本發(fā)明涉及已知化合物的新用途，具體地說，涉及一種具有熒光基團的苯甲酰胺類化合物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
肝癌是我國的重大腫瘤疾病之一，發(fā)病率高，死亡率高，研制新的防治藥物極為重要。目前，已發(fā)現(xiàn)煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（Nampt）可調(diào)控哺乳動物細胞內(nèi)必需能量物質(zhì)NAD的水平。而肝癌細胞具有很高的NAD消耗和代謝速率，對于Nampt抑制劑較為敏感。因而NAD合成途徑的限速酶Nampt成為癌癥治療的新靶標，其酶抑制劑FK866（HasmannM,etal.,CancerResearch2003;63:7436-7442.）和CHS-828（HjarnaaPJV,etal.,CancerResearch1999;59:5751-5757.）目前已進入癌癥治療的臨床研究?；衔?-(3-氧代-4-丙基-3,4-二氫喹喔啉-2-基)-N-(吡啶-3-基甲基)苯甲酰胺是一種苯甲酰胺類化合物，其英文名為4-(3-oxo-4-propyl-3,4-dihydroquinoxalin-2-yl)-N-(pyridin-3-ylmethyl)benzamide，結(jié)構(gòu)式如式I所示，目前關(guān)于該化合物在預(yù)防和/或治療肝癌方面的應(yīng)用還未見報道。。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供如式I所示的具有熒光基團的苯甲酰胺類化合物的新用途，。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：在本發(fā)明的第一方面，如式I所示的具有熒光基團的苯甲酰胺類化合物用于制備預(yù)防和/或治療肝癌的藥物。在本發(fā)明的第二方面，如式I所示的具有熒光基團的苯甲酰胺類化合物用于制備試劑，所述的試劑用于抑制人肝癌細胞株HepG2的增殖。在本發(fā)明的第三方面，如式I所示的具有熒光基團的苯甲酰胺類化合物用于制備試劑，所述的試劑用于抑制煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的活性。在本發(fā)明的第四方面，如式I所示的具有熒光基團的苯甲酰胺類化合物用于制備試劑，所述的試劑用于肝癌的影像學(xué)診斷。所述的“藥物”可為任何適用的常規(guī)劑型，其中所含如式I所示的化合物的用量為治療有效量以上，可根據(jù)具體情況選擇，一般為0.01~100mg/kg/天。所述的藥物可以僅以如式I所示的化合物作為唯一活性成分，也可還含有除如式I所示的化合物以外的其它活性成分。所述的其它活性成分為對如式I所示的化合物的抑制煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的活性沒有不良影響可聯(lián)合使用的其它活性成分，如其它通過抑制煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶來防治的藥物的活性成分。所述的“試劑”是指生物化學(xué)試劑或試藥，其概念包含診斷試劑、預(yù)防或治療疾病的藥物等。本發(fā)明優(yōu)點在于：本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一種具有熒光基團的苯甲酰胺類化合物的全新用途，該化合物對于煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶表現(xiàn)出較好的抑制活性，可用于制備通過抑制煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶來預(yù)防和/或治療的疾病的藥物，可用于防治肝癌；同時該化合物還具有熒光基團，因此也可用于診斷肝癌。附圖說明圖1為實施例1中，化合物I對煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的抑制曲線圖。圖2為實施例2中，化合物I對人肝癌細胞HepG2增殖能力抑制的量效曲線圖。圖3為實施例3中，化合物I在人肝癌細胞HepG2中的熒光成像圖。具體實施方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的具體實施方式作詳細說明。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。實施例1化合物I抑制煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的活性以下的酶是指煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，可購自康肽生物科技有限公司（003-82）或美國ChemDiv公司（M049-0244），也可自行制備。1、酶的制備：將轉(zhuǎn)化有重組質(zhì)粒（Nampt-pET28a+）的BL21（DE3）plysS細胞接種于2×YT培養(yǎng)基（37μg/ml氯霉素和75μg/ml卡那霉素）中，37℃振搖過夜，收集菌體后用20倍于原體積的新鮮培養(yǎng)基重懸，37℃培養(yǎng)至OD600約0.6，在0.5mMIPTG、28℃條件下誘導(dǎo)5小時。離心收集菌體，并重懸于lysisbuffer（20mMTris-HCl，300mMNaCl，pH=7.5）中，200W超聲裂解細胞，超聲1秒間歇9秒，共進行30分鐘。將裂解液于12500rpm、4℃離心50分鐘后吸取上清液。該上清液與Ni-NTA柱（購自QIAGEN公司）在冰上振搖孵育2小時，再依次用bindingbuffer（5mMimidazole，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.5）、washbuffer1（20mMimidazole，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.5）、washbuffer2（40mMimidazole，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.5）、washbuffer3（60mMimidazole，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.5）依次洗去雜蛋白，最后用Elutionbuffer（200mMimidazole，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.5）洗脫收集目的蛋白，并進行SDS-PAGE檢測。將收集的目的蛋白與無菌甘油以1:1比例混合，用Bradford方法測定蛋白濃度后保存于-20℃?zhèn)溆谩?、酶反應(yīng)體系為25μl，其中各種組分的濃度為：50mMTris-HCl（pH=7.5）、0.02%BSA、12mMMgCl2、2mMATP、0.4mMPRPP、2mMDTT、2μg/mlNampt、0.2μMNAM、2%DMSO和倍比稀釋的化合物I。先將0.5μl不同濃度的化合物I加于96孔板，再加入20μl酶反應(yīng)混合溶液（除底物之外的酶反應(yīng)組分），室溫孵育5分鐘后，加入4.5μl底物NAM溶液以啟動反應(yīng)，37℃反應(yīng)15分鐘后于95℃加熱1分鐘終止酶反應(yīng)。3、待酶反應(yīng)液在冰上冷卻后，依次加入10μl20%苯乙酮和10μl2MKOH，渦旋混合儀上混勻后于冰水中作用2分鐘，加入45μl88%甲酸，37℃加熱10分鐘，冰上冷卻。4、使用酶標儀測定激發(fā)波長382nm、發(fā)射波長445nm處的熒光值。5、根據(jù)公式：E=R/(1+(C/IC50)S)+B（其中E為酶活性，C為化合物濃度，R、IC50、S、B為待擬合的參數(shù)），在origin7.0軟件中將酶相對活性對化合物I濃度的曲線進行擬合（見圖1），求出化合物I的IC50，結(jié)果見表1：表1實施例2化合物I抑制人肝癌細胞的體外增殖我們考察了化合物I對人肝癌細胞體外增殖能力的抑制作用。用梯度濃度的化合物I作用于對數(shù)生長期的細胞株2天，利用細胞活力法進行檢測：1、將對數(shù)生長期的HepG2細胞消化后，吹打成單細胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板，1×104細胞/孔，每孔培養(yǎng)基100μl，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。2、待細胞貼壁后，加入梯度濃度的受試化合物I在培養(yǎng)箱中再培養(yǎng)2天。3、細胞活力測定：取細胞活力試劑（CCK-8試劑）10μl依次加到96孔細胞培養(yǎng)板中，混合均勻后于37℃反應(yīng)30分鐘，酶標儀檢測各孔OD值（檢測波長：450nm），記錄結(jié)果，按下列公式計算抑制率：抑制率(%)=(OD對照－OD給藥)/OD對照×100%。結(jié)果顯示（見圖2），化合物I對人肝癌細胞株HepG2的增殖表現(xiàn)出不同程度的抑制作用，化合物I對細胞活力抑制的IC50值為3050±950nM。實施例3化合物I在人肝癌細胞中的熒光成像我們通過激光共聚焦顯微鏡觀測了化合物I在人肝癌細胞HepG2中的熒光成像。具體方法為：1、將對數(shù)生長期的細胞消化后，吹打成單細胞懸液，接種于培養(yǎng)皿中，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。2、待細胞貼壁后，加入終濃度為3μM的化合物I，溶劑對照則加入同等體積的溶劑DMSO，即二甲基亞砜。3、30分鐘后，在激光共聚焦顯微鏡下觀測化合物熒光。4、觀測完畢后，迅速去除含有化合物的培養(yǎng)液，并用磷酸鹽緩沖液清洗3次后再次在激光共聚焦顯微鏡下觀測細胞中的熒光。5、觀測完畢后，立刻換為無化合物培養(yǎng)液繼續(xù)孵育4小時。6、4小時后，取出培養(yǎng)皿再次觀測細胞中的熒光。化合物I在人肝癌細胞HepG2中的熒光成像圖見圖3，在體外培養(yǎng)條件下，發(fā)現(xiàn)其可富集于肝癌細胞中，因此可用于肝癌的影像診斷。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。