一種光動力療法抗惡性腫瘤用的新型光敏劑及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種光動力療法抗惡性腫瘤用的新型光敏劑及其應(yīng)用，該新型光敏劑以對羥基桂皮酸為活性成分，配合光動力療法可顯示出非常明顯的癌細(xì)胞殺傷作用，具有較好的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種光動力療法抗惡性腫瘤用的新型光敏劑及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及一種用于光動力療法抗惡性腫瘤的新 型光敏劑及其應(yīng)用。
[0002]

【背景技術(shù)】
[0003] 惡性腫瘤是一類嚴(yán)重威脅人類健康的多發(fā)病和常見病，2002年惡性腫瘤發(fā)病人數(shù) 約220萬，死亡約160萬，預(yù)計到2020年，我國癌癥發(fā)病人數(shù)將達(dá)到300萬，死亡220萬；全 球新發(fā)病例將達(dá)1500萬，死亡1000萬，使人類面臨著防治惡性腫瘤新的挑戰(zhàn)。
[0004] 光動力治療（photodynamic therapy,F1DT)是隨著光纖技術(shù)、激光醫(yī)學(xué)和內(nèi)鏡技術(shù) 發(fā)展而興起的一種治療惡性腫瘤的新方法，目前認(rèn)為，光動力治療的主要機(jī)制有：（1)直接 細(xì)胞殺傷機(jī)制：主要是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及壞死；（2)脈管損傷機(jī)制：使腫瘤血管阻塞；(3)免 疫應(yīng)答機(jī)制：使腫瘤組織內(nèi)淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞、巨核細(xì)胞大量聚集。PDT與目前常用的外科 手術(shù)、化療和放療相比，最大的優(yōu)點(diǎn)在于可選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞，對正常細(xì)胞損害小，即對 器官結(jié)構(gòu)的完全保留、組織選擇性好、有效避免對正常組織的損傷，并可與其他療法聯(lián)合使 用，具有良好的臨床應(yīng)用前景。光敏劑的選擇是PDT的關(guān)鍵和核心問題，目前臨床常用的光 敏劑均為多種卟啉及其衍生物的復(fù)合物，成分復(fù)雜、易受生物代謝因素的影響，其光敏損傷 的作用程度不易控制，并且給藥后需避光1?2個月，給患者生活帶來不便，也嚴(yán)重影響到 光動力療法的實(shí)際應(yīng)用。因此，尋找高效、化學(xué)結(jié)構(gòu)明確、成分單一、代謝快或避光期短的光 敏劑一直是光動力診治領(lǐng)域中最受各國關(guān)注的重要科學(xué)問題。
[0005] 對羥基桂皮酸是一種酚酸類化合物，存在在于好幾種中草藥中。蔡鷹等人通過深 入研究回心草的化學(xué)成分，發(fā)現(xiàn)其所含的對羥基桂皮酸和7,8-二羥基香豆素能夠不同程 度增加缺氧再給氧心肌細(xì)胞存活率，增加超氧化物歧化酶和三磷酸腺苷活性，降低心肌細(xì) 胞乳酸脫氫酶的釋放，降低培養(yǎng)液中丙二醒的含量（Ying Cai，Yu Lu, Xiaohe Lu, et al. Anti-hypoxia activity and related components of Rhodobryum giganteum Par. [J]. Phytomedicine，2011 (18) :224. )。CN101817746A公開了對羥基桂皮酸的制備工藝，包括： 取干燥白茅根，切碎后用95%乙醇加熱回流提取，提取液減壓回收得浸膏，將浸膏混懸在 水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯萃取液濃縮至干即得乙酸 乙酯萃取物。乙酸乙酯部位干法上樣進(jìn)行硅膠柱色譜，以石油醚（60?90°C )_乙酸乙酯 (100 : 1?1 : 1)梯度洗脫，所得流分經(jīng)反復(fù)硅膠色譜、反相柱色譜以及凝膠柱純化，分離 得到對羥基桂皮酸單體。并且，該專利公開了對羥基桂皮酸具有抑制補(bǔ)體系統(tǒng)過度激活的 藥理作用。通過檢索國內(nèi)外文獻(xiàn)，尚沒有發(fā)現(xiàn)對羥基桂皮酸具有抗癌或增強(qiáng)光動力療法抗 癌療效的生物活性的文獻(xiàn)報道。
[0006]


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明人從中草藥中提取分離了對羥基桂皮酸，并意外地發(fā)現(xiàn)其是一種新型的光 敏劑，在與其相匹配的光源照射下，能被激活產(chǎn)生一系列光化學(xué)反應(yīng)從而導(dǎo)致癌細(xì)胞死亡 或凋亡。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種用于光動力療法抗惡性腫瘤的新型光敏劑及其 應(yīng)用。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量體外試驗(yàn)研究并不懈探索，最終得出如 下結(jié)果：不同劑量的對羥基桂皮酸作用于宮頸癌Hela細(xì)胞，從細(xì)胞形態(tài)、MTT結(jié)果均顯示對 羥基桂皮酸介導(dǎo)的PDT治療能有效抑制宮頸癌Hela細(xì)胞增殖，且呈明顯的量效關(guān)系。單獨(dú) 用藥而不進(jìn)行藍(lán)光照射時，對羥基桂皮酸對癌細(xì)胞沒有明顯毒性，在光照能量密度lOJ/cm 2 時，PDT對Hela細(xì)胞具顯著的殺傷作用。
[0009] 基于上述研究成果，本發(fā)明的技術(shù)方案可以概括如下： 一種光動力療法抗惡性腫瘤用的新型光敏劑，該新型光敏劑以對羥基桂皮酸為活性成 分。
[0010] 對羥基桂皮酸在制備以光動力療法抗惡性腫瘤用的光敏劑中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所 述的惡性腫瘤包括宮頸癌、食管癌、乳腺癌、惡性淋巴瘤、鼻咽癌、口腔癌和皮膚惡性黑色素 瘤。
[0011] 根據(jù)對羥基桂皮酸的物理性質(zhì)，可以將該化合物單體以溶液的形式，或者凍干制 劑的形式，并且還包含用于將該凍干制劑進(jìn)行重新配制以進(jìn)行施用的溶劑，從而配合光動 力療法增強(qiáng)光照殺死癌細(xì)胞的敏感性。
[0012] 光敏劑是影響PDT作用效果的重要因素。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明首次提出將對 羥基桂皮酸作為配合光動力療法的光敏劑，并獲得了非常顯著的抗癌細(xì)胞增殖效果(癌細(xì) 胞增殖抑制率達(dá)80%以上)，為臨床用藥提供了一種新的治療思路。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，對 羥基桂皮酸光敏劑具有高的光毒性和低的暗毒性，有望開發(fā)成新一代光敏劑，具有較好的 臨床意義和經(jīng)濟(jì)意義。
[0013] 說明書附圖 圖1為不同濃度光敏劑的光動力療法對人宮頸癌Hela細(xì)胞抑制率曲線。
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【具體實(shí)施方式】
[0015] 上述說明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段， 并可依照說明書的內(nèi)容和本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)手段予以實(shí)施，以下以本發(fā)明的較佳實(shí)施例做 進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0016] 實(shí)施例1人宮頸癌細(xì)胞系Hela229細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)和傳代 人宮頸癌細(xì)胞系Hela229,購自上海研域生物科技有限公司。取出凍存管后，投入37°C 水浴中，震蕩解凍2min，酒精消毒管壁外側(cè)后，將其轉(zhuǎn)入超凈臺中，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心 管中，加入5ml 37°C預(yù)熱的含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，并清洗凍存管一次，將離心管 離心（1000 rpm，5 min)，棄去上清液，再加入2ml 37°C預(yù)熱的含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng) 基，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中，放置于37°C、50mL/L CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，并以0. 5%胰蛋白酶 消化并常規(guī)傳代。
[0017] 實(shí)施例2對輕基桂皮酸最大無毒濃度和激光最大無毒能量的確定 取處于對數(shù)生長期的人宮頸癌細(xì)胞系Hela229,培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基 中，調(diào)節(jié)細(xì)胞密度5父104個/!111，取10(^1接種于96孔培養(yǎng)板，在371：、5〇111171〇) 2飽和濕 度的孵箱內(nèi)培養(yǎng)24h。試驗(yàn)分為單純給藥組和單純藍(lán)光照射組。單純給藥組即只加入對羥基 桂皮酸不給予藍(lán)光照射，用無血清DMEM培養(yǎng)液溶解羥基桂皮酸，并加入到接種有Hela229 細(xì)胞的96孔培養(yǎng)板中，分別使終濃度為10、20、40、80、160 μ M，以不加藥作為空白對照；單 純藍(lán)光照射組，即僅給予藍(lán)光照射不加入光敏劑對羥基桂皮酸，能量密度分別為5、10和 15J/cm 2,激光波長562nm，功率500 mW，以不照射作為空白對照。每組3個復(fù)孔。在孵箱內(nèi) 避光培養(yǎng)24h，然后棄去培養(yǎng)液，每孔加入180 μ L新鮮無血清DMEM培養(yǎng)液和20 μ L濃度為 5mg/mL的MTT溶液，37。。避光孵育4h。小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液上清，每孔加入150 μ L DMSO， 避光振蕩IOmin后，各處理均檢測OD492值。在全自動酶標(biāo)儀上測定各孔的吸光度值（Α)，各 平行孔的A值取平均數(shù)。按如下公式計算細(xì)胞增殖抑制率：細(xì)胞增殖抑制率=(干預(yù)組A 值-本底A值V(空白對照組A值-本底A值）Χ100%。試驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果見表1、表2。
[0018] 通過表1的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，單獨(dú)使用濃度< 80μΜ的對羥基桂皮酸對宮頸癌 Hela細(xì)胞沒有明顯的毒性反應(yīng)，劑量增大至160 μ M后對Hela細(xì)胞的生長有一定的抑制作 用。通過表2的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，單獨(dú)使用激光照射對細(xì)胞生存率也沒有影響，能量密度 5、10和15 J/cm2的激光劑量均對宮頸癌細(xì)胞沒有明顯的毒性。
[0019] 表1不同濃度的對羥基桂皮酸對Hela細(xì)胞的增殖抑制率比較（％)

【權(quán)利要求】
1. 一種光動力療法抗惡性腫瘤用的新型光敏劑，其特征在于，該新型光敏劑以對羥基 桂皮酸為活性成分。
2. 對羥基桂皮酸在制備以光動力療法抗惡性腫瘤用的光敏劑中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的惡性腫瘤包括宮頸癌、食管癌、乳 腺癌、惡性淋巴瘤、鼻咽癌、口腔癌和皮膚惡性黑色素瘤。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的惡性腫瘤為宮頸癌。
【文檔編號】A61P35/00GK104306972SQ201410623138
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年11月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月9日
【發(fā)明者】張德芳 申請人:白玲強(qiáng)