三葉青地上部分總黃酮的提純方法
【專利摘要】一種三葉青地上部分總黃酮的提純方法，包括預(yù)處理步驟、提取步驟和純化步驟：取三葉青地上部分粉碎成粗粉，加入50～70％乙醇加熱回流提取，提取液回收干燥得粗提物；將粗提物用蒸餾水配制成混懸液，調(diào)節(jié)混懸液的pH值后離心，取上清液，上樣于大孔吸附樹脂柱上；吸附完畢后靜置，先用蒸餾水洗至無混濁后，再用40％～50％乙醇洗脫，收集0.5～2.0BV區(qū)間的洗脫液，濃縮，干燥，即得三葉青地上部分總黃酮。本發(fā)明操作簡單、成本低、易于工業(yè)化生產(chǎn)、醇提與純化效率及制備獲得的三葉青地上部分總黃酮有效部位成分含量高，環(huán)境污染小。
【專利說明】三葉青地上部分總黃酮的提純方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種中草藥三葉青地上部分總黃酮的提純方法。

【背景技術(shù)】
[0002]三葉青是我國特有的珍稀藥用植物，屬于葡萄科崖爬藤屬植物。三葉青即三葉崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg.)，別名蛇附子、石抱子、三葉扁藤、金線吊葫蘆、金絲吊葫蘆、破石珠、三葉對等。三葉青以塊根或全草入藥，分布在浙江、江西、福建、臺灣、湖北、廣東、廣西、四川、貴州、云南等地。據(jù)醫(yī)書記載，三葉青有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、活血止痛的功效，常用于治療高熱驚厥、肺炎、哮喘、肝炎、風(fēng)濕、月經(jīng)不調(diào)、咽痛、瘰疬、癰疔瘡癤等。
[0003]近年來，三葉青塊根因其在抗腫瘤、保肝和免疫調(diào)節(jié)上的突出作用，大量被藥用，與此同時，民間將三葉青地上部分的煎煮液用于輔助抗腫瘤抗炎效果良好，為充分利用三葉青資源，為深入開發(fā)利用三葉青地上部分的藥用價值，我們對其進行了研宄，研宄結(jié)果表明:三葉青地上部分含有黃酮類成分等，藥理實驗證明，本發(fā)明的三葉青地上部分總黃酮提取物具有良好的抗炎解熱鎮(zhèn)痛作用。
[0004]因此，研宄三葉青地上部分總黃酮提取物制備工藝，對進一步開發(fā)安全、有效的三葉青抗炎解熱鎮(zhèn)痛制劑、充分利用珍稀藥用植物三葉青地上部分中藥資源具有重要的現(xiàn)實意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題，在于提供一種中草藥三葉青地上部分總黃酮的提純方法，其操作簡單、成本低、易于工業(yè)化生產(chǎn)、醇提與純化效率及制備獲得的三葉青地上部分總黃酮有效部位成分含量高，環(huán)境污染小。
[0006]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的:一種三葉青地上部分總黃酮的提純方法，包括以下步驟:
[0007](I)預(yù)處理:將干燥后的三葉青地上部分粉碎后，得三葉青地上部分粗粉；
[0008](2)提取:采用乙醇回流提取法對三葉青地上部分粗粉進行提取，獲得粗提物；
[0009](3)純化:將所述粗提物用蒸餾水配制成總黃酮含量為2.0?4.0mg/mL的混懸液，并調(diào)節(jié)混懸液的pH值為3.0?4.0 ;將混懸液離心，取上清液，以1.0?3.0BV/h的上樣流速上樣于大孔吸附樹脂柱上；吸附完畢后靜置，然后按1.0?3.0BV/h的洗脫速度進行洗脫，先用蒸飽水洗至無混池后，再用3?5BV濃度為40%?50%乙醇洗脫，收集0.5?2.0BV區(qū)間的洗脫液，將所述洗脫液回收乙醇，得浸膏，將浸膏于40?60°C減壓干燥至干，即得棕黃色粉末狀的三葉青地上部分總黃酮。
[0010]進一步地，所述步驟(2)的具體操作方法如下:
[0011]以三葉青地上部分粗粉質(zhì)量15?30倍的50%?70%乙醇為提取劑，回流提取3次，每次回流時間為2h，合并提取液并回收乙醇，將提取液于40?60°C下減壓干燥，獲得粗提物。
[0012]進一步地，所述步驟(3)的大孔吸附樹脂柱為HPD-100大孔吸附樹脂柱，HPD-100大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:4?1:10，且上柱量中，所述三葉青地上部分粗粉與樹脂量的比例為2:1?1:1。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)點在于:醇提與純化效率較高，并且制得的總黃酮有效部位成分含量高；采用乙醇回流提取法及乙醇洗脫不僅對環(huán)境的污染小，而且價格低廉可回收，易于工業(yè)化生產(chǎn)；大孔吸附樹脂柱可多次再生利用，再生方法簡便易行，能夠進一步降低成本；制備工藝簡單，具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，每批三葉青地上部分總黃酮含量均可達50%以上，且制得的三葉青地上部分總黃酮具有良好的抗炎解熱鎮(zhèn)痛作用，該制備工藝為三葉青地上部分總黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)提供了科學(xué)依據(jù)。

【具體實施方式】
[0014]一種三葉青地上部分總黃酮的提純方法，包括以下步驟:
[0015](I)預(yù)處理:將干燥后的三葉青地上部分粉碎后，得三葉青地上部分粗粉；
[0016](2)提取:采用乙醇回流提取法三葉青地上部分粗粉進行提取，獲得粗提物；具體地:
[0017]以三葉青地上部分粗粉質(zhì)量15?30倍(即w/v)的50%?70%乙醇為提取劑，回流提取3次，每次回流時間為2h，合并提取液并回收乙醇，將提取液于40?60°C下減壓干燥，獲得粗提物。
[0018](3)純化:將所述粗提物用蒸餾水配制成總黃酮含量為2.0?4.0mg/mL的混懸液，并調(diào)節(jié)混懸液的pH值為3.0?4.0 ;將混懸液離心，取上清液，以1.0?3.0BV/h的上樣流速上樣于大孔吸附樹脂柱上；所述大孔吸附樹脂柱為HPD-100大孔吸附樹脂柱，HPD-100大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:4?1:10，且上柱量中，三葉青地上部分粗粉與樹脂量的比例為2:1?1:1 ;吸附完畢后靜置過夜，然后按1.0?3.0BV/h的洗脫速度進行洗脫，先用蒸餾水洗至無混濁后，再用3?5BV濃度為40%?50%乙醇洗脫，收集0.5?2.0BV區(qū)間(即40%?50%乙醇溶液洗脫至0.5倍柱體積時開始收集，一直到2倍柱體積為止)的洗脫液，將所述洗脫液回收乙醇，得浸膏，將浸膏于40?60°C減壓干燥至干，即得棕黃色粉末狀的三葉青地上部分總黃酮。
[0019]實施例一
[0020]預(yù)處理:將干燥后的三葉青地上部分粉碎后，得三葉青地上部分粗粉。
[0021]提取:稱取上述三葉青地上部分粗粉270g，加50%乙醇4050mL，回流提取3次，每次2h，合并提取液并回收乙醇，得浸膏粗提物，并置50°C下減壓干燥，獲得粗提物粉末52.90go
[0022]純化:采用HPD-100大孔吸附樹脂對上述所得的粗提物進行純化，具體為:將上述獲得的粗提物加蒸餾水混懸，使上柱藥液的總黃酮含量約為3mg/mL，同時調(diào)節(jié)該混懸液的PH值為3，將混懸液進行離心，取上清液，以吸附速率為2.0BV/h上樣于樹脂柱徑高比為1:8的HPD-100大孔吸附樹脂柱上；吸附完畢靜置過夜后進行洗脫，且在洗脫過程中，按2.0BV/h的洗脫速度，先用蒸餾水洗至無混濁后，再用4BV濃度為40%乙醇洗脫，收集
0.5?2.0BV區(qū)間洗脫液，將洗脫液回收乙醇，得浸膏，并將浸膏置于50°C減壓干燥至干，得呈棕黃色粉末狀的三葉青地上部分總黃酮5.98g，測得其總黃酮含量為56.86%，收率為2.21% (其中收率是根據(jù)三葉青地上部分總黃酮與三葉青地上部分粗粉重量之間的比值關(guān)系計算的)。
[0023]實施例二
[0024]預(yù)處理:將干燥后的三葉青地上部分粉碎后，得三葉青地上部分粗粉。
[0025]提取:稱取上述三葉青地上部分粗粉270g，采用乙醇回流提取法對其進行提取，具體為:加60%乙醇6750mL，回流提取3次，每次2h，合并提取液并回收乙醇，得浸膏粗提物，并置40°C下減壓干燥，獲得三葉青地上部分總黃酮提取物粉末即粗提物60.04go
[0026]純化:采用HPD-100大孔吸附樹脂對上述所得的三葉青地上部分粗提物進行純化，具體為:將上述獲得的粗提物加蒸餾水混懸，使上柱藥液的總黃酮含量約為2mg/mL，同時調(diào)節(jié)該混懸液的PH值為4，將混懸液進行離心，取上清液，以吸附速率為1.0BV/h上樣于樹脂柱床徑高比為1:4的HPD-100大孔吸附樹脂柱上；吸附完畢靜置過夜后進行洗脫，且在洗脫過程中，按3.0BV/h的洗脫速度，先用蒸餾水洗至無混濁后，再用3BV濃度為50%乙醇洗脫，收集0.5?2.0BV區(qū)間洗脫液，將洗脫液回收乙醇，得浸膏，并將浸膏置于40°C減壓干燥至干，得呈棕黃色粉末狀的三葉青地上部分總黃酮6.31g，測得其總黃酮含量為55.01%，收率為 2.34%。
[0027]實施例三
[0028]預(yù)處理:將干燥后的三葉青地上部分粉碎后，得三葉青地上部分粗粉。
[0029]提取:稱取上述三葉青地上部分粗粉270g，采用乙醇回流提取法對其進行提取，具體為:加70%乙醇8100mL，回流提取3次，每次2h，合并提取液并回收乙醇，得浸膏粗提物，并置60°C下減壓干燥，獲得三葉青地上部分總黃酮提取物粉末即粗提物52.65go
[0030]純化:采用HPD-100大孔吸附樹脂對上述所得的三葉青地上部分粗提物進行純化，具體為:將上述粗提物加蒸餾水混懸，使上柱藥液的總黃酮含量約為4mg/mL，同時調(diào)節(jié)該混懸液的pH值為3，將混懸液進行離心，取上清液，以吸附速率為3.0BV/h上樣于樹脂柱床徑高比為1:10的HPD-100大孔吸附樹脂柱上；吸附完畢靜置過夜后進行洗脫，且在洗脫過程中，按1.0BV/h的洗脫速度，先用蒸餾水洗至無混濁后，再用5BV濃度為40%乙醇洗脫，收集0.5?2.0BV區(qū)間洗脫液，將洗脫液回收乙醇，得浸膏，并將浸膏置于60°C減壓干燥至干，得呈棕黃色粉末狀的三葉青地上部分總黃酮5.46g，測得其總黃酮含量為58.00%，收率為2.02%o
[0031]本發(fā)明制備工藝簡單，醇提與純化效率及獲得的總黃酮有效部位成分含量高；采用乙醇回流提取及乙醇洗脫純化不僅對環(huán)境的污染小，而且價格低廉可回收，易于工業(yè)化生產(chǎn)；且HPD-100型大孔吸附樹脂柱可多次再生利用，再生方法簡便易行，能夠進一步降低成本；另外，本發(fā)明具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，每批三葉青地上部分總黃酮含量均可達50%以上，且提取物三葉青地上部分總黃酮經(jīng)藥理實驗證實具有良好的抗炎解熱鎮(zhèn)痛作用，故本發(fā)明為三葉青地上部分總黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)并進一步開發(fā)相關(guān)健康產(chǎn)品提供了科學(xué)依據(jù)。
【權(quán)利要求】
1.一種三葉青地上部分總黃酮的提純方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)預(yù)處理:將干燥后的三葉青地上部分粉碎后，得三葉青地上部分粗粉； (2)提取:采用乙醇回流提取法對三葉青地上部分粗粉進行提取，獲得粗提物； (3)純化:將所述粗提物用蒸餾水配制成總黃酮含量為2.0?4.0mg/mL的混懸液，并調(diào)節(jié)混懸液的pH值為3.0?4.0 ;將混懸液離心，取上清液，以1.0?3.0BV/h的上樣流速上樣于大孔吸附樹脂柱上；吸附完畢后靜置，然后按1.0?3.0BV/h的洗脫速度進行洗脫，先用蒸餾水洗至無混濁后，再用3?5BV濃度為40%?50%乙醇洗脫，收集0.5?2.0BV區(qū)間的洗脫液，將所述洗脫液回收乙醇，得浸膏，將浸膏于40?60°C減壓干燥至干，即得棕黃色粉末狀的三葉青地上部分總黃酮。
2.如權(quán)利要求1所述的三葉青地上部分總黃酮的提純方法，其特征在于:所述步驟(2)的具體操作方法如下: 以三葉青地上部分粗粉質(zhì)量15?30倍的50%?70%乙醇為提取劑，回流提取3次，每次回流時間為2h，合并提取液并回收乙醇，將提取液于40?60°C下減壓干燥，獲得粗提物。
3.如權(quán)利要求1所述的三葉青地上部分總黃酮的提純方法，其特征在于:所述步驟(3)的大孔吸附樹脂柱為HPD-100大孔吸附樹脂柱，HPD-100大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:4?1:10，且上柱量中，所述三葉青地上部分粗粉與樹脂量的比例為2:1?1:1。
【文檔編號】A61P29/00GK104435401SQ201410648201
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月13日
【發(fā)明者】陳丹, 蔡韋煒, 范世明 申請人:福建中醫(yī)藥大學(xué)