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一種橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法

文檔序號:768766閱讀:258來源:國知局
一種橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,包括:按4∶1至20∶1的質(zhì)量比例稱取磷脂與膽固醇,并稱取適量的橄欖苦苷,使藥物與脂質(zhì)的質(zhì)量比例為20∶1至150∶1;加入15-50倍的低沸點有機溶劑,加熱使溶解;30-70℃下減壓蒸餾除去有機溶劑,使在器壁形成一層脂質(zhì)薄膜;加入質(zhì)量為脂質(zhì)膜15-50倍的水性介質(zhì),超聲20-90min,使脂質(zhì)薄膜分散于介質(zhì)中形成脂質(zhì)體;分別用0.45及0.22μm的微孔濾膜過濾3-6次。選用的材料為磷脂與膽固醇;無需使用惰性氣體;采用的是超聲分散法。本發(fā)明提高了橄欖苦苷對腫瘤的治療效果,同時減緩了橄欖苦苷的降解,改善了藥物口服生物利用度,延長了體內(nèi)作用時間。
【專利說明】一種橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于脂質(zhì)體制備【技術領域】,尤其涉及一種橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法。

【背景技術】
[0002]橄欖苦苷主要存在于素馨花、小葉丁香、紫丁香及油橄欖葉等植物中,具有抗病毒、抗菌、抗腫瘤及保護心血管系統(tǒng)等作用,其中較為重要的是它的抗癌活性,多個動物體內(nèi)實驗證實了橄欖苦苷對乳腺癌、前列腺癌及直腸癌有很好的治療效果。目前橄欖苦苷的應用多為普通劑型,藥物對腫瘤組織與正常組織無識別能力,給藥后隨血液循環(huán)進入到全身各組織與器官,在各組織器官的分布情況主要與器官的血流量相關,導致腫瘤部位的藥物濃度較低,需要通過多次重復給藥才能達到有效治療濃度,而血流量豐富的正常組織卻擁有大量的橄欖苦苷,不僅造成使用上的浪費,同時給正常組織帶來毒副作用。將橄欖苦苷制成脂質(zhì)體,可通過腫瘤的EPR效應使藥物更長時間地停留在腫瘤部位,特異性作用于腫瘤,減少在正常組織的分布,增強殺傷力,提高療效,降低毒副作用;還可在脂質(zhì)體上連接具有主動靶向作用的配體,將藥物定位濃集至癌變部位,進一步改善療效,降低毒副作用。由于橄欖苦苷在酸堿性環(huán)境中易降解,將它包封在脂質(zhì)體中,可減少其與胃腸道液的接觸,減慢橄欖苦苷的降解速度,改善吸收與口服生物利用度,延長體內(nèi)作用時間。脂質(zhì)體增強藥物活性、降低毒副作用的研究很多,如鄧旭坤發(fā)表的“馬錢子堿及其脂質(zhì)體對移植性荷瘤小鼠抗腫瘤作用的對比研究”一文的研究結(jié)果顯示,馬錢子堿制成脂質(zhì)體后對H印s腫瘤與S180腫瘤的抑制率明顯高于游離藥物(中草藥,2006,27 (3) =389-393);趙榮生等發(fā)表的“兩性霉素B脂質(zhì)體體內(nèi)外毒性及抗真菌活性的研究”指出,兩性霉素B制成脂質(zhì)體后,與市售注射劑比較,溶血現(xiàn)象明顯降低,急性毒性降為注射劑的1/6,而抗真菌的活性與注射劑相當(中國抗生素雜志,2001,26(2) =123-126);秦晶等的研究論文“阿魏酸脂質(zhì)體的制備及其體外抗氧化活性評價”顯示,阿霉素脂質(zhì)體的體外抗氧化活性顯著高于阿霉素溶液(藥學學報,2007,42 (10): 1092-1096)。
[0003]目前尚無有關橄欖苦苷脂質(zhì)體研制的報道,僅檢索到I篇內(nèi)容有所關聯(lián)的文獻。Paiva-Martins 等發(fā)表了題為 “Activity and locat1n of olive oil phenolicant1xidants in liposomes,,(Chemistry and Physics of Lipids, 2003,124:23-36)的文章,文中作者為研究橄欖油中的多酚類成分對低密度脂蛋白氧化的延緩與抑制作用,制備了一大單層脂質(zhì)體替代體內(nèi)的生物脂質(zhì)膜,考察橄欖苦苷、羥基酪醇等橄欖油內(nèi)的多酚組分對脂質(zhì)生物膜氧化的保護作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明實施例的目的在于提供一種橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,旨在解決橄欖苦苷給藥后對正常組織與腫瘤組織無選擇性的問題,本發(fā)明將橄欖苦苷制成脂質(zhì)體,依靠腫瘤的EPR效應,使脂質(zhì)體能攜帶橄欖苦苷定位濃集在腫瘤部位,減少其在其他正常組織中的分布,加強藥物對腫瘤的殺傷能力,降低藥物對正常組織器官的毒副作用,提高整體治療效果。
[0005]本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的,一種橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,該橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟:
[0006]步驟一,按4:1至20:1的質(zhì)量比例稱取磷脂與膽固醇,并稱取適量的橄欖苦苷,使藥物與脂質(zhì)的質(zhì)量比例為20:1至150:1 ;橄欖苦苷的量由磷脂與膽固醇的量決定,磷脂與膽固醇確定后,橄欖苦苷的量應占它們的1/20至1/150 ;
[0007]步驟二,加入15-50倍的低沸點有機溶劑,加熱使溶解;
[0008]步驟三,30-70°C下減壓蒸餾除去有機溶劑,使在器壁形成一層脂質(zhì)薄膜;
[0009]步驟四,加入質(zhì)量為脂質(zhì)膜15-50倍的水性介質(zhì),超聲20_90min,使脂質(zhì)薄膜分散于介質(zhì)中形成脂質(zhì)體;
[0010]步驟五,分別用0.45及0.22 μ m的微孔濾膜過濾3-6次。
[0011]進一步,在步驟一中,磷脂為大豆磷脂,氫化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、蛋黃磷月旨,氫化蛋黃磷脂、蛋黃磷脂酰甘油中的一種或幾種。
[0012]進一步,在步驟二中,低沸點有機溶劑,包括乙醚、戊烷、二氯甲烷、丙酮、1,1-二氯乙烷、氯仿、甲醇、四氫呋喃、己烷中的一種或幾種。
[0013]4、如權利要求3所述的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,低沸點有機溶劑優(yōu)選為二氯甲烷、丙酮、1,1-二氯乙烷、氯仿、甲醇中的一種或幾種。
[0014]進一步,在步驟四中,分散脂質(zhì)薄膜的水性介質(zhì),包括水、磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、蔗糖溶液、PVA溶液、葡萄糖溶液、海藻糖溶液、PEG溶液的一種或幾種。
[0015]進一步,分散脂質(zhì)膜的水性介質(zhì)優(yōu)選為磷酸鹽緩沖液、蔗糖溶液與葡萄糖溶液。
[0016]進一步,在步驟四中,超聲使用常溫超聲、冰浴超聲和加熱超聲;橄欖苦苷脂質(zhì)體粒徑在400nm以下,包封率為40% -90%,適于臨床用藥。
[0017]進一步,該橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟:
[0018]步驟一,按6:1的質(zhì)量比例稱取大豆磷脂與膽固醇共600mg,加入1mg橄欖苦苷;
[0019]步驟二,加入15ml的二氯甲烷,40°C下稍加熱使溶;
[0020]步驟三,將溶液轉(zhuǎn)入球形燒瓶中,使用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器在40°C下減壓蒸餾除去二氯甲烷,在燒瓶內(nèi)壁形成一層均勻的脂質(zhì)膜;
[0021]步驟四,倒入1ml pH6.0磷酸鹽緩沖液,超聲30min,使脂質(zhì)膜從瓶壁脫落,分散在水相介質(zhì)中形成脂質(zhì)體;
[0022]步驟五,分別用孔徑為0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過濾3次;
[0023]制得的脂質(zhì)體粒徑為235nm,包封率為45%。
[0024]進一步,該橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟:
[0025]步驟一,按10:1的質(zhì)量比例稱取大豆磷脂與膽固醇共600mg,加入20mg橄欖苦苷;
[0026]步驟二,加入1ml的丙酮,50°C下稍加熱使溶;
[0027]步驟三,將溶液轉(zhuǎn)入球形燒瓶中,使用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器在50°C下減壓蒸餾除去丙酮,在燒瓶內(nèi)壁形成一層均勻的脂質(zhì)膜;
[0028]步驟四,倒入25ml質(zhì)量濃度為10%的蔗糖溶液,超聲45min,使脂質(zhì)膜從瓶壁脫落,分散在水相介質(zhì)中形成脂質(zhì)體;
[0029]步驟五,分別用孔徑為0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過濾3次。
[0030]進一步,該橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟:
[0031]步驟一,按8:1的質(zhì)量比例稱取大豆磷脂與膽固醇共600mg,加入5mg橄欖苦苷;
[0032]步驟二,加入25ml的氯仿,40°C下稍加熱使溶;
[0033]步驟三,將溶液轉(zhuǎn)入球形燒瓶中,使用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器在40°C下減壓蒸餾除去氯仿,在燒瓶內(nèi)壁形成一層均勻的脂質(zhì)膜;
[0034]步驟四,倒入15ml質(zhì)量濃度為10%的蔗糖溶液,超聲60min,使脂質(zhì)膜從瓶壁脫落,分散在水相介質(zhì)中形成脂質(zhì)體;
[0035]步驟五,分別用孔徑為0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過濾3次。
[0036]本發(fā)明提供的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,選用的材料為磷脂與膽固醇;無需使用惰性氣體;采用的是超聲分散法。本發(fā)明研制的橄欖苦苷脂質(zhì)體,因腫瘤的EPR效應而為腫瘤所保留,提高了橄欖苦苷在腫瘤部位的濃度,增強了藥物對腫瘤的殺傷作用;同時橄欖苦苷在正常組織的分布減少,對正常組織產(chǎn)生的毒副作用降低。與橄欖苦苷普通劑型相比,橄欖苦苷脂質(zhì)體在增效減毒方面具有明顯的優(yōu)勢。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0037]圖1是本發(fā)明實施例提供的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法流程圖。

【具體實施方式】
[0038]為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白,以下結(jié)合實施例,對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解,此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明,并不用于限定本發(fā)明。
[0039]下面結(jié)合附圖及具體實施例對本發(fā)明的應用原理作進一步描述。
[0040]如圖1所示,本發(fā)明實施例的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟:
[0041]SlOl:按4:1至20:1的質(zhì)量比例稱取磷脂與膽固醇,并稱取適量的橄欖苦苷,使藥物與脂質(zhì)的質(zhì)量比例為20:1至150:1 ;
[0042]S102:加入15-50倍的低沸點有機溶劑,加熱使溶解;
[0043]S103:30-7(TC下減壓蒸餾除去有機溶劑,使在器壁形成一層脂質(zhì)薄膜;
[0044]S104:加入質(zhì)量為脂質(zhì)膜15-50倍的水性介質(zhì),超聲20_90min,使脂質(zhì)薄膜分散于介質(zhì)中形成脂質(zhì)體;
[0045]S105:分別用0.45及0.22 μ m的微孔濾膜過濾3-6次。
[0046]在步驟S102中,低沸點有機溶劑,包括乙醚、戊烷、二氯甲烷、丙酮、1,1-二氯乙烷、氯仿、甲醇、四氫呋喃、己烷中的一種或幾種。
[0047]在步驟S104中,分散脂質(zhì)薄膜的水性介質(zhì),包括水、磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、蔗糖溶液、PVA溶液、葡萄糖溶液、海藻糖溶液、PEG溶液的一種或幾種。
[0048]在步驟S104中,超聲可使用常溫超聲、冰浴超聲和加熱超聲。
[0049]優(yōu)選磷脂為大豆磷脂,氫化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、蛋黃磷脂,氫化蛋黃磷脂、蛋黃磷脂酰甘油中的一種或幾種。
[0050]優(yōu)選的低沸點有機溶劑為二氯甲烷、丙酮、1,1-二氯乙烷、氯仿、甲醇中的一種或幾種。
[0051]優(yōu)選的用于分散脂質(zhì)膜的水性介質(zhì)為磷酸鹽緩沖液、蔗糖溶液與葡萄糖溶液。
[0052]本發(fā)明制備的橄欖苦苷脂質(zhì)體粒徑在400nm以下,包封率為40% _90%,適于臨床用藥。
[0053]本發(fā)明的工作原理:
[0054]本發(fā)明按一定比例稱取磷脂、膽固醇與橄欖苦苷,加入低沸點有機溶劑溶解材料與藥物,再減壓蒸餾除去有機溶劑,使器壁上形成一層脂質(zhì)薄膜;加入水性介質(zhì)超聲
20-90min,使脂質(zhì)薄膜分散于介質(zhì)中形成脂質(zhì)體;分別用不同孔徑的微孔濾膜過濾除去較大的液滴,得到粒徑在400nm以下、包封橄欖苦苷的脂質(zhì)體。
[0055]本發(fā)明的具體實施例:
[0056]實施例1:
[0057](I)按6:1的質(zhì)量比例稱取大豆磷脂與膽固醇共600mg,加入1mg橄欖苦苷;
[0058](2)加入15ml的二氯甲烷,40°C下稍加熱使溶;
[0059](3)將溶液轉(zhuǎn)入球形燒瓶中,使用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器在40°C下減壓蒸餾除去二氯甲烷,在燒瓶內(nèi)壁形成一層均勻的脂質(zhì)膜;
[0060](4)倒入1ml pH6.0磷酸鹽緩沖液,超聲30min,使脂質(zhì)膜從瓶壁脫落,分散在水相介質(zhì)中形成脂質(zhì)體;
[0061](5)分別用孔徑為0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過濾3次;
[0062]制得的脂質(zhì)體粒徑為235nm,包封率為45%。
[0063]實施例2:
[0064](I)按10:1的質(zhì)量比例稱取大豆磷脂與膽固醇共600mg,加入20mg橄欖苦苷;
[0065](2)加入1ml的丙酮,50°C下稍加熱使溶;
[0066](3)將溶液轉(zhuǎn)入球形燒瓶中,使用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器在50°C下減壓蒸餾除去丙酮,在燒瓶內(nèi)壁形成一層均勻的脂質(zhì)膜;
[0067](4)倒入25ml質(zhì)量濃度為10%的蔗糖溶液,超聲45min,使脂質(zhì)膜從瓶壁脫落,分散在水相介質(zhì)中形成脂質(zhì)體;
[0068](5)分別用孔徑為0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過濾3次。
[0069]實施例3:
[0070](I)按8:1的質(zhì)量比例稱取大豆磷脂與膽固醇共600mg,加入5mg橄欖苦苷;
[0071](2)加入25ml的氯仿,40°C下稍加熱使溶;
[0072](3)將溶液轉(zhuǎn)入球形燒瓶中,使用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器在40°C下減壓蒸餾除去氯仿,在燒瓶內(nèi)壁形成一層均勻的脂質(zhì)膜;
[0073](4)倒入15ml質(zhì)量濃度為10%的蔗糖溶液,超聲60min,使脂質(zhì)膜從瓶壁脫落,分散在水相介質(zhì)中形成脂質(zhì)體;
[0074](5)分別用孔徑為0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過濾3次。
[0075]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已,并不用以限制本發(fā)明,凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等,均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權利要求】
1.一種橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,該橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟: 步驟一,按4:1至20:1的質(zhì)量比例稱取磷脂與膽固醇,并稱取適量的橄欖苦苷,使藥物與脂質(zhì)的質(zhì)量比例為20:1至150:1 ;橄欖苦苷的量由磷脂與膽固醇的量決定,磷脂與膽固醇確定后,橄欖苦苷的量應占它們的1/20至1/150 ; 步驟二,加入15-50倍的低沸點有機溶劑,加熱使溶解; 步驟三,30-70°C下減壓蒸餾除去有機溶劑,使在器壁形成一層脂質(zhì)薄膜; 步驟四,加入質(zhì)量為脂質(zhì)膜15-50倍的水性介質(zhì),超聲20-90min,使脂質(zhì)薄膜分散于介質(zhì)中形成脂質(zhì)體; 步驟五,分別用0.45及0.22 μ m的微孔濾膜過濾3_6次。
2.如權利要求1所述的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,在步驟一中,磷脂為大豆磷脂,氫化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、蛋黃磷脂,氫化蛋黃磷脂、蛋黃磷脂酰甘油中的一種或幾種。
3.如權利要求1所述的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,在步驟二中,低沸點有機溶劑,包括乙醚、戊烷、二氯甲烷、丙酮、1,1-二氯乙烷、氯仿、甲醇、四氫呋喃、己烷中的一種或幾種。
4.如權利要求3所述的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,低沸點有機溶劑優(yōu)選為二氯甲烷、丙酮、1,1-二氯乙烷、氯仿、甲醇中的一種或幾種。
5.如權利要求1所述的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,在步驟四中,分散脂質(zhì)薄膜的水性介質(zhì),包括水、磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、蔗糖溶液、PVA溶液、葡萄糖溶液、海藻糖溶液、PEG溶液的一種或幾種。
6.如權利要求5所述的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,分散脂質(zhì)膜的水性介質(zhì)優(yōu)選為磷酸鹽緩沖液、蔗糖溶液與葡萄糖溶液。
7.如權利要求1所述的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,在步驟四中,超聲使用常溫超聲、冰浴超聲和加熱超聲;橄欖苦苷脂質(zhì)體粒徑在400nm以下,包封率為40% -90%,適于臨床用藥。
8.如權利要求1所述的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,該橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟: 步驟一,按6:1的質(zhì)量比例稱取大豆磷脂與膽固醇共600mg,加入1mg橄欖苦苷; 步驟二,加入15ml的二氯甲烷,40°C下稍加熱使溶; 步驟三,將溶液轉(zhuǎn)入球形燒瓶中,使用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器在40°C下減壓蒸餾除去二氯甲烷,在燒瓶內(nèi)壁形成一層均勻的脂質(zhì)膜; 步驟四,倒入1ml pH6.0磷酸鹽緩沖液,超聲30min,使脂質(zhì)膜從瓶壁脫落,分散在水相介質(zhì)中形成脂質(zhì)體; 步驟五,分別用孔徑為0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過濾3次; 制得的脂質(zhì)體粒徑為235nm,包封率為45%。
9.如權利要求1所述的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,該橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟: 步驟一,按10:1的質(zhì)量比例稱取大豆磷脂與膽固醇共600mg,加入20mg橄欖苦苷; 步驟二,加入1ml的丙酮,50°C下稍加熱使溶; 步驟三,將溶液轉(zhuǎn)入球形燒瓶中,使用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器在50°C下減壓蒸餾除去丙酮,在燒瓶內(nèi)壁形成一層均勻的脂質(zhì)膜; 步驟四,倒入25ml質(zhì)量濃度為10%的蔗糖溶液,超聲45min,使脂質(zhì)膜從瓶壁脫落,分散在水相介質(zhì)中形成脂質(zhì)體; 步驟五,分別用孔徑為0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過濾3次。
10.如權利要求1所述的橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于,該橄欖苦苷脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟: 步驟一,按8:1的質(zhì)量比例稱取大豆磷脂與膽固醇共600mg,加入5mg橄欖苦苷; 步驟二,加入25ml的氯仿,40°C下稍加熱使溶; 步驟三,將溶液轉(zhuǎn)入球形燒瓶中,使用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器在40°C下減壓蒸餾除去氯仿,在燒瓶內(nèi)壁形成一層均勻的脂質(zhì)膜; 步驟四,倒入15ml質(zhì)量濃度為10%的蔗糖溶液,超聲60min,使脂質(zhì)膜從瓶壁脫落,分散在水相介質(zhì)中形成脂質(zhì)體; 步驟五,分別用孔徑為0.45 μ m和0.22 μ m的微孔濾膜過濾3次。
【文檔編號】A61P35/00GK104434800SQ201410642956
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月14日 優(yōu)先權日:2014年11月14日
【發(fā)明者】姚倩, 茍小軍, 劉嵬, 郭曉強, 顏軍, 陳封政, 梁立, 李論, 王世虎 申請人:成都大學
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