一種治療糖尿病的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種干預治療糖尿病的藥物組合物，含有葛根和山楂為有效成分，有效成分占所述藥物組合物總重量的百分比為：所述葛根占35％～45％，所山楂椹占30％～48％。動物實驗表明，這種干預治療糖尿病的藥物組合物能有效地降低糖尿病大鼠的血糖水平，縮小葡萄糖耐量實驗曲線下面積。
【專利說明】一種治療糖尿病的藥物組合物

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種治療糖尿病的藥物組合物，具體涉及含有葛根和山楂為有效成分的治療糖尿病的藥物組合物。

【背景技術】
[0002]糖尿病(diabetes)是多種致病因子作用于機體導致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質、脂肪、水和電解質等一系列代謝素亂綜合征，臨床上以聞血糖為主要特點。我國目前糖尿病的總體患病率已達9.7%。同期糖尿病前期的患病率高達15.5%。根據(jù)調查結果所做出的推算顯示我國總糖尿病患病人數(shù)達9千2百萬以上，糖尿病前期人數(shù)達I億4千8百萬以上。糖尿病是胰島β細胞分泌胰島素絕對或相對不足，伴或不伴胰島素抵抗。糖尿病發(fā)病過程緩慢，機制尚未完全闡明。
[0003]糖尿病的治療幾乎需要貫穿終生，治療主要有胰島素，化學藥物和中醫(yī)中藥等，其它尚未完全成熟的方法有胰島移植和干細胞治療。雖然方法不少，但都不能治愈糖尿病，而且糖尿病的發(fā)病率呈快速上升態(tài)勢。其主要原因是在糖尿病發(fā)生發(fā)展的過程中，胰島β細胞功能損傷在糖尿病發(fā)病前已經(jīng)存在，這種損傷隨著程度的加重而變?yōu)椴豢赡?。不幸的是糖尿病發(fā)病時胰島β細胞功能損傷基本已經(jīng)處于不可逆狀態(tài)，而糖尿病的治療又往往在糖尿病發(fā)生后才開始。這就是目前糖尿病不能治愈的主要原因。
[0004]有研究表明糖尿病發(fā)病前進行干預治療能有效的阻止或延緩該病發(fā)生，但問題在于，由于醫(yī)學倫理及藥物毒副作用等諸多方面限制，現(xiàn)行的糖尿病治療藥物不能用于人發(fā)病前的預防性干預治療。這也為糖尿病的防治研究提供了一個新的鍥入點，即尋找新的安全的藥物，在糖尿病發(fā)病前，胰島β細胞功能損傷的早期進行預防性干預治療。
[0005]在這一點上，中藥經(jīng)過幾千年的實踐應用，已被證明有效而少有副作用，能用于機體機能調理，健康保健等養(yǎng)生功能而無醫(yī)學倫理問題。因此中藥在糖尿病的預防性干預治療中可以發(fā)揮不可替代的重要作用。葛根的有效成份葛根素是一種黃酮類衍生物，化學名為8-C?P-D-葡萄糖基-7，4’ - 二羥基-異黃酮(8-C-B-D-Glucop”anosyl-7，4’-dihydroxy_i80navone)。除了傳統(tǒng)的解表退熱、鎮(zhèn)靜、生陽止灣的作用外,近年來有大量研究證實，葛根素能降血脂、保護血管、抗氧化應激、抗炎、升高胰島素敏感指數(shù)，同時無明顯不良反應。
[0006]研究發(fā)現(xiàn)葛根素可以對血管起到保護作用，保持其舒縮活性。高糖環(huán)境將會導致大鼠離體主動脈環(huán)收縮能力下降，葛根素能抑制高糖誘導的完整血管環(huán)反應性收縮能力的下降。葛根素具有抗氧化應激作用。葛根素還可以誘導血紅素加氧酶I(HO-1)的表達，另有研究表明HO-1具有抗氧化應激的作用。葛根素可以改善2型糖尿病患者凝血纖溶系統(tǒng)活性，調節(jié)血管內皮的舒縮功能，減輕尿微量白蛋白，從而發(fā)揮減輕胰島素抵抗，提高胰島素敏感性作用。葛根素可能通過阻斷Akt/GSK-3 β/β -catenin信號通路從而抑制脂肪分化形成。
[0007]山楂作為中國特有的藥果兼用樹種，其化學成分及藥理作用已得到充分地研究，到目前為止，從山楂中發(fā)現(xiàn)且分離得到的物質有150多種，其中主要包括黃酮類、有機酸類及三萜類。近年來研究發(fā)現(xiàn)山楂具有調血脂、降壓、助消化、強心、抗氧化、抗腫瘤等作用[1]。糖尿病并發(fā)癥眾多，可分為急性并發(fā)癥和慢性并發(fā)癥。急性并發(fā)癥包括糖尿病酮癥酸中毒和糖尿病高滲非酮癥昏迷；慢性并發(fā)癥累積全身各個組織器官，主要包括大血管(如心血管、腦血管、腎血管和四肢大血管)、微血管(如糖尿病腎病和糖尿病視網(wǎng)膜病變)和神經(jīng)病變(如自主神經(jīng)和軀體神經(jīng)等)等。山楂主要是對糖尿病的慢性并發(fā)癥發(fā)揮作用。山楂的活血化瘀作用能顯著抑制大鼠血栓形成。正常情況下，血管平滑肌處于靜止狀態(tài)，而高糖環(huán)境可刺激平滑肌細胞的增殖。山楂對頸動脈血管重構的干預作用，包括減少頸動脈中膜厚度(MT)、增加頸動脈血管內徑(Dd)。這一作用通過減少有絲分裂來抑制VSMC的增殖而得以實現(xiàn)。
[0008]在糖尿病的前期干預治療階段，如何有效控制患者的血糖并不產(chǎn)生副作用是本發(fā)明所提出的課題之一，同時，為了滿足不同服用人群的需要，提供一種有效且價格低廉的藥物組合物也本發(fā)明的目的之一。
[0009]基于現(xiàn)有技術中所存在的問題，本發(fā)明的藥物組合物是以純天然植物葛根、山楂混合加工提煉而成的一種具有降血糖功能的藥物，對預防胰島β細胞損傷，保護胰島β細胞功能有特殊的療效。同時，該葛根、山楂組合物通過適當?shù)呐浔?，消除了該兩種中藥材單獨服用時治療作用沒有充分顯現(xiàn)的弱點，作為前期干預治療糖尿病的藥物，取得了意想不到的治療效果的同時，在成本和價格方便也具有極大的實用性。


【發(fā)明內容】

[0010]本發(fā)明所要解決的技術問題在于為糖尿病在發(fā)病之前提供一種干預治療糖尿病的藥物組合物。為解決上述問題，本發(fā)明人經(jīng)潛心研究發(fā)現(xiàn)了一種干預治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于，含有葛根和山楂為有效成分。
[0011]本發(fā)明所述一種干預治療糖尿病的藥物組合物，優(yōu)選有效成分占所述藥物組合物總重量的百分比為:所述葛根占35%?45%，所述山楂占30%?48%。
[0012]本發(fā)明所述一種干預治療糖尿病的藥物組合物，更優(yōu)選所述葛根占45%，所述山植占48 % ο
[0013]本發(fā)明所述一種干預治療糖尿病的藥物組合物，還包括藥學上可接受的載體和/或賦形劑。
[0014]本發(fā)明還提供一種藥物組合物在干預治療糖尿病中的應用，其特征在于，所述藥物組合物含有葛根和山楂為有效成分。
[0015]本發(fā)明還提供一種藥物組合物在干預治療糖尿病中的應用，優(yōu)選所述有效成分占所述藥物組合物總重量的百分比為:所述葛根占35%?45%，所述山楂占30%?48%。
[0016]本發(fā)明還提供一種藥物組合物在干預治療糖尿病中的應用，更優(yōu)選所述葛根占45%，所述山楂占48%。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1:本發(fā)明組合物具有降低糖尿病大鼠血糖作用的對比圖。
[0018]圖2:本發(fā)明組合物具有降低糖尿病大鼠葡萄糖耐量試驗曲線下面積的作用的對比圖。
[0019]圖3:各組大鼠血漿胰島素濃度的測量結果。
[0020]圖4:各組大鼠血漿膽固醇濃度的測量結果。
[0021]圖5:各組大鼠正常飼喂條件下大鼠血糖濃度一日波動曲線

【具體實施方式】
[0022]下面將具體說明本發(fā)明的實施方式，然而本發(fā)明的實施方式并不被以下【具體實施方式】所限制。
[0023]1.葛根與山楂揮發(fā)油的分離收集
[0024]揮發(fā)油，又名精油，是一類可隨水蒸氣蒸餾得到的與水不相混溶的油狀液體的總稱。從葛根和山楂的鮮果或其速凍冷藏鮮果中提取揮發(fā)油的常用方法有蒸餾法、溶劑提取法、壓榨法、超臨界液體萃取法。本實施方式中采用一般中藥揮發(fā)油所采取的水蒸汽蒸餾法，具體方法為常規(guī)方法，也可以采用CN201940071U、CN2928228Y、CN2686690Y等專利文獻中所描述的提取方法。
[0025]除了上述從鮮果中提取揮發(fā)油，還可以將原材料通過各種烘干方式干燥，然后通過本領域所采用的一般方法制備中藥浸膏，只要在不破壞原料主成分的情況下，本發(fā)明可選用任意方式提取葛根和山楂的主要成分，其中優(yōu)選分離收集揮發(fā)油，因為揮發(fā)油中可以將糖分及其它副作用成分降低至合理的范圍內。
[0026]2.組合物的制備
[0027]將上述分別從葛根和山楂中分離收集的揮發(fā)油，按照特定的比例混合，配制組合物原液。還根據(jù)臨床上不同的需求，制成丸劑、散劑、片劑、栓劑、顆粒劑、膜劑、膠囊劑、微囊劑、滴丸劑、氣霧劑、注射劑、膏劑、酒劑、糖漿劑、口服溶液劑、凝膠劑或脂質體?！揪唧w實施方式】可以依據(jù)中國藥典2000年版標準中執(zhí)行。
[0028]3.本發(fā)明組合物的效果檢測
[0029]3.1動物來源及模型制備
[0030]健康雄性SD大鼠，鼠齡2個月，體重150g?200g，由浙江省實驗動物中心提供。實驗前動物均置于實驗室適應環(huán)境一周，自由飲水及標準大鼠飼料喂養(yǎng)，保持籠內清潔，室溫控制在23±2°C,自然光照(養(yǎng)于寧波大學醫(yī)學院實驗動物中心)，相對濕度為60%?70%。先隨機選取6只大鼠作為正常對照組并喂以普通飼料四周。其余大鼠用高糖高脂飼料(15%豬油、20%蔗糖、13蛋黃粉、2%膽酸鈉、50%普通飼料)喂養(yǎng)四周后以30mg/kg的劑量(I周I次，連續(xù)2周)一次性腹腔注射I %鏈脲佐菌素(STZ，美國Sigma公司，批號:S0130-lg)檸檬酸緩沖液(以pH為4.2的0.lmol/L檸檬酸鈉緩沖液配制，現(xiàn)配現(xiàn)用)，正常對照組于尾靜脈同步注射等量的生理鹽水。
[0031]兩周后制模的大鼠剪尾取血測空腹血糖和隨機血糖，選用空腹血糖值(FBG)彡7.8mol/L,隨機血糖值彡11.lmol/L的大鼠12只，并隨機分為糖尿病模型組6只，每天灌胃0.9%生理鹽水；陽性藥物對照組6只，每天灌胃葛根山楂制劑。
[0032]3.2干預措施
[0033]糖尿病模型制作成功后開始干預治療。葛根山楂組合物按5g/kg劑量灌胃給藥，每天I次，連續(xù)灌胃4周。正常對照組同步給予等量的生理鹽水，連續(xù)灌胃4周。
[0034]本發(fā)明組合物實驗組按照200ml/kg的劑量灌胃，正常對照組和陰性對照組灌胃等溶劑的生理鹽水。其中在配置本發(fā)明的組合物時，葛根和山楂蒸餾液之外的余份為蒸餾水。灌胃時間間隔為12小時。
[0035]3.3標本的采集與處理
[0036]治療結束后，各組大鼠均測空腹血糖，稱體重，做好相關記錄，然后抓緊大鼠直接剪斷一側股動脈致其死亡，接著對大鼠進行解剖并迅速取胰腺，4°C生理鹽水沖洗干凈后用4%甲醛固定24h，蒸餾水浸泡4h。取出常規(guī)梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，LEICA2135石蠟切片機連續(xù)切片，厚度5 μ m,每隔20片取I片，每個標本取6片，分別裱于涂有聚賴氨酸的載玻片上，室溫保存?zhèn)溆谩?br> [0037]3.4觀察指標
[0038]3.4.1 一般情況
[0039]每日觀察大鼠進食，飲水情況，尿量，精神狀況等變化。分別在造模前，造模后，治療后測體重。
[0040]3.4.2血糖測定
[0041]3.4.2.1空腹血糖及隨機血糖
[0042]各組動物分別在造模前、造模后、治療后測空腹血糖(FBG) (mmol/L)，并每隔3天測一次隨機血糖，測空腹血糖前夜，大鼠禁食12h，次日鼠尾靜脈取血，用自動血糖儀測定空腹血糖，并做好相關記錄。
[0043]3.4.2.2 口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)
[0044]于造模前、造模后、治療后行口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)。大鼠禁食12h后，按2g/kg劑量，用50%葡萄糖溶液灌胃，于0h、0.5h、lh、2h取尾靜脈血測血糖。實驗結束后繪制各組大鼠葡萄糖耐量曲線。
[0045]3.4.3病理形態(tài)學
[0046]治療結束后動物處死并迅速摘取胰腺，4°C生理鹽水沖洗干凈后4%甲醛固定24h，蒸餾水浸泡4h。常規(guī)梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，LEICA2135石蠟切片機連續(xù)切片，厚度5 μ m，裱于涂有聚賴氨酸的載玻片上，使用蘇木精-伊紅染色法染色后光學顯微鏡下觀察。
[0047]3.4.4免疫組織化學
[0048]準備HIF-1 α親和純和抗體、即用型SABC試劑盒，DAB顯色試劑盒。取上述切片置于60°C烤箱考片lh，嚴格按照試劑盒操作說明書進行操作，行切片常規(guī)脫蠟，蒸餾水浸泡2分鐘；加3%過氧化氫室溫下10分鐘；蒸餾水洗I分鐘X 3次；切片置于0.01mol/L枸櫞酸緩沖液中，微波加熱至沸騰，斷電15分鐘，再次加熱沸騰后自然冷卻；加0.02mol/LPBS洗I分鐘X3次；加5% BSA抗原封閉，室溫下20分鐘，甩去多余液體；滴加一抗(I: 100)稀釋，37°C孵育I小時；0.02mol/LPBS洗2分鐘X3次；滴加生物素化二抗，37°C孵育20分鐘；0.02mol/LPBS洗2分鐘X 3次；滴加辣根過氧化物酶標記的鏈酶卵白素，37°C孵育20分鐘；0.02mol/LPBS洗5分鐘X4次；DAB顯色，鏡下控制反應時間；蘇木紫復染10秒，自來水沖洗；脫水、透明、中性樹脂封片。光鏡下觀察，特異性染色為片狀棕黃色顆粒。對每批染色均同步設立以0.lmol/LPBS液代替一抗的陰性空白對照。光學顯微鏡(400倍)下，每張切片隨機選擇4個視野，分別計數(shù)每個視野內的陽性細胞數(shù)，最后以各組的均數(shù)做比較。
[0049]實施例
[0050]分別將100g葛根和山楂的鮮果(或冷凍鮮果)用攪拌機攪碎勻漿，置于如圖1所示的蒸餾瓶中，蒸餾后收集蒸餾產(chǎn)物。其中葛根的蒸餾產(chǎn)物為642g，收率為64.2%，山楂的蒸餾產(chǎn)物為432g，收率為43.2%。
[0051]將上述蒸餾產(chǎn)物進行不同比例的配方，并飼喂給模型大鼠及作為對照的正常大鼠。本實驗例中，所使用的本發(fā)明組合物組分的配比為:葛根占45%，山楂占48%。而為了證明兩者混用所帶來的意想不到的效果，分別單獨使用葛根或單獨使用山楂，進行對比實驗，其中單獨使用某種組分時，使用量與本發(fā)明組合物的實驗例相同。
[0052]四周飼喂實驗結束后，統(tǒng)計各組大鼠的血液指標檢測值，以葡萄糖氧化酶法測定血清葡萄糖的濃度(單位為mg/dl)。
[0053]下面根據(jù)附圖順序依次介紹本發(fā)明組合物所取得的意想不到的效果。
[0054]圖1顯示的是本發(fā)明組合物一典型實驗例的結果，各實驗組為三次重復實驗的平均值。其中，
[0055]a組為正常大鼠的空白對照
[0056]b組為糖尿病模型大鼠的空白對照
[0057]c組為糖尿病模型大鼠經(jīng)本發(fā)明組合物干預治療后的血糖濃度
[0058]d組為單獨服用葛根的糖尿病模型大鼠
[0059]e組為單獨服用山楂的糖尿病模型大鼠
[0060]結果顯示c組大鼠經(jīng)服用本發(fā)明藥物組合物之后，其血糖濃度得到有效控制，而單獨服用葛根或山楂時，雖然血糖濃度有所抑制，但是并沒有被控制在理想的范圍之內。
[0061]圖2顯示了本發(fā)明的藥物組合物有降低糖尿病大鼠葡萄糖耐量試驗曲線下面積的作用，圖中a為正常組，b組，c組，d組和e組分別為糖尿病空白對照組和不同用藥組，取正常對照組為1，其余與之對比。其中，
[0062]a組為正常大鼠的空白對照
[0063]b組為糖尿病模型大鼠的空白對照
[0064]c組為糖尿病模型大鼠經(jīng)本發(fā)明組合物干預治療后的血糖濃度糖尿
[0065]d組為單獨服用葛根的糖尿病模型大鼠
[0066]e組為單獨服用山楂的糖尿病模型大鼠
[0067]結果顯示c組大鼠經(jīng)服用本發(fā)明藥物組合物之后，大鼠葡萄糖耐量試驗曲線下面積接近正常大鼠，而單獨服用葛根或山楂時，雖然血糖濃度有所抑制，但并不如本發(fā)明的實驗例理想。
[0068]圖3顯示了本發(fā)明的藥物組合物有維持血漿胰島素濃度的作用，圖中a為正常組，b組，c組，d組和e組分別為糖尿病空白對照組和不同用藥組，取正常對照組為1，其余與之對比。其中，
[0069]a組為正常大鼠的空白對照
[0070]b組為糖尿病模型大鼠的空白對照
[0071]c組為糖尿病模型大鼠經(jīng)本發(fā)明組合物干預治療后的血糖濃度糖尿
[0072]d組為單獨服用葛根的糖尿病模型大鼠
[0073]e組為單獨服用山楂的糖尿病模型大鼠
[0074]結果顯示c組大鼠經(jīng)服用本發(fā)明藥物組合物之后，大鼠血漿胰島素濃度接近正常大鼠，而單獨服用葛根或山楂時，雖然血漿胰島素濃度高于陽性對照，但并不如本發(fā)明的實驗例理想。
[0075]圖4顯示了本發(fā)明的藥物組合物有降低血漿膽固醇的作用，圖中a為正常組，b組，c組，d組和e組分別為糖尿病空白對照組和不同用藥組，取正常對照組方I，其余與之對比。其中，
[0076]a組為正常大鼠的空白對照
[0077]b組為糖尿病模型大鼠的空白對照
[0078]c組為糖尿病模型大鼠經(jīng)本發(fā)明組合物干預治療后的血糖濃度糖尿
[0079]d組為單獨服用葛根的糖尿病模型大鼠
[0080]e組為單獨服用山楂的糖尿病模型大鼠
[0081]結果顯示c組大鼠經(jīng)服用本發(fā)明藥物組合物之后，大鼠血漿膽固醇濃度接近正常大鼠，而單獨服用葛根或山楂時，雖然血漿胰島素濃度低于陽性對照，但并不如本發(fā)明的實驗例理想。
[0082]圖5是測量了 a至e組大鼠正常飼喂條件下大鼠血糖濃度一日波動曲線。圖中反應出，服用本發(fā)明組合物的c組曲線與正常大鼠非常接近，說明對于維持患病大鼠的血糖值在正常范圍內波動起到了良好的效果。
[0083]本發(fā)明的其它實施例與對照例的結果如表I所示，根據(jù)表I所示結果，可得知使用發(fā)明的藥物組合物后，取得的技術效果有:
[0084]1.與對照組相比，單獨飼喂葛根或山楂的蒸餾液，雖然對糖尿病模型大鼠中高血糖有一定的抑制作用，但是本發(fā)明的組合物卻能將大鼠的血糖降低到更低的水平。
[0085]2.尤其是按照本發(fā)明的比例混合使用葛根與山楂，結果顯示大鼠的血糖濃度被長時間控制在7-10mg/dl之間的正常值，而且隨著時間的波動曲線接近正常大鼠，因此本發(fā)明的組合物經(jīng)特定比例混合取得了意想不到的效果。
【權利要求】
1.一種治療糖尿病的藥物組合物，含有葛根和山楂為有效成分，其特征在于，所述葛根占35%?45%，所述山楂占30%?48%。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述葛根占45%，所述山楂占48%。
3.如權利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于，還包括藥學上可接受的載體和/或賦形劑。
4.一種藥物組合物在干預治療糖尿病中的應用，其特征在于，所述藥物組合物含有葛根和山楂為有效成分。
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述有效成分占所述藥物組合物總重量的百分比為:所述葛根占35%?45%，所述山楂占30%?48%。
6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述葛根占45%，所述山楂占48 %。
【文檔編號】A61P3/10GK104352593SQ201410591442
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年10月24日 優(yōu)先權日:2014年10月24日
【發(fā)明者】步世忠, 鄒欣蓉, 劉瓊, 羅春 申請人:寧波大學