一種米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿┘捌渲苽浞椒?br> 【專利摘要】本發(fā)明公開了一種米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿┘捌渲苽浞椒ǎㄋ幬锩追撬就?、載體材料殼聚糖以及交聯(lián)劑，所述米非司酮與所述載體材料的質(zhì)量比為1:10~2:1，所述載體與交聯(lián)劑的質(zhì)量比為1:2~2:1。具體的制備方法為將米非司酮溶解于有機(jī)溶劑中并加入一定的表面活性劑，滴加到殼聚糖稀酸溶液中，充分溶脹脫氣之后，加到交聯(lián)劑水溶液中，攪拌一定時(shí)間后，離心收集沉淀，洗滌，凍干即得米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶?。本發(fā)明所得到的微球粒徑均一，具有較高的包封率，并且能提高米非司酮的生物利用度，減少臨床給藥頻次，減少給藥量，降低不良反應(yīng)。此米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶虻闹苽浞椒ú僮骱?jiǎn)單，易重復(fù)，可控性好，具有很好的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿┘捌渲苽浞椒?br>
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物制備領(lǐng)域，涉及一種具有緩釋效果的殼聚糖微球制劑及其制備方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 米非司酮是一種抗孕激素藥物，在臨床上主要用于終止早孕、引產(chǎn)、事后緊急避孕 等。此外，根據(jù)最新的臨床前及臨床研究結(jié)果顯示，米非司酮可作為一種抗腫瘤藥物被用于 乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌及中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤包括良性腫瘤(腦膜瘤） 和惡性腫瘤(膠質(zhì)瘤）的治療（Chen等，MedResRev，34 (2014) 979-1000)。近來研究表 明服用大量米非司酮后子宮內(nèi)膜癌Fas表達(dá)顯著提高，可促使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞死亡。米非 司酮具有如下幾種主要的抗腫瘤機(jī)制：改變細(xì)胞周期，加強(qiáng)他莫西芬的抗腫瘤作用；改變 凋亡基因的表達(dá)，控制腫瘤細(xì)胞的增殖，促使腫瘤細(xì)胞的死亡；調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 (FGF-3)，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-13)等來起到抗腫瘤作用。但由于米非司酮水溶性差，口 服后在胃腸道的吸收率較低，并且具有明顯的首過效應(yīng)，絕對(duì)生物利用度低。為達(dá)到預(yù)期臨 床效果，常不得不加大劑量，而米非司酮在動(dòng)物試驗(yàn)中顯示出一定的抗糖皮質(zhì)激素活性的 副作用，加大劑量將使米非司酮的副作用增強(qiáng)。因此，需要開發(fā)新的米非司酮制劑，以期能 提高生物利用度、降低劑量、減少不良反應(yīng)。
[0003] 殼聚糖是自然界中唯一的堿性多糖，具有良好的生物相容性和生物可降解性， 粘合性和無毒性，并具有抗菌，殺菌，抗腫瘤，增強(qiáng)免疫力，促進(jìn)組織修復(fù)及止血的作用， 因而在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中有著極廣闊的前景（IntJPharm，274 (2004) 1-33)。由于殼聚糖 (pKa=6. 5)是氨基多糖，在酸性條件下，由于氨基質(zhì)子化而溶于水。在pH〈5情況下，殼聚糖 可以完全溶于水形成非常粘稠的液體，經(jīng)堿處理后，能形成凝膠而沉淀，進(jìn)而控制藥物的溶 出和擴(kuò)散。依賴此特點(diǎn)，可以通過控制殼聚糖的分子量、溶液濃度、離子強(qiáng)度以及PH等因 素，制備具有不同緩釋效果的微球。與傳統(tǒng)藥物劑型相比，微球可避免藥物在給藥后便迅速 釋放，導(dǎo)致血液中藥物濃度變化幅度大，還可延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的有效作用時(shí)間。此外，由于 殼聚糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力的作用，用其作為載體制備的微球在抗腫瘤藥物輸送中具 有更明顯的優(yōu)越性。殼聚糖微球除了具有親水性能可以延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)循環(huán)的時(shí)間和減少 巨噬細(xì)胞捕獲，提高藥物生物利用度以外，還可以作為佐劑增強(qiáng)抗腫瘤藥物的活性。目前有 很多米非司酮新制劑被研究開發(fā)如米非司酮膠丸（中國專利號(hào)：CN1311000A)、米非司酮半 固體骨架制劑（中國專利號(hào)：CN1408356A)、米非司酮緩釋片等，雖然這些制劑可提高米菲司 酮的生物利用度，提高其抗早孕效果，卻無法作用于腫瘤來提高米非司酮的抗腫瘤效果。
[0004] 基于上述研究背景，本發(fā)明人制備了米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿?，既能解決米 非司酮水溶性差、生物利用低的問題，提高米非司酮生物利用度、降低劑量、減少不良反應(yīng)， 同時(shí)還可以利用殼聚糖的抗腫瘤及增強(qiáng)免疫力的生物效應(yīng)，與米非司酮協(xié)同增效，提高米 非司酮的抗腫瘤效果。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿?及其制備方法。本發(fā)明將米非司酮包載于殼聚糖微球中，解決了米非司酮生物利用度低的 問題，并且為米非司酮用作抗腫瘤藥物提供了一種可靠的制劑。
[0006] -種米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿?，其原料包括米非司酮、載體材料殼聚糖、交聯(lián) 齊U;微球制劑的粒徑為〇. 5~5i!m。
[0007] 米非司酮與所述載體材料的質(zhì)量比為1:1(T2:1，所述載體與交聯(lián)劑的質(zhì)量比為 1:2?2:1。
[0008] 所述殼聚糖的分子量為20kDa?lOOOkDa。
[0009] 所述交聯(lián)劑為三聚磷酸鈉、海藻酸鈉、十二烷基硫酸鈉、戊二醛、甲醛中的一種或 多種。
[0010] 一種制備如上所述的米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿┑闹苽浞椒?，a:將米非司酮溶 解于有機(jī)溶劑中并加入一定的表面活性劑；b:在將步驟a中的混合液滴加到殼聚糖稀酸溶 液中，充分溶脹脫氣；c:混合液滴加到交聯(lián)劑水溶液中，攪拌一定時(shí)間；d:離心收集沉淀， 洗滌，凍干即得米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿?br> [0011] 所述的有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇、叔丁醇中的一種或多種。
[0012] 所述的表面活性劑為非離子表面活性劑吐溫、司盤、Brij、泊洛沙姆中的一種或多 種。
[0013] 所述的稀酸溶液為稀鹽酸或稀醋酸。
[0014] 步驟a中，有機(jī)溶劑與表面活性劑的比例為1:5~5:1。步驟b中，殼聚糖溶液的濃 度為5?20mg/ml。步驟c中，攪拌速度為4000?5000rpm，攪拌時(shí)間為20?40min。步驟d 中，離心分離的轉(zhuǎn)速為800(Tl2000rpm，沉淀用去離子水洗滌2~4次。
[0015] 本發(fā)明的有益效果在于： (1)本發(fā)明將米非司酮包載于殼聚糖微球中，解決了米非司酮生物利用度差的問題。因 此，以米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶虼婷追撬就纤?，可令藥物進(jìn)入體內(nèi)后的半衰期顯著延長(zhǎng)， 提高藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間，從而降低消除速率，提高生物利用度。
[0016] (2)本發(fā)明拓寬了米非司酮制劑在腫瘤治療的臨床應(yīng)用。將米非司酮包載于殼聚 糖微球內(nèi)，可供口服或靜脈注射使用，同時(shí)利用殼聚糖的抗腫瘤及增強(qiáng)免疫力的生物效應(yīng)， 與米非司酮協(xié)同增效，提高米非司酮的抗腫瘤效果。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017] 圖1為實(shí)施例2制備的米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶虻牧綔y(cè)定結(jié)果。
[0018] 圖2為實(shí)施例2制備的米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶虻募t外光譜圖。（A)米非司酮紅外光 譜圖；（B)空白殼聚糖微球紅外光譜圖；（C)米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶蚣t外光譜圖。
[0019] 圖3為實(shí)施例2制備的米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶虻腦射線光譜圖。（A)米非司酮X射 線光譜圖；（B)空白殼聚糖微球X射線光譜圖；（C)米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶騒射線光譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面，將通過實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施 例，在本發(fā)明權(quán)利要求所闡明的范圍內(nèi)，可進(jìn)行各種改變或等同替換。
[0021] 實(shí)施例1 精確稱取120mg殼聚糖溶于8mL濃度為2%醋酸溶液中，攪拌至完全溶解，靜置60min。 精確稱取150mg三聚磷酸鈉配制成濃度為15mg/mLpH=9的TPP溶液，攪拌均勻。精確稱取 120mg米非司酮用無水乙醇和吐溫-80 (1:1，IOmL)配制成溶液，然后加入到殼聚糖溶液中， 攪拌均勻，待其充分溶脹脫氣，將所得溶液滴加到TPP溶液中。將上述溶液液以一定的速度 攪拌30min，然后靜置兩個(gè)小時(shí)。將其過濾并用二次水洗滌微球，收集微球冷凍干燥后得到 米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶?。采用超高效液相色譜儀（UPLCH-CLASS)測(cè)得米非司酮的峰面積，根 據(jù)公式計(jì)算其包封率和載藥率，結(jié)果見表一。
[0022] 實(shí)施例2 精確稱取120mg殼聚糖溶于IOmL濃度為2%醋酸溶液中，攪拌至完全溶解，靜置60min。 精確稱取150mg三聚磷酸鈉配制成濃度為15mg/mLpH=9的TPP溶液，攪拌均勻。精確稱 取120mg米非司酮用無水乙醇和吐溫-80配制成溶液（l:l，10mL)，然后加入到殼聚糖溶液 中，攪拌均勻，待其充分溶脹脫氣，將所得溶液滴加到TPP溶液中。將上述溶液液以一定的 速度攪拌30min，然后靜置兩個(gè)小時(shí)。將其過濾并用二次水洗滌微球，收集微球冷凍干燥后 得到米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶?。用粒度測(cè)定儀測(cè)定載藥微球的粒徑為0. 2~4. 5ym，平均粒徑為 0.82iim，結(jié)果見圖1。采用超高效液相色譜儀（UPLCH-CLASS)測(cè)得米非司酮的峰面積，根 據(jù)公式計(jì)算其包封率和載藥率，結(jié)果見表一。不加米非司酮，同法制備空白殼聚糖微球。將 米非司酮、空白殼聚糖微球和米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶蜻M(jìn)行紅外光譜測(cè)定和X射線光譜測(cè)定， 表明米非司酮被成功包載入微球中，結(jié)果見圖2和圖3。
[0023] 實(shí)施例3 精確稱取120mg殼聚糖溶于12mL濃度為2%醋酸溶液中，攪拌至完全溶解，靜置60min。 精確稱取150mg三聚磷酸鈉配制成濃度為15mg/mLpH=9的TPP溶液，攪拌均勻。精確稱取 120mg米非司酮用無水乙醇和吐溫-80 (1:1，IOmL)配制成溶液，然后加入到殼聚糖溶液中， 攪拌均勻，待其充分溶脹脫氣，將所得溶液滴加到TPP溶液中。將上述溶液液以一定的速度 攪拌30min，然后靜置兩個(gè)小時(shí)。將其過濾并用二次水洗滌微球，收集微球冷凍干燥后得到 米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶颉２捎贸咝б合嗌V儀（UPLCH-CLASS)測(cè)得米非司酮的峰面積，根 據(jù)公式計(jì)算其包封率和載藥率，結(jié)果見表一。
[0024] 實(shí)施例4 精確稱取120mg殼聚糖溶于8mL濃度為2%醋酸溶液中，攪拌至完全溶解，靜置60min。 精確稱取150mg三聚磷酸鈉配制成濃度為15mg/mLpH=9的TPP溶液，攪拌均勻。精確稱取 80mg米非司酮用無水乙醇和吐溫-80 (1:1，IOmL)配制成溶液，然后加入到殼聚糖溶液中， 攪拌均勻，待其充分溶脹脫氣，將所得溶液滴加到TPP溶液中。將上述溶液液以一定的速度 攪拌30min，然后靜置兩個(gè)小時(shí)。將其過濾并用二次水洗滌微球，收集微球冷凍干燥后得到 米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶颉２捎贸咝б合嗌V儀（UPLCH-CLASS)測(cè)得米非司酮的峰面積，根 據(jù)公式計(jì)算其包封率和載藥率，結(jié)果見表一。
[0025] 實(shí)施例5 精確稱取120mg殼聚糖溶于8mL濃度為2%醋酸溶液中，攪拌至完全溶解，靜置60min。 精確稱取150mg三聚磷酸鈉配制成濃度為15mg/mLpH=9的TPP溶液，攪拌均勻。精確稱取 60mg米非司酮用無水乙醇和吐溫-80 (1:1，IOmL)配制成溶液，然后加入到殼聚糖溶液中， 攪拌均勻，待其充分溶脹脫氣，將所得溶液滴加到TPP溶液中。將上述溶液液以一定的速度 攪拌30min，然后靜置兩個(gè)小時(shí)。將其過濾并用二次水洗滌微球，收集微球冷凍干燥后得到 米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶?。采用超高效液相色譜儀（UPLCH-CLASS)測(cè)得米非司酮的峰面積，根 據(jù)公式計(jì)算其包封率和載藥率，結(jié)果見表一。
[0026] 實(shí)施例6 精確稱取120mg殼聚糖溶于8mL濃度為2%醋酸溶液中，攪拌至完全溶解，靜置60min。 精確稱取200mg三聚磷酸鈉配制成濃度為20mg/mLpH=9的TPP溶液，攪拌均勻。精確稱取 120mg米非司酮用無水乙醇和吐溫-80 (1:1，IOmL)配制成溶液，然后加入到殼聚糖溶液中， 攪拌均勻，待其充分溶脹脫氣，將所得溶液滴加到TPP溶液中。將上述溶液液以一定的速度 攪拌30min，然后靜置兩個(gè)小時(shí)。將其過濾并用二次水洗滌微球，收集微球冷凍干燥后得到 米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶?。采用超高效液相色譜儀（UPLCH-CLASS)測(cè)得米非司酮的峰面積，根 據(jù)公式計(jì)算其包封率和載藥率，結(jié)果見表一。
[0027] 實(shí)施例7 精確稱取120mg殼聚糖溶于8mL濃度為2%醋酸溶液中，攪拌至完全溶解，靜置60min。 精確稱取250mg三聚磷酸鈉配制成濃度為25mg/mLpH=9的TPP溶液，攪拌均勻。精確稱取 120mg米非司酮用無水乙醇和吐溫-80 (1:1，IOmL)配制成溶液，然后加入到殼聚糖溶液中， 攪拌均勻，待其充分溶脹脫氣，將所得溶液滴加到TPP溶液中。將上述溶液液以一定的速度 攪拌30min，然后靜置兩個(gè)小時(shí)。將其過濾并用二次水洗滌微球，收集微球冷凍干燥后得到 米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶?。采用超高效液相色譜儀（UPLCH-CLASS)測(cè)得米非司酮的峰面積，根 據(jù)公式計(jì)算其包封率和載藥率，結(jié)果見表一。
[0028] 實(shí)施例8 精確稱取120mg殼聚糖溶于8mL濃度為2%醋酸溶液中，攪拌至完全溶解，靜置60min。 精確稱取150mg三聚磷酸鈉配制成濃度為15mg/mLpH=3的TPP溶液，攪拌均勻。精確稱取 120mg米非司酮用無水乙醇和吐溫-80 (1:1，IOmL)配制成溶液，然后加入到殼聚糖溶液中， 攪拌均勻，待其充分溶脹脫氣，將所得溶液滴加到TPP溶液中。將上述溶液液以一定的速度 攪拌30min，然后靜置兩個(gè)小時(shí)。將其過濾并用二次水洗滌微球，收集微球冷凍干燥后得到 米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶?。采用超高效液相色譜儀（UPLCH-CLASS)測(cè)得米非司酮的峰面積，根 據(jù)公式計(jì)算其包封率和載藥率，結(jié)果見表一。
[0029] 實(shí)施例9 精確稱取120mg殼聚糖溶于8mL濃度為2%醋酸溶液中，攪拌至完全溶解，靜置60min。 精確稱取150mg三聚磷酸鈉配制成濃度為15mg/mLpH=7的TPP溶液，攪拌均勻。精確稱取 120mg米非司酮用無水乙醇和吐溫-80 (1:1，IOmL)配制成溶液，然后加入到殼聚糖溶液中， 攪拌均勻，待其充分溶脹脫氣，將所得溶液滴加到TPP溶液中。將上述溶液液以一定的速度 攪拌30min，然后靜置兩個(gè)小時(shí)。將其過濾并用二次水洗滌微球，收集微球冷凍干燥后得到 米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶?。采用超高效液相色譜儀（UPLCH-CLASS)測(cè)得米非司酮的峰面積，根 據(jù)公式計(jì)算其包封率和載藥率，結(jié)果見表一。
[0030] 實(shí)施例10 精確稱取120mg殼聚糖溶于8mL濃度為2%醋酸溶液中，攪拌至完全溶解，靜置60min。 精確稱取150mg三聚磷酸鈉配制成濃度為15mg/mLpH=10的TPP溶液，攪拌均勻。精確稱 取120mg米非司酮用無水乙醇和吐溫-80 (1:1，IOmL)配制成溶液，然后加入到殼聚糖溶液 中，攪拌均勻，待其充分溶脹脫氣，將所得溶液滴加到TPP溶液中。將上述溶液液以一定的 速度攪拌30min，然后靜置兩個(gè)小時(shí)。將其過濾并用二次水洗滌微球，收集微球冷凍干燥后 得到米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶?。采用超高效液相色譜儀（UPLCH-CLASS)測(cè)得米非司酮的峰面 積，根據(jù)公式計(jì)算其包封率和載藥率，結(jié)果見表一。
[0031] 表一各實(shí)施例得到的米非司酮?dú)ぞ厶俏⑶虻陌饴屎洼d藥率

【權(quán)利要求】
1. 一種米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿涮卣髟谟冢浩湓习追撬就?、載體材料 殼聚糖、交聯(lián)劑；微球制劑的粒徑為0. 5飛i! m。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿?，其特征在于：米非司酮與所 述載體材料殼聚糖的質(zhì)量比為1:1〇~2:1，所述載體與交聯(lián)劑的質(zhì)量比為1:2~2:1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿?，其特征在于：所述殼聚糖?分子量為20 kDa?lOOOkDa。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿?，其特征在于：所述交?lián)劑為 三聚磷酸鈉、海藻酸鈉、十二烷基硫酸鈉、戊二醛、甲醛中的一種或多種。
5. -種如權(quán)利要求1所述的米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿┑闹苽浞椒ǎ涮卣髟谟冢篴 :將米非司酮溶解于有機(jī)溶劑中并加入一定的表面活性劑；b :在將步驟a中的混合液滴加 到殼聚糖稀酸溶液中，充分溶脹脫氣；c :混合液滴加到交聯(lián)劑水溶液中，攪拌一定時(shí)間；d :離心收集沉淀，洗滌，凍干即得米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿?br> 6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿┑闹苽浞椒?，其特征在于所?步驟a中有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇、叔丁醇中的一種或多種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿┑闹苽浞椒?，其特征在于所?的表面活性劑為非離子表面活性劑吐溫、司盤、芐澤、泊洛沙姆中的一種或多種；所述的稀 酸溶液為稀鹽酸或稀醋酸。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿┑闹苽浞椒ǎ涮卣髟谟谒?的殼聚糖溶液的濃度為5~20 mg/ml ;所述有機(jī)溶劑與表面活性劑的比例為1:5~5:1。
9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿┑闹苽浞椒?，其特征在于所?的攪拌速度為400(T5000 rpm，攪拌時(shí)間為2(T40 min。
10. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的米非司酮?dú)ぞ厶蔷忈屛⑶蛑苿┑闹苽浞椒?，其特征在于?述的離心收集沉淀，洗滌，離心分離的轉(zhuǎn)速為800(Tl2000 rpm，沉淀用去離子水洗滌2~4 次。
【文檔編號(hào)】A61K31/722GK104352442SQ201410558220
【公開日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2014年10月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月18日
【發(fā)明者】高瑜, 吳福強(qiáng), 李雅珍, 王超群, 陳海軍 申請(qǐng)人:福州大學(xué)