一種姜黃素衍生物的制備及在防治肺纖維化中應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種姜黃素衍生物的制備方法及在防治肺纖維化中的應(yīng)用。通過化學(xué)合成方法將?；氲浇S素分子中獲得結(jié)構(gòu)新穎的姜黃素?；苌铮撝苽浞椒ê?jiǎn)單，水溶性較好。通過觀察對(duì)博萊霉素所致肺纖維化動(dòng)物模型的影響，證實(shí)姜黃素?；苌锞哂辛己玫目狗卫w維化作用，為其用于制備防治肺纖維化藥物提供依據(jù)。
【專利說明】一種姜黃素衍生物的制備及在防治肺纖維化中應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種姜黃素衍生物在制備防治肺纖維化藥物中的 應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 肺纖維化（Pulmonary fibrosis)是以大量的成纖維細(xì)胞聚集、細(xì)胞外基質(zhì)（EMC)沉 積并伴有炎性病變和損傷所致肺泡結(jié)構(gòu)破壞為特征的疾病，進(jìn)行性呼吸困難是其主要臨床 癥狀，終末期出現(xiàn)呼吸衰竭是其主要的死亡原因。肺纖維化病因復(fù)雜，粉塵、輻射、過敏、病 毒、藥物等都可引起，很多患者因此出現(xiàn)彌漫性肺纖維化，嚴(yán)重影響生存時(shí)間及生活質(zhì)量。 而目前對(duì)于肺纖維化，還缺乏有效的治療方法。傳統(tǒng)的治療藥物有糖皮質(zhì)激素，可以抑制炎 癥細(xì)胞的趨化和聚集作用，但臨床治療顯示僅對(duì)30%的患者有效。免疫抑制劑和細(xì)胞毒性 藥物如環(huán)磷酰胺已經(jīng)被應(yīng)用到臨床試驗(yàn)，但存在著嚴(yán)重的毒副反應(yīng)。影響細(xì)胞因子藥物吡 非尼酮、干擾素等近年也用于抗肺纖維化治療，但療效還不能最終確定。確診后存活期3-5 年，死亡率超過50%，因此，尋找安全有效的治療藥物，以減少高的發(fā)病率和病死率。
[0003] 姜黃素是從姜科植物根莖中提取的一種天然酚類化合物，具有抗炎、抗氧化、抗 癌、抗菌等作用，近年來研究表明姜黃素可以抑制肝、肺、腎等多種器官組織的纖維化進(jìn) 程(吳紅媛，厲建中，張俊平.中藥對(duì)組織器官纖維化防治機(jī)制研究.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜 志.2013,19 (21):331-335.;黃春芳，李或，沈俊輝等.姜黃素對(duì)博來霉素誘導(dǎo)肺纖維化 C57BL/6小鼠 cath印sin K表達(dá)的影響.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào).2013,35 (6):379-382.), 越來越受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。但其水溶性極小，血液濃度低，體內(nèi)不易吸收，生物利用度 低，影響藥效發(fā)揮。針對(duì)這一問題，有必要對(duì)姜黃素的結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，以達(dá)到更好利用姜黃 素和發(fā)現(xiàn)新的衍生物的藥理活性的目的。
[0004] 在姜黃素分子中的羥基引入?；?，可以大大改善它的水中溶解性，增加其抗纖維 化作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種姜黃素?；苌锏闹苽浞椒捌湓诳狗卫w維化中 的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：1.制備方法簡(jiǎn)單，水溶性較好，原料來源廣，成本低廉。
[0007] 2.制備所得姜黃素?；苌锟娠@著減輕博萊霉素所致肺纖維化大鼠的肺泡 炎及肺纖維化程度，同時(shí)還能明顯降低肺纖維化大鼠的肺系數(shù)及肺組織羥脯氨酸的含量， 從而發(fā)揮抗肺纖維化作用，有效的拓寬了肺纖維化患者的選擇，與現(xiàn)有的肺纖維化治療藥 物比較，本發(fā)明具備療效好、副作用小的優(yōu)點(diǎn)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0008] 圖1正常對(duì)照組大鼠肺組織HE染色（X200):肺組織結(jié)構(gòu)正常，肺泡壁完整，無間 質(zhì)纖維組織增生，未見炎性細(xì)胞滲出。
[0009] 圖2模型組大鼠肺組織HE染色（X200):肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡間隔增寬明顯，出 現(xiàn)大量膠原纖維和成纖維細(xì)胞，纖維組織增生明顯，肺泡壁破壞嚴(yán)重，部分肺泡實(shí)變，有大 量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
[0010] 圖3姜黃素衍生物高劑量組大鼠肺組織HE染色（X200):肺組織結(jié)構(gòu)較清晰，肺 泡間隔輕度增寬，肺泡壁尚完整，僅有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
[0011] 圖4姜黃素衍生物中劑量組大鼠肺組織HE染色（X200):肺組織結(jié)構(gòu)輕度破壞， 部分肺泡間隔稍增寬，有輕度纖維組織增生，部分肺泡變小，少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
[0012] 圖5姜黃素衍生物低劑量組大鼠肺組織HE染色（X200):少部分肺組織結(jié)構(gòu)紊 舌L有膠原及纖維組織增生，肺泡間隔稍增寬，部分肺泡結(jié)構(gòu)破壞，并有一些炎性炎性細(xì)胞 浸潤(rùn)。
[0013] 圖6陽(yáng)性對(duì)照藥組大鼠肺組織HE染色（X200):部分肺組織結(jié)構(gòu)破壞，肺泡間增 寬不明顯，少量纖維組織增生。

【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例1姜黃素?；苌锏闹苽?。
[0015] 將姜黃素30 g，乙酸酐100 ml和氨基磺酸2 g，充分混合，先于室溫下30 min，再 將溫度繼續(xù)上升至60-90°C進(jìn)行?；磻?yīng)20 min，待反應(yīng)完全結(jié)束，過濾除去未反應(yīng)的乙 酸酐，再將產(chǎn)物中加入乙酸乙酯200 ml分次沖洗，5%碳酸氫鈉 10 ml沖洗兩次，然后過濾、 減壓濃縮、干燥得到姜黃素?；苌?。使用時(shí)加生理鹽水溶解備用。
[0016] 以下通過藥理實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0017] 1 材料。
[0018] 1.1藥品與試劑：注射用鹽酸博萊霉素 A5 15mg/支，日本化藥株式會(huì)社生產(chǎn)；羥 脯氨酸測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；醋酸潑尼松片，浙江仙琚制藥股份有限 公司生產(chǎn)。
[0019] 1. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SD大鼠，雄性，體重180_220g，共60只，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提 供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK (豫）2010-0002。
[0020] 2 方法。
[0021] 2. 1模型制備、分組及給藥 模型制備方法：大鼠用4%水合氯醛麻醉后，鈍性分離暴露氣管，經(jīng)氣管軟骨環(huán)間隙向 心端穿刺，一次性氣管內(nèi)滴入博萊霉素 A5 (5mg · kg4)，對(duì)照組相同方法滴入等體積生理 鹽水，將動(dòng)物直立旋轉(zhuǎn)，使藥物在肺內(nèi)分布均勻，復(fù)制肺纖維化模型。造模后隨機(jī)分成對(duì) 照組、模型組、姜黃素衍生物高劑量組（200mg · kg，、中劑量組（IOOmg · kg，及低劑量組 (50mg · kg，、醋酸潑尼松陽(yáng)性對(duì)照組（5mg · kg，，每組10只，每日上午9時(shí)分別采用灌 胃方法進(jìn)行給藥，對(duì)照組和模型組以同樣方法給予等容量蒸餾水。給藥28 d，處死動(dòng)物，收 集待測(cè)標(biāo)本。
[0022] 2. 2檢測(cè)指標(biāo)及方法。
[0023] 2. 2. 1肺系數(shù)：處死大鼠后，完整分離出氣管和雙肺，電子天平稱肺濕重，根據(jù)公 式計(jì)算其肺系數(shù)(計(jì)算公式：肺系數(shù)=肺重量mg /體重g)。
[0024] 2. 2. 2肺組織羥脯氨酸含量測(cè)定：取右肺中葉組織，稱重后剪碎、勻楽，測(cè)定方法 按堿水解法羥脯氨酸試劑盒說明進(jìn)行。
[0025] 2. 2. 3病理組織學(xué)觀察：取左肺，用10%中性福爾馬林經(jīng)左主支氣管灌注固定 30min后，投入10%中性福爾馬林中固定48 h。在矢狀面上取厚3-5mm的組織作5μπι石蠟 切片，行HE染色，根據(jù)Szapiel等提供的方法評(píng)價(jià)肺泡炎及纖維化程度。兩種病變程度均 分四級(jí)：〇級(jí)無明顯改變，評(píng)分〇 ;1級(jí)輕度改變，病變范圍小于全肺的20%，評(píng)分1 ;2級(jí)中度 改變，病變范圍占全肺的20%-50%，評(píng)分2 ;3級(jí)重度改變，病變范圍占全肺的50%以上，評(píng)分 3〇
[0026] 2. 2. 4統(tǒng)計(jì)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)量資料以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用SPSS13. 0統(tǒng) 計(jì)軟件，單因素方差分析（One-Way AN0VA)，各組間兩兩比較采用LSD法，以P〈0. 05為差異 有顯著性。
[0027] 3 結(jié)果。
[0028] 3. 1肺組織鏡下組織病理學(xué)觀察。
[0029] 對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)正常，偶見炎性細(xì)胞，無間質(zhì)纖維組織增生；模型組的肺組織結(jié) 構(gòu)紊亂，大量肺泡壁斷裂，肺泡腔塌陷，肺泡間隔有大量膠原及纖維組織增生，部分肺泡實(shí) 變，并有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，多呈3級(jí)纖維化和2級(jí)肺泡炎改變，與對(duì)照組相比肺泡炎及肺 纖維化評(píng)分顯著提高（P〈〇. 01);姜黃素衍生物各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組肺泡炎及肺纖維化評(píng) 分均較模型組明顯減輕（P〈〇. 05)，多數(shù)肺組織結(jié)構(gòu)較為清晰，肺泡間隔增寬不明顯，膠原組 織增生也較少，僅少量炎性細(xì)胞侵潤(rùn)，多呈1級(jí)纖維化改變，肺泡炎不明顯，其中姜黃素衍 生物高、中劑量組的肺泡炎和肺纖維化評(píng)分低于陽(yáng)性對(duì)照組，提示姜黃素衍生物更能明顯 的降低博萊霉素所致大鼠的肺泡炎及肺纖維化程度，見表1，圖1-6。
[0030] 表1姜黃素衍生物對(duì)大鼠肺泡炎及肺纖維化的影響（xd： # )

【權(quán)利要求】
1. 一種防治肺纖維化的藥物，其特征在于它是由姜黃素經(jīng)?；苽涠?。
2. 權(quán)利1所述的姜黃素?；苌?，其特征在于所述方法是通過以下步驟來實(shí)現(xiàn) 的：將姜黃素30 g，乙酸酐100ml和氨基磺酸2 g，充分混合，先于室溫下30 min，再將溫度 繼續(xù)上升至60-90°C進(jìn)行?；磻?yīng)20 min，待反應(yīng)完全結(jié)束，過濾除去未反應(yīng)的乙酸酐， 再將產(chǎn)物中加入乙酸乙酯200 ml分次沖洗，5%碳酸氫鈉10 ml沖洗兩次，然后過濾、減壓濃 縮、干燥得到姜黃素酰基化衍生物。
3. 權(quán)利2所述的制備方法得到的姜黃素?；苌镌诜乐卫w維化疾病中應(yīng)用，所 述疾病為肺纖維化。
【文檔編號(hào)】A61P11/00GK104434903SQ201410662079
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月19日
【發(fā)明者】張崇, 牛秉軒, 賈巖龍, 屈艷, 張春曉 申請(qǐng)人:牛秉軒