脂吸附，先用水洗脫，然后依次用10^,30^,50%, 70%的乙醇-水溶液洗脫。將洗脫液減壓干燥，最后真空干燥得CLM-H2O, CLM-10 %，CLM-30 %，CLM-50 %，CLM-70 % 和 CLM-90 % 提取物。取 CLM-10 % 60 克加入藥用淀粉60克，混合均勻，再與糊精120克混合均勻，加入乙醇(50% )適量制軟材。通過16目尼龍篩制粒，在60°C干燥，干粒再過16目篩整粒，加入硬脂酸鎂21克，混合均勻后壓片。
[0027]實施例3
[0028]中藥復方柴胡加龍骨牡蠣湯混合藥材重約5Kg浸潰30分鐘，然后熬20分鐘和10X3次(v/w)蒸餾水總共三個濾液收集和混合在一起，離心(2400r/分鐘)5分鐘，上清是集中在40°C到500毫升，依次用石油醚，乙酸乙酯和正丁醇萃取。將正丁醇萃取液真空干燥到棕色粉末，然后將粉末溶解在蒸餾水中，通過大孔吸附樹脂吸附，先用水洗脫，然后依次用10^,30^,50%, 70%的乙醇-水溶液洗脫。將洗脫液減壓干燥，最后真空干燥得CLM-H2O, CLM-10 %，CLM-30%，CLM-50%，CLM-70%和 CLM-90%提取物。取 CLM-10% 150 克加入藥用淀粉150克，混合均勻，再與糊精180克混合均勻，加入乙醇(50% )適量制軟材。通過16目尼龍篩制粒，在60°C干燥，干粒再過16目篩整粒，加入硬脂酸鎂30克，混合均勻后壓片。
【權利要求】
1.一種柴胡加龍骨牡蠣湯治療精神和神經(jīng)退行性疾病的有效部位，其特征在于，通過如下提取方法制得:按重量份數(shù)稱取柴胡10-15、龍骨4-8、黃芩4-8、生姜(切)4-8.鉛丹4-8、人參4-8、桂枝去皮4-8、茯苓4-8，半夏(熬0-6、大棗4?8枚；粉碎后按每克藥材加6?10升水，加熱煎煮，離心，上清濃縮至浸膏，601真空干燥，粉碎得粗提物，用蒸餾水溶解后依次進行石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，將正丁醇部分減壓回收溶劑，濃縮至浸膏，601真空干燥，粉碎得011。
2.一種柴胡加龍骨牡蠣湯治療精神和神經(jīng)退行性疾病的有效部位，其特征在于，通過如下提取方法制得:按重量份數(shù)稱取柴胡10-15、龍骨4-8、黃芩4-8、生姜(切)4-8.鉛丹4-8、人參4-8、桂枝去皮4-8、茯苓4-8，半夏(熬0-6、大棗4?8枚；粉碎后按每克藥材加6?10升水，加熱煎煮，離心，上清濃縮至浸膏，601真空干燥，粉碎得粗提物，用蒸餾水溶解后依次進行石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，將正丁醇部分減壓回收溶劑，濃縮至浸膏，601真空干燥，粉碎，用蒸餾水溶解，過八8-8大孔吸附樹脂柱，分別用水、10 %乙醇水、30 %乙醇水、50 %乙醇水、70 %乙醇水、90 %乙醇水洗脫，收集10 %洗脫液、濃縮、干燥得有效部位11-10%。
3.如權利要求1或2所述的柴胡加龍骨牡蠣湯治療精神和神經(jīng)退行性疾病的有效部位，其特征在于，按重量份數(shù)稱取柴胡12、龍骨6、黃芩6、生姜(切〉6、鉛丹6、人參6、桂枝去皮6、茯苓6，半夏(洗〉6、大黃6、牡蠣(熬)4.5、大棗6枚。
【文檔編號】A61P25/28GK104353004SQ201410534148
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年10月11日 優(yōu)先權日:2014年10月11日
【發(fā)明者】于海川, 吳嬌, 趙杰, 王琳, 荊云, 王明宇, 雷浪, 張高麗 申請人:新鄉(xiāng)醫(yī)學院