松果菊苷在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】松果菊苷在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明首先將MTH1，無機(jī)焦磷酸酶和dGTP加入到反應(yīng)液(100mM pH8.0 Tris-醋酸，40mM NaCl，10mM醋酸鎂，0.005％Tween20和1mMDTT)中，酶和底物室溫孵育1小時后加入25μl孔雀石綠溶液終止反應(yīng)，用BIO-RAD iMark酶標(biāo)儀在630nm處進(jìn)行吸光度檢測，結(jié)果表明松果菊苷對MTH1的酶活性抑制效果顯著；其次，通過MTT實驗檢測松果菊苷在細(xì)胞水平對腫瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明松果菊苷能夠明顯的抑制SW480結(jié)腸癌細(xì)胞和U2OS人骨肉瘤細(xì)胞的生長，本發(fā)明用松果菊苷抑制了腫瘤細(xì)胞中維持生存的特異性酶MTH1，導(dǎo)致氧化的核苷酸摻入到DNA中，致使癌細(xì)胞發(fā)生致死性的DNA雙鏈斷裂，以此來產(chǎn)生抗腫瘤作用，為松果菊苷發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，為今后開發(fā)新的抗腫瘤藥物奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】松果菊苷在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及松果菊苷在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]癌癥是導(dǎo)致動物和人類死亡的最主要的原因，嚴(yán)重威脅著人類的生命和健康。人們一直為獲得有活性并且安全施用于癌癥患者的抗腫瘤藥物不懈努力。我們首次發(fā)現(xiàn)松果菊苷能抑制抑制腫瘤細(xì)胞中維持生存的特異性酶MTH1，導(dǎo)致氧化的核苷酸摻入到DNA中，致使癌細(xì)胞發(fā)生致死性的DNA雙鏈斷裂，以此來產(chǎn)生抗腫瘤作用。
[0003]中醫(yī)中藥抗病毒已有數(shù)千年的歷史，我國在利用中藥防治流感方面積累了大量寶貴的理論和實踐經(jīng)驗。在我國，中藥資源非常豐富，從古至今用中醫(yī)藥治療流感療效顯著。但在國外，由于中藥中有效成分不明，作用原理不清，所以使中藥的發(fā)展在國外受阻。現(xiàn)在單體中藥抗腫瘤的研究已經(jīng)有數(shù)十年了，已經(jīng)篩選出很多具有抗腫瘤的中草藥。所以，我們從天然產(chǎn)物中獲得了新穎的具有MTHl抑制活性的化合物——松果菊苷，以此來尋找抑制維持腫瘤細(xì)胞生存的MTHl，從而研發(fā)出具有抗腫瘤活性的新藥物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供松果菊苷在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。松果菊苷能夠有效的抑制MTHl的活性，從而阻斷腫瘤細(xì)胞清除氧化的核苷酸，使之滲入到DNA中致使腫瘤細(xì)胞發(fā)生致死性的DNA雙鏈斷裂，從而達(dá)到治療癌癥患者的作用。本發(fā)明對化合物松果菊苷對MTHl進(jìn)行了體外酶學(xué)抑制性的檢測，發(fā)現(xiàn)其對MTHl酶學(xué)水平的IC5tl為7.42 ±2.13 μ mol/L。我們又通過MTT實驗檢測松果菊苷在細(xì)胞水平對腫瘤細(xì)胞的作用。最終確定松果菊苷對SW480人結(jié)腸癌細(xì)胞和和U20S人骨肉瘤細(xì)胞都有顯著抑制作用。本發(fā)明為開發(fā)以MTHl為靶點的抗腫瘤新藥提供基礎(chǔ)，為松果菊苷應(yīng)用于人類癌癥的治療提供了參考。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0005]圖1是不同濃度松果菊苷對MTHl蛋白的抑制作用
[0006]圖2是不同濃度松果菊苷在24小時、48小時對SW480人結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用
[0007]圖3是不同濃度松果菊苷在24小時、48小時對U20S人骨肉瘤細(xì)胞的抑制作用

【具體實施方式】
[0008]以下通過實例形式的【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0009]實施例1
[0010]我們將MTH1，無機(jī)焦磷酸酶和dGTP加入到反應(yīng)液(10mM pH8.0Tris-醋酸，40mMNaCI, 1mM醋酸鎂，0.005%Tween20和 ImMDTT)中。各成分終濃度是 InM ΜΤΗΙ,ΙΟΟμΜ dGTP和0.2U ml-1無機(jī)焦磷酸酶，松果菊苷濃度為3 μ Μ、6 μ Μ、9 μ M、12 μ M、15 μ M，實驗在96孔板中進(jìn)行體積為100 μ I。酶和底物室溫孵育I小時,加入25 μ I孔雀石綠溶液終止反應(yīng),在630nm處測定吸光度。
[0011]從圖1中可以看出，在酶學(xué)實驗中松果菊苷對MTHl有較好的抑制作用，并且抑制作用隨藥物濃度增加呈現(xiàn)劑量依賴。松果菊苷對MTHl的半數(shù)抑制濃度(IC5tl)為7.42±2.13 μ mol/L。
[0012]實施例2
[0013]為了檢測松果菊苷在細(xì)胞水平對腫瘤細(xì)胞的作用，我們選用SW480人結(jié)腸癌細(xì)胞和和U20S人骨肉瘤細(xì)胞兩種不同細(xì)胞進(jìn)行實驗。首先將松果菊苷按濃度梯度稀釋成不同濃度，在96孔板鋪適量適量細(xì)胞，當(dāng)生長密度達(dá)到80%左右時加入松果菊苷，終濃度分別為 15μΜ、25μΜ、35μΜ、45μΜ、55μΜ、65μΜ、75μΜ、85μΜ、95μΜ，反應(yīng)體積為 100 μ 1，藥物作用24小時后，加入MTT反應(yīng)4小時，加入150 μ I DMS0，酶標(biāo)儀630nm檢測吸光值。上述實驗均在37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)。
[0014]結(jié)果如圖2和圖3所示，加入松果菊苷后，隨著松果菊苷濃度的增加，細(xì)胞存活率隨之降低。說明松果菊苷可以抑制SW480和U20S腫瘤細(xì)胞的生長，且抑制作用也隨松果菊苷濃度的增加呈現(xiàn)濃度依賴性和時間依賴性。松果菊苷對SW480細(xì)胞最高抑制率可以達(dá)到90%以上，對U20S細(xì)胞最高抑制率可以達(dá)到80%。松果菊苷對SW480細(xì)胞的24h半數(shù)抑制濃度(IC50)為 53.84±6.33 μ mol/L, 48h 半數(shù)抑制濃度(IC50)為 47.30±2.57 μ mol/L ;松果菊苷對U20S細(xì)胞的24h半數(shù)抑制濃度(IC5tl)為36.24±4.42 μ mol/L, 48h半數(shù)抑制濃度(IC50)為 25.7 ±3.86 μ mol/L。
【權(quán)利要求】
1.化合物松果菊苷在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1中松果菊苷以作為單一成分在抗腫瘤藥物的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求1中松果菊苷以作為復(fù)方藥物中的一種成分在抗腫瘤藥物的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求1中松果菊苷以口服給藥方式的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求1中松果菊苷以注射給藥方式的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求1中松果菊苷以噴霧吸入方式的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/7048GK104288170SQ201410572626
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月22日
【發(fā)明者】鄒志華, 王燁, 董麗偉, 吳諾婷, 牛家婧 申請人:吉林大學(xué)